Họ tên : Lớp : Cao học Mã HV : Môn: Sinh dược học bào chế Sinh dược học thuốc tiêm thuốc nhỏ mắt Đề Hãy tìm ví dụ thuốc tiêm thuốc nhỏ mắt tác dụng kéo dài, nội dung:  Phương pháp bào chế (nguyên lý, tá dược, tiến hành…),  Đánh giá tính chất (hình thái, kích thước tiểu phân…), Đánh giá in vitro, in vivo (nếu có) Bài làm Tiểu phân nano Eudragit® (RS100 RL100) có chứa Piroxicam I.Phương pháp bào chế: 1.Nguyên lý: Hầu hết nhiễm khuẩn mắt có triệu chứng viêm, sử dụng sinh phẩm tra mắt có chứa piroxicam giúp cải thiện triệu chứng viêm nhanh chóng, mang lại hiệu điều trị tốt Tuy nhiên sinh khả dụng thấp tính thấm rửa trôi nhanh Nhiều hệ thống đưa thuốc dùng cho mắt hệ tiểu phân micro, liposome hay tiểu phân nano nghiên cứu phát triển với mục đích kéo dài tác dụng thuốc nhỏ mắt Hệ tiểu phân nano polyme mang thuốc vừa làm tăng thấm dược chất có kích thước nano, vừa bảo vệ,che chở dược chất đồng thời kéo dài tác dụng dược chất Polymer Eudragit® RS100 (RS) RL100 (RL) chất mang thuốc kích thước nano với đặc tính ổn định, phân bố kích thước tốt tích điện dương tương tác với anion mucin làm tăng thời gian lưu giữ tiểu phân nano bề mặt giác mạc Công thức: Thành phần Vai trò Piroxicam Dược chất, kháng khuẩn Polymer Eudragit® RS100 (RS) Polymer bẫy dược chất, ổn định kéo RL100 (RL) dài tác dụng Polyvinyl alcol Chất ổn định Manitol Chống kết tụ Nước, ethanol tuyệt đối Dung môi 3.Phương pháp bào chế: phương pháp bốc dung môi từ nhũ tương Bước 1: chuẩn bị - Dung dịch dược chất polyme: hòa tan piroxicam, Eudragit (RS100, RL100, S100) tá dược khác (nếu có 7,5 ml hỗn hợp ethanol dicloromethan theo tỷ lệ 1:2 (dung dịch C) - Môi trường phân tán: hòa tan PVA nước (nồng độ thay đổi theo mục tiêu khảo sát), lọc qua màng lọc cellulose acetat kích thước lỗ lọc 0,2 µm (dung dịch D), làm lạnh nhiệt độ từ -2 0C đến 00C Bước 2: tạo nhũ tương D/N - Nhũ hóa từ từ dung dịch C vào dung dịch D phút (tốc độ 1,5 ml/phút) Làm lạnh hỗn hợp đá muối, trì nhiệt độ khoảng khảo sát (0-20 0C) Khuấy trộn liên tục thời gian phối hợp hai dung dịch - Tiếp tục khuấy trộn thiết bị khác (siêu âm, đồng hóa) phút, Bước 3: Loại dung môi: - Loại dung môi dicloromethan ethanol cách bốc nhiệt độ phòng kết hợp với khuấy từ khoảng 400 vòng phút, 24 - Loại dung dịch PVA cách ly tâm với tốc độ 15000 vòng/phút 30 phút Rửa phần cắn lần nước tinh khiết -Loại nước cách đông khô Piroxicam Eu PVA Cân dragit RS 100 Dicloromethan Nước cất Hòa tan EtOH (2:1) Lọc loại khuẩn Cân Hòa tan Lọc loại khuẩn Dung dịch piroxicam vô khuẩn Dung dịch PVA vô khuẩn Tốc độ phối hợp 1,5ml/ph Nhiệt độ 0-50C Tốc độ khuấy 18000v/ph( máy cánh khuấy, phút) 15000 Khuấ /ph máy ĐNH y 400 , hút) v/ph, 24 giờ, Phối hợp Bốc dung môi Nhiệt độ phòng thí nghiệm Nước cất pha tiêm Manitol Nước cất pha tiêm Ly tâm, rửa tủa Hòa tan Lọc vô khuẩn DD manitol vô khuẩn Đông khô II Đánh giá tính chất đánh giá