Phân tích vi sinh vật trong nước.

16 823 1
Phân tích vi sinh vật trong nước.

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

trình bày các thử nghiệm sinh hóa, thử nghiệm lên men, quy trình phân tích các vi sinh vật. các thử nghiệm được tóm tắt một cách ngắn gọn và chính xác, giúp hiểu nhanh kiến thức. Giup ác bạn hoàn thành tốt đề cương môn phân tích vi sinh vật trong nước và thực phẩm.

ĐỀ CƯƠNG PHÂN TÍCH VI SINH VẬT TRONG NƯỚC VÀ THỰC PHẨM Câu Nêu qui tắc an toàn phòng thí nghiệm vi sinh vật.Nêu phương pháp định lượng vi sinh vật đếm khuẩn lạc 1.Quy tắc an toàn phòng thí nhiệm vi sinh vật - - - - -  Để đảm bảo cho thân người khác phong thí nghiệm vi sinh vật cần tuân thủ quy tắc an toàn sau: - Nắm vững nguyên tắc, phương pháp làm việc với vsv Không ăn uống, hút thuốc phòng kiểm nghiệm Mang trang thao tác với vsv Mặc áo blouse thời gian làm việc Trước bắt đầu làm cần sát trùng mặt bàn giấy lau tẩm cồn 70 o dung dịch diệt khuẩn khác (lysol 5%, amphyl 10%, chlorox 10%), để khô Thực tương tự cho hai tay Chú ý chưa đốt đèn cồn đèn Bunsen tay chưa khô cồn lặp lại việc sát trùng sau hoàn thành công việc Cần ghi tên chủng, ngày tháng thí nghiệm lên tất hộp petri, ống nghiệm môi trường, bình nuôi cấy Khi lỡ tay làm đổ, nhiễm vi sinh vật nơi làm việc, dùng khăn giấy thấm chất diệt khuẩn lau kỹ, sau thực khử trùng lại bàn làm việc Cần cẩn thận thao tác với đèn cồn đèn Bunsen Tắt lửa chưa có nhu cầu sử dụng sau thực xong thao tác Lưu ý tránh đưa tay, tóc qua lửa Cần có cách bảo vệ tóc thích hợp trường hợp có tóc dài Sử dụng bóp cao su thao tác ống hút định lượng,không hút miệng Khi làm vỡ dụng cụ thủy tinh, cẩn thận mang găng tay thu gọn tất mảnh vỡ vào túi rác riêng Tác riêng chất thải rắn chất thải lỏng Tất chất thải rắn, môi trường chứa nhiễm vsv cần hấp khử trùng trước thải bỏ vào bãi giác Các dụng cụ, bình chứa nhiễm vsv cần ngâm vào dung dịch diệt khuẩn trước rửa tái sử dụng Cần gói ràng băng keo đặt trồng hộp petri lên Không mở hộp petri dùng mũi ngửi tránh nhiễm vsv vào đường hô hấp Khi đốt que cấy có dính sinh khối vi sinh vật, cần đặt vòng đầu que cấy vào chân lửa để tránh văng nhiễm vsv vào không khí Sát trùng rửa tay trước rời phòng thí nghiệm Nêu phương pháp định lượng vi sinh vật đếm khuẩn lạc Phương pháp đếm khuẩn lạc cho phép xác định số lượng tế bào VSV sống diện mẫu Phương pháp đếm khuẩn lạc thực kĩ thuật hộp trải hay hộp đổ với thiết bị hỗ trợ đọc kết Trong phương pháp cần thực pha loãng mẫu thành nhiều độ pha loãng bậc 10 liên tiếp cho có độ pha loãng với mật độ tế bào thích hợp đê xuất khuẩn lạc riêng lẽ bề mặt thạch với số lượn đủ lớn để hạn chế đếm so sánh, tính toán Số lượng khuẩn lạc xuất đĩa phụ thuộc vào mẫu sử dụng, môi trường điều kiện ủ Thông thường điều kiện nuôi cấy ( nhiệt độ, mt, t) cần đảm bao cho số khuẩn lạc xuất tối đa Phương pháp đếm khuẩn lạc dễ cho sai số lớn nên cần thực đĩa Kết đếm mật độ tế bào thường trình bày số đơn vị hình thành khuẩn lạc CFU/ml - Đây phương pháp tốt để xác định mật độ tế bào sống Ngoài phương pháp có ưu điểm độ nhạy cao, cho phép định lượng vsv mật độ thấp mẫu Quy trình thao tác xác định mật độ tế bào phương pháp đếm khuản lạc: +Pha loãng mẫu theo dãy thập phân: mẫu pha loãng thành dãy nồng độ:1/10, 1/100, 1/1000… +Tạo hộp trải hay hộp đổ +Tính kết quả: tính theo công thức: Mi (CFU/ml) = Ai * Di/V Câu Trình bày thử nghiệm sinh hóa TSI thử nghiệm Catalase.Nêu qui trình phân tích Staphylococcus aureus Trình bày thử nghiệm sinh hóa TSI thử nghiệm Catalase + + + + +   − + − + + + + + − + −  Thử nghiệm sinh hóa TSI − Nguyên tắc: Môi trường TSI với mt KIA sử dụng để kết hợp thử nghiệm khả sử dụng nguồn carbon khác khả sinh H2S chủng vsv Về nguồn carbon môi trường TSI chứa loại đường 1% lactose, 0.1% glucose 1% sucrose Khả sử dụng nguồn đường glu, lac, sur hay sử dụng glu để lấy lượng − Phương pháp tiến hành Môi trường TSI pha chế, hấp khử trùng, chuyển vào ống nghiệm vô trùng tạo ống thạch nghiêng Dùng que cấy thẳng cấy sinh khối khuẩn lạc vào ống thạch Tiến hành ủ Đọc kết quả:  Nếu lên men glucose, sau 18-24h phần môi trường bề mặt ống thạch nghiêm trở lên có pH kiềm phần sâu ống có pH acid  Nếu sử dụng glucose, lactose, sucrose, sau 18-24h i toàn môi trường trở lên pH acid  Nếu không sử dụng ba nguồn carbon này, pepton sử dụng để biến dưỡng thu lượng vật chất cần cho tăng trưởng vsv Thử nghiệm Catalase Nguyên tắc: Các vsv hiếu khí kị khí tùy ý chứa chuỗi truyền điện tử có cytochrome có enzyme catalase Catalase thủy phân hydrogen peroxide thành H2O O2 Phương pháp tiến hành: Hóa chất sử dụng dung dịch hydrogen peroxide 30%, dung dịch đệm phosphate pH 7.0 Có thể thực phương pháp sau đây: Thử nghiệm phiến kính: dùng ki