Đang tải... (xem toàn văn)
Nội dung 1. Lịch sử nghiên cứu 1.1 Trên thế giới Năm 1890, thí nghiệm đầu tiên về cấy truyền phôi thành công trên thỏ bởi Walter Heap. Ông là người sáng lập ra công nghệ cấy truyền phôi. 1932, cấy truyền phôi thành công trên dê bởi Warwick và Berry. 1933, cấy truyền phôi thành công trên chuột cống bởi Nicholas. 1934, cấy truyền phôi thành công trên cừu bởi Warwick và Berry. 1951, bê đầu tiên trên thế giới ra đời bằng cấy truyền phôi bởi Willet và cộng sự. 1970, thành công trong công việc bảo quản phôi đông lạnh. 1972, cấy truyền phôi trên bò bởi Willmut và Rowson. 1982, vi phẫu thuật thành công trong phòng thí nghiệm (theo Vlahov, 1987). 1992, bằng kĩ thuật cloning từ một phôi bò đã cho ra 5 phôi (Viện INRA Pháp, 1992). ............
Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Nội dung Lịch sử nghiên cứu 1.1 Trên thế giới Năm 1890, thí nghiệm cấy truyền phôi thành công thỏ Walter Heap Ông người sáng lập công nghệ cấy truyền phôi - 1932, cấy truyền phôi thành công dê Warwick Berry - 1933, cấy truyền phôi thành công chuột cống Nicholas - 1934, cấy truyền phôi thành công cừu Warwick Berry - 1951, bê giới đời cấy truyền phôi Willet - cộng 1970, thành công công việc bảo quản phôi đông lạnh 1972, cấy truyền phôi bò Willmut Rowson 1982, vi phẫu thuật thành công phòng thí nghiệm (theo Vlahov, - 1987) 1992, kĩ thuật cloning từ phôi bò cho phôi (Viện INRA Pháp, 1992) Nhóm Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 1.2 Ở Việt Nam - Năm 1978, trung tâm khoa học tự nhiên và công nghệ quốc gia đã có một bộ phận bắt đầu nghiên cứu cấy truyền phôi thỏ - Năm 1980, nghiên cứu cấy truyền phôi bò Tháng 9-1989, Viện chăn nuôi bộ môn cấy truyền phôi được thành lập - Năm 1986, Con bê đầu tiên ở nước ta đời từ cấy truyền phôi - Năm 1989, Cấy truyền 50 phôi đông lạnh với sự giúp đỡ của chuyên gia Cuba - Năm 1996, 150 phôi đông lạnh cấy bò miền Nam và Hà Nội, những bê sinh sinh trưởng, phát triển, sinh sản bình thường, cho sữa vượt toàn đàn 2030% Hình 2: Bò được chuyển phôi ở Việt Nam Nhóm 2 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Cơ sở khoa học và ý nghĩa thực tiễn 2.1 Cơ sở khoa học - Phôi coi thể độc lập giai đoạn đầu trình phát triển - Nếu chuyển phôi vào thể khác có trạng thái sinh lí sinh dục phù hợp với trạng thái cá thể cho phôi sống phát triển bình thường ( phù hợp gọi đồng pha) - Sử dụng chế phẩm sinh học chứa hoocmon điều khiển sinh sản vật nuôi theo ý muốn 2.2 Ý nghĩa thực tiễn - Tăng số đời bò có tiềm di truyền vượt trội, phổ biến nhân nhanh giống tốt, quí, thực tế sản xuất sỏ khai thác triệt để tiềm di truyền cá thể cao sản cho trứng cá thể đực cho - tinh trùng, tận dụng tốt đặc tính cho nhận phôi Nâng cao khả sinh sản, sản phẩm thịt, sữa chăn nuôi bò Tăng tốc độ kiểm tra đời sau, nâng cao cường độ chọn lọc, đẩy mạnh công tác - giống sở tăng nhanh tiến độ di truyền hằng năm Giảm khoảng cách hệ Giúp người dễ dàng, thuận lợi việc xuất nhập, vận chuyển phôi từ khu vực sang khu vực khác, tránh lây lan bệnh tật, tiết kiệm chi phí kiểm dịch, - hạn chế stress chi