in vitro: STT Đặc tính Phương pháp đánh giá Kích thước tiểu Đo KTTP phương pháp tán xạ laser sử dụng máy phân đo kích thước tiểu phân Thế zêta Phương pháp đo tán xạ ánh sáng điện di.Thí nghiệm tiến hành mẫu bào chế - Mẫu 1: hệ tiểu phân có piroxicam (P) - Mẫu 2: hệ tiểu phân có riêng Eudragit RS100 (E-RS) - Mẫu 3: hệ tiểu phân piroxicam-Eudragit RS100 tỷ lệ 1:5 (PE-RS5) Định lượng RP-HPLC: pha động : ethanol : dung dịch đệm citroCiprofloxacin.HCl phosphat (55:45), điều chỉnh tới pH 4-4.5 Tốc độ dòng: 1,0 ml phút Bước sóng phát 254nm Thử độ giải phóng Thử qua màng thẩm tích theo nguyên tắc khuếch tán có in vitro giá trị giới hạn 12.000Da, dùng 300mg gel nano Sau giờ, lấy ml môi trường, bổ sung ml môi trường khuếch tán tiến hành thí nghiệm Mỗi lần lấy 1ml, bổ sung 1ml môi trường khuếch tán Mẫu đem định lượng đo quang UV-VIS so sánh với mẫu chuẩn III.Kết đánh giá: 1.Kích thước tiểu phân zeta: Kích thước tiểu phân: TT Tiểu phân piroxicam bào chế với Eudragit (n=5) Tỷ lệ dược chất chất mang Hình dạng, KTTP trung bình Piroxicam:Eud RS 100= 1:2,5 Hình cầu xen kẽ khối tinh thể (PERS2,5) 800 - 1000 nm PDI > 0,5 Piroxicam:Eud RS 100 = 1:5 Đa số hình cầu, 357,5 ± 21,3 nm, (PERS5) PDI = 0,231 ± 0,027 Piroxicam:Eud RS100 = 1:10 Đa số hình cầu, 332,8 ± 32,6 nm (PERS10) PDI= 0,387 ± 0,052 Piroxicam:Eud RL100 = 1:2,5 Đa số hình cầu, 986,7 ± 121,3 nm (PERL2,5) PDI > 0,5 Piroxicam:Eud RL 100 = 1:5 627,4 ± 35,7 nm (PERL5) Piroxicam:Eud RL100 = 1:10 Đa số hình cầu (PERL10) 538,2 ± 25,3 nm, xuất tiểu phân polyme không chứa dược chất, kích thước nhỏ (50-200 nm) Piroxicam:Eud S 1:2,5 Hình trứng, hình cầu, khối tinh thể (PES2,5) 1600 - 1800 nm Piroxicam:Eud S 1:5 Hình trứng, hình cầu, khối tinh thể (PES5) 700 - 100 nm Piroxicam:Eud S 1:10 1000 - 1200 nm (PES10) Dựa vào kết bảng nhận định sau: - Trong loại Eudragit khảo sát, Eudragit RS 100 tạo hệ tiểu phân có kích thước nhỏ -Kích thước tiểu phân khác đáng kể thay đổi tỷ lệ loại polymer này.Tăng tỷ lệ polymer làm tăng độ nhớt, làm tiểu phân to -Đông khô làm tăng đáng kể kích thước tiểu phân nano loại polymer hình thành tinh thể nước đá pha nước làm tích tụ tiểu phân dẫn tới khó tái phân tán lại tiểu phân Thế zeta: Trong nước, công thức chứa Eudragit cho zeta dương lớn Thế Zeta tiểu phân nước (n=5) Mẫu P E-RS Thế Zeta (mV) -10,1 ± 1,6 Ảnh hưởng kích thước tiểu phân + 28,5 ± 1,1 PE-RS5 + 25,2 ± 1,3 Nhiều công trình nghiên cứu nano cho thấy: KTTP nano làm cho lượng dược chất thấm qua màng sinh học tăng lên [19], [58], [72] Trong nội dung nghiên cứu này, khả thấm hệ tiểu phân nano khảo sát mẫu hỗn dịch chứa tiểu phân kích thước 300 nm (PDI = 0,07), 600 nm (PDI= 0,06) , 1000 nm (PDI = 0,05) so sánh với hỗn dịch quy ước Kết cho thấy lượng piroxicam thấm qua giác mạc từ hỗn dịch KTTP 300 nm cao gấp đôi so với hỗn dịch KTTP 600 nm, cao gấp lần so với hỗn dịch KTTP 1000 nm 10 