lấy sinh khối khuẩn lạc, đặt lên phiến kính, nhỏ H 2O2 30% , ghi nhận sủi bọt Thử nghiệm ống thạch nghiêng: nhỏ trực tiếp 1ml H 2O2 30% lên sinh khối bề mặt thạch nghiêng Thử nghiệm ống mao dẫn: dùng ống mao dẫn thu lấy dung dịch H 2O2 30%, chấm đầu ống mao dẫn vào tâm khuẩn lạc Đọc kết quả: Thử nghiệm (+) có tượng sủi bọt khí O tao ra, ngược lại (-) 2.Nêu qui trình phân tích Staphylococcus aureus  Định nghĩa nguyên tắc: Là vi khuẩn hiếu khí hay kị khí tùy ý, hình cầu, gram dương, có khả lên men, sinh sinh acid từ mannitol, trehalose, surose − S aureus xác định dựa sở đặc điểm tăng trưởng phản ứng đông huyết tương dòng từ khuẩn lạc đặc trưng môi trường phân lập  Môi trường hóa chất sử dụng: − Môi trường canh MSB − Môi trường thạch máu − Môi trường thạch BPA − Môi truường TGA − Môi trường BHI − Huyết tương thỏ  Phân tích định tính − Cấy 2ml dung dịch mẫu vào ống nghiệm chứa 8ml môi trường MSB, trộn ủ 37 oC 24h − Dùng que cấy ria dịch mẫu từ ống (+) lên môi trường phân lập thạch TGA, ủ 37 oC 24h − Tìm khuẩn lạc đặc trưng S aureus môi trường phân lập − Chọn khuẩn lạc đặc trưng, cấy vào ống môi trường BHI, ủ 37oC 24h − Cấy vào ống nghiệm nhỏ chứa khoảng 0.3ml huyết tương ủ 37 oC 24h để thử phản ứng đông kết − Thực song song ống đối chứng không cấy dịch vi sinh vật − Mẫu kết luận có S.aureus thử nghiệm coagulase (+) ( có xuất khối đông ống đối chứng không có)  Phân tích định lượng − Bằng phương pháp đếm khuẩn lạc − Bằng phương pháp MPN Câu Trình bày thử nghiệm sinh hóa khả lên men thử nghiệmcoagulase.Nêu qui trình phân tích tổng số vi sinh vật hiếu khí + + + + • • Trình bày thử nghiệm sinh hóa khả lên men thử nghiệm coagulase  Thử nghiệm khả lên men − Nguyên tắc: Vsv có khả khác việc sử dụng nguồn carbon khác Khi sử dụng nguồn acrbon để lên men tùy phương thức lên men sản phẩm tạo khác tất trường hợp, sản phẩm tạo thành làm giảm pH mt dẫn đến thay đổi thị màu pH mt.ngoài CO tạo thành, phát qua ống Durham − Phương pháp tiến hành: Môi trường sử dụng Phenol Red Broth Base có pH=7.4, thị pH đỏ phenol Môi trường bổ sung đường chứa bình tam giác khử trùng ba cách: • Lọc vô trùng qua màng lọc • Hấp 116-118oC 15’ • Hấp 121oC 15’ + Làm nguội, phân phối vào ống nghiệm + Tiến hành cấy chủng vào ống − Đọc kết quả: + Khả lên men đánh giá dựa vào sinh acid sinh Sinh acid (+) môi trường với thị đỏ phenol chuyển tành màu vàng, ngược lại mt chuyển thành màu đỏ Sinh (+) có bọt khí ống Durham  Thử nghiệm coagulase − nguyên tắc: phát có mặt ezyme coagulase phản ứng đông huyết tương Từ để định danh loài thuộc giống Staphylococus, loài có khả tiết coagulase − Phương pháp tiến hành: + Thử nghiệm thực với huyết tương( thỏ, người) fibrinogen + Hoạt tính coagulase thực bằn hai phương pháp: • Thử nghiệm phiến kính: nhỏ lên lame giọt nước cất, thu khuẩn lạc hòa vào giọt nước, thêm huyết tương, hòa tạo huyền phù đồng • Thử nghiệm ống nghiệm: ho vào ống nghiệm 0.5ml huyết tương thỏ 0.5ml dịch cấy vi khuẩn, ủ 37oC 4h − Đọc kết + Thử nghiệm (+) có kết tụ, là(-) hỗn hợp không kết tụ Nêu qui trình phân tích tổng số vi sinh vật hiếu khí  Định nghĩa nguyên tắc − Vi khuẩn hiếu khí vi khuẩn tăng trưởng hình thành khuẩn lạc điều kiện có xuất khí oxy phận tử − Chỉ số xác định phương pháp đếm vi khuẩn lạc mọc môi trường thạch dinh dưỡng  Môi trường hóa chất: − Môi trường sử dụng PCA có pH +- 0.2 − Dung dịch nước muối pepton SPW  Quy trình phân tích − Chuẩn bị mẫu trước phân tích: + Đồng mẫu: • Đối với mẫu dạng rắn, dùng dụng cụ khử trùng cân xác 10g(hay25g) mẫu vào bao PE Thêm vào lượng mẫu 90ml ( hay 225ml) dung dịch pha loãng SPW Thực đồng mẫu • Đối với mẫu dạng lỏng, hút 10ml( hay 25ml) cho vào bình tam giác chứa 990ml (hay 225ml) nước SPW khử trùn, lác + Sau đồng dung dịch mẫu thu có độ pah loãng 10-1 + Dung dịch đồng tiếp tục pha loãng theo dãy thập phân cách dùng pipet vô trùng chuyển 1ml dịch mẫu vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch pha loãng Trộn mẫu ống nghiệm cho đồng Dung dịch mẫu có độ pha loãng 10 -2 + Tiếp tục thực tương tự để có độ pha loãng thập phân độ pha loãng cần thiết − Cấy mẫu + Chọn hay độ pha loãng liên tiếp dự kiến chứa 25-250 tế bào vsv 1ml để cấy lên đĩa petri + Dùng pipet vô trùng chuyển 1ml dịch mẫu pha loãng vào đĩa petri vô trùng Tương ứng với độ pha loãng cấy 2-3 đĩa + Sau cấy, đổ vào đĩa 10-15ml môi trường PCA đun chảy ổn định 45 oC trộn dịch mẫu với môi trường + Đặt đĩa lên mặt phẳng nằm nganh cho thạch đông + Lật ngược ủ tủ ấm 30o C 72h Cách tính kết quả: + Mật độ tổng số vk hiếu khí 1g hay 1ml tính sau: A (CFU/g hay CFU/ml)= N/(n1Vf1+…+niVfi) Câu Nêu qui tắc an toàn phòng thí nghiệm vi sinh vật.Nêu phương pháp phát quang sinh học ATP Nêu phương pháp phát quang sinh học