phí vận chuyển gia súc sống Tạo bê sinh đôi thúc đẩy nhanh phát triển ngành khoa học khác như: - sinh lý, di truyền học Có thể tạo phôi từ bò có tiềm di truyền cao khả trì trình mang thai bình thường Bảo tồn giống dạng - trứng, phôi, tinh trùng nhằm giữ vật liệu di truyền Hạn chế số dịch bệnh nâng cao khả chống chịu bệnh, khả thích nghi cho vật môi trường (không lây truyền bệnh, tăng sức đề kháng …) Quy trình cấy truyền phôi bò nhân tạo Sơ đồ quy trình: Chọn bò cho phôi gây động dục Nhóm Bò Thụ chotinh phôi nhân trở lại Gây Thu rụnghoạch trứng phôi nhiều ở bìnhtạo thường bò cho phôi Chọn bò nhận phôi Đàn sinh mang đặc tính di Cấy truyền bò cho phôi truyền phôi vào Gây động Bò nhận dụcphôi cho bò bò nhận phôi nhận có chửa phôi Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Nhóm Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.1) Chọn bò cho trứng gây động dục - Bò khỏe mạnh, bệnh tật đường sinh sản, có suất cao 50007000kg sữa/ chu kỳ - Bò suất cao một vài tính trạng mong muốn tính trạng phải di truyền cho hệ sau Ưu tiên tính trạng có hệ số di truyền cao giá trị thương phẩm lớn - Không mắc khuyết tật bệnh di truyền - Không già - Chu kì động dục bình thường, biểu chu kì rõ ràng Buồng trứng hoạt động tốt Chọn bò sau sinh từ tháng đến tháng 3.2) Gây rụng trứng nhiều bò cho trứng - Đưa hoocmon PMSG vào bò dụng cụ chuyên dụng (Kill made) Mục đích: đưa lượng hoocmon PMSG cao vào máu bò nhằm ức chế toàn trình phát triển nang trứng bò - Sau ngày, tiếp tục tiêm hoocmon estradiol, lượng tiêm 0,5ml liều 1mg tiêm vào bắp sau mông bò - Ngày 10 13 rút kill made tiêm FSH để thúc đẩy trình tạo nang trứng phát triển đồng loạt sau thời gian bị ức chế rụng lượng lớn trứng.( tính từ ngày đưa kill made vào đường sinh dục bò) Hình 3: Kill made và đưa hoocmon vào bò Nhóm Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.3 Thụ tinh 3.3.1 Thu trứng Hút trứng với trợ giúp máy siêu li tâm dùng kĩ thuật hỗ trợ sinh sản người Phương pháp OPU đòi hỏi phải có thiết bị dụng cụ chuyên dụng máy siêu âm, đầu dò, kim chọc hút tay nghề cao người thao tác Hệ kim hút có nối dây để thu trứng từ nang vào tube đựng bên Bộ đầu dò siêu âm dây chuyền tín hiệu Phần nhựa cố định đầu dò Ống kim loại bao toàn hệ thống kim, dây hút, đầu dò, dây truyền tín hiệu Phương pháp cho phép hút trứng nang trứng buồng trứng từ vật sống Con vật đưa vào khai thác trứng giữ đứng yên giá cố định người thao tác tay đưa vào trực tràng kiểm soát buồng trứng, áp buồng trứng vào đầu dò, tay điều khiển kim hút - Cách tiến hành: Cho bò vào giá cố định, lấy hết phân ra, rửa sạch, sát khuẩn âm hộ khu vực xung quanh - Chuẩn bị hệ thống máy siêu âm, nối đầu dò âm đạo vào máy siêu âm Nối kim hút tế bào trứng (kim 16G dài 55 cm), đặt máy tạo áp suất 120 mmHg, tương đương tốc độ dòng chảy 25 ml/phút Chuẩn bị môi trường hút tế bào trứng Nhóm Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc (mDPBS Sigma) có bổ sung 50 iu/ml heparin 5% huyết bê kháng sinh (100.000 UI penicilin/ml + 100mg streptomycin/ml) trì nhiệt độ 37oC máy ổn nhiệt - Nhẹ nhàng cho đầu dò siêu âm