ĐạI HọC THáI NGUYÊN TRƯờNG ĐạI HọC NÔNG LÂM Lê Viết Tùng Tên đề tài: Phân lập số chủng xạ khuẩn có khả sinh enzyme ngoại bào ứng dụng sản xuất chế phẩm xử lý chất thải chăn nuôi khoá luận tốt nghiệp đại học Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ Sinh học Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 - 2014 Thái Nguyên - 2014 ĐạI HọC THáI NGUYÊN TRƯờNG ĐạI HọC NÔNG LÂM Lê Viết Tùng Tên đề tài: Phân lập số chủng xạ khuẩn có khả sinh enzyme ngoại bào ứng dụng sản xuất chế phẩm xử lý chất thải chăn nuôi khoá luận tốt nghiệp đại học Hệ đào tạo Chuyên ngành Khoa Lớp Khoá học Giảng viên hớng dẫn : Chính quy : Công nghệ Sinh học : CNSH - CNTP : 42 - CNSH : 2010 - 2014 : GS.TS Nguyễn Quang Tuyên - Viện Khoa học Sự sống TS Nguyễn Văn Duy - Khoa CNSH & CNTP ThS Đỗ Bích Duệ - Viện Khoa học Sự sống Thái Nguyên - 2014 LI CM N hon thnh khúa lun ny tụi xin by t lũng bit n sõu sc ti GS.TS Nguyn Quang Tuyờn Phú vin trng Vin Khoa hc S sng Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn ó to mi iu kin thun li v hng dn tn tỡnh tụi quỏ trỡnh thc Tụi cng xin by t lũng bit n chõn thnh n thy giỏo TS Nguyn Vn Duy - Phú trng khoa Cụng ngh Sinh hc v Cụng ngh Thc phm ngi ó tn tỡnh hng dn v giỳp tụi hon thnh khúa lun ny Tụi xin chõn thnh cm n Th.S Bớch Du cỏn b B mụn Cụng ngh Vi sinh - Vin Khoa hc S sng - Trng i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn Tụi xin chõn thnh cm n cỏc thy cụ giỏo Khoa Cụng ngh Sinh hc v Cụng ngh Thc phm, cng nh cỏn b v nhõn viờn Vin Khoa hc S sng - i hc Nụng Lõm Thỏi Nguyờn V cui cựng, tụi xin cm n s quan tõm, giỳp , ng viờn tinh thn ca tt c ngi thõn v bn bố sut thi gian qua Thỏi Nguyờn, ngy thỏng nm 2014 Sinh viờn Lờ Vit Tựng DANH MC CC BNG BIU Trang Bng 2.1 Thnh phn cỏc cht vụ c (%) ca mt s loi vt Bng 2.2 Khi lng cht thi rn chn nuụi Vit Nam Bng 2.3 Tớnh cht ca nc thi chn nuụi ln .6 Bng 2.4 c tớnh cht thi rn chn nuụi nm 2007 Bng 3.1 Trỡnh t cp mi phn ng PCR 18 Bng 3.2 Dng c thớ nghim 19 Bng 3.3 Thit b thớ nghim 20 Bng 4.1 Kt qu phõn lp x khun t v phõn hoai mc 28 Bng 4.2 c im ca cỏc chng x khun phõn lp 29 Bng 4.3 Kt qu xỏc nh hot tớnh enzyme ca cỏc chng XK phõn lp c 30 Bng 4.4 Hot tớnh enzyme ca cỏc chng x khun nghiờn cu sau 48h 32 Bng 4.5 c im hỡnh thỏi ca chng x khun T1 v T4 33 Bng 4.6 c im nuụi cy ca chng x khun T1 v T4 35 Bng 4.7 Kh nng ng húa ng 36 Bng 4.8 Kh nng chng chu mui ca chng XK T1 v T4 37 Bng 4.9 HTKS ca chng x khun tuyn chn 37 Bng 4.10 Kt qu so sỏnh trỡnh t gen ca chng T1 vi gen tng ng ca cỏc chng x khun c ng ký trờn GenBank 39 Bng 4.11 Kt qu so sỏnh trỡnh t gen ca chng T4 vi gen tng ng ca cỏc chng x khun c ng ký trờn GenBank 39 DANH MC CC S , HèNH V Trang Hỡnh 4.1 Hot tớnh enzyme ngoi bo ca mt s chng x khun 31 Hỡnh 4.2 Hot tớnh enzyme ca cỏc chng x khun nghiờn cu sau 48 gi 32 Hỡnh 4.3 Hỡnh thỏi khun lc v CSBT chng x khun T1 v T4 34 Hỡnh 4.4 in di 37 Hỡnh 4.5 in di kim tra sn phm PCR 38 Hỡnh 4.6 Cõy phõn loi th hin mc tng ng di truyn gia chng Streptomyces T1 v T4 vi cỏc chng khỏc thuc chi Streptomyces 40 DANH MC T VIT TT T vit tt Ngha y ca t VSV Nhu cu oxi sinh húa Colony Forming Unit Nhu cu oxi húa hc Cung sinh bo t Cht thi rn Khun ty c cht Khun ty khớ sinh Cht rn hũa tan Tng cc thng kờ Vi sinh vt XK X khun BOD CFU COD CSBT CTR KTCC KTKS SS TCTK MC LC Trang PHN M U 1.1 t 1.2 Mc tiờu nghiờn cu 1.3 í ngha khoa hc v thc tin ca ti 1.3.1 í ngha