1 I HC THI NGUYấN TRNG I HC NễNG LM NGUYễN THị ĐàO Tờn ti: Nghiên cứu đánh giá đặc điểm nông sinh học dòng cà chua chống chịu bệnh sơng mai chọn tạo thị phân tử KhóA LUậN TốT NGHIệP ĐạI HọC H o to : Chớnh quy Chuyờn ngnh : Cụng ngh sinh hc Lp : K42 - CNSH Khoa : CNSH-CNTP Khoỏ hc : 2010-2014 Ging viờn hng dn: TS Trn Ngc Hựng B mụn CNSH Vin nghiờn cu Rau Qu TS Nguyn Vn Duy Khoa CNSH-CNTP, trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn Thỏi Nguyờn, nm 2014 LI CM N Trc ht,em xin by t lũng bit n sõu sc ti Ts.Trn Ngc HựngTrng b mụn Cụng ngh Sinh hc, Vin Nghiờn cu Rau Qu Vit Nam ó tn tỡnh giỳp em sut thi gian thc v TS Nguyn Vn DuyKhoa Cụng ngh sinh hc v Cụng ngh thc phm, Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn ó tn tỡnh hng dn v to iu kin cho em quỏ trỡnh thc hin v hon thnh khúa lun Em xin cm n tt c cỏc cỏn b,cụng nhõn viờn chc v cỏc nh nghiờn cu sinh lm vic ti phũng thớ nghiờm ca b mụn Cụng ngh Sinh hc , Vin Nghiờn cu Rau Qu Vit Nam ó to mi iu kin giỳp v ng viờn em sut thi gian thc va qua Em cng xin by t lũng bit n ca mỡnh n th thy cụ khoa Cụng ngh Sinh hc Thy cụ ó tn tỡnh ging dy, giỳp em sut quỏ trỡnh hc v nghiờn cu Cui cựng, em xin gi ti ngi thõn cựng bn bố, nhng ngi ó luụn quan tõm ng h v l ch da cho em sut thi gian em lm khúa lun ny, cng nh cuc sng Xin trõn trng cỏm n! Thỏi Nguyờn, thỏng nm 2014 Sinh viờn DANH MC CC BNG trang Bng Din tớch v sn lng c chua trờn th gii (1000ha tn)[17] Bng 2: Din tớch, nng sut v sn lng c chua ca cỏc chõu lc trờn th gii nm 2011[18] Bng 3.: Nhng nc cú sn lng c chua cao nht nm 2011 [18] Bng 4: Din tớch, nng sut, sn lng c chua ca Vit Nam t nm 2004 n nm 2008 [7] Bng 5: Tớnh khỏng bnh sng mai ca cỏc dũng c chua 28 Bng 6: Kiu gene Ph3 ca cỏc dũng c chua 32 Bng 7: c im qu ca cỏc dũng c chua v ụng xuõn 33 Bng 8: Mt s c tớnh sinh trng ca cỏc dũng c chua v ụng xuõn 34 Bng 9: Kh nng u qu ca cỏc dũng c chua v xuõn hố 35 DANH MC CC HèNH trang Hỡnh1: Bnh sng mai hi c chua 10 Hỡnh 2: Quỏ trỡnh sõm nhp ca nm sng mai vo : A- Ging nhim bnh, B v C ging khỏng bnh (I-V l giai on ny mm ca bo t ng, VIxõm nhp, VII to bc bo t) [35,36] 11 Hỡnh 3: Hỡnh thỏi b phn sinh sn ca nm sng mai : Bc bo t ng (sporangia), bo t ng (zoospore), Oospore (tớnh t trỏi qua phi) 12 Hỡnh 4: Bn liờn kt cỏc gene (QTL) liờn quan n tớnh khỏng bnh sng mai ca c chua: LB-1 v LB-2 QTL khỏng bnh sng mai (Frary v cs, 1998); Ph1, Ph2, Ph3- gene khỏng bnh sng mai[38] 14 Hỡnh Mi quan h gia cỏc chi loi Solanum [35] 15 Hỡnh Biu hin ca (A) ch th ng tri, (B) ch th tri (P1, P2 b m, F1 = P1 x P2)[47] 17 Hỡnh : V trớ ca gene Ph3 bn ch th phõn t RFLP ti cỏnh tay di ca nhim sc th s [38] 19 Hỡnh : nh in di ca ch th SCAR phỏt trin t ch th AFLP (L87) [46] 19 Hỡnh 9: Bn liờn kt gene khỏng bnh sng mai v ch th phõn t TOM236 trờn nhim sc th s ca c chua [43] 20 Hỡnh 10: Quỏ trỡnh phõn lp nm sng mai 23 Hỡnh 11 : Phng phỏp lõy bnh sng mai nhõn to 24 Hỡnh 12: Kim tra DNA chit t lỏ c chua 25 Hỡnh13: ỏnh giỏ tớnh khỏng bnh sng mai bng phng phỏp lõy bnh trờn lỏ tỏch ri 29 Hỡnh14 : nh in di trờn gel agarose cỏc mu ging c chua 30 DANH MC CC T,THUT NG VIT TT T, thut ng vit tt Ngha y ca cỏc t thut ng vit tt AFLP Amplified Fragment Length Polymorphism RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism MAS Marker Asisted Selection PCR Polymerase Chain Rection SCAR Sequence- Characterized Amplified Region DNA Deoxyribonucleic acid PTNT Phỏt trin nụng thụn CNSH Cụng ngh sinh hc OD Optical density LB Left border SSR Simple Sequence Repeats RAPD Random amplification of polymorphic DNA Ph Phytophthora MC LC trang Phn 1: M U 1.1.t 1.2 Mc ớch nghiờn cu 1.3 Yờu cu ca ti 1.4 í ngha khoa hc v thc tin 1.4.1 í ngha khoa hc 1.4.2 í ngha thc tin Phn 2: TNG QUAN TI LIU 