có gắn hệ thống dẫn kim vào âm đạo, cho tay qua trực tràng xác định vị trí buồng trứng, vị trí nang trứng đưa buồng trứng phía đầu quét đầu dò, quan sát nang trứng hình máy siêu âm, đếm số nang trứng có mặt buồng trứng Trước hút dịch nang trứng, hút môi trường hút trứng để làm trơn hệ thống kim ống dẫn Sau chọc hút - nang trứng, rút kim ra, hút dung dịch thu tế bào trứng để tế bào trứng chảy vào ống falcon, tiến hành hút lặp lại đến không nhìn thấy nang trứng buồng trứng chuyển qua buồng trứng đối diện Dịch hút thu vào ống ly tâm 50ml trì nhiệt độ 370C máy ổn nhiệt - Sau hút xong buồng trứng, đưa phòng thí nghiệm, lọc cốc lọc Emcon có đường kính lỗ lọc 20µm, 10ml dung dịch lại chuyển vào đĩa petri vô trùng có đường kính 90mm để soi tìm tế bào trứng kính hiển vi soi Tế bào trứng thu được đánh giá Nhóm Công nghệ sinh học động vật - GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Phân loại chọn lọc tế bào trứng + Loại A: tế bào trứng hoàn hảo, trứng có lớp tế bào cumulus chắc, dày bao quanh vòng suốt tròn rõ, liên kết chặt với nhau, chất nguyên sinh đồng đều + Loại B: tế bào trứng với ít lớp tế bào cumulus, không liên kết chặt chẽ, có một vài nơi bị mất các tế bào này, nguyên sinh chất đồng đều màu tối + Loại C: lớp tế bào cumulus bao quanh tế bào trứng mà có sợi huyết (fibrin), nguyên sinh chất không đồng đều Thông thường chỉ dùng trứng loại A B để nuôi tới chín sau thụ tinh thành hợp tử để phát triển thành phôi - Nuôi chín tế bào trứng Các trứng khai thác từ buồng trứng trạng thái chưa thành thục, để thụ tinh , trứng cần có khả phát triển đạt đến trạng thái thành thục Sự phát triển trứng có kèm theo biến đổi mặt hình thái, sinh lý sinh hóa liên quan đến nhân trứng, nguyên sinh chất màng trứng Chọn trứng có chất lượng tốt đưa vào nuôi cấy môi trường TCM-199 5% CS (20 tế bào trứng 100 ml môi trường) với có mặt tế bào granulose (ở nồng độ 1-5 triệu tế bào/ml) Nhiệt độ tử nuôi đặt 38,5oC, đồng thời nồng độ sục khí CO2 điều chỉnh mức 5% Môi trường nuôi bổ sung huyết bò động dục (giàu LH, FSH, Estradiol) bằng huyết bào thai (giàu yếu tố IGF-1) song song bổ sung thêm Estradiol- 17β (nồng độ cao có ảnh hưởng âm tính tới hình thành thoi vô sắc xuất thể cực đầu tiên) Tuy nhiên, để hoàn thiện trình thành thục ống nghiệm, cần bổ sung thêm LH, FSH vào môi trường nuôi trứng Nhóm Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.3.2) Hoạt hóa tinh trùng * Thu tinh trùng: tinh trùng được thu từ bò đực giống với những đặc điểm sức khỏe tốt, có những tính trạng tốt mong muốn, không mắc bệnh di truyền, Thu tinh trùng bằng phương pháp nhảy giả: Tinh trùng thu trực tiếp cách cho bò đực nhảy vào giá nhảy giả làm hình nộm bò có gắn âm đạo giả Bò đực sau dắt đến giá nhảy nhờ phản xạ có điều kiện bò đực nhảy giả xuất tinh vào âm đạo giả, thu nhận tinh trùng từ âm đạo giả, giữ môi trường INRA sau đó đem bảo quản lạnh nitơ lỏng -1960c * Tinh trùng hoạt hoá theo phương pháp 90% percoll: - Ly tâm lần 1: lấy ml môi trường 90% percoll cho vào ống ly tâm, giải đông 12 cọng rạ tinh đông lạnh nước ấm 37°C, cho tinh trùng vào