ATP − Pháp quang sinh học ATP − Phân tử ATP ( Adenosin Triphosphat) tìm thấy tất tế bào sống nên phát ATP dấu hiệu để nhận biết vật chất sống tồn Phạm vi áp dụng: + Xác định rõ số vi sinh vật diện + Đánh giá chất lượng vi sinh thực phẩm + Kiểm tra tình trạng vệ sinh bề mặt thiết bị sản xuất , chế biến thực phẩm ,tổng vi khuẩn hiếu khí thành phẩm + Ngày phát quang sinh học sử dụng rộng rãi để đánh giá chất lượng vệ sinh bề mặt thiết bị sử dụng trình sản xuất ,chế biến , đánh giá chất lượng thực phẩm − Nguyên tắc: + Mẫu thu cách dùng que vô trùng quẹt diện tích định bề mặt dụng cụ , thiết bị + Sau que cho vào dung dịch ly trích ATP, xử lý với ATPase cho phản ứng phát sáng − Cách tiến hành: + Chuẩn bị dung dịch đệm + Lấy mẫu cho vào dung dịch đệm + Sử lý với Enzyme ATPase phút Ly trích ATP trichlaoutic axit 5% + Thêm hỗn hợp phản ứng phát sáng (enzyme luciferase) ánh sáng phát − Kết quả: + Để biết mật độ vi sinh vật ,so sánh trị số ánh sáng đo với đường chuẩn tương quan lượng ánh sáng phát mật độ tế bào vi sinh vật biết trước Câu Trình bày thử nghiệm sinh hóa MR (Methyl red), thử VP (Voges- Proskauer)Nêu qui trình phân tích Coliforms Escherichia coli Trình bày thử nghiệm sinh hóa MR (Methyl red), thử VP (Voges- Proskauer)  Thử nghiệm sinh hóa MR − Nguyên tắc − Phân biệt vsv dựa khác biệt khả tạo trì sản phẩm biến dưỡng có tính acid bền môi trường trình lên men glucose Chỉ thị đỏ methy red giúp phân biệt nồng độ ion H + diện môi trường sau sinh vật lên men glucosePhương pháp tiến hành + Được thực ống môi trường lỏng Glucose Phosphate + Dùng que cấy vồng cấy sinh khôi từ khuẩn lạc môi trường KIA, ủ 37 oC khoảng 2-5 ngày + Nhỏ vài giọt methyl red 0.02% vào ống nghiệm, đọc kết − Đọc kết + Phản ứng (+) môi trường có màu đỏ, (-) môi trường có màu vàng  Thử nghiệm sinh hóa VP − Nguyên tắc + Phát vi khuẩn có hai loại enzyme chuyển hóa 2,3 butanediol thành acetoin có oxy chuyển hóa tiếp acetoin thành diacetyl + Diacetyl kết hợp với guanidin pepton tạo phức diacetyl-guanidin có màu đỏ − Phương pháp tiến hành: + Môi trường sử dụng cho thử nghiệm VP môi trường lỏng MR-VP, có pH 6.9 + Dùng que cấy, cấy sinh khối từ khuẩn lạc môi trường KIA TSI + Ủ 37oC 24-48h + Bổ sung thuốc thử trực tiếp vào môi trường ( dùng loại thuốc thử sau: Barrit, Koblentz, O’Meara) Lắc nhẹ ống phút + Đọc kết sau 20’ chậm 4h − Đọc kết + Thử nghiệm VP (+) có màu đỏ bề mặt môi trường, (-) bề mặt môi trường không đổi màu Nêu qui trình phân tích Coliforms Escherichia coli  Định nghĩa − Bao gồm số vi khuẩn gram âm, không tạo bào tử hiếu khí kị khí không bắt buộc, có khả lên men đường lactoza, sinh  Định lượng coliforms, coliforms chịu nhiệt, coliforms phân ecoli phương pháp MPN − Nguyên tắc: dựa vào nguyên tắc mẫu pha loãng theo dãy thập phân ủ ống nghiệm chứa môi trường thích hợp theo dõi sinh hơi, đổi màu − Môi trường hóa chất: + Môi trường LSB, môi trường BGBL, môi trường lỏng E.coli, môi trường rắn SCA + Dung dịch nước muối pepton SPW, thuốc thử Kovac’s, thuốc thử Methyl Red − Quy trình phân tích + Định lượng coliforms: lấy 1ml dịch mẫu pha loãng 10 -1 vào ống nghiệm chứa 10ml LSB Thực tương tự với dịch mẫu pha loãng 10 -2 10-3 ủ 37oC/48h Dùng que cấy chuyển dịch mẫu từ ống LSB sang ống BGBL ủ 37oC/48h + Định lượng coliforms chịu nhiệt: cấy chuyển dịch mẫu từ ống LBS (+) sang mt EC ủ 44.5 +0.2 độ/24h + Định lương coliforms phân: dùng que cấy ria dịch mẫu từ ông (+) EC sang mt thạch đĩa EMB ủ 37oC/24h Chọn khuẩn lạc > 1mm cấy chuyển vào Trypton ủ 44.5 +- 0.2/24h nhỏ thuốc thử Kovac’s vào ống nghiệm + Định lượng ecoli: làm tương tự coliform phân cấy khuẩn lạc vào mt MRVP, SCA để thực thử nghiệm IMViC − Đọc kết quả: Từ số lượng ống nghiệm có E.coli(+) độ pha loãng dùng bảng MPN thích hợp để tính mật độ vsv  Định lương coliforms, coliform phân phương pháp đếm khuẩn lạc − Nguyên tắc: mẫu cấy môi trường thạch chứa lactose, đếm khuẩn lạc lên men lactose sinh acid − Môi trường hóa chất: + Môi trường : TSA, VRB, BGBL, EC broth + Hóa chất: thuốc thử Kovac’s − Quy trình phân tích + Mẫu đồng pha loãng Lấy 1ml dịch pha loãng vào đĩa petri + Bổ sung 5ml mt TSA vào đĩa, trộn + Bổ sung 10-15ml mt thạch VRB lên mt TSA + Thử nghiệm khẳng định coliform: chọn khuẩn lạc nghi ngờ , cấy chuyển sang ống nghiệm chứa môi trường, BGBL ủ 37 độ, 24-48h − Cách tính kết quả: tính mật độ theo công thức A=N/(n1vf1+…nivfi)*R  Định lượng e.coli phương pháp đếm khuẩn lạc − Nguyên tắc: mẫu nuôi cấy mt thạch chứa lactose, đếm khuẩn lạc có hình dạng đặc trưng coliforms Sau khẳng định thử nghiệm IMViC − Môi trường hóa chất + Môi trường: TSA, VRB, EC Broth, LST Broth, MR-VP + Hóa chất: thuốc thử Kovac’s − Quy trình phân tích: + Mẫu đồng pha loãng định lượng