2.1.Tỡnh hỡnh sn xut c chua giai on hin 2.1.1.Tỡnh hỡnh sn xut c chua trờn th gii 2.1.2 Vit Nam 2.2 Bnh sng mai hi c chua 2.3 Chn to ging c chua chng chu bnh sng mai 12 2.4.Lp bn v chn ging bng ch th phõn t 16 2.5 Ch th phõn t chn ging chng chu bnh sng mai 18 2.6 Chn to ging c chua khỏng bnh sng mai bng ch th phõn t ti Vit nam 20 Phn 3: VT LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 22 3.1 Mu dũng/ging c chua 22 3.2.Nm bnh sng mai 22 3.3 ỏnh giỏ tớnh khỏng bnh sng mai 23 3.4.Xỏc nh kiu allele gene Ph3 ca mu ging c chua 25 3.4.1 Ly chớch DNA 25 3.4.2.Xỏc nh kiu allele ca gene Ph3 25 3.5 Kho sỏt chn lc dũng cú tớnh trng nụng hc (nng sut, cht lng ) tt 26 Phn 4: KT QU NGHIấN CU V THO LUN 28 4.1.ỏnh giỏ tớnh khỏng bnh ca cỏc mu dũng ging c chua 28 4.2 Xỏc nh kiu gene Ph3 ca cỏc dũng c chua bng ch th phõn t 30 4.3.c im nụng sinh hc cỏc dũng c chua v ụng xuõn 33 4.4.c im nụng sinh hc cỏc dũng c chua v xuõn hố 35 Phn 5: KT LUN V NGH 37 5.1 Kt lun 37 5.2 Kin ngh 37 TI LIU THAM KHO 38 Phn M U 1.1.t C chua (Solanum lycopersicum L.) thuc h c (Solanaceae) cựng vi cỏc cõy: thuc lỏ, khoai tõy, t, c tớm cú ngun gc Trung, Nam M v Nam bc M Ngy c chua ó c sn xut hu ht cỏc nc trờn ton th gii vi hng nghỡn ging khỏc nhau, a dng v mu sc, dng qu, dng hỡnh sinh trngC chua c s dng di nhiu hỡnh thc khỏc nh n ti, lm Salat, nc ung Sn phm ch bin cng cú nhiu dng nh úng hp qu búc v, cụ c, nc st c chua, mt c chua C chua l loi rau cú giỏ tr dinh dng cao, cha nhiu glucid, axit hu c, v l ngun cung cp cht chng ụ xy húa quan trng nh Lycopen, Phenolic, Vitamin C.[2] Chn to ging c chua c bt u thc hin chõu u (Italia) khong 200 nm trc M chn to ging c chua c thc hin vo nhng nm 70 ca th k 19 [21],[22] Nh chn ging ó a nng sut ca c chua M tng t 10,1 tn/ha nhng nm 20 ca th k 20 n 72,4 tn nhng nm 90 v n nm 2004 l 102 tn/ha [13] Mc dự chn to ging c chua theo phng phỏp truyn thng ó mang li thnh tu to ln nhng cn nhiu thi gian Cụng ngh ch th phõn t chn to ging giỳp xỏc nh chớnh xỏc gene cn chn v rỳt ngn quỏ trỡnh to ging C chua l mt nhng cõy trng u tiờn c ng dng ch th phõn t chn ging[23],[24] T nhng nm 1980, ch th phõn t ó c s dng nh cụng c c bn chn to ging c chua n khong 40 gene liờn quan n tớnh khỏng bnh chớnh ó c lp trờn bn phõn t ca c chua [ 19],[20] Cụng ngh ch th phõn t DNA ó c s dng cỏc chng trỡnh to ging c chua thng mi t nhng nm 90[25] Bnh sng mai (late blight) gõy hi bi nm Phytophthora infestans l mt nhng bnh gõy hi hy dit hu ht cỏc vựng c chua v khoai tõy trờn ton th gii[4] Bnh cú th hi mi thi gian sinh trng ca cõy [21] Nm bnh hi nhiu b phn ca c chua: thõn, lỏ, qu v ht [11],[12] Bnh cú th tin n t, ht ging, v phỏt tỏn c khụng khớ nc ta, v ụng xuõn l thi k hi t nhiu yu t mụi trng (nhit , m , ỏnh sỏng ) rt thun li cho bnh sng mai phỏt trin Bnh gõy hi nghiờm trng v cú nh hng ln ti nng sut (gim 60- 70%) v phm cht trờn c chua, khoai tõy mt s vựng H Ni, Hi Phũng, Lo Cai, Lt [10] Bnh nng t thỏng thỏng ng bng Bc b v ma cỏc vựng cao cú khớ hu ụn hũa: Mc chõu- Sn la, SapaLo cai, lt Lõm ng hn ch bnh, k thut ph bin nht ang c nụng dõn ỏp dng l phun thuc tr bnh vi 13-15 ln phun/ v c chua Tuy nhiờn, hiu qu phun thuc húa hc rt hn ch nhiu mu nm sng mai cú kh nng khỏng metalaxyl, hot cht chớnh cỏc thuc tr bnh sng mai.Vi c thự ny sn xut c chua luụn tim n tớnh thiu n nh v nguy c khụng an ton v sinh thc phm cao [3] Nhng nm qua, nhiu chng trỡnh, d ỏn chn to ging rau, cỏc c quan thuc B Nụng nghip & PTNT, trng i hc ca Vit nam ó a mt s ging c chua mi vo sn xut Ging c chua phc v ch bin PT18 (Vin nghiờn cu rau qu), Ging C95, VT3 ( Vin cõy lng thc & cõy thc phm), cỏc ging c chua lai F1 : FM 20, FM29, lai s 4, lai s (Vin nghiờn cu rau qu), HT21, HT144 (trng i hc nụng nghip H ni) So vi