ống ly tâm có môi trường 90% percoll, ly tâm với tốc độ 2100v/phút 10 phút - Ly tâm lần 2: Lấy phần tinh trùng lắng phía dưới, cho tiếp 6ml môi trường rửa tinh trùng (BO+ Hypotaurine+ Heparin), ly tâm lần (1800v/phút, phút) - Pha loãng đến nồng độ 6,25x106 tinh trùng/ml Nhóm Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Nhóm 10 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.3.3) Thụ tinh - Tế bào trứng sau nuôi 20 lấy khỏi tủ nuôi cấy, rửa 3-4 lần môi trường rửa (BO + BSA) Sau để tiến hành thụ tinh, chuyển 20 TB trứng rửa vào 100μl môi trường BO có mật độ tinh trùng 6,25x10 tinh trùng / ml đĩa petri có phủ dầu khoáng vô trùng, cho vào tủ nuôi cấy 5% CO , nhiệt độ 38,5ºC, độ ẩm 98%, trình thụ tinh tiến hành khoảng thời gian 5-6 - Thu trứng thụ tinh từ giọt chứa tinh trùng (giọt môi trường thụ tinh) - Rửa trứng thụ tinh lần môi trường nuôi trứng chín (TCM-199) chuẩn bị sẵn - Đặt đĩa có trứng thụ tinh vào tủ ấm có nhiệt độ 38 0C với 5% C02 48h Hình 7: Trứng đã thụ tinh 3.3.4) Nuôi phôi - Chuẩn bị hai đĩa rửa, đĩa 2,5ml môi trường CR1aa 5% CS, phủ ml dầu khoáng vi lượng Một đĩa nuôi phôi: lấy giọt giọt 100 ml CR1aa 5% CS cho vào đĩa petri, phủ 4,5 ml dầu khoáng vi lượng Cho đĩa vào tủ ấm Nhóm 11 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc CO2 khoảng trước chuyển phôi vào nuôi Trứng sau thụ tinh, chuyển vào đĩa rửa, rửa đĩa lần, sau chuyển vào giọt môi trường nuôi phôi, cho vào tủ nuôi cấy CO2 nuôi tiếp theo dõi phát triển phôi Sự phân chia hợp tử đánh giá dựa vào phân chia tế bào 48 sau thụ tinh Sự phát triển phôi đánh giá kính hiển vi soi ngày thứ 5, 6, sau nuôi cấy ống nghiệm dựa vào số phôi phát triển đến giai đoạn phôi dâu, phôi nang Ngày 0-2: phôi phát triển tế bào, ngày 1-3: phôi tế bào, ngày 2-3: phôi tế bào, ngày 3-5: phôi tế bào, ngày 5-6: phôi dâu, ngày 6-7: phôi dâu chặt, ngày 6-8: phôi nang sớm, ngày 8-9: phôi nang trương nở thoát màng, ngày 9-11: phôi nang thoát màng 3.4) Thu phôi, chọn lọc phôi - Sau thụ tinh, loại bỏ trứng không thụ tinh Trứng không thụ tinh màng noãn hoàn rõ nét, nhân có cấu trúc đồng phân chia - Trứng thụ tinh: có phân chia tế bào tương ứng với giai đoạn phát triển phôi - Phôi chất lượng phôi chậm phát triển, phôi thoái hóa Nhóm 12 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc - Phôi có chất lượng tốt phôi dâu, phôi nang có hình dáng kích thước phù hợp với độ tuổi, màu sắc tế bào đặc trưng Nhóm 13 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.5) Chọn bò nhận phôi gây động dục đồng pha bò nhận phôi - Bò khỏe mạnh, bệnh tật đường sinh sản, sinh sản tốt tạo tỷ lệ đậu phôi cao đưa phôi vào thể, không cần suất cao - Bò nhận phôi không đóng góp kiểu di truyền có tác động đến kiểu hình non thời gian mang thai nuôi - Sự đồng pha: trạng thái sinh lý sinh dục bò nhận phôi phù hợp với trạng thái sinh lý sinh dục bò cho phôi phù hợp với tuổi phôi - Gây động dục đồng pha trình kích thích cho nhận phôi động dục vào thời điểm động dục cho phôi 3.6) Cấy truyền phôi (ET- embryo transfer) - Là trình đưa phôi tạo từ cá thể bò mẹ cho phôi vào cá thể