tương tự phần coliforms phân với bước khẳng định sau: chọn khuẩn lạc nghi ngờ, cấy sang mt EC, urtrong 24h, chọn ống (+) cấy chuyển sang mt : MR-VP, canh trytone Thực thử nghiệm indol, methyl red Ghi nhận số khuẩn lạc − Cách tính kết quả: theo công thức Câu Trình bày thử nghiệm sinh hóa Oxidase thử nghiệm Catalase.Nêu qui trình phân tích Salmonella Trình bày thử nghiệm sinh hóa Oxidase thử nghiệm Catalase • +  − + − + + + + + − +  Thử nghiệm Oxidase − Nguyên tắc: phát khả sinh enzyn cytochrome c oxydase vi khuẩn − Phương pháp tiến hành: + Có thể thực hai phương pháp sau: Cấy sinh khối chủng lên ống thạch nghiêng Nutrie, ủ nhiệt độ thích hợp 24-48h nhúng giấy lọc vào oxalate Thu sinh khối dàn lên thuốc thứ giấy lọc quan sát, ghi nhận − Đọc kết : Thử nghiệm oxidase (+) xuất màu xanh dương đậm, ngược lại, không xuất (-) Thử nghiệm Catalase Nguyên tắc: Các vsv hiếu khí kị khí tùy ý chứa chuỗi truyền điện tử có cytochrome có enzyme catalase Các vsv có khả biến dưỡng lương theo phương thức hô hấp với oxy chất nhận điện tử cuối chuỗi truyền điện tử H 2O2 Catalase thủy phân hydrogen peroxide thành H2O O2 , Phương pháp tiến hành: Hóa chất sử dụng dung dịch hydrogen peroxide 30%, dung dịch đệm phosphate pH 7.0 Có thể thực phương pháp sau đây: Thử nghiệm phiến kính: dùng ki lấy sinh khối khuẩn lạc, đặt lên phiến kính, nhỏ H 2O2 30% , ghi nhận sủi bọt Thử nghiệm ống thạch nghiêng: nhỏ trực tiếp 1ml H 2O2 30% lên sinh khối bề mặt thạch nghiêng Thử nghiệm ống mao dẫn: dùng ống mao dẫn thu lấy dung dịch H 2O2 30%, chấm đầu ống mao dẫn vào tâm khuẩn lạc Đọc kết quả: Thử nghiệm (+) có tượng sủi bọt khí O tao ra, ngược lại (-) .Nêu qui trình phân tích Salmonella  Định nghĩa nguyên tắc − Là trực khuẩn gram âm, hiếu khí kị khí tùy nghi, không sinh bào tử, có tiêm mao, lên men glucose mannitol sinh acid − Salomomella phát quy trình gồm bước: tăng sinh, tăng sinh chọn lọc, phân lập khẳng định  Môi trường hóa chất: − Môi trường: RV, RV cải tiến, TT, XLD, HE, BS, BPLS, TSI, URE, canh Mannitol, canh Sucrose − Hóa chất: nước pepton đệm, thuốc thử Kovac’s, kháng huyết Salmonella đa giá  Quy trình phân tích đánh giá định tính − Tăng sinh: tiến hành cân 25g mẫu túi PE vô trùng, bổ sung 225ml dung dịch BPW đồng Ur 37 +- 1oC 18-24h − Tăng sinh chọn lọc: trộn dịch tăng sinh, chuyển 0.1ml sang 10ml môi trường tăng sinh Rappapport-Vasliadis Soya Pepton ủ ấm đến 42 độ Ủ 42+- 0.2 độ 18-24h − Phân lập nhận diện: cấy phân lập khuẩn lạc đơn với giống từ dịch tăng sinh chọn lọc lên đĩa môi trường chọn lọc phân biệt đặc trưng cho Salmonella XLD,HE,BS…Tất đĩa môi trường sau cấy ủ 37 oC 22-26h Tiến hành thử nghiệm LDC(+), ure(-), lên men mannitol, sorbitol(+), indol VP(-) thử nghiệm kháng nguyên  Báo cáo kết quả: quy trình kiểm nghiệm cho phép phân tích định tính Salomella, giúp kết luận có hay Salmonella diện 25g mẫu Câu Trình bày thử nghiệm sinh hóa decarboxylase thử nghiệm Urease Nêu qui trình phân tích tổng số nấm men, nấm mốc + + + + + + + − Trình bày thử nghiệm sinh hóa decarboxylase thử nghiệm Urease  Thử nghiệm decarboxylase − Nguyên tắc: Phát loài vi khuẩn đường ruột có khả thăng tạo enzyme carboxlase có vai trò xúc tác phản ứng loại bỏ nhóm carboxyl loại acid amin tạo amine diamine C02 điều kiện kị khí − Phương pháp tiến hành Sử dụng mt Decarboxylase Basal Medium, chứa thị Bromocresol purple, pH 6.0 Môi trường lỏng, pha chế, hấp khử trùng Đổ 4-5ml mt vào ống nghiệm Cấy chủng vào ống mt, bổ sung thêm 2-3ml khoáng parafi ủ 37 độ 24h-4 ngày − đọc kết thử nghiệm (+) môi trường trở nên đục, có màu tím, (-) môi trường có màu vàng  Thử nghiệm Urease Nguyên tắc: phát enzym urease phân giải ure thành ammonia carbondioxide Ammonia sinh kiềm hóa môi trường Là phản ứng đặc trưng cho loài Proteus − Phương pháp tiến hành + Môi trường ure lỏng, chứa thị đỏ phenol + Cấy lượng sinh khối lớn vi khuẩn vào ống chứa 3ml mt + Lắc nhẹ ống, trộn đều, ủ 37 độ 48h quan sát ghi nhận chuyển đổi màu − Đọc kết + Dương tính: môi trường chuyển thành màu tím đỏ Âm tính: không màu 2.Nêu qui trình phân tích tổng số nấm men, nấm mốc  Định nghĩa, nguyên tắc − Định nghĩa: Nấm men nhóm vsv nhân thật, có vách tế bào lớp vỏ chitin, có nhân bào quan khác, thuộc nhóm vsv dị dưỡng, sinh sản bào tử khuẩn ty − Nguyên tắc: mật độ nấm mốc, nấm men xác định chung dạng tổng nấm mốc nấm men kĩ thuật pha loãng, trải đếm khuẩn lạc môi trường DG18 hay DRBC  Môi trường hóa chất − Môi trường thạch: DG18, DBRC, MEA, PDA, SDA, SDB − Dung dịch pha loãng (nước pepton 1%)  Quy trình phân tích định tính: Mẫu pha loãng 10-1 đồng vào mt SDB Ủ 30oC theo dõi ngày Các khuẩn lạc nấm mốc xuất chuyển vào mt SDA để định danh  Quy trình phân tích định lượng: − Cân 10g mẫu túi PE, bổ sung 90ml dung dịch pha loãng − Đồng mẫu pha loãng thành dãy nồng độ thập phân thích hợp − Hút 0.1ml dịch mẫu vào đĩa mt DBRC DG18 trải dịch mẫu đến khô − ủ nhiệt độ 25oC 5-7 ngày − Đếm tính số khuẩn lạc nấm mốc nấm men đĩa Câu Trình bày dụng cụ thiết bị, máy móc chuyên dụng cần thiết cho nghiên cứu vi sinh vật Nêu bước chuẩn bị dụng cụ cho nuôi cấy vi khuẩn  − + + + − − − − − − − − − − − − − − − Dụng cụ thiết bị, máy móc chuyên dụng cần thiết cho nghiên cứu vi sinh vật Các dụng cụ thủy tinh Ống nghiệm: chứa môi trường nuôi cấy cấy vsv Đĩa petri: gồm lắp lớn nắp nhỏ lồng vào nhau, đường kính: 8,10,12 cm Các dụng cụ thủy tinh khác: đèn cồn, cốc thủy tinh, bình cầu, đáy tròn, bình tam giác, loại ống đong, ống hút − Các loại que cấy + Que cấy thẳng: dùng để cấy sâu, hay thu lấy vsv môi trường đặc + Que cấy vòng: dùng cấy ria vsv, phân lập vsv + Que cấy móc: dùng cấy loại nấm men, nấm mốc, xạ khuẩn Nhiệt kế: nhiệt kế chia độ 0.2oC 0.1oC pH kế : sử dụng máy đo pH độ xác 0.1 đơn vị Cân: có mức phân biệt tối thiểu 0.01g mức cân tối đa 200g sử dụng cân phân tích với mức phân biệt tối thiểu 0.1mg để cân lượng nhỏ 2g Máy cất nước: nước cất để pha môi trường dung dịch Tủ sấy: sấy khô dụng cụ khử trùng Tủ ấm: để nuôi cấy vsv Máy lắc: đảo trộn môi trường, tăng cường oxi hòa tan mt Bể điều nhiệt: giữ mt rắn đun chảy ổn định Tủ lạnh: có nhiệt 4-10oC để lưu giữ mẫu, môi trường, hóa chất Màng lọc vô trùng: đê lọc, trùng môi trường Đèn tử ngoại: tia UV có tác dụng khử trùng không khí phòng, khử trùng bề mặt nước, dung dịch nhạy cảm với nhiệt Nồi hấp: tiêu diệt catr tế bào sinh dưỡng lẫn bào tử vsv, thiết bị bắt buộc phòng kiểm nghiệm vsv Tủ sấy vô trùng: đảm bảo tính vô trùng cao thao tác với vsv Kính hiển vi: phóng đại, quang sát vsv Bình ủ kị khí  Nêu bước chuẩn bị dụng cụ cho nuôi cấy vi khuẩn − Bước : Xử lý dụng cụ + Phương pháp trung tính dụng cụ: • Đổ vào bên dụng cụ nước có pH = • Hấp khử trùng dụng cụ 1200C 30 phút nồi hấp • Lấy dụng cụ để nguội kiểm tra pH nước dụng cụ • Rửa kĩ nước nhiều lần dùng + • • • • − + + − + + - Câu Phương pháp rửa dụng cụ: Phiến kính: Với phiến kính cũ( dùng làm tiêu bản) Chùi mỡ vazolin phiến kính miếng vải tẩm xilen Ngâm tiêu vào nước xà phòng đun sôi 1h Rửa nước, để Ống nghiệm: Với ống nghiệm cũ bị nhiễm khuẩn : Hấp trùng 1200C 30 phút Rửa ống nghiệm cách: Dùng chổi chấm xà hay tro bếp cọ xát vào thành ống khắp nhiều lần Rửa nước 2- lần Úp ống nghiệm cho thật nước khô Đĩa pêtri: Dùng xà xát vào mặt đĩa, khe chân đĩa thành đĩa Rửa nước -3 lần Úp nghiêng đĩa giỏ nhựa cho thật khô Các dụng cụ thủy tinh khác: phễu, chai lọ, bình cầu, bình tam giác Dùng giẻ với nước xà cọ rửa phần ngoại dụng cụ Dùng nước xà đặc lắc kĩ để rửa phần dụng cụ Bước 2: Bao gói dụng cụ Làm nút : cho ống nghiệm, bình tam giác, pipet, que gạt Bao gói: cho hầu hết dụng cụ thủy tinh Bước 3: Khử trùng dụng cụ Các hình thức khử trùng: khử trùng khô, khử trùng ướt Sau khử trùng cần đảm bảo:Sự vô trùng tuyệt đối cho vật phẩm dụng cụ Không làm thay đổi chất lượng mẫu vật Trình bày sai khác môi trường lỏng, rắn nuôi cấy vi khuẩn Nêu bước cần thiết để tiến hành chế tạo môi trường  − + + − − + + Trình bày sai khác môi trường lỏng, rắn nuôi cấy vi khuẩn Môi trường lỏng: môi trường không bổ sung agar, môi trường trạng thái lỏng Thường sử dụng nuôi cấy vi sinh vật nhằm thu sinh khối Dùng để nghiên cứu trình vi tổng hợp vi sinh vật + Ví dụ: sử dụng sản xuất nấm men, phản ứng test sinh hóa − Môi trường rắn: + Môi trường có bổ sung agar + Môi trường thường trạng thái thạch đông, rắn + Mục đích sử dụng: để phân lập giống khiết, giữ giống khuẩn lạc, dùng để nghiên cứu đặc điểm hình thái, sinh lí vi sinh vật  Nêu bước cần thiết để tiến hành chế tạo môi trường Chuẩn bị môi trường nuôi cấy: tùy vào loại vi khuẩn mà sử dụng môi trường nuôi cấy phù hợp, cần biết tỉ lệ % chất phù hợp cho vi khuẩn phát triển Pha chế: Cân, đong thật xác thành phần môi trường pha chế theo trình tự Môi trường lỏng: Cân, đong chất hòa tan vào nước + Môi trường đặc:Cân agar ngâm vào nước.Cân hóa chất hòa tan nước.Vớt agar ra, vắt khô, bỏ vào xoong môi trường để đun + Chú ý đun sôi, hòa tan chất để môi trường đồng − Điều chỉnh độ pH môi trường: + Người ta dùng HCl 10% hay NaCl 10% + Sử dụng máy đo pH, giấy quỳ để kiểm tra độ pH − Phân phối môi trường vào dụng cụ: + Môi trường cần đun cho hóa lỏng đổ qua phễu thủy tinh vào dụng cụ − Khử trùng môi trường: + Tùy theo tính chất điều kiện cụ thể loại môi trường mà có chế độ phương pháp khử trùng khác + Các phương pháp khử trùng thường sử dụng là: phương pháp Pasteur, phương pháp Tyndal, phương pháp lọc dụng cụ lọc vi khuẩn phương pháp hấp nước bão hòa áp suất cao − Làm thạch nghiêng, thách đứng, đổ thạch vào đĩa Pêtri: + Làm thạch nghiêng: Cần tiến hành sau khử trùng môi trường vừa kết thúc môi trường chưa đông đặc.