khoa hc 1.3.2 í ngha thc tin PHN TNG QUAN TI LIU .3 2.2 Tng quan v cht thi chn nuụi 2.2.1 c im ca cht thi chn nuụi 2.2.2 Tỡnh hỡnh ụ nhim mụi trng cht thi chn nuụi Vit Nam 2.2.3 Kh nng gõy ụ nhim ca cht thi chn nuụi 2.3 X khun 2.3.1 V trớ phõn loi v s phõn b ca x khun t nhiờn .9 2.3.2 c im sinh hc ca x khun 10 2.3.4 Phõn loi x khun 14 2.3.5 Enzyme ngoi bo ph bin t x khun 16 PHN I TNG, NI DUNG V PHNG PHP NGHIấN CU 18 3.1 i tng nghiờn cu 18 3.1.1 i tng nghiờn cu 18 3.1.2 Vt liu nghiờn cu 18 3.1.2 Phm vi nghiờn cu 18 3.2 Thi gian v a im nghiờn cu 18 3.3 Húa cht v thit b 19 3.3.1 Húa cht 19 3.3.2 Dng c v thit b 19 3.3.3 Mụi trng nghiờn cu 20 3.4 Ni dung nghiờn cu 20 3.5 Phng phỏp nghiờn cu 21 3.5.1 Phng phỏp thu thp mu 21 3.5.2 Phng phỏp phõn lp v nuụi cy x khun 21 3.5.3 Phng phỏp nghiờn cu mt s c im sinh hc ca x khun 23 3.5.3 Phng phỏp ỏnh giỏ kh nng sinh enzyme ngoi bo [10] 23 3.5.5 Kim tra tớnh khỏng mt s loi vi sinh vt gõy bnh [10], [11] 24 3.5.6 Phng phỏp xỏc nh trỡnh t on gen 16S rRNA 25 3.5.7 Phng phỏp x lý s liu 27 PHN KT QU V THO LUN 28 4.1 Kt qu phõn lp cỏc chng x khun 28 4.1.1 Kt qu phõn lp cỏc chng XK t v phõn hoai mc 28 4.1.2 c im hỡnh thỏi, mu sc khun lc ca 14 chng x khun phõn lp c 29 4.2 Kt qu tuyn chn x khun sinh enzyme ngoi bo 30 4.3 Kt qu ỏnh giỏ kh nng sinh enzyme ngoi bo ca cỏc chng phõn lp 31 4.4 Kt qu xỏc nh mt s c iờm sinh hc ca chng XK T1 v T4 33 4.4.1 c im hỡnh thỏi v nuụi cy 33 4.4.2 Kt qu xỏc nh mt s c im sinh hc ca chng XK T1 v T4 35 4.5 Kt qu xỏc nh tớnh khỏng cỏc vi sinh vt kim nh 37 3.6 Kt qu nh danh bng sinh hc phõn t 37 PHN KT LUN V KIN NGH 41 5.1 Kt lun 41 5.2 Kin ngh 41 TI LIU THAM KHO 42 PHN M U 1.1 t Nụng nghip l ngnh kinh t quan trng ca Vit Nam, cú vai trũ quan trng chin lc n nh v phỏt trin kinh t - xó hi Hng nm ngnh ny úng gúp khong 18% tng GDP c nc [3] Trong c cu ngnh Nụng Nghip nc ta, ngnh chn nuụi úng vai trũ ht sc quan trng Sn phm ca ngnh l nhng nhu yu phm, mt hng rt cn thit i vi cuc sng hng ngy ca ngi õy cng l ngnh kinh t giỳp ngi nụng dõn tng thu nhp, gii quyt c nhiu cụng n vic lm cho ngi lao ng Tuy nhiờn, bờn cnh vic sn xut v cung cp mt s lng ln sn phm quan trng cho nhu cu ca ngi, ngnh chn nuụi cng ó gõy nờn nhiu hin tng tiờu cc v mụi trng Ngoi cht thi rn v cht thi lng, chn nuụi hin úng gúp khong 18% hiu ng núng lờn ca trỏi t thi cỏc khớ gõy hiu ng nh kớnh, ú cú 9% tng s khớ CO2 sinh ra, 37% khớ mờtan (CH4) v 65% oxit nit (N2O) [25] Ngy nay, xó hi phỏt trin kốm theo ú l s gia tng dõn s din khụng ngng dn ti nhu cu i vi sn phm ngnh chn nuụi ngy cng ln ỏp ng c yờu cu ngy cng ln ú ngnh chn nuụi cn phi cú nhng thay i tớch cc ú l m rng quy mụ sn xut, thay i phng thc sn xut hay ng dng cỏc bin phỏp khoa hc k lm tng nng sut, cht lng, sn lng cỏc sn phm ca ngnh V vic m rng quy mụ sn xut chn nuụi cng ng ngha vi lng cht thi chn nuụi thi s tng lờn T ú lm ny sinh thờm nhiu nhng v mụi trng v nhng h ly ca nú cú th tỏc ng tiờu cc ti ngi i vi nhng h chn nuụi nh l, khụng trung thụng thng nhng ngun cht thi t chn nuụi gia sỳc, gia cm ch c thu dn s si khụng x lý trit gõy ụ nhim ngun nc, khụng khớ l mụi trng sng ca chỳng ta Hu ht nhng trang tri chn nuụi ngi ta cha quan tõm ỳng mc n x lý cht thi quỏ trỡnh chn nuụi to iu ny gõy thit hi ln v kinh t v e sc kho dõn c, l nguyờn nhõn phỏt sinh nhiu dch bnh nguy him gia sỳc, gia cm cng nh ngi (st xut huyt, viờm nóo nht bn, cỳm