bò mẹ khác (Bò nhận phôi) Phôi sống phát triển bình thường sở trạng thái sinh lí sinh dục bò cho phôi phù hợp với bò nhận phôi phù hợp với tuổi phôi, phù hợp gọi đồng pha - Dùng phương pháp cấy truyền phôi cọng rạ để cấy truyền phôi vào bò nhận Nhóm 14 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.7) Kiểm tra, chăm sóc bò mang thai a Chăm sóc bò mang thai Thức ăn chủ yếu cỏ xanh, phụ phế phẩm trồng trọt công nghiệp rơm, vỏ thân bắp, đọt mía, thân loại họ đậu, cám, rỉ mật … Bò chửa cần ăn uống đầy đủ, ngày 30-35 kg cỏ tươi, kg rơm ủ, kg thức ăn tinh (ngô, cám,…), 25- 30 gram muối, 30-40 gram bột xương Không bắt bò làm việc nặng như: cày bừa, kéo xe,… Tránh xua đuổi mạnh bò có chửa tháng thứ 3, tháng thứ 7, thứ thứ b Đỡ đẻ cho bò Thời gian mang thai trung bình bò 280-285 ngày - Triệu chứng bò đẻ: Bò có tượng sụt mông, bầu vú căng, đầu vú chĩa hai bên, niêm dịch treo lòng thòng mép âm môn, đau bụng, đứng lên nằm xuống, chân cào đất, đái nhiều lần, bắt đầu đẻ bọc ối thò trước - Đỡ đẻ cho bò: Trong trường hợp bò đẻ bình thường (thai thuận) không cần can thiệp cần hỗ trợ cho bò cách dùng tay kéo nhẹ thai Cắt dây rốn dài khoảng 10-12 cm (không cần buộc dây rốn), sát trùng cồn Iốt 5% Lau rớt, rãi mũi, mồm bê, để bò mẹ tự liếm Vệ sinh phần thân sau bầu vú bò mẹ, cho bò mẹ uống nước thêm muối, cám nước ấm Trường hợp đẻ khó phải gọi cán thú y can thiệp kịp thời c Chăm sóc, nuôi dưỡng bò đẻ bê * Đối với bò mẹ - 15- 20 ngày đầu sau đẻ cho bò mẹ ăn cháo (1,0- 1,5 kg thức ăn tinh/con/ngày) 25-30 gr muối ăn, 30-40 gr bột xương, có đủ cỏ non xanh ăn chuồng - Những ngày sau, suốt thời gian nuôi con, ngày cho bò mẹ ăn 30 kg cỏ tươi, 2-3 kg rơm ủ, 1-2 kg cám thức ăn hỗn hợp để bò mẹ phục hồi sức khoẻ, nhanh động dục lại để phối giống * Đối với bê Nhóm 15 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc - Từ sinh đến 30 ngày tuổi bê nuôi nhà, cạnh bò mẹ Luôn giữ ấm cho bê, tránh gió lùa, chỗ bê nằm khô, - Trên tháng tuổi, chăn thả theo bò mẹ bãi gần chuồng, tập cho bê ăn thức ăn tinh - Từ 3-6 tháng tuổi: cho 5-10 kg cỏ tươi 0,2 kg thức ăn tinh hỗn hợp Tập cho bê ăn cỏ khô Nên cai sữa bê vào khoảng tháng tuổi - Từ 6-24 tháng tuổi, chăn thả chính, ngày cho ăn thêm 10-20 kg cỏ tươi, mía, ngô non Mùa thiếu cỏ cho ăn thêm 2-4 kg cỏ khô ngày 3.8) Đàn bê suất cao sinh Nhóm 16 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Hình 8: Bò cấy truyền phôi sinh trưởng và phát triển tốt Nhóm 17 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Danh mục thành phần các loại môi trường Môi trường nuôi thành thục trứng: TCM- 199 PVA (mg) Sodium citrate (0,5mM) (ml) Axit amin thay (x100) (ml) Yếu tố sinh trưởng biểu bì (EGF) (mg) Penicillin (iu) Streptomycin (mg) pH Áp suất thẩm thấu (mOsm) Nuôi thành thục trứng (trong 100ml M199) 300 - Nuôi hợp tử (trong 100ml mSOF) 300 1,0 1,0 1,0 0,5 5000 7,3-7,4 290-310 5000 7,4 270-280 BSA: abumin huyết bò albumin protein phổ biến hệ tuần hoàn chiếm 80% áp suất keo máu Người ta chứng minh albumin huyết chịu trách nhiệm cho việc trì pH máu Albumin động vật có vú gan tổng hợp ban đầu