cỏc ging c chua truyn thng ( c chua Ba lan, c chua Phỏp, c chua Hng lan ) cỏc ging mi to th hin vt tri v nng sut v cht lng Cỏc ging mi c chn to u ỏp dng cụng ngh truyn thng (conventional breeding) v ch chỳ ý n bin hin nng sut, cht lng qu v tớnh chng chu bnh ng rung [9] Trc thc trng trờn, Vin nghiờn cu ó thc hin chng trỡnh to ging c chua chng chu bnh sng mai bng ch th t nm 2009 Qua ú, mt s dũng c chua ó c to tip tc chng trỡnh chn ging ny, chỳng tụi xin c thc hin ti: Nghiờn cu ỏnh giỏ c im nụng sinh hc ca cỏc dũng c chua chng chu bnh sng mai chn to bng ch th phõn t 1.2 Mc ớch nghiờn cu Xỏc nh c cỏc dũng c chua mang gene Ph3 ng hp t, chng chu bnh sng mai, v thớch hp v c th (ụng xuõn hoc xuõn hố) 1.3 Yờu cu ca ti t mc ớch trờn, ti cú cỏc yờu cu sau: -Nghiờn cu kiu gene v kiu hỡnh liờn quan n tớnh khỏng bnh sng mai ca cỏc dũng c chua -Nghiờn cu c im nụng sinh hc v c th ca cỏc dũng c chua 1.4 í ngha khoa hc v thc tin 1.4.1 í ngha khoa hc Kt qu thu c t ti s gúp phn xõy dng phng phỏp chn to ging c chua chng chu bnh bng ch th phõn t i vi c chua ti Vit nam 1.4.2 í ngha thc tin Xỏc nh c dũng c chua chng chu bnh sng mai vi cỏc c im nụng sinh hc tt phc v sn xut hoc l ngun vt liu cho cỏc chng trỡnh to ging tip theo 27 -Nng sut cỏ th =s qu x trng lng qu -Nng sut lý thuyt = nng sut cỏ th x mt trng (35000 cõy/ha) Dng qu c xỏc nh nh sau: - Dng qu: I = H/ D (trong ú H =Chiu cao qu (cm); D= ng kớnh qu (cm) I > 1: Dng qu di I = 0,8-1: Dng qu trũn I < 0,8: Dng qu dt 28 Phn KT QU NGHIấN CU V THO LUN 4.1.ỏnh giỏ tớnh khỏng bnh ca cỏc mu dũng ging c chua Bng 5: Tớnh khỏng bnh sng mai ca cỏc dũng c chua Mó hiu (xuõn hố 2014) Ph h S bo t (x104) 14-LBS-01 T5-2 HQ-3 47,7a 14-LBS-02 (08TP15-12-1-6 X 08TP72-6-2-4)-30-1 1,0b 14-LBS-03 (08TP76 X 08TP65)3-3-4-3-4 1,0b 14-LBS-04 (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-2-2-3 10,0b 14-LBS-05 (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-3-1 0,0b 14-LBS-06 (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-1-3-1 0,0b 14-LBS-06 (08TP85 x 08TP65)2-1-9-1-2-1-4 0,0b 14-LBS-09 (Sar X 08TP70-20-2)-1-2-4 0,7b 14-LBS-10 08TP85-2-3-10-1-1-1-4 0,0b 14-LBS-11 08TP85-2-3-10-1-1-1-5 0,0b 14-LBS-12 08TP85-2-3-10-1-1-1-6 0,3b 14-LBS-13 08TP85-2-3-10-1-1-1-7 0,3b 14-LBS-14 08TP85-2-3-10-1-1-2-4 1,3b 14-LBS-15 08TP85-2-3-5-1-1-2-7 0,3b 14-LBS-16 08TP86B-4-5-8-6-4 1,0b 14-LBS-17 AVTO-9803 (CLN1621F) 52,3a 14-LBS-18 Dark red 4-2 57,0a Da vo bng 5: Tớnh khỏng bnh sng mai ca cỏc dũng c chua qua s bo t nm mc sng mai v xuõn hố cho ta thy nh sau: Cỏc dũng ging cú tinh khỏng bnh sng mai cao l cỏc dũng ging : (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-3-1, (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-1-3-1, (08TP85 x 08TP65)2-1-9-1-2-1-4, 08TP85-2-3-10-1-1-1-4, 08TP85-2-3-10-1-1-1-5, 08TP85-2-3-10-1-1-1-6, 29 08TP85-2-3-10-1-1-1-7, 08TP86B-4-5-8-6-4, 08TP85-2-3-10-1-1-2-4, (Sar X 08TP70-20-2)-1-2-4, (08TP15-12-1-6 X 08TP72-6-2-4)-30-1, (08TP76 X 08TP65)3-3-4-3-4 cỏc dũng ging ny khụng xut hin hoc xut hin bo t nm mc sng mai vi s lng rt nh Cũn cỏc dũng ging: T5-2 HQ-3, AVTO-9803 (CLN1621F), Dark red 4-2 khụng cú kh nng khỏng bnh sng mai hoc kh nng khỏng bnh ca nú rt kộm vỡ cú s lng bo t nm mc sng mai rt cao nh giụng Dark red 4-2 cú tn 57,0.10^4 bo t nm Da vo bng chỳng ta khụng th a kt lun l ging cú kh nng khỏng bnh cao nht l: (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-3-1, (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-1-3-1, (08TP85 x 08TP65)2-1-9-1-2-1-4, 08TP85-2-3-10-11-1-4, 08TP85-2-3-10-1-1-1-5 vỡ cỏc ging ny nú sai khỏc khụng cú ý ngha vi cỏc ging nh: 08TP85-2-3-5-1-1-2-7, 08TP85-2-3-10-1-1-2-4 Chỳng ta ch cú th nhn xột l cỏc ging ny cú kh nng khỏng bnh nm mc sng mai