B ộ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI TRẦN THẾ PHƯƠNG ĐỈNH LƯỢNG ĐỒNG THÒI THEOPHYLIN, EPHEDRIN HYDROCLORID, PHENOBARBITAL TRONG THUỐC HỗN HỢP TRị HEN SUYỄN BANG PHƯONG PHÁP SẮC KỶ LỎNG HIỆU NĂNG CAO ( KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược s ĩ KHOÁ 1997-2002 ) Người hướng dẫn: TS THÁI PHAN QUỲNH NHƯ TS THÁI DUY THÌN Nơi thực hiện: Phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm Thời gian thực hiện: 2/2000 đến 5/2002 M T H tv p ), Hà Nội 5-2002 '\ Kl ế í ỉ ỳ / Khoá luận thực hoàn thành phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội Trong trình thực khoá luận tốt nghiệp, nhận hướng dẫn tận tình thầy cô hướng dẫn, giảng viên, cán môn Hoá Dược cán phồng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế Trước tiên xin chân thành cảm ơn hướng dẫn tận tình TS Thái Phan Quỳnh Như - Trưởng phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm TS Thái Duy Thìn - Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội giúp cố tài liệu kỹ cần thiết trình thực khoá luận Đồng thời xin cảm ơn giúp đỡ thầy cô, kỹ thuật viên khác môn Hoá Dược cán phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm giúp hoàn thành khoá luận thời gian ngắn Tôi xin chân thành cảm ơn Thư viện trường Đại học Dược Hà Nội cung cấp tài liệu liên quan, phòng Thí nghiệm trung tâm trường Đại học Dược giúp xử lý số mẫu mà điều kiện máy mốc phòng thí nghiệm Bộ môn Hoá Dược chưa cho phép thực SỤ Trần Thê'Phương MỤC LỤC Trang ĐẶT VẤN ĐỀ ! PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 Theophylin 1.1.1 Đại cương 1.1.2 Các phương pháp định lượng 1.1.3 Tác dụng dược lý 1.2 Phénobarbital 1.2.1 Đại cương 1.2.2 Các phương pháp định lượng 1.2.3 Tác dụng dược lý 1.3Ephedrin 1.3.1 Đại cương 1.3.2 Các phương pháp định lượng 1.3.4 Phương pháp định lượng thành phần hỗn hợp 1.4 Kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.4.1 Khái quát phương pháp HPLC 1.4.2 Các đại lượng đặc trưng kỹ thuật HPLC 1.4.3 Hệ thống HPLC 10 1.4.4 Pha tĩnh kỹ thuật HPLC 11 1.4.5 Pha động kỹ thuật HPLC .13 1.4.6 Cách đánh giá pic 15 1.4.7 Cách tính kết quct 16 PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú 17 2.1 Đối tượng nghiên cứu 17 2.1.1 Viên nén Tiphasmin 17 2.1.2 Viên bao đường Etadasmin 17 2.1.3 Viên nén Antasma 17 2.1.4 Viên nén Asmin 17 2.2 Phương pháp nghiên cứu 18 PHẦN 3: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 19 3.1 Thiết bị, hoá chất, dung môi 19 3.1.1 Thiết bị 19 3.1.2 Hoá chất, dung môi 19 3.2 Xây dựng chương trình sắc ký 19 3.2.1 Khảo sát lựa chọn bước sóng 19 3.2.2 Lựa chọn dụng môi pha động 21 3.2.3 Khảo sát tốc độ dòng 21 3.2.4 Chương trình sắc ký 22 3.3 Khảo sát phụ thuộc tuyến tính chất khảo sát diện tích pic tương ứng thu 23 3.4 Khảo sát độ lặp lại .26 3.5 Khảo sát độ 30 3.6 ứng dụng chương trình để định lượng số chế phẩm 31 3.6.1 Định lượng viên nén Tiphasmyl 31 3.6.2 Định lượng viên nén Asmin 33 3.6.3 Định