lần so với hỗn dịch quy ước Với kết nghiên cứu đề tài, hỗn dịch chứa piroxicam nano có KTTP trung bình từ 300 đến 350 nm Các kết có triển vọng tốt nghiên cứu bào chế thuốc nhỏ mắt hướng tới sinh khả dụng cao 2.Khảo sát nồng độ piroxicam trong thủy dịch mắt thỏ sau nhỏ thuốc 0,5% (n=6) Thời gian Nồng độ piroxicam thủy dịch mắt thỏ (ng/ml) (phút) Hỗn dịch nano Dung dịch Hỗn dịch quy ước 0 0 925,85 ± 66,73 1362,97± 44,66 1229,17 ± 223,35 10 2103,14 ± 476,60 6049,71 ± 294,79 3198,99 ± 712,67 15 2998,75 ± 390,05 7603,23 ± 491,80 3340,89 ± 213,97 20 3609,36 ± 235,83 7793,57 ± 643,61 3367,34 ± 468,66 25 4902,13 ± 842,84 5357,56 ± 623,37 2666,62 ± 557,91 30 7058,06 ± 399,57 4489,47 ± 421,79 2131,73 ± 191,93 45 5456,73 ± 319,79 1847,11 ± 33,72 1188,63 ± 157,38 60 3515,44 ± 331,46 1042,75 ± 47,15 1066,12 ± 171,36 120 1963,72 ± 252,95 347,82 ± 75,84 764,21 ± 155,67 180 1066,58 ± 163,91 - - Nồng độ Px thủy dịch (ng/ml) Kết cho thấy dung dịch hỗn dịch quy ước đạt Cmax sau 20 phút hỗn dịch nano đạt C max sau 30 phút Nồng độ đỉnh hỗn dịch nano 90% so với dung dịch đạt 210 % so với hỗn dịch quy ước Tính đến thời điểm dừng thí nghiệm, AUC 1-180 hỗn dịch nano cao gấp 1,8 lần so với dung dịch gấp 2,5 lần so với hỗn dịch quy ước AUC dự đoán (A 0-∞) hỗn dịch nano cao gấp 2,1 lần dung dịch gấp 2,9 lần so với hỗn dịch quy ước Thời gian lưu thuốc hỗn dịch nano cao gấp 2,5 lần 1,5 lần so với dung dịch hỗn dịch quy ước Như vậy, tiểu phân bao polyme, hỗn dịch nano bám dính tốt niêm mạc, thời gian lưu thuốc trước giác mạc ko dài nên tỷ lệ dược chất hấp thu qua giác mạc cao hẳn so với hỗn dịch quy ước bào chế từ nguyên liệu ban đầu So sánh sinh khả dụng hỗn dịch nano polyme hỗn dịch nano tinh thể ch (ng/ml) dị y thủ Px độ ng Nồ Đồ thị so sánh mức độ thấm piroxicam qua giác mạc mắt thỏ từ hỗn dịch nano polyme hỗn dịch nano tinh thể (HT: hỗn dịch nano tinh thể, HN: hỗn dịch nano polymer) Hỗn dịch nano tinh thể đạt đỉnh nhanh nhiên mặt nồng độ đỉnh thời gian tác dụng hẳn so với nano polyme Tài liệu trích dẫn: Nguyễn Thị Mai Anh (2014), “Nghiên cứu bào chế đánh giá sinh khả dụng hỗn dịch nano piroxicam dùng cho nhãn khoa”, luận án tiến sỹ dược học trường Đại học Dược Hà Nội Bộ Môn Bào Chế, (2009), Sinh dược học bào chế, Nhà xuất Y học ... cứu bào chế đánh giá sinh khả dụng hỗn dịch nano piroxicam dùng cho nhãn khoa”, luận án tiến sỹ dược học trường Đại học Dược Hà Nội Bộ Môn Bào Chế, (2009), Sinh dược học bào chế, Nhà xuất Y học. .. tốt nghiên cứu bào chế thuốc nhỏ mắt hướng tới sinh khả dụng cao 2.Khảo sát nồng độ piroxicam trong thủy dịch mắt thỏ sau nhỏ thuốc 0,5% (n=6) Thời gian Nồng độ piroxicam thủy dịch mắt thỏ (ng/ml)... sánh với mẫu chuẩn III.Kết đánh giá: 1.Kích thước tiểu phân zeta: Kích thước tiểu phân: TT Tiểu phân piroxicam bào chế với Eudragit (n=5) Tỷ lệ dược chất chất mang Hình dạng, KTTP trung bình Piroxicam:Eud