cao ch khụng khng nh la ging no cú kh nng khỏng cao nht Mu ging khỏng bnh Mu ging nhim bnh Hỡnh13: ỏnh giỏ tớnh khỏng bnh sng mai bng phng phỏp lõy bnh trờn lỏ tỏch ri Da vo kt qu ỏnh giỏ tớnh khỏng bnh sng mai bng phng phỏp lõy bnh trờn lỏ tỏch ri cho nm mc sng mai tip xỳc vi mu lỏ ca ging khỏng bnh v ging khụng khỏng bnh thỡ mu ging khỏng bnh lỏ khụng b nhim nm mc sng mai cũn mu ging khụng cú kh nng khỏng mc sng mai thỡ nm mc phỏt trin rt nhanh 30 mu ging khỏng bnh nm mc sng mai xõm nhp vo mụ bo cua ging khỏng bnh thỡ nm mc s b c ch s hỡnh thnh bo t ng lm mụ t bo cht,khoanh vựng kh nng lõy lan bnh ging khụng khỏng bnh thỡ nm mc sng mai xõm nhõp vo thi chỳng s hỡnh thnh rt nhiu bc bo t ng chỳng s phỏt tỏn v tip tc quỏ trỡnh xõm nhim mi lm cho bnh lan rt nhanh 4.2 Xỏc nh kiu gene Ph3 ca cỏc dũng c chua bng ch th phõn t Sauk hi ly chich DNA, dựng ch th LB3 liờn kt vi gen khỏng sau ú PCR c kt qu nh hỡnh 14: 600bp 500 bp 246 bp Hỡnh14 : nh in di trờn gel agarose cỏc mu ging c chua Cỏc ng chayh s 2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14 xut hin vch sỏng phớa di vi kớch thc gen khong 246bp mang kiu hỡnh R tri õy l cỏc dũng c chua mang gen khỏng bnh sng mai Cũn ng chy s xut hin c vch sỏng mag vi kớch thc kiu gen l 246bp v 482bp v mang kiu hỡnh la H d hp t Cỏc ng chy s 15,16,17 xut hin vch sỏng phớa trờn vi kớch thc kiu gen l khong 482bp v chỳng mang kiu hỡnh l S ln õy l cỏc dũng c chua khụng mang gen khỏng bnh sng mai 31 T kt qu ca hỡnh nh in di ta thy 17 mu ging c chua thỡ cú 13 ging mang gen khỏng bnh sng mai, mu ging khụng mang gen khỏng v mu d hp t Tuy nhiờn kt qu ny khụng hon ton khng nh c l cỏc dũng c chua mang gen khỏng s khỏng tt nm mc sng mai m mun khng nh c iu ny ta phi tip tc ỏnh giỏ cỏc dũng c chua chn c ngoi ng rung Da vo hỡnh nh in di ta thy kiu gene ca cỏc mu ging khỏng bnh cú kớch thc khong 246bp v cú kiu hỡnh l R (tri) cũn cỏc ging khụng cú kh nng khỏng bnh thỡ cú kớch thc kiu gene khong 482bp v kiu hỡnh S nhim bnh (ln).Cú nht mu ging s l trờn bng in di xut hin vch v kiu hỡnh d hp t 32 Bng 6: Kiu gene Ph3 ca cỏc dũng c chua TT trờn Ph h bn gel Kiu gene Kiu (-600bp;+246bp) hỡnh +/- H (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-2-2-3 (08TP15-12-1-6 X 08TP72-6-2-4)-30-1 + R (08TP76 X 08TP65)3-3-4-3-4 + R (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-3-1 + R (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-1-3-1 + R (08TP85 x 08TP65)2-1-9-1-2-1-4 + R (Sar X 08TP70-20-2)-1-2-4 + R 08TP85-2-3-10-1-1-1-4 + R 08TP85-2-3-10-1-1-1-5 + R 10 08TP85-2-3-10-1-1-1-6 + R 11 08TP85-2-3-10-1-1-1-7 + R 12 08TP85-2-3-10-1-1-2-4 + R 13 08TP85-2-3-5-1-1-2-7 + R 14 08TP86B-4-5-8-6-4 + R 15 T5-2 HQ-3 - S 16 AVTO-9803 (CLN1621F) - S 17 Dark red 4-2 - S Kiu hỡnh H : d hp t Kiu hỡnh R : ng hp t tri Kiu hỡnh S : ng hp t ln Da vo bng trờn ta thy cỏc ging : 08TP85-2-3-10-1-1-1-4, 08TP852-3-10-1-1-1-5, 08TP85-2-3-10-1-1-1-6, 08TP85-2-3-10-1-1-1-7 cú s tng ng khỏ cao v chỳng u co kiu hỡnh l tri vi kớch thc kiu gene khong 246bp 33 4.3.c im nụng sinh hc cỏc dũng c chua v ụng xuõn Bng 7: c im qu ca cỏc dũng c chua v ụng xuõn Mó hiu ng kớnh qu (g) Cao qu (cm) I (cm) Dng qu Brix0 13-PM-026 6.1bc 5.6cd 0.92 Trũn 5.7a 13-PM-040 5.1e 4.9e 0.96 Trũn 4.0ef 13-PM-050 6.6ab 6.3ab 0.95 Trũn 4.0ef 13-PM-061 5.9b-d 5.7cd 0.97 Trũn 5.2ab 13-PM-065 6.9a 6.1bc 0.88 Trũn 5.0bc 13-PM-069 5.2de 6.0bc 1.15 Di 4.9b-d 13-PM-084 5.4c-e 5.4de 1.00 Trũn 3.9ef 13-PM-110 4.4f 5.3de 1.20 Di 4.0ef 13-PM-129 5.6c-e 6.5ab 1.16 Di 4.0ef 13-PM-130 5.5c-e 6.4ab 1.16 Di 3.8ef 13-PM-131 5.4c-e 6.3ab 1.17 Di 4.5b-e 13-PM-132 5.6c-e 6.3ab 1.13 Di 4.5b-e 13-PM-136 5.8c-e 6.4ab 1.10 Di 3.6f 13-PM-169 5.6c-e 6.8a 1.21 Di 4.0ef 13-PM-223 4.3f 4.1f 