dạng preproabumin Sau loại bỏ chuỗi peptide tín hiệu thành proalbumin tiếp tục loại bỏ proalbumin lại để trở thành albumin Albumin cấu tạo lượng thấp tryptophan, methionine; lượng lớn cytine amino acid tích điện, aspartic, glutamic acid, lysine, arginine Glucine isoleucine BSA thấp so với protein bình thường BSA phản ứng với protein lysozyme clupeine nhờ vào liên kết chéo BSA lysozyme bề mặt phân cách BSA tiến tới điểm đẳng điện lực đẩy tĩnh điện mức tối thiểu Khi tương tác với lysozyme, giãn nở ổn định lớn pH cải thiện việc tạo bọt ổn định pH, chất vận chuyển acid béo không no huyết Nó thực chức khác cô lập gốc oxygen tự bất hoạt độc tố bilirubin BSA làm tăng amino acid bổ sung, cung cấp phân tử amino acid kết hợp kích thích phất triển, cung cấp chất bắt giữ Dung dịch đệm Dulbecco - PBS* Nhóm 18 Công nghệ sinh học động vật Thành phần Sodium chloride GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Công thức g NaCl 8,00 0,20 Potasium chloride KCl Sodium dihydrogen NaH2P04.2H20 1,15 Orthophosphate Disodium hydrogen Na2HP04.2H20 0,20 Orthophosphate Glucose Sodium pyruvate C6H1206 1,00 Thành phần Công thức g Calcium chloride CaCl2.2H20 0,132 Magnesium sulphate MgS04 7H20 Lyopholized BSA 0,400 Penicilin G 10 Sodium ** 11 0,036 12 Streptomicin sulphate 0,05 Nước cất lần vừa đủ *** * Lọc trùng màng vi lọc 0,2 ** 100UI/ml; ***1000ml 0,4 m; D-PBS (Môi trường thu nhận trứng) Thành phần Hàm lượng NaCl 8g KCl 0,2 g KH2PO4 0,2 g Na2HPO4.12H2O 1,15 g MgCl2.6H2O 0,1 g CaCl2 0,1 g Na pyruvate 0,036 g Nhóm 19 0,121 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Glucose 1g BSA (Sigma) 3-4g Nước cất lần Vừa đủ 1000 ml Dung dịch phá cumulus (Hyaluronidase 1,0 mg/ml) Thành phần Hàm lượng Hyaluronidase (Sigma) 10 mg PBS (-) Vừa đủ 10 ml Dung dịch pha loãng tinh trùng Thành phần Hàm lượng NaHCO3 5% 50 g Formol 36-40% 10 ml Trypan Blue 0,25 g Nước cất Vừa đủ 1000 ml Môi trường IVF Thành phần Hàm lượng TCM-199 9,78 g/l D-glucose 3,05 mM Nhóm 20 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Calcium lactate 2,92 mM Sodium pyruvate 0,91 mM Potassium penicillin G 75 µg/ ml Streptomycin sulfate 50 µg/ml Fetal calf serum 10 % Môi trường CR1aa (dùng nuôi phôi sau thụ tinh) a CR1aa- A: Thành phần Hàm lượng NaCl 6.7031 g KCl 0.2311 g Natri pyruvate 0.044 g NaHCO3 2.2011 g Phenol red (10 µg/ml) 0.01 Nước cất lần vừa đủ 770 ml b CR1aa- B: Thành phần Hàm lượng Hemicalcium lactate 0.5996 g Nhóm 21 Công nghệ sinh học động vật Nước cất lần thêm vừa đủ GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 200 ml c Môi trường CR1aa: Thành phần Hàm lượng CR1aa- A 77 ml CR1aa- B 20 ml BME (Essential Amino Acid) 100X ml MEM (Non Essential Amino Acid) 100X ml L- Glutamic acid(20 mg/ml) ml Bovine Serum Albumine mg/ml Penicillin- G 100IU/ml 10000 IU Streptomycin Sulfate 100µg/ml 100 10 Môi trường nuôi trứng chín TCM-199 bổ sung 20% FBS Nhóm 22 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Thành phần Hàm lượng TCM-199 (Sigma) 80 ml FBS (GIBCO) 20 ml Gentamycin 0,125 ml TCM-199 bổ sung mg/ml BSA Thành phần Hóa chất TCM-199 (Sigma) 100 ml BSA (Sigma) 300 mg Gentamycin 0,125 ml 11 Môi trường nuôi trứng In Vitro TCM- 199 + 20% FBS Thành phần Hàm lượng TCM- 199 19.5 ml FBS ml Gentamycin 62.5 µl Natri pyruvate 0.5 ml Nhóm 23 Công nghệ sinh học động vật Folltropin GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 125 µl Nhóm 24 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc Tài liệu tham khảo - Giáo trình công nghệ sinh học động vật Nguyễn Thị Kim Cúc http://doc.edu.vn/tai-lieu/giao-trinh-sinh-ly-hoc-vat-nuoi-sinh-ly-sinh-san68717/ http://luanvan.co/luan-van/san-xuat-phoi-bo-bang-thu-tinh-ong-nghiemtheo-phuong-phap-imai-40445/ sản xuất phôi bò http://nghenong.com/video/ki-thuat-truyen-cay-phoi-cho-bo-sua-kenh-nhanong-4422.html quy trình cấy truyền phôi bò http://www.authorstream.com/Presentation/anhnongdan-1109645-congnghe-cay-truyen-phoi-bo-nxpowerlite/ kỹ thuật cấy truyền phôi http://tailieu.vn/doc/bai-giang-cong-nghe-cay-truyen-phoi-bo1743097.html giảng cấy truyền phôi http://vcn.vnn.vn/thu-tinh-trong-ong-nghiem-in-vitrofertilization_n58151_g721.aspx http://doc.edu.vn/tai-lieu/khoa-luan-anh-huong-cua-nong-do-bsa-bovineserum-albumin-trong-moi-truong-nuoi-cay-len-kha-nang-phat-trien-cuaphoi-10020/ Nhóm 25 [...]... hợp với tuổi phôi - Gây động dục đồng pha là quá trình kích thích cho cái nhận phôi động dục đúng vào thời điểm động dục của cái cho phôi 3.6) Cấy truyền phôi (ET- embryo transfer) - Là quá trình đưa phôi được tạo ra từ cá thể bò mẹ cho phôi vào cá thể bò mẹ khác (Bò nhận phôi) Phôi vẫn sống và phát triển bình thường trên cơ sở trạng thái sinh lí sinh dục của bò cho phôi phù hợp với bò nhận phôi hoặc... http://luanvan.co/luan-van/san-xuat-phoi-bo-bang-thu-tinh-ong-nghiemtheo-phuong-phap-imai-40445/ sản xuất phôi bò http://nghenong.com/video/ki-thuat-truyen-cay-phoi-cho-bo-sua-kenh-nhanong-4422.html quy trình cấy truyền phôi ở bò http://www.authorstream.com/Presentation/anhnongdan-1109645-congnghe-cay-truyen-phoi-bo-nxpowerlite/ kỹ thuật cấy truyền phôi http://tailieu.vn/doc/bai-giang-cong-nghe-cay-truyen-phoi-bo1743097.html bài giảng cấy truyền phôi http://vcn.vnn.vn/thu-tinh-trong-ong-nghiem-in-vitrofertilization_n58151_g721.aspx... tuổi phôi, sự phù hợp này gọi là đồng pha - Dùng phương pháp cấy truyền phôi bằng cọng rạ để cấy truyền phôi vào bò nhận Nhóm 2 14 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.7) Kiểm tra, chăm sóc bò mang thai a Chăm sóc bò mang thai Thức ăn chủ yếu là cỏ xanh, phụ phế phẩm trồng trọt và công nghiệp như rơm, vỏ thân cây bắp, đọt mía, thân các loại cây họ đậu, cám, rỉ mật … Bò cái... của phôi - Phôi kém chất lượng là những phôi chậm phát triển, phôi thoái hóa Nhóm 2 12 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc - Phôi có chất lượng tốt là phôi dâu, phôi nang có hình dáng và kích thước phù hợp với độ tuổi, màu sắc của tế bào đặc trưng Nhóm 2 13 Công nghệ sinh học động vật GVHD: Nguyễn Thị Kim Cúc 3.5) Chọn bò nhận phôi và gây động dục đồng pha bò nhận phôi. .. phôi - Bò khỏe mạnh, không có bệnh tật về đường sinh sản, sinh sản tốt tạo tỷ lệ đậu phôi cao