lượng viên nén Antasma 33 3.7 Bàn luận 33 PHẦN 4: KẾT LUẬN 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 ĐẶT VÂN ĐỂ Với phát triển nhanh chóng thành tựu khoa học ngành Dược thuốc nhiều thành phần có tác dụng dược lý phối hợp ngày sản xuất, lưu hành sử dụng rộng rãi giới, đặc biệt nước ta, kể thuốc nội nhập ngoại Ví dụ thuốc hỗn hợp vitamin, hỗn hợp hạ nhiệt giảm đau, chống dị ứng, chữa hen Nghiên cứu phương pháp để kiểm tra chất lượng thuốc vấn đề thu hút cố gắng ngành kiểm nghiệm Hiện thị trường có nhiều loại thuốc chữa hen có thành phần[l]: Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phénobarbital biệt dược Etadasmyl, Tiphasmyl ( Công ty Dược vật tư y tế Tiền Giang ); Asmin (Xí nghiệp Dược phẩm trung ương 25 ); Dophasmin ( Xí nghiệp Dược phẩm trung ương II ); Asmalin ( Xí nghiệp Dược phẩm trung ương ); Antasma ( Công ty vật tư y tế Bến Tre ); Tedralas ( Labomed - Pháp ) Trong Dược điển có Việt Nam số tài liệu tham khảo khác [2][8][13][14] [16][18] 'ichỉ có chuyên luận kiểm nghiêm dạng bào chế đơn thành phần hoạt chất phương pháp định lượng là: đo mật độ quang, định lượng môi trường khan, phương pháp chuẩn độ acid - base, phương pháp so mầu Như muốn định lượng thành phần hỗn hợp phải thực việc chiết tách phức tạp Hơn nữa, chênh lệch lượng thành phần lớn lượng Phénobarbital nhỏ làm cho kết khó xác phụ thuộc nhiều vào người thực hiện, không định lượng phương pháp cổ điển Để khắc phục tình trạng này, tiến hành nghiên cứu đề tài “Định lượng đồng thòi Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phénobarbital thuốc hỗn hợp trị hen suyễn phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” với hai mục tiêu: Khao sát lựa chọn điều kiện để xây dựng quy trình định lượng đồng thời Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phénobarbital hỗn hợp phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao ( HPLC ) với điều kiện sắc ký lỏng pha đảo, đẳng dòng, detector uv - Áp dụng phương pháp để định lượng số chế phẩm có thành phần hoạt chất tương tự lưu hành thị trường PHẦN TỔNG QUAN 1.1 THEOPHYLIN 1.1.1 Đại cương [8][14]: • Cổng thức: • Tên khoa hoc: 1,3 - dimethyl xanthin • Tính chất: tinh thể hình kim hay bột trắng không mùi, vị đắng, nóng chảy 270 - 2740C, khó tan nước, ethanol, cloroíorm Dễ tan nước nóng, ethanol nóng, acid vô cơ, dung dịch hydroxyd kim loại kiềm amoniac Thực tế không tan ether 1.1.2 Các phương pháp định lượng: • Phương pháp chuẩn đồ mối trường khan r191: hoà chế phẩm vào anhydric acetic, thêm benzen khan định lượng acid percloric 0,1N vói thị tím tinh thể xuất màu vàng bền • Phương pháp chuẩn đỏ acid - base r2ir3iri3115in6in Sl: hoà chế phẩm vào nước, thêm dung dịch bạc nitrat Chuẩn độ dung dịch natri hydroxyd xuất màu xanh với thị xanh bromothymol 1.1.3 Tác dụng dược lý [5]: thuộc dẫn chất xanthin, có tác dụng kích thích thân kinh, đặc biệt trung tâm hô hấp vận mạch, làm giãn phế quản, giãn động mạch phổi, làm thông khí tăng tần số, biên độ hô hấp 1.2 PHENOBARBITAL 1.2.1 Đại cương [8][14]: • Cổng thức: /N H -CO C2H 0=c XN H -C O • Tên khoa hoc: acid - ethyl - - phenyl barbituric • Tính chất: tinh thể không màu bột kết tinh trắng, không mùi Bền vững không khí Rất khó tan nước lạnh hexan; khó tan nước nóng, cloroíorm; tan ether; dễ tan ethanol 96°, dung dịch hydroxyd, carbonat kim loại kiềm Nhiệt độ nóng chảy 176°c 1.2.2 Các phương pháp định lượng: • Phương pháp chuẩn đỏ acid - base: - Hoà tan chế phẩm vào dimethylíormamid ( DMF ) trung hoà trước ( CT xanh thymol 1% D M F) Chuẩn độ dung dịch natri hydroxyd hỗn hợp methanol : benzen tới xuất màu xanh[3] Hoà tan chế phâm vào pyridin, thêm dung dịch bạc nitrat pyridin Chuẩn độ dung dịch Natri hydroxyd ethanol có màu xanh với thị thymolphtalein Song song tiến hành làm mẫu trắng[2][13][15][16][18] • Phương pháp HPLC £19]: - Cột LI ODS ( 250mm X 4mm ) - Detector uv đặt bước sóng 254 nm - Pha động: methanol: đệm acetat pH4,5 ( : ) - Tốc độ dòng : 2ml/phút - Thể tích tiêm : lOịil 1.2 Tác dụng dược lý [5]: Phénobarbital barbituric kinh điển có tác dụng an thần, gây ngủ chống co giật Nó có tác dụng ức chế vỏ não, vùng dưói đồi, đồi thị nên ức chế hai giai đoạn giấc ngủ Ngoài ra, ức chế trung tâm hô hấp trung tâm tuần hoàn, giảm sức lọc cầu thận 1.3 EPHEDRIN HYDROCLORID 1.3.1 Đại cương [8][14]: • Cổng thức: • Tên khoa hoc: D ( - ) - methyl - - methylamino - - phenyl ethanol hydroclorid • Tinh chât: tinh thê nhỏ bôt kết tinh trắng, vi đắng Dễ tan nước cồn Không tan ether Nóng chảy 216 - 220°c [a]ổ° = -33 -36° Do phân tử có carbon bất đối nên có đồng phân hoạt quang, hỗn hợp racemic Dạng dược dụng Ephedrin tả tuyền 1.3.2 Các phương pháp định lượng: • Đinh lương c r phương pháp đo bac T81: dùng thị hấp phụ Bromphenol xanh, môi trường acid acetic, chuẩn độ trực tiếp bạc nitrat tủa vón lại dung dịch có màu tím • Phương pháp so màu T81: dựa vào phản ứng tạo phức màu với đồng Sulfat • Đinh lương mỏi trường khan r2ir3iri3iri5iri6iri7iri81: hoà tan chế phẩm vào acid acetic băng, làm lạnh Chuẩn độ acid percloric với thị tím tinh thể có màu xanh 3.2.4 Chương trình sắc ký: - Cột Lichrosorb RP18 ( 250 mm X 4,6 mm; 10 |0.m ) - Detector u v đặt 240 nm - Pha động: methanol : đệm phosphat pH 3,5 ( 38 : 62 ) thêm lg natri heptansulíonat lit hỗn hợp - Tốc độ dòng: lml/phút - Thể tích tiêm: 20 jul 3.3 KHẢO SÁT S ự PHỤ THUỘC TUYẾN TÍNH GIỮA NỔNG ĐỘ CHẤT KHẢO SÁT VÀ DIỆN TÍCH PIC TƯƠNG ỨNG THU ĐƯỢC - Để khảo sát khoảng tuyến tính phép định lượng hoạt chất, pha dãy dung dịch chuẩn hỗn hợp thành phần vói nồng độ chất hỗn hợp biến thiên từ: 0,4 4- 2,0 mg/ml đối vói Theophylin 0,1 -ỉ- 0,5 mg/ml Ephedrin.HCl 0,05 -H0,25 mg/ml đối vói Phenobarbital - Kết tính dựa nồng độ hoạt chất diện tích pic tương ứng thu Kết thu được trình bày bảng sau: 22 KẾT QUẢ KHẢO SÁT TUYẾN TÍNH Bảng : Kết khảo sát tuyến tính Theophylin STT Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic 0,4 957,2 0,8 1840,3 1,2 2851,1 1,6 3736,0 2,0 4685,2 Kết khảo sát Phương trình hồi quy: y = 2337,9x + 8,5 Hê số tương quan: r = 0,9996 Hnh V: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ Theophylin diện tích pic tương ứng thu 23 Bảng 2: Kết khảo sát tuyến tính Ephedrin hydroclorid STT Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic 0,1 10,3 0,2 20,1 0,3 32,1 0,4 42,5 0,5 55,0 Kết khảo sát Phương trình hồi quy: y = 111,8x -1,54 Hê số tương quan: r = 0,9985 Hình VI: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ Ephedrin.HCl diện tích pic tương ứng thu 24 Bảng : Kết khảo sát tuyến tính Phénobarbital STT Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic 0,05 52,5 0,10 105,0 0,15 160,5 0,20 208,5 0,25 258,3 Kết khảo sát Phương trình hồi quy: y = 1030,2x + 2,43 Hê số tương quan: r = 0,9993 Hình VII: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính nồng độ Phénobarbital diện tích pic tương ứng thu Với điều kiện sắc ký nêu, khoảng nồng độ khảo sát, kết thu cho thấy khoảng phụ thuộc tuyến tính nồng độ chất khảo sát diện tích pic tương ứng rộng với hệ số tương quan hồi quy r = 0,9985 - 0,9996 chứng tỏ phụ thuộc tuyến tính chặt chẽ nên phương pháp tuyến tính khoảng nồng độ xung quanh nồng độ đem định 25 lượng Vì áp dụng phương pháp cho nhiều công thức bào chế có hàm lượng hoạt chất khác m «N» IaJ Hình VIII: sắc ký đồ tiêu biểu hỗn hợp thành phần Trong đó: - Thời gian lưu Theophylin 4,36 phút - Thời gian lưu Ephedrin 7,44 phút - Thời gian lưu Phénobarbital 12,05 phút Qua sắc ký đồ cho thấy pic hoạt chất có độ phân giải tốt, pic đối xứng Như việc lựa chọn điều kiện cho chương trình sắc ký phù hợp cho việc phân tích hoạt chất 26 3.4 KHẢO SÁT ĐỘ LẶP LẠI Để khảo sát độ lặp lại phương pháp, tiếnhành thử nghiệm hai dạng bào chế khác nhau: viên nén viên bao đường Nồng độ chất đem định lượng dung dịch chuẩn dung dịch thử dạng bào chế khoảng: - Theophylin: 1,6 mg/ml - Ephedrin.HCl: 0,2 mg/ml - Phénobarbital: 0,1 mg/ml • Các thử nghiêm đươc thưc hiên mẫu: - Mẫu : viên bao đường Etadasmyl, SKS: 011099 - Mẫu 2: viên nén Tiphasmyl, SKS: 010600 • Cách chuẩn bi dung dich thử dung dich chuán: - Dung dịch thủ’ Cân 20 viên ( viên bao đường phải rửa hết lớp vỏ bao 20 viên, sấy 50°c đem cân nhân ), tính khối lượng trung bình viên, nghiền mịn Cân xác lượng bột viên tương ứng với khoảng 80mg Theophylin, cho vào bình định mức 50ml, thêm 15ml nước cất, lắc kỹ, thêm ethanol tuyệt đối tói vạch, lắc đều,lọc qua giấy lọc thường lọc lại qua màng lọc 0,45 Ịj,m, thu dung dịch thử - Dung dịch chuẩn: pha chất chuẩnTheophylin,Ephedrin.HƠ Phénobarbital hỗn hợp dung môi Ethanol :Nước với tỷ lệ 70 : 30 để dung dịch có nồng độ tương đương vói nồng độ chất tương ứng dung dịch thử Lọc qua màng lọc 0,45 |Lim - Tiến hành định lượng đồng thời Theophylin, Ephedrin hydroclorid Phénobarbital mẫu Etadasmyl, Typhasmyl theo phương pháp chọn Các kết trình bày bảng sau: ỵ Bảng 4: Kết khảo sát độ lặp lại mẫu Etadasmyl Hàm lưcmg hoạt chất viên ( mg ) STT Theophylin Ephedrin.HCl Phenobarbital 41,18 7,85 2,55 41,49 7,91 2,57 41,68 7,79 2,50 41,41 7,83 2,47 41,02 8,12 2,48 40,82 7,90 2,47 Tính tllống kê Giá trị trung bình 41,20 7,90 2,51 0,32 0,12 0,04 0,13 0,05 0,02 0,81 % 1,53 % 1,81 % Độ 1ệch chuẩn H i(x.