0.95 Trũn 4.0ef 13-PM-239 5.5c-e 6.3b 1.14 Di 4.2d-f 13-PM-265 5.7c-e 6.5ab 1.14 Di 4.4c-e Cỏc dũng c chua cú brix cao: 13-PM-026, 13-PM-061, 13-PM-069, 13PM-132 nờn dựng lai to nhm to cỏc dũng mi cú nng sut cao hn Thng c chua dng qu trũn cú brix cao hn v brix thng l t l ngch vi kớch thc v trng lng qu, c chua cú qu nh thng cú brix cao hn cỏc dũng c chua cú kớch thc ln Cỏc dũng c chua qu to thỡ thng brix di nm khong t 3,5 n cũn cỏc dũng c chua qu nh thỡ brix thng t trờn I = H/ D (trong ú H =Chiu cao qu (cm); D= ng kớnh qu (cm) 34 Bng 8: Mt s c tớnh sinh trng ca cỏc dũng c chua v ụng xuõn Mó hiu Chiu cao cõy Dng sinh trng P qu (g) S qu/cõy Nng sut (kg/cõy) 13-PM-026 194a Vụ hn 121.3b 26.3b-e 3,1 13-PM-040 88ef Hu hn 73.6cd 34.0a-d 2,4 13-PM-050 95ef Hu hn 160,0a 23.0c-e 3,5 13-PM-061 151bc Vụ hn 116.3b 30.0a-e 3,4 13-PM-065 126c-e Vụ hn 179.3a 15.6e 2,8 13-PM-069 95ef Hu hn 93.3bc 26.3b-e 2,4 13-PM-084 145b-d Vụ hn 99.0bc 20.3de 2,0 13-PM-110 71f Hu hn 60.3d 42.3a 2,5 13-PM-129 91ef Hu hn 116.0b 37.6a-c 4,3 13-PM-130 110c-f Vụ hn 107.6bc 39.3ab 4,2 13-PM-131 94ef Hu hn 104.0bc 35.6a-d 3,7 13-PM-132 180ab Vụ hn 114.6b 30.0a-e 3,4 13-PM-136 148b-d Vụ hn 111.6b 25.6b-e 2,8 13-PM-169 172ab Vụ hn 125.3b 34.6a-d 4,3 13-PM-223 89ef Hu hn 44.6d 44.3a 1,9 13-PM-239 80ef Hu hn 103.3bc 29.0a-e 2,9 13-PM-265 104d-f B hu hn 105.0bc 32.6a-d 3,4 Cỏc dũng c chua sinh trng vụ hn thỡ cú chiu cao cõy ln hn cỏc dũng c chua sinh trng vụ hn.chiu cao cõy c tớnh bng chiu cao ca thõn chớnh Cỏc dũng c chua cú nhiu tớnh trng tt cn c s dng chn ging nh:13-PM-026 , 13-PM-061, 13-PM-065, 13-PM-069, 13-PM-040, 13-PM-129 , 13-PM-130 , 13-PM-050 Cn kt hp sinh hc phõn t vo chn to ging to cỏc ging va cú cỏc tớnh trng tt va cú brix cao 35 4.4.c im nụng sinh hc cỏc dũng c chua v xuõn hố Bng 9: Kh nng u qu ca cỏc dũng c chua v xuõn hố Mó hiu (xuõn hố 2014) Ph h S qu /chựm(*) 14-LBS-01 T5-2 HQ-3 1,4 c-e 14-LBS-02 (08TP15-12-1-6 X 08TP72-6-2-4)-30-1 1,9 cd 14-LBS-03 (08TP76 X 08TP65)3-3-4-3-4 14-LBS-04 (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-2-2-3 2.1bc 14-LBS-05 (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-3-1 1.0d-f 14-LBS-06 (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-1-3-1 3.3a 14-LBS-07 (08TP85 x 08TP65)2-1-9-1-2-1-4 1.1d-f 14-LBS-09 (Sar X 08TP70-20-2)-1-2-4 3,0 ab 14-LBS-10 08TP85-2-3-10-1-1-1-4 1.8cd 14-LBS-11 08TP85-2-3-10-1-1-1-5 1.0d-f 14-LBS-12 08TP85-2-3-10-1-1-1-6 2.9 ab 14-LBS-13 08TP85-2-3-10-1-1-1-7 1.7cd 14-LBS-14 08TP85-2-3-10-1-1-2-4 1.7cd 14-LBS-15 08TP85-2-3-5-1-1-2-7 1.8cd 14-LBS-16 08TP86B-4-5-8-6-4 1.4c-e 14-LBS-17 AVTO-9803 (CLN1621F) 3.4a 14-LBS-18 Dark red 4-2 0.6ef 0,4f Da vo bng kh nng u qu ca cỏc dũng c chua v xuõn hố thỡ thy cú cỏc ging cú kh nng u qu cao nh sau: (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-1-3-1 trung bỡnh l 3,3 qu trờn chựm, AVTO-9803 (CLN1621F) trung bỡnh l 3,4 qu trờn chựm nhng khụng th so sỏnh c rng :ging AVTO-9803 (CLN1621F) cú kh nng u qu cao nht vỡ theo x lý thng kờ v kt qu bng thỡ ging (08TP78 X 08TP66)2-5-3-3-13-1 v AVTO-9803 (CLN1621F) cú kh nng u qu tng ng chỳng sai khỏc khụng cú ý ngha 36 Cỏc ging cú kh nng u qu kộm l cỏc ging sau: Dark red 4-2, (08TP76 X 08TP65)3-3-4-3-4, (08TP76 X 08TP65)5-3-7-3-3-1, 08TP85-2-310-1-1-1-5 S qu u/ cõy (thõn chớnh) t l thun vi kh nng chu nhit ca cõy Ngha l s qu u/ cõy ln thỡ kh nng chu nhit ca cõy cao Vỡ vy ỏnh giỏ kh nng u qu ca cỏc dũng c chua v xuõn hố cng l ỏnh giỏ c tớnh chu nhit ca cỏc dũng c chua vỡ nhit c chua u qu l 22-240C.