khi đưa phôi vào cơ thể, không cần năng suất cao - Bò cái nhận phôi không đóng góp về kiểu di truyền của con nhưng có tác động đến kiểu hình của con non trong thời gian mang thai và nuôi con - Sự đồng pha: trạng thái sinh lý sinh dục của bò nhận phôi phù hợp với trạng thái sinh lý sinh dục của bò cho phôi hoặc... trường nuôi phôi, cho vào tủ nuôi cấy CO2 nuôi tiếp và theo dõi sự phát triển của phôi Sự phân chia của hợp tử được đánh giá dựa vào sự phân chia tế bào 48 giờ sau thụ tinh Sự phát triển của phôi được đánh giá bằng kính hiển vi soi nổi ở ngày thứ 5, 6, 7 sau khi nuôi cấy trong ống nghiệm dựa vào số phôi phát triển đến giai đoạn phôi dâu, phôi nang Ngày 0-2: phôi phát triển 1 tế bào, ngày 1-3: phôi 2 tế... phôi dâu, phôi nang Ngày 0-2: phôi phát triển 1 tế bào, ngày 1-3: phôi 2 tế bào, ngày 2-3: phôi 4 tế bào, ngày 3-5: phôi 8 tế bào, ngày 5-6: phôi dâu, ngày 6-7: phôi dâu chặt, ngày 6-8: phôi nang sớm, ngày 8-9: phôi nang trương nở hoặc đang thoát màng, ngày 9-11: phôi nang thoát màng 3.4) Thu phôi, chọn lọc phôi - Sau khi thụ tinh, loại bỏ trứng không thụ tinh Trứng không thụ tinh màng noãn hoàn hiện... đẻ bọc ối thò ra ngoài trước - Đỡ đẻ cho bò: Trong trường hợp bò đẻ bình thường (thai thuận) không cần can thiệp hoặc chỉ cần hỗ trợ cho bò cái bằng cách dùng tay kéo nhẹ thai ra Cắt dây rốn dài khoảng 10-12 cm (không cần buộc dây rốn), sát trùng bằng cồn Iốt 5% Lau rớt, rãi trong mũi, mồm bê, để bò mẹ tự liếm con Vệ sinh phần thân sau và bầu vú bò mẹ, cho bò mẹ uống nước thêm ít muối, cám và nước... rơm ủ, 1 kg thức ăn tinh (ngô, cám,…), 25- 30 gram muối, 30-40 gram bột xương Không bắt bò làm những việc nặng như: cày bừa, kéo xe,… Tránh xua đuổi mạnh đối với bò đang có chửa tháng thứ 3, tháng thứ 7, thứ 8 và thứ 9 b Đỡ đẻ cho bò Thời gian mang thai trung bình của bò là 280-285 ngày - Triệu chứng bò sắp đẻ: Bò có hiện tượng sụt mông, bầu vú căng, đầu vú chĩa về hai bên, niêm dịch treo lòng thòng... can thiệp kịp thời c Chăm sóc, nuôi dưỡng bò đẻ và bê con * Đối với bò mẹ - 15- 20 ngày đầu sau khi đẻ cho bò mẹ ăn cháo (1,0- 1,5 kg thức ăn tinh/con/ngày) và 25-30 gr muối ăn, 30-40 gr bột xương, có đủ cỏ non xanh ăn tại chuồng - Những ngày sau, trong suốt thời gian nuôi con, một ngày cho bò mẹ ăn 30 kg cỏ tươi, 2-3 kg rơm ủ, 1-2 kg cám hoặc thức ăn hỗn hợp để bò mẹ phục hồi sức khoẻ, nhanh động dục ... http://nghenong.com/video/ki-thuat -truyen -cay- phoi- cho -bo- sua-kenh-nhanong-4422.html quy trình cấy truyền phôi bò http://www.authorstream.com/Presentation/anhnongdan-1109645-congnghe -cay- truyen- phoi- bo- nxpowerlite/... http://www.authorstream.com/Presentation/anhnongdan-1109645-congnghe -cay- truyen- phoi- bo- nxpowerlite/ kỹ thuật cấy truyền phôi http://tailieu.vn/doc/bai-giang-cong-nghe -cay- truyen- phoi- bo1 743097.html giảng cấy truyền phôi http://vcn.vnn.vn/thu-tinh-trong-ong-nghiem-in-vitrofertilization_n58151_g721.aspx... http://doc.edu.vn/tai-lieu/khoa-luan-anh-huong-cua-nong-do-bsa-bovineserum-albumin-trong-moi-truong-nuoi -cay- len-kha-nang-phat-trien-cuaphoi-1 0020 / Nhóm 25