virut ) [8] Thnh phn cht thi chn nuụi cú cha nhiu hp cht hu c nh tinh bt, cellulose, protein [25] õy l ngun hu c phong phỳ nu c em x lý v tỏi s dng phc v sn xut nụng nghip Nh vy, va cú giỏ tr kinh t m quan trng hn l gim thiu c nguy c gõy ụ nhim mụi trng Hin nay, cú nhiu phng phỏp x lý cht thi chn nuụi nh phng phỏp hoai mc thụng thng, cụng ngh biogas, s dng lm phõn bún, [25] Nhng cỏc phng phỏp ny thng cn phi cú kinh phớ u t cao, yờu cu k thut, mt nhiu thi gian x lý cho nờn cha thc s tin dng vi b nụng dõn S dng phng phỏp sinh hc x lý mụi trng ang ngy cng tr nờn ph bin bi nhng u im nh n gin, d thc hin, chi phớ thp, cú th kt hp vi nhng bin phỏp khỏc nõng cao hiu qu x lý T thc tin ú tụi tin hnh thc hin ti: Phõn lp mt s chng x khun cú kh nng sinh enzyme ngoi bo ng dng sn xut ch phm x lý cht thi chn nuụi 1.2 Mc tiờu nghiờn cu - Phõn lp v tuyn chn c mt s chng x khun cú kh nng sinh enzyme ngoi bo mnh - Nghiờn cu c c im sinh hc, kh nng sinh enzyme ngoi bo lm c s cho vic sn xut ch phm x lý cht thi chn nuụi 1.3 í ngha khoa hc v thc tin ca ti 1.3.1 í ngha khoa hc - Phõn lp v tuyn chn c mt s chng x khun ti Thỏi Nguyờn cú kh nng sinh enzyme ngoi bo - B sung c s d liu v nghiờn cu x khun - B sung thờm d liu v kh nng s dng x khun x lý cht thi chn nuụi 1.3.2 í ngha thc tin - Xỏc nh c cỏc chng x khun phõn gii cht thi chn nuụi ng dng vo thc t sn xut ch phm vi sinh nhm lm n gin v rỳt ngn quỏ trỡnh phõn gii cht thi chn nuụi 36 Bng 4.7 Kh nng ng húa ng Ngun ng STT Mc sinh trng Chng T1 Chng T4 D - glucose Saccharose Fructose Lactose Manitol Inositol ++ ++ ++ +++ +++ +++ ++ +++ ++ +++ ++ +++ Xylose +++ +++ Maltose + + Arabinose ++ +++ 10 Khụng cú ng (i chng õm) + + Ghi chỳ: +++ sinh trng mnh + sinh trng yu ++ sinh trng trung bỡnh - khụng sinh trng Cỏc chng x khun cú kh nng s dng c nhiu ngun ng khỏc ỏnh giỏ kh nng ng húa ngun ng ca x khun cú ý ngha quan trng vic phõn loi, ng dng chỳng vo thc tin sn xut Theo kt qu nghiờn cu, c chng x khun u cú kh nng ng húa c ngun ng nghiờn cu cỏc mc khỏc Chng T4 sinh trng tt hn trờn mụi trng cú cỏc ngun ng saccharose, lactose, inositol, xylose, arabinose v sinh trng kộm hn trờn mụi trng maltose, mụi trng cũn li mc sinh trng trung bỡnh Chng T1 sinh trng tt trờn mụi trng cha lactose, manitol, inositol v xylose.V sinh trng kộm trờn mụi trng cha maltose 4.3.2.2 Kh nng chng chu mui Hai chng x khun c nuụi cy trờn mụi trng ISP1 cú b sung NaCl cỏc nng 1, 3, 5, v 9% v 0% (i chng) Sau - 14 ngy nuụi 37 cy, kt qu thu c c trỡnh by bng 4.8 cho thy c chng u cú kh nng sinh trng c nng mui ti a l 7% Bng 4.8 Kh nng chng chu mui ca chng XK T1 v T4 Nng mui 0% 1% 3% 5% 7% 9% T1 ++ ++ ++ ++ ++ - T4 ++ +++ ++ ++ + - Ghi chỳ: +++: sinh trng tt ++: sinh trng trung bỡnh +: sinh trng yu -: khụng sinh trng 4.4 Kt qu xỏc nh tớnh khỏng cỏc vi sinh vt kim nh S dng phng phỏp thi thch ỏnh giỏ kh nng c ch vi sinh vt gõy bnh Hot tớnh khỏng sinh c xỏc nh theo kớch thc vũng vụ khun: D - d (mm), ú D l ng kớnh vũng vụ khun, d l ng kớnh ca thi thch Kt qu c th hin trờn bng 4.8 Bng 4.9 HTKS ca chng x khun tuyn chn Hot tớnh c ch VSV gõy bnh (D - d, mm) Chng Escherichia coli Salmonella 10 T1 15 T4 Qua bng ta thy c chng T1 v T4 u cú kh nng khỏng E coli (T1=10, T4=15) cao hn kh nng khỏng vi Salmonella sp (T1=5, T4=6) Tuy nhiờn mc khỏng ca c hai chng cha c cao 4.6 Kt qu nh danh bng sinh hc phõn t Tỏch chit DNA tng s ca chng x khun T1 