Đặt ống nghiệm có môi trường lên giá đặt nghiêng + Làm thạch đứng: Đặt ống nghiệm có môi trường làm thạch đứng vào giá, để yên môi trường nguội đông đặc + Đổ thạch vào đĩa pêtri: • Mở bao giấy gói đĩa pêtri • Nghiêng bình rót nhẹ chút môi trường vào đĩa pêtri sau tay trái mở nắp đĩa • Đậy nắp lại, xoay tròn đĩa pêtri để môi trường phân phối mặt đĩa • Để yên cho môi trường nguội đông đặc − Chú ý: + Nhớ viết vào nhãn: Tên môi trường … + Khử trùng: ngày … tháng … năm + Để vào nơi cất giữ môi trường để tiện cho việc theo dõi, sử dụng bảo quản Câu 10 Trình bày phương pháp pha loãng mẫu nước vấn đề cần lưu ý thao tác thực Các ý thao tác cấy trải vi sinh vật môi trường thạch  Trình bày phương pháp pha loãng mẫu nước vấn đề cần lưu ý thao tác thực − Nguyên tắc: pha loãng mẫu công đoạn quang trọng trình phân tích vsv Việc pha loãng mẫu nồng độ thích hợp giúp ích nhiều trình định lượng phân tích vsv − Phương pháp: dùng pipet hút ml mẫu cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch pha loãng( Nacl 0.9%), ta nồng độ pha loãng 10 -1 Tiếp tục từ ống nghiệm 10-1 hút 1ml cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch pha loãng ta nồng độ pha loãng 10 -2 Tiếp tục nồng độ cần thiết − Các lưu ý thao tác thực hiện: + Cần khử trùng pipet ống nghiệm trước pha loãng + Lắc mẫu ống nghiệm phút + Khi pha loãng xong, ống nghiệm cần đậy nút nút cao su  Các ý thao tác cấy trải vi sinh vật môi trường thạch − Quy trình cấy trải + Dùng pipetman đầu tip vô trùng, thao tác vô trùng chuyển 0.1ml dịch chứa giống vsv lên bề mặt môi trường đĩa petri + Nhúng đầu gạt(que trải) thuy tinh vào cồn 70 độ, hơ qua lửa để khử trùng Để đầu gạt nguội không gian vô trùng lửa + Mở đĩa petri, đặt nhẹ nhàng gạt lên bề mặt thạch đĩa petri Dùng đầu gạt xoay, trải dịch giống lên bề mặt thạch Trong trải, thực xoay vài lần, mõi lần ½ chu vi đĩa, tạo điều kiện cho gạt trải dịch giống khắp mặt môi trường + Rút gạt khỏi đĩa, đậy đĩa, gói ủ nhiệt độ vào thời gian thích hợp tủ ấm − Các ý: + Hấp khử trùng dụng cụ, khử trùng tay bàn làm việc cồn trước cấy + Chỉ mở lắp petri + Sử dụng gang tay trang suốt trình tiến hành + Mọi thao tác phải thực không gian vô trùng( tủ cấy vô trùng) + Hơ que cấy lửa đèn cồn trước cấy sau cấy + Cấy nhẹ nhàng tránh làm vỡ, lứt môi trường + Ghi tên vi khuẩn, ngày cấy, môi trường cấy lắp đĩa + Bao gói bảo quản thời gian nhiệt độ + Chú ý phải trang khô mặt thạch Câu 11 Trình bày bước tiến hành để phân lập, tuyển chọn cấy truyền vi sinh vật gây bệnh vấn đề cần lưu tâm thao tác thực Trong cấy trải, phải trang khô mặt thạch ?  Trình bày bước tiến hành để phân lập, tuyển chọn cấy truyền vi sinh vật gây bệnh vấn đề cần lưu tâm thao tác thực Mẫu bệnh Thu mẫu bệnh phẩm Nuôi cấy, phân lập Hình thái khuẩn lạc Nhuộm gram Phân loại vi khuẩn Gây nuôi cảm nhiễm Phân lập vi khuẩn, xác định biểu Kết luận giống, loài sinh vật gây Thử phản ứng sinh hóa − − − + Sơ đồ tiến hành phân lập, tuyển chọn cấy truyền vi sinh vật gây bệnh Mẫu bệnh: mẫu nước hay mẫu thực phẩm khả nghi chứa vi sinh vật gây bệnh Thu mẫu: nguyên tắc mẫu thu cần có tính đại diện, thực phẩm cần thu mẫu nhiều thời điểm công đoạn sản xuất khác Trong trình thu mẫu cần ý tránh gây tạp nhiễm lúc thu mẫu Nuôi cấy phân lập: Nguyên tắc: Tách rời tế bào vi sinh vật Nuôi cấy tế bào môi truờng dinh dưỡng đặc trưng khuẩn lạc riêng rẽ, cách biệt + Với hầu hết mẫu nghiên cứu, trình phân lập vi sinh vật dạng khiết bao gồm bước sau:Tạo khuẩn lạc riêng rẽ từ quần thể vi sinh vật ban đầu.Phân lập vi sinh vật khiết.Kiểm tra độ tinh khiết khuẩn lạc + Trong trình nuôi cấy, phân lập vi khuẩn cần ý: chọn môi trường phương pháp nuôi cấy cho hù hợp với loại vsv Cần khử trùng dụng cụ, môi trường nuôi cấy − Nhuộm gram: nhằm phân biệt loài vi khuẩn thành nhóm (Gram dương Gram âm) − Phân loại vi khuẩn: sử dụng phản ứng test sinh hóa để phận loại phát diện vi khuẩn mẫu trình thuer phản ứng sinh hóa cần lựa chọn phản ứng phù hợp cần đảm bảo dụng cụ, thao tác vô trùng  Trong cấy trải, phải trang khô mặt thạch ? Câu 12 Trình bày bước tiến hành phân tích Vibrio nước Các vấn đề cần lưu ý thao tác thực hiện?  