-x)2 i =1 n-1 Sai số chuẩn s * - 74nSai số tương đối s x -t ■100 A% = -X n = , p = 0,95, ta = 2,57 28 Bảng 5: Kết khảo sát độ lặp lại mẫu Tiphasmyl Hàm lượng hoạt chất viên ( m g ) STT Theophylin Ephedrin.HQ Phenobarbital 80,02 10,67 4,95 80,78 10,72 4,90 81,04 10,40 4,91 80,46 10,71 5,00 81,10 10,59 4,88 80,31 10,52 4,90 Tính t lông kê Giá trị trung bình 80,6 10,6 4,92 0,43 0,16 0,04 0,17 0,06 0,02 Độ lệch chuẩn Ị ĩ ^ - x )2 o _ i =1 11 n -1 Sai số chuẩn * n Sai số tương đối An/rt/o— s x -t •100 a— 0,56 1,52 % % 1,00 % X n = , p = 0,95, ta = 2,57 Nhận xét: hai dạng bào chế, độ lặp lại thu cho thấy sai số tương đối tuỳ theo trường hợp từ 0,56 - 1,81%, độ lệch chuẩn từ 0,04 0,43 Với kết cho phép áp dụng chương trình để định lượng chế phẩm có công thức chứa thành phần 29 3.5 KHẢO SÁT ĐỘ ĐÚNG CỦA PHƯƠNG PHÁP Độ phương pháp kiểm tra phương pháp thêm Các chất chuẩn thêm vào mẫu với lượng khoảng từ 20% - 30% tiến hành tương tự phép thử độ lặp lại Kết thực nghiêm trình bày bảng sau: Bảng : Kết khảo sát độ viên Etadasmin Thêm Tìm vào thấy (mg) (mg) Phénobarbital Ephedrin hydroclorid Theophylin % Thêm Tim vào thấy (mg) (mg) % Thêm 'lìm vào thấy (mg) (mg) % 20,0 19,8 99,0 3,0 2,95 98,3 1,0 0,98 98,0 20,0 19,5 ^ 98,0 3,0 2,99 99,7 1,0 0,97 97,0 20,0 20,1 101,5 3,0 2,93 97,7 1,0 0,99 99,0 Trung bình 98,0 98,6 99,1 Bảng 7: Kết khảo sát độ viên Típhasmyl Thêm Tim vào thấy (mg) (mg) 40,0 39,6 Phénobarbital Ephedrin hydroclorid Theophylin % Thêm Tim vào thấy (mg) (mg) % Thêm 'lìm vào thấy (mg) (mg) 99,0 ^ 5,0 5,10 102,0 2,0 % 1,99 99,5 40,0 38,9 97,3 5,0 4,85 97,0 2,0 1,98 99,0 40,0 39,8 99,5 5,0 4,99 98,0 2,0 1,94 97,0 Trung bình 98,6 99,0 98,5 Nhận xét: kết tìm lại tuỳ trường hợp từ 98,0 - 99,1% Như phương pháp có độ cao 30 3.6 ỨNG DỤNG CHƯƠNG TRÌNH ĐỂ đ ị n h l ợ n g m ộ t s ố CHẾ PHẨM Từ chương trình xây dựng được, tiến hành định lượng số chế phẩm có công thức bào chế tương tự lưu hành thị trường để kiểm tra lại phương pháp Quy trình định lượng tiến hành tương tự trình khảo sát độ lặp lại 3.6.1 Định lượng viên nén Tiphasmyl, SKS: 020901: Kết định lượng hoạt chất viên tính theo % ghi bảng : Bảng : Kết định lượng viên nén Tiphasmyl, SKS: 020901 Theophylin Ephedrin.HCl Phenobarbital (%) (%) (%) 101,35 95,70 94,85 99,98 96,05 95,25 101,15 96,00 94,95 TB 100,77 95,92 95,02 STT 3.6.2 Định lượng viên nén Asmin, SKS: 531100: Kết định lượng hoạt chất viên tính theo % ghi bảng 9: 31 Bảng 9: Kết định lượng viên nén Asmin, SKS: 531100 STT Theophylin Ephedrin.HCl Phenobarbital (%) (%) (%) 98,45 95,63 92,72 99,65 97,53 92,52 99,10 97,05 92,75 TB 99,07 96,74 92,66 3.6.3 Định lượng viên Antasma, SKS: 23082000: Kết định lượng hoạt chất viên tính theo % ghi bảng 10: Bảng 10: Kết định lượng viên nén Antasma, SKS: 23082000 STT Theophylin Ephedrin.HCl Phenobarbital (%) (%) (%) 99,89 95,31 97,23 99,13 96,23 97,94 99,70 96,00 97,72 TB 99,57 95,85 97,63 Nhận xét: kết thu cho thấy hàm lượng hoạt chất mẫu tiến hành định lượng theo phương pháp xây dựng đạt yêu cầu theo tiêu chuẩn s 3.7 BÀN LUẬN Phương pháp HPLC phương pháp phân tích đại, bước đưa vào phòng kiểm nghiệm trung tâm kiểm nghiệm Ưu điểm chung phương pháp có độ ổn định, độ chọn lọc cao tiến hành đơn giản, nhanh, định tính, định lượng đồng thời nhiều hoạt chất không cần chiết tách trước đo Kết thực nghiệm với việc xử lý thống kê cho thấy phương pháp định lượng chấp nhận Trên sắc ký đồ, pic có độ phân giải rõ ràng Hệ số tương quan tuyến tính r = 0,9985 - 0,9996 với khoảng khảo sát rộng cho phép áp dụng với nhiều chế phẩm tương tự có tỷ lệ thành phần khác Độ lặp lại vói sai số tương đối từ 0,56% - 1,81% độ từ 98,0% - 99,1% Phương pháp xử lý mẫu đơn giản, phân tách tốt chất hỗn hợp, dễ thực thời gian ngắn.Tuy diện tích pic hoạt chất thu có độ chênh lệch lớn hàm lượng hoạt chất có tỷ lệ khác nhau có độ hấp thụ tử ngoại khác Nhưng pic cách xa chứng tỏ ảnh hưởng lẫn định lượng Kết thực nghiệm chứng tỏ chương trình xây dựng có độ tin cậy cao, độ lặp lại độ tốt, kỹ thuật tiến hành đơn giản, nhanh chóng dễ thực 33 KẾT LUẬN Sau hoàn thành khoá luận này, thực việc sau: • Vận dụng kiến thức học để tiến hành nghiên cứu đề tài, nâng cao kỹ thực hành khả tra cứu tài liệu • Nắm lý thuyết phương pháp HPLC, phương pháp phân tích đại có nhiều ứng dụng kiểm nghiêm thuốc • Xây dựng chương trình định lượng đồng thời hỗn hợp thành phần Theophylin, Ephedrin hydroclorid Phenobarbital phương pháp HPLC vói thông số điều kiện sau: - Cột Lichrosorb RP18 (250 mm X 4,6 mm; 10 ị i m) - Detector uv đặt bước sóng 240 nm - Pha động: Methanol : đệm phosphat pH 3,5 ( 38 : 62 ) thêm lg Natri heptansulíonat lit hỗn hợp - Tốc độ dòng: lml/phút - Thể tích tiêm: 20 |jl • Áp dụng chương trình sắc ký tiến hành định lượng số chế phẩm có thành phần hoạt chất tương tự lưu hành thị trường Tuy chưa có thời gian khảo sát kỹ ảnh hưởng tá dược lên dạng bào chế khác với kết đạt so sánh vói tiêu chuẩn sở thuốc khảo sát, cho phương pháp ứng dụng kiểm nghiệm thuốc có thành phần trung tâm kiểm nghiêm, phòng kiểm nghiêm đơn vị sản xuất có điều kiện trang bị máy sắc ký lỏng hiệu cao Nếu có điều kiện, tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện chương trình để áp dụng chung cho dạng bào chế viên nén viên bao đường có thành phần hoạt chất 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài lièu nước: [1] Cục quản lý Dược - Danh mục thuốcđã cấp số đăng ký sản xuất, lưu hành Việt Nam - tập 1,11 - NXB Y học Hà Nội - 2001 ( trang 261, 273, 287, 421 ) [2] Dược điển Việt Nam m - NXB