ỏnh giỏ kh nng u qu ca c chua v xuõn hố nhm tỡm cỏc dũng c chua va cú kh nng khỏng bnh mc sng mai cao va cho nng sut tt 37 Phn KT LUN V NGH 5.1 Kt lun Qua quỏ trỡnh iu tra nghiờn cu bnh nm mc sng maivng lỏ c chua hi c chua v ụng xuõn 2013 v v xuõn hố nm 2014 ti Gia Lõm , H Ni, tụi cú mt s kt lun sau: - ó tỏch chit c 17 mu DNA lỏ c chua t cỏc cõy c chua khỏng bnh nm mc sng mai Sau ú DNA tng s ca 17 mu ny ó c kim tra bng PCR Chn lc c cỏc dũng c chua khỏng nm mc sng mai bng ch th phõn t - ỏnh giỏ cỏc c tớnh nụng sinh hc ca cỏc dũng c chua khỏng nm mc sng mai phc v cho chn ging 5.2 Kin ngh Do thi gian thc cú hn, mt s thớ nghim cha thc hin c ti ny Vỡ vy, chỳng tụi ngh: - Tựy theo tớnh cht ca tng v m mu sc, cht lng c chua cú dũng th thay i Vỡ vy cn nghiờn cu nhiu v xỏc nh c cỏc dũng c chua khỏng bnh cao , cht lng dựng v nng sut cao sn xut i tr - Tựy theo tớnh cht ca tng v m mu sc, cht lng c chua tip tc ỏnh giỏ tớnh chu nhit ca cõy qua cỏc v xuõn hố 38 TI LIU THAM KHO Ti liu Ting Vit [1] Mai Th Phng Anh (2003), K thut trng c chua an ton quanh nm, Nxb Ngh An [2].Trn Khc Thi,Trn Ngc Hựng (2008),K thut trng rau sch,Nxb Nụng Nghip, H Ni [3] V Triu Mõn, Lờ Lng T (1999), Bnh vi khun v virus hi cõy trng NXB Giỏo dc tr 178 183 [4] Trn Ngc Hựng (2013) , Nghiờn cu chn to ging c chua lai (F1) chng chu bnh sng mai (Phytophthora infestans de Bary) v bnh xon vng lỏ (TYLCV) bng ch th phõn t Hi tho quc gia v khoa hc cõy trng ln th nht 9/2013, tr 481-489 [5] T Th Cỳc, H Hu An, Nghiờm Th Bớch H (2000), Giỏo trỡnh cõy rau , Nxb Nụng Nghip , H Ni [6] Phm ng Qung (2006), Kt qu iu tra ging 13 cõy trng ch lc ca c nc- giai on 2003-2004, Nxb Nụng Nghip, H Ni [7] Tng cc thng kờ, 2008 [8].T Thu Cỳc (2007), K thut trng c chua, Nxb Nụng nghip, H Ni, tr103 [9] Trn Khc Thi, Phm M Linh (2007), Rau an ton- c s khoa hc v k thut canh tỏc, Nxb Nụng nghip, H Ni [10] Lờ Th Liu (2004), Nghiờn cu c im sinh hc v bin phỏp húa hc phũng tr b phn Bemisia tabaci Genm hi c chua vựng Gia Lõm, H Ni, Lun thc s khoa hc nụng nghip, i hc Nụng Nghip I H Ni [11] V Triu Mõn, Lờ Lng T (2001), Giỏo trỡnh bnh cõy nụng nghip, Nxb Nụng nghip, H Ni [12] V Triu Mõn (2003), Chun oỏn nhanh bnh hi thc vt NXB Nụng nghip, H Ni [14].T Thu Cỳc v cng s (1983), Kho sỏt mt s ging c chua nhp ni trng v xuõn hố trờn t Gia Lõm H Ni, Lun phú tin s 39 KHKT Nụng nghip, Trng i hc Nụng nghip I H Ni [13].Nguyn Vn Hin v cs(2000), Chn ging cõy trng, NxbGiasodc, HNi, tr 34-35 [15].T Thu Cỳc (2007), K thut trng c chua, Nxb Nụng nghip, H Ni, tr103 [16] Mai Th Phng Anh v cs (1996), Rau v trng rau, Gớao trỡnh cao hc Nụng nghip, Nxb Nụng nghip, H Ni, tr 164-176 Ti liu Ting Anh [17] FAO Database Static 2009 [18] FAO Database Static 2011 [19] Pham, X.T 2002 Breeding potatoes for late blight resistance in Vietnam.In Proceedings of the global initiative on late blight conference.(Ed C Lizỏrraga) p 154 International Potato Center: Lima, Peru [20] Chunwongse, J., Chunwongse, C., Black, L L., and Hanson, P 2002 Molecular mapping of the Ph-3 gene for late blight resistance in tomato J Hortic Sci Biotechnol 77:281-286 [21] Goodwin,S.B., C.D.Smart, R.W.Sandrock, K.L.Deahi, Z.K.Punja and W.E.Fry 1998 Genetic charge within population of Phytophthora infestans in the United States and Canada during 1994 to 1996: Role of migration and recombination Phytopathology 88(9):939-949 [23] Davis, R.M.,G.Hamilton, W.T.Lanini, T.H.Speen and C Osteen 1998 The importance of pesticides and other pest management practices in U.S tomato production USDA, NAPIAP: Document Number 1-CA-98 [24] Judelson,H.S 1997 The genetics and biology of Phytophthora infestans: Modern approaches to a historical challenge Fungal genetics and biology 22(2): 65-76 [25] Fry, W.E., S.B Goodwin, J.M Matuazak, L.J Spielman, and M.G Milgroom 1992 Population genetic and international migrations of Phytophthora infestans Ann Rev Phytopathol 30, 107-129 40 [26] Fry,W.E and S.B.Goodwin 1997a Resurgence of the Irish potato famine fungus Bioscience 47(6):363-371 [27 ]Fry,W.E and S.B.Goodwin.1997b Re-emergence of potato and tomato late blight in the United States Plant Disease 81(12): 1349-1357 [28] Davis, R.M.,G.Hamilton, W.T.Lanini and T.H.Speen.1996.The importance of pesticides and other pest management practices in U.S tomato production USDA, NAPIAP: Document Number 2-CA-96 [29] Goodwin, S.B., L.S Sujkowski and W.E Fry 1995 Rapid evolution of pathogenicity within clonal lineages of the potato late blight disease fungus Phytopathology 85(6): 669-676 [30] AVRDC.1998 AVRDC report 1997 Asian vegetable research and development center, Shanhua, Tainan, Taiwan, 84-4 [31] Kato,M., E.S.Mizubuti, S.B.Goodwin and W.E.Fry.1997.Sensitivity to protectant fungicides and pathogenic fitness of clonal lineages of Phytophthora infestans in the United State.Phytopathology 87(9): 973-978 [32] Lima, M A., L.A Maffia, R.W Barreto and E.S.G Mizubuti 2009 Phytophthora infestans in a subtropical region: surviral on tomaro debris, temporal dynamics of airborne sporangia and alternative hosts Plant pathology (2009) 58, 87-99 [ 33] Vleeshouwers, V G., W.van Dooijeweert, F.Govers, S.Kamoun, and L T Colon 2000.The hypersensitive response is associated with host and nonhost resistance to Phytophthora infestans Planta 210:853-864 [ 34] Black,L.L., Wang, T.C., Hanson, P.M., and Chen, J.T 1996a Late blight resistance in four wild tomato accessions: Effectiveness in diverse locations and inheritance of resistance Phytopathol.86:S24 [35] Peralta, I.E., Spooner, D.M 2001 Granule- bound starch synthase (GBSSI) gene phylogeny of wild tomatoes (Solanum L Section Lycopersicon [Mill.] Wettst Subsection lycopersicon) Am J Bot 88:1888-1902 41 [36] Chunwongse J., Chunwongse C., Black L., Hanson P., 1998 Mapping of the Ph-3 gene for late blight from L pimpinellifolium L3708 Report of Tomato Genetics Cooperative, 48: 13 14 [37] Gallegly, M.E 1960 Resistance to the late blight fungus in tomato Proceedings of the Campbell Soup Co., USA: 113-135 [38] Gallegly, M.E 1960 Resistance to the late blight fungus in tomato Proceedings of the Campbell Soup Co., USA: 113-135 [39] Peirce,L.C.1971 Linkage tests with Ph conditioning resistance to race O, Phytophthora infestans TGC report 21:30 [40] Conover,R.A and J.M.Walter 1952 Heritability resistance to late blight of tomato Phytopathology 42: 197-199 [41] AVRDC 1994 1993 progress report Asian vegetable research and development center, Shanhua, Tainan, Taiwan: 201-203 [42] Laterrot, H 1975 Selection for the resistance to Phytophthora infestans in tomato.Annales de IAmelioration des Plantes Paris 25(2): 129-150 [43] Kole, C., Ashrafi, H., Lin, G., Foolad, M 2006 Identification and molecular mapping of a new R gene, Ph-4,conferring resistance to late blight in tomato.Solanaceae Conf,Univ of Wisconsin,Madison,Abstr 449 [44] Kalloo,G.1991 Genetic Improvement of Tomato Springer, Berlin, Germany [45] Qiu, Y.P., Li, H.T., Zhang, Z.J., Zou, Q.D 2009 RAPD marker of the resistant gene Ph-3 for tomato late blight ACTA HORTICULTURAE SINICA, v.36(8):1227-1232, 2009 [46] Park, P.H.,Y.Chae, H.R Kim, K.H Chung, D.G Oh, K.T Kim 2010 Development of a SCAR Marker Linked to Ph-3 in Solanum ssp Korean J Breed Sci 42(2) : 139~143 (2010) [...]