SEMINAR QUÁ TRÌNH VÀ THIẾT BỊ SINH HỌC TRONG CNTP GVHD: ThS NGUYỄN THỊ VÂN ANH SVTH: NGUYỄN THỊ THÙY DƯƠNG NGUYỄN THỊ HOA ĐỀ TÀI TÌM HIỂU VỀ MÁY ĐIỆN DI NỘI DUNG ĐIỆN DI LÀ GÌ? AXIT DEOXYRIBONUCLEIC (AND) VÀ NGUYÊN TẮC XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CỦA MÁY ĐIỆN DI CẤU TRÚC VẬN HÀNH 1.Điện di gì?  Là tượng dịch chuyển vật thể mang điện tích tác động điện trường Điện di hay điện di gel áp dụng sinh học phân tử kĩ thuật phân tích phân tích phân tử AND, ARN hay protein dựa đặc điểm vật lý chúng kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điên tích 2 AXIT DEOXYRIBONUCLEIC (AND) VÀ NGUYÊN TẮC XÁC ĐỊNH 2.1 Định nghĩa - Acid Deoxyribo Nucleic (viết tắt ADN theo tiếng pháp hay DNA theo tiếng Anh ) phân tử acid nucleic mang thông tin di truyền mã hóa cho hoạt động sinh trưởng phát triển dạng sống bao gồm số virus - ADN thường coi vật liệu di truyền cấp độ phân tử tham gia định tính trạng Trong trình sinh sản, phân tử ADN nhân đôi truyền cho hệ sau 2.2 Cấu trúc không gian ADN 2.3 Nguyên tắc xác định • Công nghệ ADN tái tổ hợp – tảng cho phát triển vũ bão ngành công nghệ sinh học đại • • Các phương pháp phân tích, tổng hợp đại tách ADN, xác định thứ tự, tổng hợp… Một dò tìm đơn giản khúc ADN (ARN) tìm khúc bổ sung cách lai 3 Cấu trúc máy điện di Khay vận hành en Nắp có điện áp cao Buồng giảm sốc • Khuôn đúc gel • Khay di động suốt • Miếng bọt đệm • Nắp thiết bị • Mã màu đầu nối với điện cực đế máy với nguồn điện • Ôngs nối điện cực • Bục di chuyển • Nơi nạp 50/50 etylen glycol/ nước vào Cấu trúc vận hành 4.1 Chuẩn bị dung dịch  Chuẩn bị 250ml dung dịch đệm.Hai dung dịch đệm sử dụng phổ biến cho điện di AND đượcchuẩn bị theo công thức pha chế sau: 10X tris-borate-EDTA.nguồn cung cấp chất đệm 10X tris-acetate-EDTA.cung cấp cho chất đệm Dung dịch ETDA(etylen diamin tetraacetic axid) 4.2 Đúc gel - Thiết bị đặt khay di động - Chuẩn bị lược - Di chuyển lược - Đổ dung dịch agaroza vào khuôn đúc - Tiến hành tháo lược - Tháo khay di động gel 4.3 Vận hành điện di - Làm lạnh trước điện di - Đổ dung dịch vào khoang đệm cao gel khoảng 1mm(khoảng 220ml) - Nạp mẫu - Đặt nắp để catot(-,dây đen)ở đoạn cuối gần mẫu nhất.(Mẫu acid nucleic di chuyển phía cuối anot,+,dây đỏ.Nối dây màu tới nguồn điện.Đặt mức điện áp thiết bị để bấm theo mức phân ly 4.4 Tính kết Hiện tượng điện di chất gel sử dụng mảnh nhỏ ADN khoảng 0.1kb hay nhỏ loại gel polyacrylamit thường sử dụng mảnh nhỏ 1kb • Tính điện di ADN: -Nồng độ agaroza quy định cho trình phân ly thành mảnh vỡ với kích thước khác - Nhân tố ảnh hưởng :chất đệm, điện áp đặt vào, nhiệt độ, cố etydi brommua, agaroza đặc biệt có sẵn • Tính điện di ARN ARN phân chia dưạ theo kích thước 4.5 Sự phát ADN -AND phát nhờ phát huỳnh quangcuar liên kết etydi brommua hay nhờ phương pháp chụp ảnh tia Xcuar đồng vị phóng xạ AND -Để chụp ảnh gel,dùng phương pháp chiếu tai cực tím bề mặt đĩa vận hành di chuyển nhẹ gel bề mặt quan sát tối đa Một số ứng dụng: - Trong nghành công nghệ thực phẩm nay: ♦ Dùng để phân tách ADN (ARN) ♦ Tinh đại phân tử protein ♦ Tinh nucleic acid-trên sở kích thước/khối lượng, điện tch cấu hình chúng 13 - Ứng dụng điện di nông nghiệp o Cải thiện phẩm chất giống đặc sản o Chọn tạo giống triển vọng [...]... chuyển nhẹ bản gel trên bề mặt sẽ quan sát được tối đa Một số ứng dụng: - Trong nghành công nghệ thực phẩm hiện nay: ♦ Dùng để phân tách ADN (ARN) ♦ Tinh sạch các đại phân tử protein ♦ Tinh sạch các nucleic acid-trên cơ sở kích thước/khối lượng, điện tch và cấu hình của chúng 13 - Ứng dụng điện di trong nông nghiệp o Cải thiện phẩm chất những giống đặc sản o Chọn tạo các giống triển vọng ...4.3 Vận hành điện di - Làm lạnh trước khi điện di - Đổ dung dịch vào các khoang sao cho đến khi đệm cao hơn gel khoảng 1mm(khoảng 220ml) - Nạp mẫu - Đặt nắp để catot(-,dây đen)ở đoạn cuối gần mẫu nhất.(Mẫu acid nucleic di chuyển về phía cuối anot,+,dây đỏ.Nối các dây màu tới các nguồn điện.Đặt mức điện áp và thiết bị để bấm giờ theo mức phân ly 4.4 Tính kết quả Hiện tượng điện di chất gel... thường sử dụng những mảnh nhỏ hơn 1kb • Tính điện di của ADN: -Nồng độ agaroza quy định cho quá trình phân ly thành những mảnh vỡ với những kích thước khác nhau - Nhân tố ảnh hưởng :chất đệm, điện áp đặt vào, nhiệt độ, sự cố của etydi brommua, các agaroza đặc biệt có sẵn • Tính điện di của ARN ARN có thể phân chia dưạ theo kích thước cơ bản 4.5 Sự phát hiện ADN -AND được phát hiện nhờ sự phát huỳnh quangcuar