Y học Hà Nội - 2002 ( trang 108 - 110, 212 - 214, 278 - 279 ) [3] Dược điển Việt Nam II tập - NXB Y học Hà Nội - 1994 ( trang 128 131,231 -234, 270- 272) [4] Hồng Minh Châu dịch - Cơ sở hoá học phân tích- John H.Kenedy [5] Hoàng Tích Huyền, Đào Văn Phan, Nguyên Trọng Thông - Dược lý học đại cương - Trường Đại học Y Hà nội, NXB Y học Hà nội - 1999 [6] Phạm Gia Huệ, Trần Tử An - Giáo trình hoá phân tích tập II - trường đại học Dược Hà Nội - 1998 [71 Phạm Luận - Giáo trình sở lý thuyết sắc ký lỏng cao áp - HPLC - 1989 [8] Thái Duy Thìn, Nguyên Văn Thục - Giáo trình Hoá dược tập I - trường đại học Dược Hà Nội - 1998 [9] Thái Phan Quỳnh Như cộng - Định tính, định lượng đồng thời Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phenobarbital thuốc hỗn hợp trị hen suyễn phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao - Thông báo kiểm nghiệm số năm 2000 - trang - [10] Tiêu chuẩn sở viên nén Typhasmyl, Etadasmyl công ty Dược phẩm Tiền Giang [11] Tiêu chuẩn sở viên nén Antasma công ty vật tư y tế Bến Tre [12] Tiêu chuẩn sở viên nén Dophasmin xí nghiệp Dược phẩm Trung ương II 35 ; Tài liêu nước ngoài: [13] British Pharmacopoeia - 1998 ( trang 217 - 128, 428, 564 - 565 ) [14] Clarke’s Isolation and Identification of Drug - 2nd Edition - 1996 ( trang 585,883, 1011 ) [15] European Pharmacopoeia II- 1997 ( trang 799,1311,1649 ) [16] Pharmacopoeia China - 1997 ( trang 219,456, 609 ) [17] The International Pharmacopoeia XIII- 1996 [18] The Japanese Pharmacopoeia x i n - 1996 ( trang 119 - 220, 456 - 458, 609 - 610) [19] The United State Pharmacopeia 24 -2000 ( trang 642 - 643, 1306, 1630 1633) 36 [...]... trình sắc ký cho hỗn hợp các hoạt chất trên dựa vào đặc tính hoá lý của chúng Các kết quả khảo sát được xử lý thống kê, rút ra kết luận và đưa ra quy trình định lượng thích hợp • Phương pháp được sử dụng trong thực nghiệm: HPLC trong điều kiện sắc ký lỏng pha đảo, đẳng dòng , detector u v 18 PHẦN 3 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 THIẾT BỊ, HOÁ CHẤT VÀ DUNG MÔI 3.1.1 Thiết bị: - Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao. .. nên phương pháp là tuyến tính trong khoảng nồng độ xung quanh nồng độ đem định 25 lượng Vì thế có thể áp dụng phương pháp cho nhiều công thức bào chế có hàm lượng các hoạt chất khác nhau m «N» IaJ Hình VIII: sắc ký đồ tiêu biểu của hỗn hợp 3 thành phần Trong đó: - Thời gian lưu của Theophylin là 4,36 phút - Thời gian lưu của Ephedrin là 7,44 phút - Thời gian lưu của Phénobarbital là 12,05 phút Qua sắc. .. Tác dụng của Ephedrin trung bình nhưng kéo dài Ngoài ra còn có tác dụng co mạch máu, giãn đồng tử 1.3.4 Phương pháp định lượng 3 thànlr trong hỗn hợp : • Phương pháp HPLC ri91: - Cột LI ODS ( 300mm X 4mm ) - Detector u v đặt ở bước sóng 241 nm - Pha động: acetolnitril: đệm phosphat pH:7,8 (240 : 760) - Tốc độ dòng : lml/phút - Thể tích tiêm : 10|al 1.4 KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO (HPLC) [4]... quát phương pháp HPLC Sắc ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC ) là phương pháp phân tích hoá lý dùng để phân tách các thành phần của một hỗn hợp dựa vào ái lực khác nhau của các chất khác nhau với hai pha luôn tiếp xúc và không hoà tan nhau Trong quá trình sắc ký luôn xảy ra quá trình cân bằng động về sự phân bố của 6 chất tan vào pha tĩnh và pha động khi pha động luôn luôn chảy qua cột với một tốc độ nhất định. .. thể là một hỗn hợp nhiều dung môi trộn lẫn vói nhau theo nhữngtỷ lệ nhấtđịnh Nó cũng có thể là dung dịch các muối có chứa chất đệm, chấttạophức Nói chung mỗi loại sắc ký sẽ có các hệ dung môi rửa giải riêng để có được hiệu quả phân tách tốt nhất Pha động là một trong những yếu tố quyết định hiệu quả và hiệu suất tách sắc ký của một hỗn hợp mẫu Nó quyết định thòi gian lưu giữ các chất mẫu và hiệu quả... độ các chất tương ứng trong dung dịch thử Lọc qua màng lọc 0,45 |Lim - Tiến hành định lượng đồng thời Theophylin, Ephedrin hydroclorid và Phénobarbital trong mẫu Etadasmyl, Typhasmyl theo phương pháp đã chọn Các kết quả được trình bày trong các bảng sau: ỵ Bảng 4: Kết quả khảo sát độ lặp lại trên mẫu Etadasmyl Hàm lưcmg hoạt chất trong một viên ( mg ) STT Theophylin Ephedrin. HCl Phenobarbital 1 41,18... thì chúng ta có sắc ký lỏng lỏng LLC ( Liquid Liquid Chromatography ) Xét vê cấu trúc xốp của pha tĩnh là các hạt rắn thì pha tĩnh có 2 kiểu xốp: xốp toàn phần hạt và xốp chỉ lớp vỏ ngoài ( xốp bề mặ t ) 11 • Điều kiên đối vói mốt pha tĩnh: - Phải trơ và bền vững với các điều kiện của môi trường sắc ký - Có khả năng tách chọn lọc một hỗn hợp chất tan nhất định trong điều kiện sắc ký nhất định - Tính chất... hiện bằng detector và được chuyển qua bộ phận xử lý kết quả Kết quả sau khi được xử lý sẽ được đưa ra máy ghi hoặc hiển thị trên màn hình Tín hiệu phân tích định tính mỗi thành phần trong hỗn hợp là thời gian lưu của chất đó trên cột hay vị trí của pic tương ứng trên sắc ký đồ, còn tín hiệu phân tích định lượng là diện tích pic ( hoặc chiều cao pic ) thu được, phụ thuộc vào nồng độ của chất đó trong. .. ổn định pH cho quá trình sắc ký, chất tạo phức để tạo ra sự rửa giải chọn lọc, chất tạo cặp ion để sử dụng trong sắc ký cặp ion • Trong sắc ký trao đổi ion, pha động là dung dịch nước của các acid hay base, hoặc là dung dịch nước của các muối kim loại kiềm, kiềm thổ, có chứa chất đệm pH, chất tạo cặp ion, chất tạo phức Trong loại sắc ký này thì pH pha động và chất tạo phức có ý nghĩa rất lớn Trong sắc. .. trình sắc ký - Phù hợp vói loại detector được lựa chọn để phát hiện các chất phân tích - Có tính kinh tế, dễ kiếm • Trong sắc ký hấp phụ pha thuận, pha động phải là các dung môi hữu cơ không phân cực hoặc ít phân cực như n - hexan, n-heptan, cloroform, tetraclorocarbon Trong quá trình chạy sắc ký, để cho quá trình tách được 14 ổn định, độ lặp lại cao, phải bão hoà pha động trước khi chạy sắc ký bằng nước