... bệnh sương mai hại cà chua do 1 gene trội hoàn toàn quy định, chỉ thị TOM236 liên kết với gene kháng bệnh (5,7 cM), và có thể ứng dụng trong MAS (hình 9) Hình 9: Bản đồ liên kết gene kháng bệnh sương mai và chỉ thị phân tử TOM236 trên nhiễm sắc thể số 9 của cà chua [43] 2.6 Chọn tạo giống cà chua kháng bệnh sương mai bằng chỉ thị phân tử tại Việt nam Chương trình nghiên cứu chọn tạo giống cà chua chống. .. vụ cho chọn tạo giống 21 -Dòng cà chua (F5-F7) kháng bệnh sương mai, năng suất trên 40 tấn/ha đã được tạo ra bằng chỉ thị phân tử Các dòng cà chua được tạo ra từ chương trình này cần tiếp tục đánh giá tính ổn định về khả năng chống chịu bệnh và các đặc điểm nông sinh học khác 22 Phần 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Mẫu dòng/ giống cà chua Thí nghiệm gồm 17 mẫu dòng/ giống, trong đó có mẫu... kháng bệnh sương mai còn phụ thuộc vào tuổi lá Các lá già mẫn cảm với bệnh sương mai hơn lá non, nhưng tuổi cây ảnh hưởng không rõ đến mức độ kháng bệnh [37] Hình 3: Hình thái bộ phận sinh sản của nấm sương mai : Bọc bào tử động (sporangia), bào tử động (zoospore), Oospore (tính từ trái qua phải) 2.3 Chọn tạo giống cà chua chống chịu bệnh sương mai Các nỗ lực tạo giống cà chua kháng bệnh sương mai đã... trạng mong muốn Các chỉ thị liên kết kém sẽ xuất hiện tần số trao đổi chéo lớn, chọn lọc kém chính xác +Không sẵn có các chỉ thị phân tử dựa trên PCR Các chỉ thị RFLP và AFLP không có tác dụng trong hầu hết các chương trình chọn giống 2.5 Chỉ thị phân tử trong chọn giống chống chịu bệnh sương mai Chunwongse và cs (2002) đã sử dụng quần thể F2 của cặp lai CLN657 (nhiễm bệnh) x L3708 (kháng bệnh) để khảo... nguyên mới cho nghiên cứu về di truyền – chọn giống Chỉ thị DNA xuất phát từ vùng nhỏ đặc trưng của DNA tạo ra tính đa hình giữa các cá thể trong cùng loài hoặc giữa các loài Trong hai thập kỷ qua hàng loạt dạng chỉ thị phân tử đã được phát triển Trong số các loài cây trồng, cà chua được phát triển rất nhiều chỉ thị phân tử Hiện tại có trên 1000 chỉ thị RFLP, 148 chỉ thị SSR, 77 chỉ thị CAPS đã được... phát hiện bằng phóng xạ hoặc các probe đã đánh dấu màu Chỉ thị DNA có tác dụng nếu chúng phân biệt giữa các cá thể của cùng một loài hay khác loài Các chỉ thị này gọi là chỉ thị đa hình, trong khi những chỉ thị không phân biệt được các kiểu gene gọi là chỉ thị đơn hình Mặt khác, chỉ thị đa hình còn được chia ra 2 nhóm là chỉ thị đồng trội và chỉ thị trội Chỉ đồng trội cho thấy sự khác biệt được các kiểu... bệnh Mẫu giống nhiễm bệnh Hình13: Đánh giá tính kháng bệnh sương mai bằng phương pháp lây bệnh trên lá tách rời Dựa vào kết quả đánh giá tính kháng bệnh sương mai bằng phương pháp lây bệnh trên lá tách rời cho nấm mốc sương mai tiếp xúc vơi mẫu lá của giống kháng bệnh và giống không kháng bệnh thì mẫu giống kháng bệnh lá không bị nhiễm nấm mốc sương mai còn ở mẫu giống không có khả năng kháng mốc sương. .. nhóm cà chua này có đặc điểm tự bất hợp nên gặp khó khăn khi lai với giống cà chua trồng trọt Các gene và QTL kháng bệnh sương mai đã được lập bản đồ liên kết trên các nhiễm sắc thể khác nhau (Hình 4) 14 Hình 4: Bản đồ liên kết các gene (QTL) liên quan đến tính kháng bệnh sương mai của cà chua: LB-1 và LB-2 – QTL kháng bệnh sương mai (Frary và cs, 1998); Ph1, Ph2, Ph3- gene kháng bệnh sương mai[ 38]... thể Các chỉ thị trên bản đồ này có thể ứng dụng trong bất kỳ quần thể nào trong loài Lycopersicon spp Chọn giống bằng chỉ thị phân tử là chọn lọc tính trạng dựa trên biểu hiện của chỉ thị liên kết với tính trạng, nghĩa là chỉ thị liên kết được sử dụng 18 như là chỉ tiêu chọn lọc gián tiếp Về mặt lý thuyết, MAS sẽ giảm giá, tăng tính chính xác của quá trình chọn tạo giống MAS cho phép chọn lọc các tính... cho nhiều gene kháng bệnh Quần thể để lập bản đồ hầu hết sử dụng quần thể F2 hoặc quần thể lai lại BC1 Mức độ liên kết giữa chỉ thị phân tử và gene kháng bệnh làm cơ sở cho việc tạo giống thông qua phương pháp chọn giống bằng chỉ thị phân tử (MAS) Bản đồ phân giải cao (high density map) của cà chua được lập đầu tiên năm 1991 [25] Bản đồ này bao gồm 1030 chỉ thị RFLP và một số chỉ thị kiểu hình đế định