v T4 ng chy 1: DNA tng s chng T1 ng chy 2: DNA tng s chng T4 Hỡnh 4.4 in di sn phm DNA tng s 38 Kt qu in di kim tra sn phm tỏch chit DNA tng s trờn hỡnh 4.4 cho thy bng DNA tng s gn, rừ rng chng t sn phm tỏch chit ớt b t góy iu kin lm khuụn cho phn ng PCR khuch i vựng gen 16S rRNA, s dng cp mi 341F v 907R phc v cho vic gn trỡnh t gen: kt qu khuch i vựng gen 16S rRNA ca chng T1 v T4 bng cp mi 341F v 907R th hin hỡnh 4.5 Kt qu in di kim tra sn phm PCR ca chng T1 v T4 c th hin hỡnh 4.6 cho thy: ti mi ng bng ch xut hin mt bng DNA rừ nột cú kớch thc khong 546bp, chng t sn phm PCR tiờu chun cho vic gii trỡnh t Kt qu gii trỡnh t gen 16S rRNA ca chng T1 v T4 c trỡnh by phn ph lc Trỡnh t gen 16S rRNA c so sỏnh vi cỏc chng x khun cụng b trờn ngõn hng gen bng chng trỡnh Blast 546bp ng chy M: Thang DNA chun 1kb ng chy 1: Sn phm PCR ca chng x khun T1 ng chy 2: Sn phm PCR ca chng x khun T4 Hỡnh 4.5 in di kim tra sn phm PCR 39 Bng 4.10 Kt qu so sỏnh trỡnh t gen ca chng T1 vi gen tng ng ca cỏc chng x khun c ng ký trờn GenBank Trỡnh t gen 16S-rRNA ca chng Mó s truy cp trờn tng x khun T1 GenBank ng (%) Streptomyces scabiei JQ860222 99 Streptomyces rimosus DQ299944 99 Streptomyces reticuli GU383165 99 Streptomyces erumpens EF031295 99 Streptomyces griseus EF661794 99 Streptomyces albospinus FJ406369 99 Streptomyces megasporus AY289795 99 Streptomyces griseorubens KF938603 99 Bng 4.11 Kt qu so sỏnh trỡnh t gen ca chng T4 vi gen tng ng ca cỏc chng x khun c ng ký trờn GenBank Trỡnh t gen 16S-rRNA ca Mó s truy cp trờn tng chng x khun T4 GenBank ng (%) Streptomyces sp XKNA21 AM398159 99 Streptomyces sp SCAUEC4 KJ093410 99 Streptomyces sp SDT 101 KJ019011 99 Streptomyces sp MUSC193T KF692201 99 Streptomyces sp SDT85 KJ018998 99 Streptomyces sp VITJS JQ234978 99 Streptomyces sp Coeruleofuscus JQ659879 99 40 Khi so sỏnh cỏc trỡnh t gen nhn c nghiờn cu vi cỏc trỡnh t gen tng ng trờn ngõn hng c s d liu Genbank bng cụng c Blast (NCBI) cho thy gen 16S- r RNA ca chng x khun T1 v T4 cú tng ng cao (99%) so vi gen tng ng ca cỏc chng trờn ngõn hng gen Nh vy, kt qu phõn loi cho thy chng x khun T1 v T4 thuc chi Streptomyces Hỡnh 4.6 Cõy phõn loi th hin mc tng ng di truyn gia chng Streptomyces T1 v T4 vi cỏc chng khỏc thuc chi Streptomyces Qua cõy phõn loi ta nhn thy rng hai chng x khun T1 v T4 cú chung ngun gc v tỏch bit vi cỏc chng x khun c so sỏnh Tuy nhiờn mi quan h h hng gia hai chng x khun T1 v T4 vi cỏc chng x khun s dng so sỏnh cú s khỏc Cỏc chng Streptomyces rimosus, Streptomyces reticuli, Streptomyces griseorubens l cú mi quan h h hng vi chng x khun T1 v T4 gn hn c, cỏc chng x khun ny cựng vi T1 v T4 nm mt nhỏnh phõn loi nhỏnh phõn loi khỏc gm cú cỏc chng Streptomyces scabiei, Streptomyces erumpens, Streptomyces stelliscabiei, Streptomyces griseus, Streptomyces albospinus thỡ cú mi quan h h hng xa hn Nm tỏch bit riờng hn trờn mt nhỏnh phõn loi, chng Streptomyces megasporus l cú mi quan h h hng xa nht i vi hai chng x khun T1 v T4 41 PHN KT LUN V KIN NGH 5.1 Kt lun ó phõn lp mu t v phõn hoai mc trờn a bn Trng i hc Nụng Lõm v Thnh ph Thỏi Nguyờn Tuyn chn c chng x khun cú hot tớnh phõn gii cellulose, tinh bt v protein cao, cú kh nng c ch vi sinh vt gõy bnh ó nghiờn cu c mt s c im sinh hc v phõn loi cỏc chng x khun ny Cỏc chng x khun tuyn chn c thuc chi Streptomyces, chỳng cú hot tớnh tớnh enzyme ngoi bo mnh (cellulase, amylase, protease) Cú th tip tc nghiờn cu lm c s sn xut ch phm x lý cht thi chn nuụi 5.2 Kin ngh Tip tc nghiờn cu, s dng hai chng Streptomyces T1 v T4 phõn lp c ch to ch phm sinh hc v th nghim hiu qu ch phm x lý cht thi chn nuụi 42 TI LIU THAM KHO A TI LIU TING VIT B Nụng nghip v Phỏt trin nụng thụn (2005), Tp bi ging bo v mụi trng v phỏt trin chn nuụi theo hng bn vng, H Ni B Nụng nghip v Phỏt trin nụng thụn (2005), Khoa hc cụng ngh nụng nghip 20 nm i mi, NXB Chớnh tr quc gia, H Ni, tr.11-13 B Nụng Nghip v phỏt trin Nụng thụn (2013), Bỏo cỏo Tng kt ngnh Nụng nghip v PTNT nm 2013, H Ni B Ti Nguyờn v Mụi trng (2011), Bỏo cỏo mụi trng Quc gia nm 2011, H Ni Tng Th Chớnh (2007), Nghiờn cu sn xut cỏc ch phm vi sinh vt v ng dng x lý ụ nhim mụi trng, Vin Cụng Ngh Mụi Trng, Vin KH&CN Vit Nam Vi Th oan Chớnh (2011), Tuyn chn v nghiờn cu x khun cú kh nng i khỏng vi mt s chng vi khun gõy nhim trựng bnh vin, Bỏo cỏo tng kt ti khoa hc v cụng ngh cp B, Mó s B2009 TN07 - 02 Cc chn nuụi (2008), ễ nhim mụi trng chn nuụi gia sỳc, gia cm trung v cỏc gii phỏp khc phc, H Ni Cc chn nuụi (2008), Bỏo cỏo ụ nhim mụi trng chn nuụi gia sỳc, gia cm trung v cỏc gii phỏp khc phc, H Ni Cc Thỳ y (2008), ễ nhim mụi trng hot ng chn nuụi thỳ y v gii phỏp khc phc, H Ni 10 Nguyn Lõn Dng, Nguyn ỡnh Quyn, Phm Vn Ty (2000), Vi sinh vt hc (tp 1, 2), NXB Giỏo Dc 11 Nguyn Lõn Dng, Phm Th Trõn Chõu (1972), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt hc, Tp NXB Khoa hc v K thut, H Ni 12 Nguyn Lõn Dng, Phm Th Trõn Chõu (1978), Mt s phng phỏp nghiờn cu vi sinh vt hc, Tp NXB Khoa hc v K thut, H Ni 43 13 Nguyn Lõn Dng, Nguyn Kim N Tho (2006), Cỏc nhúm vi khun ch yu, Vietciences 14 Nguyn Lõn Dng (dch) (1993), Thc vi sinh vt hc, NXB i hc v Trung hc chuyờn nghip, H Ni 15 Nguyn Hu on, Bựi Xuõn Trch, V ỡnh Tụn (2011), Qun lý cht thi chn nuụi, NXB Nụng Nghip, H Ni 16 V Th Minh c (2001), Thc vi sinh vt hc, NXB i hc Quc gia 17 Hong Kim Giao, Bựi Th Oanh , o L Hng (2008), ễ nhim mụi trng chn nuụi gia sỳc, gia cm trung v cỏc gii phỏp khc phc, Tp nụng Nụng nghip v Phỏt trin nụng thụn, 10/2008, tr5-10 18 Thu H (2004), Nghiờn cu x khun sinh cht khỏng sinh chng nm phõn lp t t Qung Nam Nng, Lun ỏn tin s sinh hc, H Ni 19 Bựi Th Vit H (2006), Nghiờn cu x khun sinh cht khỏng sinh chng nm gõy bnh thc vt Vit Nam, Lun ỏn Tin s Sinh hc, H Ni 20 Trn Thanh Loan, Ngc Biờn (2012), k thut s dng ch phm sinh hc sn xut nụng nghip, Ti liu k thut, tr.2 21 Nguyn Vn Minh, Dng Nht Linh (2008), Thc vi sinh c s, Trng i hc M Thnh ph H Chớ Minh 22 Nguyn Xuõn Thnh (2007), Giỏo trỡnh vi sinh vt hc cụng nghip, NXB Giỏo dc 23 Nguyn Xuõn Thnh, Nguyn Th Hin (2003), Giỏo trỡnh vi sinh vt hc nụng nghip, NXB i hc S phm 24 Trn ỡnh Toi, Trn Th Hng (2007), Tng lai ng dng Enzyme x lý ph thi, Tp Khoa hc i hc Quc gia H Ni, Khoa hc T nhiờn v Cụng ngh, 23, 75 - 85 25 Trng i hc Nụng Nghip H Ni (2009), Bỏo cỏo hi tho khoa hc Cht thi chn nuụi - Hin trng v gii phỏp, H Ni 44 26 Trn Linh Thc (2005), Phng phỏp phõn tớch vi sinh vt nc, thc phm v m phm, Nh xut bn Giỏo dc 27 Kim Tuyn (2011), Nghiờn cu s a dng sinh hc ca mt s chng x khun thuc chi Streptomyces phõn lp ti Thỏi Nguyờn v nh hng ng dng Lun thc s 28 Vin Chn nuụi (2006), iu tra ỏnh giỏ hin trng mụi trng chn nuụi, H Ni 29 Trn Th Cm Võn (2001), Giỏo trỡnh vi sinh vt hc mụi trng, NXB i hc Quc gia H Ni 30 Lờ Th Xuõn, Phan Th Tuyt Minh, Trn H Ninh, Tng Th Chớnh (2005), Phõn lp v tuyn chn cỏc chng x khun a nhit sinh tng hp xenllulaza cao, Bỏo cỏo khoa hc, Hi ngh ton quc, Nghiờn cu c bn khoa hc s sng, NXB Khoa Hc v K Thut, H Ni, tr 872- 875 B TI LIU NC NGOI 31 Agrios, G N(1997), Plant Pathology, 4th Edition Academic Press, San Diego, USA 32 Berge's Manual of determination of bacteria(1986), Academic press, London and New York 33 Chen M., Xiao X., Wang P., Zeng X., Wang F (2008), Arthrobacter ardleyensis sp nov isolated from Antarctic lake sediment and deep-sea sediment, Arch Microbiol, 183, 301- 305 34 Geschva, A Shurk and W Romer (1979), "Phosphate inhbition of secondary metabolism in Streptomyces hygroscopicus and its reversal by cylic AMP", Arch Microbiol, 121, p 91 - 96 35 Haijun D, Taifo M., Ingo T., Sungsook L., Heinz G (2001), Biosynthesis of the Validamycin A by Streptomyces hygroscopicus var limoneus, J Am Chem Soc., 123, 2733 - 2742 45 36 HeshamM Abdulla (2007), Enhancement of rice straw compostinh by lignocelluloselytic Actinomyces strain, Int J Agriculture & biology, (1), pp 106-109 37 Newman D.J, Cragg G.M, Snader K.M (2003), "Natrural products as ourees of new drugs over the period", J Nat Prod, 66, 1022 - 1037 38 Jesus G M., Silvia G A., Ana I A , Francisco R V (1999), Use of the 16S23S ribosomal gens spacer region in studies of prokaryotic diversity, Unidad de Microbiological, Centro de Biologia Molecular y Celular, 18 , Spain 39 Jeffrey L S H (2008), Isolation, characterization and identification of actinomycetes from agriculture soils at Semongok, Sarawak, African Journal of Biotechnology, (20), 3697 - 3702 40 Ludwig W., Schleifer K H (1994), Bacterial phylogeny based on 16S and 23S rRNA sequence analysis, FEMS Microbiol Rev., 15, 155 - 173 41 Ramasamy Vijaykumar, Chinasamy Muthukumar, Nooruddin Thajuddin, namalai Panneerselvam, and Regasamy Saravanamuthu (2007), Studies on the diversity of actinomycetes in the Palk Stait region of Bay of Bengal, India, Actinomycetologica 42 Sahnay S., Benton M J and Ferry P A.(2010), Links bettween global taxonomic diversity and the expansion of vertebrates on land, Biology Letters, 6(4), pp.544-547 43 Shang S Y., Jan Y W (1999), Protease and amylase production of Streptomyces rimosus in submerged and solid state cultivations, Bot.Bull.Acad Sin, (40), 259 - 265 44 Shirling E.B., Gottlieb D (1996), Methods for characterization of Streptomycesspecies, International Journal of Systematic Bacteriology, 16 (3) 45 Vasanthabharathi V., Lakshminarayana R., Jayalakshmi S (2011), Melanin production from manine Streptomyces, African Journal of Biotechnology, 10(54), 11224 - 11234 46 46 Waksman S A (1961), The Actinomycet es: Classification, identification and descriptions of genera and species, The Williams & Wilkins Co., Baltimore, 2, USA 47 William S.T and Dacier F.L(1965), Use of antibiotics for selective isolation and enumeration of actimomycetes in soil, J.Gen, Microbiol, 38: 251 - 261 48 Williams S T., Sharpe M E., Holt J G (1989), Bergeys manual of systematic bacteriology, Williams & Wilkins, Baltimore, USA PH LC >gi|T1 TGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGCACTTAATGCGTTAGCTGCGGCACGGACGACG TGGAATGTCGCCCACACCTAGTGCCCACCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATC TAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTATCGGCCCAGAGAT CCGCCTTCGCCACCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGG AATTCCGATCTCCCCTACCGAACTCTAGCCTGCCCGTATCGACTGCAGACCCGGGG TTAAGCCCCGGGCTTTCACAACCGACGTGACAAGCCGCCTACGAGCTCTTTACGCC CAATAATTCCGGACAACGCTCGCGCCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAG TTAGCCGGCGCTTCTTCTGCAGGTACCGTCACTTTCGCTTCTTCCCTGCTGAAAGA GGTTTACAACCCGAAGGCCGTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTTCG CCCATTGTGCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGT >gi|T4 TGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGGGCACTTAATGCGTTAGCTGCGGCACGGACAACG TGGAATGTTGCCCACACCTAGTGCCCACCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATC TAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTATCGGCCCAGAGAT CCGCCTTCGCCACCGGTGTTCCTCCTGATATCTGCGCATTTCACCGCTACACCAGG AATTCCGATCTCCCCTACCGAACTCTAGCCTGCCCGTATCGACTGCAGACCCGGGG TTAAGCCCCGGGCTTTCACAACCGACGCGACAAGCCGCCTACGAGCTCTTTACGCC CAATAATTCCGGACAACGCTTGCGCCCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAG TTAGCCGGCGCTTCTTCTGCAGGTACCGTCACTTTCGCTTCTTCCCTGCTGAAAGA GGTTTACACCCGAAGGCCGTCATCCCTCACGCGGCGTCGCTGCATCAGGCTTGCGC CCATTGTGCAATATTCCCCACTGTGGCCTCCCGTAGGAGG PH LC STT Húa cht Khi lng (g) Mụi trng Gause (g/l) (Mụi trng nuụi cy x khun) Tinh bt 20 NaCl K2HPO4 0.5 MgSO4.7H2O 0.5 KNO3 FeSO4 0.01 Agar 20 H2O 1000 ml Mụi trng tinh bt Tinh bt 20 Pepton NaCl 0.5 Agar 20 H2O 1000ml Mụi trng casein NaCl K2HPO4 1.5 KH2PO4 0.5 Casein Cao tht Agar 20 H2O 1000ml Mụi trng cellulose (NH4)2HPO4 20 KH2PO4 0.5 MgSO4 0.4 NaCl 0.1 FeSO4, MnSO4 Vt STT 4 5 Húa cht Bt giy Agar H2O 4.Mụi trng Gause Cao tht Pepton NaCl Glucose Agar H2O Mụi trng ISP1 Trypone Cao nm men Agar H2O Mụi trng ISP6 (pH7-7,2) Pepton Agar Cao nm men Xtrat st Nc ct Mụi trng ISP9 (pH 6,8-7) (NH4)2SO4 K2HPO4 KH2PO4 MgSO4.7H2O Agar Nc ct Mui A MPA 1000ml (pH7,0 - 7,2) Khi lng (g) 20 1000ml 5 10 20 1000ml 20 1000ml 20 0,5 1000ml 2,64 5,65 2,38 20 1000ml 1ml STT Húa cht Cao tht Pepton NaCl Agar Nc ct Khi lng (g) 3g 5g 5g 20g 1000ml Mui A: CuSO4.5H2O: 0,64g; FeSO4.7H2O: 0,11g; MgCl2: 0,79g; nc ct: 100ml [...]... Tổng quan về chất thải chăn nuôi 2.2.1 Đặc điểm của chất thải chăn nuôi Chăn nuôi được xác định là một trong những ngành sản xuất tạo ra một lượng chất thải nhiều nhất ra môi trường Chất thải chăn nuôi là một tập hợp phong phú bao gồm các chất ở tất cả các dạng rắn, lỏng hay khí phát sinh trong quá trình chăn nuôi, lưu trữ, chế biến hay sử dụng chất thải [15] Các chất thải chăn nuôi được phát sinh chủ... khả năng sinh enzyme và các chất kháng sinh nên được ứng dụng trong nhiều lĩnh vực của đời sống [6], [18], [19] Ngoài ra, xạ khuẩn có hệ enzyme vô cùng phong phú Chúng có khả năng phân hủy và sử dụng các chất hữu cơ khó phân hủy như axit humic trong đất đến các hợp chất hữu cơ phức tạp như: tinh bột, protein, các pectin, cellulose… chứng tỏ rằng xạ khuẩn phải có khả năng sinh những hệ enzyme tương ứng. .. việc sản xuất các chế phẩm bao gồm một số enzyme để xử lý phế thải là các polysaccharide thực vật [24] - Enzyme protease: Protease thuộc nhóm enzyme thủy phân protein được sử dụng rộng rãi trong công nghiệp thực phẩm, chẳng hạn trong chế biến cá và thịt Protease có thể thủy phân các protein có trong chất thải, để sản xuất các dung dịch đặc hoặc các chất rắn khô có giá trị dinh dưỡng cho cá hoặc vật nuôi. .. trình bày chi tiết trong phần phụ lục 3.4 Nội dung nghiên cứu - Nội dung 1: Phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có khả năng sinh enzyme ngoại bào mạnh - Nội dung 2: Nghiên cứu các đặc điểm hình thái, nuôi cấy, sinh lý – sinh hóa và phân loại của một số chủng xạ khuẩn đã tuyển chọn được 21 - Nội dung 3: Kiểm tra đặc tính kháng một số loại vi sinh vật gây bệnh của các chủng xạ khuẩn tuyển chọn được... mức độ sinh trưởng của xạ khuẩn so sánh với xạ khuẩn được nuôi cấy trong môi trường không bổ sung NaCl [11] 3.5.3 Phương pháp đánh giá khả năng sinh enzyme ngoại bào [10] - Phương pháp sơ tuyển các chủng xạ khuẩn sinh enzyme Cấy chấm điểm các chủng xạ khuẩn phân lập được vào đĩa petri chứa môi trường chứa thành phần tương ứng cenlulose, protein, casein để sơ tuyển khả năng sinh enzyme của các chủng. .. 2.3.3 Bào tử và sự hình thành bào tử của xạ khuẩn Bào tử xạ khuẩn được hình thành trên các nhánh phân hóa của khuẩn ty khí sinh ( gọi là cuống sinh bào tử) Đó là cơ quan sinh sản đặc trưng cho xạ khuẩn Trên mỗi cuống sinh bào tử mang 30 – 100 bào tử, đôi khi có thể mang tới 200 bào tử cũng có khi chỉ có một hoặc hai bào tử (chi Saccharomonosprora, chi Microbispora) Hình thái, cuống sinh bào tử và bào. .. điểm sinh lý, sinh hóa thường được kết hợp để định danh xạ khuẩn một cách chính xác tên loài Các đặc điểm sinh lý sinh hóa thường được kết hợp sử dụng trong phân loại xạ khuẩn là khả năng đồng hóa các nguồn cacbon, nitơ, nhu cầu các chất kích thích sinh trưởng, khả năng phân hủy các chất khác nhau nhờ khả năng sinh enzyme Bên cạnh đó, các chỉ tiêu khác như mối quan hệ với pH, nhiệt độ, khả năng chịu... và chế biến hay xử lý chất thải Chất thải chăn nuôi chứa nhiều thành phần có khả năng gây ô nhiễm môi trường, làm ảnh hưởng đến sự sinh trưởng, phát triển của gia súc, gia cầm và sức khỏe của con người Vì vậy, việc hiểu rõ thành phần và các tính chất của chất thải chăn nuôi nhằm có biện pháp quản lý và xử lý thích hợp, khống chế ô nhiễm, tận dụng nguồn chất thải giàu hữu cơ vào mục đích kinh tế là một. .. lở cao Trong chất thải chăn nuôi luôn tồn tại một lượng lớn vi sinh vật hoại sinh Ô nhiễm do chất thải chăn nuôi không chỉ ảnh hưởng nặng tới môi trường sống dân cư mà còn gây ô nhiễm nguồn nước, môi trường không khí, tài nguyên đất và ảnh hưởng lớn đến kết quả sản xuất chăn nuôi Chất thải chăn nuôi khi chưa xử lý mang đi sử dụng cho trồng trọt như tưới, bón cho cây rau, củ, quả sau đó các sản phẩm này... Chăn nuôi năm 2006 [7] về chăn nuôi lợn ở 8 vùng sinh thái thì số gia trại, trang trại chăn nuôi lợn có áp dụng các biện pháp xử lý chất thải chiếm khoảng 74%, còn lại không xử lý chiếm khoảng 26%; trong các hộ, các cơ sở có xử lý thì 64% áp dụng phương pháp sinh học (Biogas, ủ v.v ), số còn lại 36% xử lý bằng phương pháp khác Chăn nuôi nước ta thời gian qua chủ yếu vẫn là phân tán nhỏ lẻ, quy mô hộ ... TRƯờNG ĐạI HọC NÔNG LÂM Lê Viết Tùng Tên đề tài: Phân lập số chủng xạ khuẩn có khả sinh enzyme ngoại bào ứng dụng sản xuất chế phẩm xử lý chất thải chăn nuôi khoá luận tốt nghiệp đại học Hệ đào tạo... cm vi cht khỏng sinh Tuy nhiờn, phn ln cỏc c im sinh lý sinh húa cựng c im nuụi cy d b bin ng v cú giỏ tr thp v mt phõn loi Do vy, ngy nhng nguyờn tc vic s dng cỏc c im sinh lý sinh húa phõn... da vo nhng c im v húa phõn loi, hỡnh thỏi, cỏc c im sinh lý, sinh húa thng c kt hp nh danh x khun mt cỏch chớnh xỏc tờn loi Cỏc c im sinh lý sinh húa thng c kt hp s dng phõn loi x khun l kh nng