Trình bày bước tiến hành phân tích Vibrio nước Thu mẫu Tăng sinh chọn lọc Phân lập Thử nghiệm sinh hóa Thử nghiệm kháng huyết Báo cáo kết − Nguyên lý phương pháp: lượng mẫu xác định tăng sinh môi trường chọn lọc đặc trưng Cấy phân lập từ môi trườn tăng sinh sang môi trường phân biệt chọn lọc đặc trưng Các khuẩn lạc nghi ngờ môi trường phân lập, khẳng định thử nghiệm sinh hóa huyết học − Môi trường hóa chất: + Môi trường:canh pepton APW, canh colistine, thạch TCBS, canh tryptone, thạch KI, canh HLG + Hóa chất: dung dịch oxidase, dung dich string, kháng huyết O, dung dịch NaOH 1N, dung dịch HCL 1N, dung dịch dầu phủ vô trùng, dung dịch brom tím − Quy trình phân tích: + Tăng sinh chọn lọc: cho 25g muẫ vào túi PE vô trùng, thêm 225ml canh thang tăng sinh chọn lọc đồng máy dập mẫu ủ 37 độ C/6-8h + Phân lập:Dùng que cấy vòng ria váng bề mặt môi trường tăng sinh chọn lọc lên bề mặt đĩa thạch TCBS để phân lập khuẩn lạc đơn ủ 37 độ C 18-22h thu khuẩn lạc đặc trưng, cấy chuyển sinh khối khuẩn lạc đặc trưng môi trường phân lập sang môi trường không chọn lọc hay thạch máu, ủ qua đêm nhiệt độ 37 để thu sinh khối + Thử nghiệm sinh hóa: thử nghiệm sinh hóa để phát phân biệt loài Vibrio quan sát tính di động kính hiển vi, quan sát di động thạch mềm thử nghiệm khác + Thử nghiệm kháng huyết thanh: thử nghiệm kháng huyết dùng để xác định dòng vibio có biểu kháng nguyên chuyên biệt • O1: số trường hợp kháng nguyên O1 không bị che lấp cần xử lí chúng trước ngưng kết cách dùng que cấy chuyển sinh khối chúng môi trường thạch chọn lọc vào dung dịch nacl 3% hấp khử trùng 121 độ/30’ • Thử nghiệm với huyết đa giá palyvalent O nhóm 1: nhỏ giọt kháng huyết O1 giọt nước muối sinh lí lên phiến kính Dùng que cấy vô trùng chuyển vsv nuôi cấy lên hai giọt trên, phân tán vi khuẩn đều, kết (+) ngưng kết − Báo cáo kết quả: + Kết báo cáo dướng dạng phát hay không phát V cholerae hay V parahaemolyticus 25g mẫu  Các lưu ý thao tác thực hiện: vibrio nhóm chứa dòng gây bệnh lên cần tuân thủ triệt để biện pháp an toàn làm việc với chủng Vibrio dùng làm đối chứng (+) thao tác chủng phân lập Các môi trường hay mẫu vật sau nuôi cấy cần phải hấp khử trùng cẩn thận trước rửa Câu 13 Trình bày bước tiến hành phân tích coliform E coli nước Các vấn đề cần lưu ý thao tác thực hiện? a.Trình bày bước tiến hành phân tích coliform E coli nước  Định nghĩa − Bao gồm số vi khuẩn gram âm, không tạo bào tử hiếu khí kị khí không bắt buộc, có khả lên men đường lactoza, sinh  Định lượng coliforms, coliforms chịu nhiệt, coliforms phân ecoli phương pháp MPN − Nguyên tắc: dựa vào nguyên tắc mẫu pha loãng theo dãy thập phân ủ ống nghiệm chứa môi trường thích hợp theo dõi sinh hơi, đổi màu − Môi trường hóa chất: + Môi trường LSB, môi trường BGBL, môi trường lỏng E.coli, môi trường rắn SCA + Dung dịch nước muối pepton SPW, thuốc thử Kovac’s, thuốc thử Methyl Red − Quy trình phân tích Chuẩn bị dung dịch đồng pha loãng mẫu để có độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3 Chuyển ml dung dịch 10-1, 102, 10-3 vào ống 10ml canh LSB, nồng độ ống lặp lại, ủ 37 độ/48h Cho ống canh BGBL, ủ Cấy vào ống ECủ 44.5 +- 0.2 37 độ +-1 độ, 48h Ghi nhận ống LSB (+) độ, 24h nồng độ pha loãng Số ống (+) nồng độ pha loãng Sô ống (+) nồng độ pha loãng Cấy lên thạch EMB, ủ 37 độ , 24h Chọn khuẩn lạc điển hình cấy vào canh trypton 44.5 +- 0.2 độ, 24h coliforms Chọn khuẩn lạc điển hình cấy vào canh trypton,MR-VP,SC citrate 44.5 +- 0.2 Thử nghiệm indol Thử nghiệm IMVIC Đếm số canh EC (+) indol (+) tra bảng MPN Đếm số canh EC (+) IMViC ++ tra bảng MPN Coliforms chịu nhiệt Coliforms phân ecoli − Đọc kết quả: Từ số lượng ống nghiệm có E.coli(+) độ pha loãng dùng bảng MPN thích hợp để tính mật độ vsv  Định lương coliforms, coliform phân phương pháp đếm khuẩn lạc − Nguyên tắc: mẫu cấy môi trường thạch chứa lactose, đếm khuẩn lạc lên men lactose sinh acid − Môi trường hóa chất: + Môi trường : TSA, VRB, BGBL, EC broth + − + + + Hóa chất: thuốc thử Kovac’s Quy trình phân tích Mẫu đồng pha loãng Lấy 1ml dịch pha loãng vào đĩa petri Bổ sung 5ml mt TSA vào đĩa, trộn đều, Bổ sung 10-15ml mt thạch VRB lên mt TSA, thực tương tự mẫu nồng độ pha loãng liên tiếp cho mẫu + Thử nghiệm khẳng định coliform: chọn khuẩn lạc nghi ngờ , cấy chuyển sang ống nghiệm chứa môi trường, BGBL ủ 37 độ, 24-48h khẳng định dương môi trường đục sinh − Cách tính kết quả: tính mật độ theo công thức A=N/(n1vf1+…nivfi)*R  Định lượng e.coli phương pháp đếm khuẩn lạc − Nguyên tắc: mẫu nuôi cấy mt thạch chứa lactose, đếm khuẩn lạc có hình dạng đặc trưng coliforms Sau khẳng định thử nghiệm IMViC − Môi trường hóa chất + Môi trường: TSA, VRB, EC Broth, LST Broth, MR-VP + Hóa chất: thuốc thử Kovac’s − Quy trình phân tích: + Mẫu đồng pha loãng định lượng tương tự phần coliforms phân với bước khẳng định sau: chọn khuẩn lạc nghi ngờ, cấy sang mt EC, u 24h, chọn ống (+) cấy chuyển sang mt : MR-VP, canh trytone Thực thử nghiệm indol, methyl red Ghi nhận số khuẩn lạc − Cách tính kết quả: theo công thức b.Các vấn đề cần lưu ý thao tác thực [...]... của các vi khuẩn trong mẫu trong quá trình thuer phản ứng sinh hóa cần lựa chọn các phản ứng phù hợp và cần đảm bảo dụng cụ, thao tác đều vô trùng  Trong cấy trải, tại sao phải trang khô mặt thạch ? Câu 12 Trình bày các bước tiến hành phân tích Vibrio trong nước Các vấn đề cần lưu ý trong thao tác thực hiện?  Trình bày các bước tiến hành phân tích Vibrio trong nước Thu mẫu Tăng sinh chọn lọc Phân lập... nhau Trong quá trình thu mẫu cần chú ý tránh gây tạp nhiễm trong lúc thu mẫu Nuôi cấy phân lập: Nguyên tắc: Tách rời các tế bào vi sinh vật Nuôi cấy các tế bào trên trong môi truờng dinh dưỡng đặc trưng để cho khuẩn lạc riêng rẽ, cách biệt nhau + Với hầu hết các mẫu nghiên cứu, quá trình phân lập vi sinh vật ở dạng thuần khiết bao gồm các bước sau:Tạo ra các khuẩn lạc riêng rẽ từ quần thể vi sinh vật. .. hành để phân lập, tuyển chọn và cấy truyền vi sinh vật gây bệnh và các vấn đề cần lưu tâm trong thao tác thực hiện Trong cấy trải, tại sao phải trang khô mặt thạch ?  Trình bày các bước tiến hành để phân lập, tuyển chọn và cấy truyền vi sinh vật gây bệnh và các vấn đề cần lưu tâm trong thao tác thực hiện Mẫu bệnh Thu mẫu bệnh phẩm Nuôi cấy, phân lập Hình thái khuẩn lạc Nhuộm gram Phân loại vi khuẩn... sinh vật ban đầu .Phân lập vi sinh vật thuần khiết.Kiểm tra độ tinh khiết của các khuẩn lạc + Trong quá trình nuôi cấy, phân lập vi khuẩn cần chú ý: chọn môi trường và phương pháp nuôi cấy cho hù hợp với từng loại vsv Cần khử trùng dụng cụ, môi trường nuôi cấy − Nhuộm gram: nhằm phân biệt các loài vi khuẩn thành 2 nhóm (Gram dương và Gram âm) − Phân loại vi khuẩn: sử dụng các phản ứng test sinh hóa để phận... phân lập Hình thái khuẩn lạc Nhuộm gram Phân loại vi khuẩn Gây nuôi cảm nhiễm Phân lập vi khuẩn, xác định biểu hiện Kết luận giống, loài sinh vật gây Thử các phản ứng sinh hóa − − − + Sơ đồ tiến hành phân lập, tuyển chọn và cấy truyền vi sinh vật gây bệnh Mẫu bệnh: có thể là mẫu nước hay mẫu thực phẩm khả nghi chứa vi sinh vật gây bệnh Thu mẫu: nguyên tắc mẫu thu được cần có tính đại diện, đối với thực... trình phân tích: + Tăng sinh chọn lọc: cho 25g muẫ vào túi PE vô trùng, thêm 225ml canh thang tăng sinh chọn lọc đồng nhất bằng máy dập mẫu ủ ở 37 độ C/6-8h + Phân lập:Dùng que cấy vòng ria váng trên bề mặt môi trường tăng sinh chọn lọc lên bề mặt đĩa thạch TCBS để phân lập khuẩn lạc đơn ủ 37 độ C trong 18-22h thu khuẩn lạc đặc trưng, cấy chuyển sinh khối của khuẩn lạc đặc trưng trên môi trường phân. .. parahaemolyticus trong 25g mẫu  Các lưu ý trong thao tác thực hiện: vibrio là nhóm chứa các dòng gây bệnh lên cần tuân thủ triệt để các biện pháp an toàn khi làm vi c với chủng Vibrio dùng làm đối chứng (+) cũng như khi thao tác trên các chủng phân lập được Các môi trường hay mẫu vật sau khi nuôi cấy cần phải hấp khử trùng cẩn thận trước khi rửa Câu 13 Trình bày các bước tiến hành phân tích coliform và E coli trong. .. trường thạch  Trình bày phương pháp pha loãng mẫu nước và các vấn đề cần lưu ý trong thao tác thực hiện − Nguyên tắc: pha loãng mẫu là một trong những công đoạn cơ bản nhưng rất quang trọng trong quá trình phân tích vsv Vi c pha loãng mẫu ở nồng độ thích hợp sẽ giúp ích rất nhiều trong quá trình định lượng cũng như phân tích vsv − Phương pháp: dùng pipet hút 1 ml mẫu cho vào ống nghiệm chứa 9ml dung... để môi trường được phân phối đều trên mặt đĩa • Để yên cho môi trường nguội và đông đặc − Chú ý: + Nhớ vi t vào nhãn: Tên môi trường … + Khử trùng: ngày … tháng … năm + Để vào nơi cất giữ môi trường để tiện cho vi c theo dõi, sử dụng và bảo quản Câu 10 Trình bày phương pháp pha loãng mẫu nước và các vấn đề cần lưu ý trong thao tác thực hiện Các chú ý trong thao tác cấy trải vi sinh vật trên môi trường... mẫu Tăng sinh chọn lọc Phân lập Thử nghiệm sinh hóa Thử nghiệm kháng huyết thanh Báo cáo kết quả − Nguyên lý phương pháp: một lượng mẫu xác định được tăng sinh trong môi trường chọn lọc đặc trưng Cấy phân lập từ môi trườn tăng sinh sang môi trường phân biệt chọn lọc đặc trưng Các khuẩn lạc nghi ngờ trên môi trường phân lập, được khẳng định bằng các thử nghiệm sinh hóa và huyết thanh học − Môi trường ... Nguyên tắc: pha loãng mẫu công đoạn quang trọng trình phân tích vsv Việc pha loãng mẫu nồng độ thích hợp giúp ích nhiều trình định lượng phân tích vsv − Phương pháp: dùng pipet hút ml mẫu cho vào... 12 Trình bày bước tiến hành phân tích Vibrio nước Các vấn đề cần lưu ý thao tác thực hiện?  Trình bày bước tiến hành phân tích Vibrio nước Thu mẫu Tăng sinh chọn lọc Phân lập Thử nghiệm sinh hóa... Proskauer)Nêu qui trình phân tích Coliforms Escherichia coli Trình bày thử nghiệm sinh hóa MR (Methyl red), thử VP (Voges- Proskauer)  Thử nghiệm sinh hóa MR − Nguyên tắc − Phân biệt vsv dựa khác biệt

Ngày đăng: 14/04/2016, 21:09

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan