Đang tải... (xem toàn văn)
Chương 1: Hóa chất và dung dịch Chương 2: Phương pháp lấy mẫu phân tích (lấy mẫu, chuẩn bị mẫu, cố định mẫu)Chương 3: Phương pháp so màuChương 4: Phương pháp quang phổ kếChương 5: Định lượng gluxitChương 6: Định lượng LipitChương 7: Định lượng acid amin và proteinChương 8: Định lượng axit nucleicChương 9: Xác định hoạt độ của một số enzymeChương 10: Định lượng vitaminChương 11: Định lượng một số nguyên tố
Chương ĐỊNH LUỢNG AXIT AMIN VÀ PROTEIN I ĐỊNH LƯỢNG AXIT AMIN BẰNG p h n g p h p CHUẨN đ ộ PORMOL (PHƯƠNG PHÁP SỒRENSEN) Nguyên tắc Axit amm hoà tan nưốc có tính chất muối nội phân tử, nhóm amin cacboxyl trung hồ lẫn Nhóm -COO axit amũi bị cản trỏ nhóm amin nên khơng thể chuẩn độ trực tiếp Trong fomanđehit, nhóm amin axit amm phản ứng vổi nhóm anđehit cho metylen, kết phản ứng nhóm amm tính chất nó, ngược lại nhóm cacboxyl axit amin tồn dạng metylen không bị cản trở chuẩn độ o N H / I I R — CH I HC R — CH \ H2O I H coo N=CH2 COOH N = CH2 I R — CH N = CH, NaOH R — CH I HoO COOH COONa Sơ' nhóm cacboxyl tự sơ' nhóm amm liên kết với íomanđehit, chuẩn độ nhóm cacboxyl xác định đưđc nhóm amin Vì cho phép định lượng axit amũi có dung dịch nghiên cứu Nguyên liệu Dung dịch axit amin khoảng 0,1% nguyên liệu có axit amin cần định lượng Hoá ch ất - Dung dịch NaOH 0,1 N 72 - Dung dịch HCl 0,1N - Dung dịch fomanđehit tnmg hồ 30%: Lấy 50ml íomanđehit 30% cho thêm o.lml phenolphtalein etanol % chủih NaOH 0,1N đến xuất màu vàng nhạt - Dung dịch tymolphtalein 0,1% etanol 90% - Dung dịch KOH 0,01N etanol 90% - Cồn tuyệt đối - Dung dịch CuCl2 amoniac 0,0025M - Dung dịch phenolphtaleũi 1% etanol 60% Dụng cụ Bình nón, biưet, pipet lOml Tiến h àn h Cho vào bìiứi nón 20ml dung dịch chứa axit amin 0,5ml dung dịch phenolphtálẻin ĩ% Để trung hoà dung dịch axit amin, cho giọt NaOH 0,1N đến xuất màu vàng nhạt Cho thêm 20ml dung dịch íomanđehit 30% trung hồ ỉắc bình nón Sau phút dung dịch màu Chuẩn độ NaOH 0,ỈN đến xuất màu vàng nhạt trỏ lại (pH = 9,0) Thí nghiệm kiểm tra tiến hành tưdng tự vối hoá chất thay dung dịch chứa axit amin nước cất thể tích Tính k ế t Iml dung dịch NaOH 0,1N tưdng đưdng l,4mg nitơ Sô' mg nitđ amin dung dịch nghiên cứu tứih theo công thức: mgN = (A - B) X 1,4 Trong đó: A - Sơ' ml NaOH 0,1N dừng để chuẩn độ bình thí nghiệm, B - Sơ' ml NaOH 0,1N dùng để chuẩn độ bình kiểm tra Phương pháp chuẩn độ formol axit amm trực tiếp thuận lợi Nó đưỢc sử dụng để định lượng axit amũi dung dịch nghiên cứu Đồng thời cầnnhổ phưđng pháp khơng cho kết hồn tồn chửih xác giá trị nitơ amin,vì dimg dịch có prolin, liên kết khơng bền vối fomanđehit nên ỉàm giảm kết định lượng Ngược lại dung dịch nghiên cứu có tữozin, lại làm tăng kết định lượng có nhóm phenol Phưdng pháp định lượng chuẩn độ íormol 73 khơng thể sử dụng vối mẫu có muối amoni, formalm cho hexamm, đồng thời giải phóng axỉt 4NH^C1 + 6HCH0 > N4(CH2)g + H 2O + 4HC1 Nhóm cacboxyl axit amin lưõng tính, peptit lỏn protein đưỢc xác định kỹ thuật chuẩn độ dung dịch nước - etanol khơng có formalũi Môi trưồng nưốc - etanol gây cản trỏ phân ly nhóm atnin, kết trơ mơi trường nước, axit amm trồ thành axit, nhóm cacboxyl axit amữi chuẩn độ lại kiềm Với đặc tính cđ này, định lượng axit amin phưdng pháp micro: Lấy 2ml dung dịch chứa axit amin, cho thêm giọt dung dịch tymolphtalem 0,1% etanoỉ 90% chuẩn độ KOH 0,0 IN etanol 90% đến xuất màu xanh Sau cho thêm 10 thể tích cồn tuyệt đơ'i vào thể tích dung dịch cần định ỉượng axit amm Màu dung dịch biến mất, chuẩn độ lại dung dịch màu xanh Mầu để so sánh vối màu chuẩn độ sử dụng dung dịch amoniac CuClg 0.0025M Phương pháp đặc biệt dùng cho nghiên cứu trình động học enzim, biểu diễn dưối ảnh hưỏng tác động lên enzim proteolitic protein peptit II Đ ỊN H L Ư Ợ N G A X IT A M IN B Ằ N G N IN H IĐ R IN N ^ y ê n tắc Dưới tác dụng ninhiđrũi, axit amin bị oxi hoá chuyển thành axit amm đến amoniac cacbonic Axit amin bị giảm bốt nguyên tử cacbon, trỏ thành dạng anđehit Như axit amin có khốỉ ỉượng phân tử nhỏ amoniac tạo thành oxi hố ninhịcừm tạo nên phức hỢp có màụ xanh tím, cưịng độ màu tưdng ứng vói giá trị nitd amin axit atnin Phản ứng axỉt amin vổi nứihiđrin cđ số để định lượng hỢp chất theo phưđng pháp khí kế cách tính sơ' lượng CO2 NH3 bay ra, cịn phươi^ pháp so màu lại đo cưịng độ màu, phụ thuộc nồng độ phức hợp ninhiđrin vối NH3 Phản ứng màu ninhiđrin xảy vói axit amin mạch bên peptit vi protein với muối amoni, glucozamin amoniac Để định lượng xác axit amin, dxmg địch nghiên cứu phải khơng có hỢp chất H R -C -CO O H + NH2 axỉt amỉn 74 + H,0 R - C H + CO., + JL NH ninhiđrin nữihiđrin khử o NH R -c : R - CH + H ,0 11 H NR o '1 a c c + NHo 4- OH o o- o + SHgO + NH4 C -N = C c o o Phức chất mầu Nguyên liệu Dung dịch chứa axit amm có a - 5|ig nitơ Iml H o c h ấ t - Dung dịch ninhiđrin: hoà tan 2g ninhiđrin 50ml dung dịch etanol 50% - Dung dịch đệr xitrat 0,4M; pH = - Dung dịch etanoỉ 50% Máy móc dụng cụ Bình định mức lOml, pipet Iml, pipet 5ml, ống nghiệm lOml, nồi ủ, máy so màu Tiến hành Lấy 0,5ml dung dịch axit amin, cho thêm l,5ml dung dịch đệm xitrat 0,4M; pH = ml dung dịch ninhiđrin Lắc õhg nghiệm đật vào nồi ủ nhiệt đ\m sôi 30 phút Cho thêm etanol 50% vào đến lOml Đo giá trị hấp thụ ỏ 570nm Chỉnh máy vể khơng với ơng kiểm tra có đủ hố chất nhiíng thay dimg dịch axit amin nưốc cất thể tích Giá trị hấp thụ nhận tương ứng vối độ hấp thụ cùa dung dịch chuẩn leuxữi đă biết nồng độ (cưòng độ màu phản ứng ninhỉđrin tưđng ứng với cường độ màu dimg dịch chuẩn leuxữi) 75 Đường chuẩn leuxin: lấy Iml dung dịch chuẩn leuxin có từ - 5^g cho vào ốhg nghiệm Làm phản ứng với hoá chất đo hấp thụ Phương pháp ninliiArm nhạy xác, đưỢc sử dụng nhiều để định lượng axit amin tách phưđng pháp sắc ký giấy sắc ký cột Nó dùng để định lượng axit amũi peptit proteũi thuỷ phân hoá học enzim *Chú ý: Đinh ỉượng xác axit amin phương pháp dùng ninhiđrin phụ thuộc vào loại bỏ chất chứa NH.ị hố chất sử dụng phải khơng có NH III ĐỊNH LƯỢNG AXIT AMIN NHỜ TẠO THÀNH PHỨC CHAT VỚI ĐồNG (Phương pháp Pope Stevens) Nguyên tắc Để định lượng axit amin dung dịch nghiên cứu cần cho thêm vào môi trường bazđ yếu dung dịch đồng photphat dư dung dịch đệm borat Mi đồng axit amũi hồ tan tốt dvuig dịch Đồng photphat dư loại bỏ cách lọc, sau cho thêm CH3COOH KI Xác định lượng đồng cách chuẩn độ vối dung dịch Na2S2 , iôt tách ra, phản ứng xảy sau: 2Cu^^ + 41" 2CuI + I Ịon r môi trường axit khử ion đồng phức chất liên kết với axit amin bị oxi hố thành Ỉ 2- Từ kết phUdng trình ta thấy ỉ ion iôt khử ion đồng tạo nên liên kết phức chất vối gốc axit amỉn ion iơt "nốỉ" nhóm amữi axit amm Iml dxuig dịch Na2S20 0,01N tưởng ứng vối 0,28mg nitơ amin Nguyên liệu Dimg dịch chứa axit amm dung dịch protein thuỷ phân trung hoà chứa 0,5 Ỷ l,Omg nitđ amũi Iml Hoá chất Dung dịch đồng photphat mổi pha Một thể tích dung dịch A vói thể tích dung dịch B, cho thêm thể tích dung dịch c Dung dịch A; hoà tan 35,4g CuClg H2O 27,3g CuClg vào nước dẫn đến lOOOml Dung dịch B: Hoà tan 64,5g Na2HP0 H2 7,2g NaOH vào õOOml nưốc dẫn đến lOOOml Dung dịch C: Dung dịch đệm borat: 57,21g borat (Na2B4P7.10ĩỈ20) hoà tan lõOOml nưổc, cho thêm lOOml HCl IN dẫn nưốc đến 2000ml 76 - D u n g d ịch ty m o lp h ta le m ; 0,25g ty m o lp h ta le in hoà ta n tro n g lOOml d u n g dịch etanol 50% - D u n g d ịch N a 2S 203 ,0 N (được p h a loãng từ dung dịch gốc 0,1N đ ã c h ỉn h bới KIO3) - Dung dịch NaOH 0,1N - D u n g d ịch tin h b ộ t 1% h o t a n tro n g N aCl b ão hoà - CH.5COOH đặc - T m h th ể K I D ụng cụ máy móc Bình định mức 25ml, pipet Iml, pipet 5ml, pipet lOml, cô'c thuỷ tinh Tiến hàn h L ấ y m l d u n g dịch c h ứ a a x it am ữ i dung dịch p ro te in th u ỷ p h â n trung hoà cho vào bình định mức 25 ml, cho thêm giọt tymolphtaleũi giọt N aO H I N đ ế n k h i x u ấ t h iệ n m u x a n h n h t (pH Ịd io i^ 10) Cho nưóc vào bình đến 25ml lắc kỹ Kết tủa (đồng photphat dư) li tà m lọc qua giấy lọc L ấ y -lO m l dịch li tâ m (hoặc dịch lọc) cho vào cốc, cho th ê m ,5 m l C H iCO O H đặc v 0,2 - ,5 g KI, trộ n Chuẩn đô I giải phóng Na2S.,0 ;, 0,01N Gần kết thúc chuẩn độ cho thêm 2-4 giọt tinh bột 1% tiếp tục chuẩn độ đến xuất màu xanh Tương tự, làm thí nghiệm kiểm tra với iiố cKất, thay dung dịch c h ứ a a x it a m in b ằ n g nước c ấ t cù n g th ể tích Tính k ết m gN = (A - B)x 0,28 Trong đó: A - Sơ' ml NH2S20 dùng để chuẩn độ bình thí nghiệm, B - Sơ ml Na2S20 dùng để chuẩn độ bình kiểm tra, 0,28 - Iml Na 2S2 0,01N tương ứng 0,25mg nitđ *Chú ý: Khi sử dụng phương pháp phải loại bỏ cẩn thận đồng photphat dư dung dịch nghiên cứu, làm tăng kết chuẩn độ ưu điểm phương pháp định lượng nitd amin axit amin có lượng nhỏ amoniac lượng lớn ure Vì sử dụng phưđng pháp để địiứỉ lưdng axit amin nước tiểu 77 IV ĐỊNH LƯỢNG NITƠ BẢNG PHƯƠNG PHẢP KJELDAHL ỉ Nguyên tắc Tất dạng nitđ có thể hay mơ đưỢc gọi nitơ tổng sơ Nitơ có thành phần axit amũi proteũi nitơ proteừi Nitơ khơng có thành phần protein muối vô cờ, axit nitric, axit amin tự do, peptit, ure dẫn xuất ure, ancaloit, bazơ purin pyrimiđin nitơ phi proteứi v.v Nitd tổng số = Nitd protein + Nitđ phi protein Tníốc tiên mẫu vơ cđ hố H2SO4 đặc nhiệt độ cao có chất xúc tác Các phản ứng q trình vơ hoá xảy sau: H2SO4 -> H 2O + S0 t + O2 Oxi tạo thành phản ứng lại oxi hố ngun tơ' khác Các phân tử chứa nitđ dưổi tác dụng H2SO4 tạo thành NH3 Ví dụ protein bị thuỷ phân thành axit amin, cacbon hiđro axit amin tạo thành CO2 H2O, cịn nitđ giải phóng dạng NH3, kết hỢp vối H2SO4 dư tạo thành (NH4)2S04 tan dung dịch Các nguyên tố P , NH3 + H2 SO4 (NH4 )2 SƠ4 Ca, Mg chuyển thành dạng oxit: P 2O5 , KgO, CaO, MgO Đuổi amoniac kbỏị dung dịch NaOH: (MH4)2S0 + 2NaOH = Na2S0 + HgO + NH3 NH3 bay nưổc sang bình hứng, bình hứng chứa H3B0.J NH4OH + H3BO3 = (NH4)2B4ơ + IHỵO H2SO4, ph àn a g xảy sau: NH4OH ♦ + H2SO4 -> (NH4)2SƠ4 + H2O Tiến hành a) Vô hố ngìun liệu Cân Ig mẫu ttaơi ,1 - 0,3g mẵu khô đưdc nghiền nhỏ (dùng ơng giấy cân cuộn trịn) Choi cẵỈn thận vào đáy bmh Kjeldahl dimg tích 50ml Cho thêm - lữnsl H2SO4 đặc (d=l,84) Nếu mẫu bột khô, trước cho thêm axit cần cho vài giọt mưềc cất khơng có nitớ để thấm ưốt bột Nếu mẫu lỏng nưóc mắm, xì dầu, dừng pipelt lấy - 5ml, côn nước hộp lấy 10 - 20ml Khi cho mẫu vào bình, khơng đưđc để rmẫu dính bám cổ bình 78 Đậy nút lỏng thụỷ tinh hổng nút thuỷ tinh lọ nhồ giọt LÁc nhẹ bình đặt lên bếp cách cát đtm nhẹ khoảng 30 - 40 phứt, sau nhấc bình ra, đế nguội Cho vài giọt xúc tác axit percloric (hoặc HClOg H2O2 30%, cho giai đoạn cuối dung dịch có màu vàng sẫm) hỗn hợp K2SO4 CuSO^ vối tỉ lệ 3:1, cho lần từ đầu (lưỢng hỗn hợp chất xúc tác lượng mẫu tươi dùng để vô Ctí hố), tiếp tục đốt bếp khoảng 30 phút Dung dịch chuyển từ màu đen sang màu cánh dán Nhắc bình khỏi bếp, để nguội Cho thêm chất xúc tác lần thứ hai (vài giọt axit percloric), tiếp tục đốt dung dịch bình khơng màu Để nguội Chuyển dung dịch sang bình định mức 50 lOOml, tráng bừửi Kjeỉdahỉ vài lần nước cất khơng có nitđ dẫn đến thể tích định mức nưốc cất khơng có nitd b) S d ụ n g HgBOg binh hứng • Hố chất: -H 2S0 đặc - Dung dịch H2SO4 O.lN - Dung dịch NaOH đặc - Dung dịch NaOH 40% - Diưig dịch HCIO3 H 2O2 30% K2SO4, CUSO4 (100:10:1), dùng selen kim loại '0,05g) hỗn hỢp K2SO4 : CUSO4 (3:1) - Dung dịch H3BO3 3% - Thuốc thử hỗn hợp: metyl đỏ 0,1% níỢu etylic metylen xanh 0,1% tỉ-ong etylic, tỉ lệ :1 - Chỉ thị Tashừo: Hỗn hỢp metyl đỏ metylen xanh có giổi hạn biến đểi màu ỏ pH 5,2-5,6 Môi trường axit có màu tím đỏ, mơi trưịng kiềm có màu xanh lục Hoà 0,05g metylen xanh vào 5ml nước, cho vào lOOml etanoỉ hoà thêm 0,15g metyl đồ Hồ tan cho vào lọ màu đậy kín • Tiến hành: Rửa chtíng cất Kjeldahl kỹ nước cất khơng có nitđ Lấy 10 - 20ml (tuỳ theo hàm lượng nitơ có mẫu) đă vơ boấ cho vào bình phản ứng (c) qua phễu (e) Cho vài giọt thuôc thử hỗn hđp vào bình phản ứng dừng xúc tác axit HCIO3 H 2O2 79 Cho vào bình hứng 20ml dung dịch H ịBO , 3%, thêm vài giọt thị Tashừo Ehm sơi nưỏc hìnli ctơt (a) đồng thời cho nưốc từ vòi q u a ông làm lạ n h (d; Cho qua phễu (e) vào bình phản ứng (c) 30ml NaOH 40% Mồ khố cho kiềni chay vào bình đến dung dịch bình phản ứng đổi màu thi đóng khố lại Đun bình đơ't NH;j đuọc bay lên với nước qua ơng làm lạnh sang bình hứng tác dụng với H.^BOị tạo thành muôi amon tetraborat [(NH4).2B4 ] Quá trình cất tiến hành 30 - 40 phút, ỉíiểm tra NH;, đả hết chưa cách hạ thấp bình hứng thử mẩu giây đo pH vào đầu ông làm lạnh Khi NH.^ đưỢc cát hồn tồn, hạ bình hứng xng, dùng tia nưốc cất nhỏ tráng axit dính đẩu ơng ỉàm lạnh Định lưỢng amon tetraborat[(NH4)2B,ị0 ] tạo thành dung dịch H2SO 0,1N xuâ't màu hồng nhạt, phản ứng xảy sau: + H.^SO^ + õHỵO (NH,,)^SO^ + H3BO;, • Tính kết quả: Hàm lưdng nitơ tổng sơ' có mẫu: M 0/ _ V X1,42 X100 Nmg% = - w Trong đó: V- sô' ml H26 O4 0,1N chuẩn độ, 1,42 - số mg nitơ ứng vối Iml H2SO4 0,1N, 100 - h ệ s ô 'c h u y ể n th n h %, w - khơi lượng mẫu tính mg c) S dụng H SO bình hứng • Hố chất - H2SO4 đặc - Dung dịch IỈ 2S0 ^ (hoặc HCl) 0,1N (chính xác) - Dung dịch NaOH 30% - 40% - Dung dịch NaOH 0,1N - Thuốc thử hỗn hdp: metyl đỏ 0,1% rượu etylic metyl xanh 0,1%) rưỢu etylic, tỉ lệ 2:1 - Chất xúc tác ( trên) 80 BấpđốtKịeldahllớn BộcấtKNdahllớn Hình 7.1-Bộ chưng cất Kjeldahl định luợng nitđ a - bình đốt b ■bình rửa c - bình phản ứng d - ốhg làm lạnh e - phễu f • bình hứng g - đèn đốt 81 X pH X pH X pH X pH X pH ,0 1,81 ,0 3,29 40,0 5,72 60,0 7,96 80,0 10,38 2,5 1,89 22,5 3,78 42,5 6,09 62,5 8,36 82,5 ,8 5,0 1,98 25,0 4,10 54,0 6,37 65,0 8,69 85,0 1 ,2 7.5 2,09 27,5 4,35 47,5 6,59 67,5 8,95 87,5 11,40 10,0 ,2 30,0 4,56 50,0 6,80 70,0 9,15 90,0 11,58 12,5 2,36 32,5 4,78 52,5 7,00 72,5 9,37 92,5 11,70 15,0 2,56 35,0 5,02 55,0 7,24 75,0 9,62 95,0 11,82 17,5 2,87 37,5 5,33 57,5 7,54 77,5 9,91 97,5 11,92 * - - - - - m - 0 ,0 11,98 13 Dung d ịch dệm Mc Ilvaine ( pH ss 2,2 ^ 8,0) a) Dung d ịch axit xitrỉc 0,1M : 21,008g axit xitric (CgHgO^) hoà tan dẫn nước đến lOOOml b) D ung dịch đ in a tri hiđrophotphat : 35,62g Na2HP0 ỈỈ 71,7g Na2HP0 12 H đưỢc hoà tan dẫn nưốc đến lOOOml Dung dịch đệm có pH khác phụ thuộc vào X ml dung dịch (a) dẫn đến 20ml dung dịch (b) X pH X pH X pH X pH 19,60 2 12,90 3,8 8,85 5.4 3,53 7,0 18,76 2,4 12,29 4,0 8,40 5,6 2,61 7,2 17,82 11,72 4,2 7,91 5,8 1,83 7,4 16,83 11,18 4,4 7,37 ,0 1,27 7,6 15,89 3.0 10,65 4,6 6,78 ,2 0,85 7.8 15,06 3.2 10,14 4,8 6,15 6,4 0,55 ,0 14,30 3,4 9,70 5,0 5,45 ,6 - • 13,56 3,6 9,28 5,2 4,55 - - 14 Dung d ịch đệm Theorella Steinhagen (pH = 2,0 -ỉ-12,0) a) Dung dịch gốc : lOOml CH.ịCOOH IN (5,7ml dung dịch axit axetic đặc dẫn nưồc đến lOOOml), lOOml axit photphoric (H3PO4) IN, 3,54g axit boric 343ml NaOH IN đươc hoà tan dẫn nưỏc đến lOOOml 161 b) D u n g d ịc h HCl 0,1 N : 8,4ml HCl đặc (37%) pha thành lOOOml Dung dịch đệm có pH khác phụ thuộc vào lOOml dung dịch gỗc (a) cho thêm X ml dung dịch (b) dẫn nước đến 500ml X pH X pH X pH X pH X pH 366,5 ,0 247,3 4,2 183,7 6,4 130,5 ,6 77,0 10,8 339,3 ,2 241,8 4,4 176,8 6,6 124,5 ,8 72,6 1 ,0 319,3 2,4 236,3 4,6 169,6 ,8 118,8 9,0 6 ,0 11,2 304,0 ,6 231,1 4,8 163,3 7,0 111,9 9,2 56,2 11,4 292,3 ,8 225,9 5,0 157,3 7,2 105,6 9,4 42,0 1 ,6 282,5 3.0 220,3 5,2 151,8 7,4 99,7 9,6 23,5 1 ,8 274,8 3,2 214,7 5,4 147,2 7,6 94,1 9,8 ,0 ,0 268,5 3,4 ,0 5,6 143,4 7,8 89,6 10,0 263,3 3,6 203,1 5,8 140,1 ,0 84,9 10,2 * - 257,3 3,8 197,1 6,0 137,3 8,2 81,8 10,4 - - 252,5 4,0 190,5 6,2 134,5 8,4 79,8 10,6 m • - 15 D ung dịch đệm axit axetic - am oniac (pH = 3,0 -i-11,0) a) D ung dịch axit axetic 0,1 N : 0,57ml axit axetic đặc pha thành lOOOml vổi nước cất b) D ung dịch amoniac 0,1N: Dung dịch đệm có pH khác phụ thuộc vào X inl dung dịch (a) dẫn đến lOOml dung dịch (b) 162 X pH X pH X pH X pH 99,24 3,0 54,60 5,4 47,80 7,8 16,00 10,2 93,40 3,4 50,90 5,8 46,40 ,2 9,80 10,6 8 ,2 3,8 50,40 6,2 44,70 ,6 2,48 1 ,0 80,20 4,2 50,30 ,6 41,00 9,0 - - 66,90 4.6 50,00 7,0 34,00 9.4 - - 58,60 5,0 48,40 7,4 28,00 9,8 - IL D U N G D ỊC H p H C H U Ẩ N Dung dịch đikali tartrat (C4H4 (.K2) bão hoà ci 25"c pH = 3,56; 30°c pH = 3,55 Dung dịch kali phtalat (Cj(H504 K) 0.05M: 10,21 Ig hoà tan nưốc dẫn đến lOOOml, ỏ 20 - 30°c, pH = 4,0 Dung dịch KH2PO4 Na^HPO^ 0,025M: 3,402g KH2PO4 4,451g Na2HP0 lỈ hoà tan nưổte dẫn đến lOOOml, ỏ 20- 30°c, pH = ,8 - ,8 Dung dịch borat 0,01M: 3,814g Na-^B^Oy.lO HgO hoà tan nưổc dẫn đến lOOOml, 20- 25°c, pH = 9,2 III NỒNG ĐỘ AXIT VÀ AMONIAC THƯỜNG GẶP Tên dun g dịch T ỷ k h ố i(d )ở ° c % khôi lượng N ồng độ N Axit 8unfuric đặc 1,834 95,00 36,00 Axit suníixric pha lỗng 1,178 25,00 6,00 Axit suníuric pha lỗng 1,032 5,00 1,20 Axit clohiđric đặc 1,181 37,0 12,00 Axit clohiđric pha loãng 1,098 20,ọo 6,00 Axit clohiđric pha loãng 1,Q17 10,00 3,00 Axit photphoric đặc 1.700 5.00 14,70 Axit percloric 1,540 60,00 9,00 Axit Aohiđric đặc 1,146 46,60 26,30 Axit axetic đặc 1,050 100,00 17,50 Axit axetic pha ỉoãng 1,013 ,0 1,70 Axit axetic pha loăng 1,005 5,00 0,90 Amoniac đặc 0,907 25,00 13,40 Amoniac pha ỉoỉmg 0,975 10 ,0 ,0 Amoniac pha ỉoãng 0,977 5,00 3,00 163 IV PHA DUNG DỊCH PHẨN t r ă m AXIT v AMONIAC (mililit dving dịch đặe để pha thành h't) Các nồng dộ % m uốn pha Tỷ khốs (d) 15“c Nồng ăộ% 25% 20% 10 % 5% 2% 1% CH3COOH 1,(05 95,50 217,8 196,7 97,1 48,2 19,2 9,00 H2SO4 1,84 9õ,60 167,7 129,9 60,6 29,3 11,5 5,60 HCl 1,19' 37,23 634,8 496,8 236,4 115,2 45,5 22,60 HNO3 1,40 65,60 313,6 243,6 115,0 56,0 2 ,0 10,80 NH4OH (0,91 25,00 814,0 422,0 215,4 87,2 43,7 Tên hố chất 100,0 1,« Pha dung dịch có nồng độ dương lượng khác: Hố ch ất ĐươTng lưựng IN 0,5N 0,2N 0,1N ái) H2S04(d=l,84) 49,04 2«,0 14,0 HCl(d=l,19) 356,46 82,0 41,0 16,40 H2C2O4.2 H2O 6Ỉ3,(04 • - KM11O4 351,61 - • NaOH 5,60 0,05N 0,Ơ2N 0,01N Đơn vi• 2,80 1,40 0,56 0,28 ml 8,2 4,10 1,64 0,82 ml - 6,30 3,15 1,26 0,63 g - 3,16 1,58 0,63 0,32 g 4iO,iOƠ 40,0 20,0 s.oa 4,00 2,0 0,80 0,40 g ỖS,Ì 28,0 1 ,20 5,60 2,80 1 0,56 g KOH 5»6,ll AgNOa 169,89 • 17,00 8,51 3,40 1,70 g 248,21 - 24,80 12,40 5,00 2,50 g 392,16 78,40 39,20 19,60 7,84 3,92 g 4«,(04 9,81 4,90 2,45 0,98 0,49 g 18642 - 18,61 9,306 3,722 1,861 g Muối Mohr * TrilonB** *Muôĩ Mohr : s ầ t (lE) —amoiii sunfat - FeS0 (NH4)S0 IỈ ** Trỉlon B : axit etylteni điamintetra axetic đinatri Na2H 2(CH2C0 ))4.N2i(CH2)2.2 H2 (Complexom III hay chelaton 3) - 372,242 Có tài liệu đương ầượng Trilon B = khối lượng mol (M) đưdng lượng tính M/2 164 V KHỐI LƯỢNG MOL PHÂN TỬ VÀ TỶ KHỐl CỦA MỘT s ố AXIT N ồng độ {%) K hối lượng m ol p h â n t (M) Đ ể n h ậ n đưỢc d u n g d ịc h Im o ỉ (m l/ 1) Tỷ k h ố i (d) Axit nitric (HNO3) 70 15,7 64 1,42 Axit photphoric (H3PO4) 85 14,8 68 1,70 Axit percloric (HCIO4) 60 9,2 109 1,54 Axit percloric (HCIO4) 70 1 ,6 86 1,67 99,5 17,4 58 1,05 Axit sunfuric (H2SO4) 96 18,0 56 1,84 Axit clohiđric (HCl) 37 ,0 84 1,19 Tên axit Axit axetic (CH3COOH) VI KIỂM TRA NỒNG ĐỘ CÁC DUNG DỊCH CHUẨN đ ộ đ ã p h a BẰNG DƯNG DỊCH CHẤT G ố c c ó NồNG ĐỘ CHÍNH XẢC Dung dịch chuẩn độ pha C hất gốc Số gam để pha lOOml 0,1N H2SO4 0,1N Natri tetraborat Na2B4 H2Ơ 1,910 giọt thị metyl da vàng sang đỏ nhạt cam NaOH 0,G30 0,1N Axit oxalic H 2C2O4.2 H 2O giọt phenolphtalein KMnƠ4 0,1N Axit oxalic H 2C2O4.2 H 2O 0,630 15ml H2SO4 1:4 đun xuất hồng nhạt nóng nhẹ (80°C) Na2S2 ;j ,1N Kali bicromat K2Cr2 (Sấy khô ỏ 100“C) 0,490 15ml KI 10%, 3ml HCl màu đặc, 150ml nưốc cất, xanh chuẩn độ đến vàng nhạt thêm 2ml tũủi bột 0,5% AgNƠ3 Natri clorua khan-NaCl(Sấy khơ ỏ 120°C) 0,580 cho vào bình nón 5ml xuất NaCl 0,1N 20ml nước, màu nâu thêm Iml K2CrƠ4 % Magie sunfat MgS04.7 HijO 1,2325 5ml đệm amoni (pH=ll), từ đỏ sang 10 giọt thị cromogen xanh bền đen (erichrom đen T) 0,5% 0,02N Trilon B 0,05N ml chất gốc thêm ch ất ph ụ Màu ch u ẩn độ thị xuất hồng nhạt 165 VII CHỈ THỊ MÀU AXIT ■BAZƠ Tên thưòfng gọi Giới hạn pH đổi màu Màu Axit Bazơ D ung môi h tan Nóng % Metyl tím (bưỏc chuyển 1) 0,1-0,õ vàng xanh lục nước c.l Metyl tím (bước chuyến 2) 1,0-1,5 xanh lục xanh biển nưốc C,1 Creson đỏ 0,2-1,8 đỏ vàng nưốc 05 Tymol xanh da trời 1.2-2.8 đỏ vàng etanol 20% C1 Tropeolm 1.2 - 3,2 đỏ vàng nưóc c.l Đimetyl vàng 2,9-4,0 đỏ vàng etanol 96% (1 Bromophenol xanh da trời 3.0-4,6 vàng đỏ thẫm nưỏc 01 Metyl da cam 3,1-4,4 đỏ vàng da cam nước c1 Bromocresol xanh 3,8-5,4 vàng xanh thẫm etanol % 0.1 Congo đỏ 3,0-5,0 tím đỏ cam etanol 80% C,1 Metyl đỏ 4,2-6,3 đỏ vàng etanol 60% 0,1 02 Bromophenol đỏ thẫm 5,2-6,8 vàng tím nước 0,1 Lacmus (litmus, quỳ xanh) 5,0-8,0 đỏ xanh thẫm nước C1 Bromtymol xanh da trời 6,0-7,6 vàng xanh thẫm etanol % 005 Phenol đỏ 6,8-8.2 vàng đỏ etanol 20% C1 Đỏ trung tính 6,8-8,0 đỏ vàng da cam etanol 70% 0,1 Cresol đổ 7,2-8,8 vàng đỏ nưốc 01 Tymol xanh da trời 8,0-9,2 vàng xanh da trời etanol 20% 01 Phenolphlateũi 8.2-10,0 không màu đỏ anh đào etanol 70% 01 Tymolphlatein 8,8-10,5 không màu etanol 90% 01 Alizarm vàng R 10,0-12,0 vàng etanol 80% 01 Tropeolin 11,1-12.7 vàng nưỏc 166 00 01 VIII CÁCH PHA VÀ SỬ DỤNG MỘT s ố THUỐC THỬ CHỈ THỊ MÀU THÔNG THƯỜNG Thuốc thử thị màu hóa chất biêu màu phản ứng hoá học xẩy Thuỗc thị khơng ảnh hưởng đến q trình, tốc độ thành phần phản Ííng Sau số chất thị màu thông dụng Thuốc th hỗn hợp dùng định lượng nitơ Màu sắc thuốc thử phụ thuộc vào pH môi trường phản ứng lỷ lệ phần trảm hỗn hỢp Có hai loại thường dùng: a) Thuốc thử - Ig metyl xanh hoà lOOml cồn 90% - Ig metyl đỏ hoà lOOml cồn 90% Trộn hai thứ theo tỷ lệ 1:2 Trong môi trường axit, thuốc thử có màu hồng tím, mơi trường trung tínli kiềm có màu xanh mạ b) Thuốc thử ■ 33mg bromocresol xanh (hoặc bromotymol xanh da trời) - 6 mg metylen đỏ Ilồ tan vào 200ml cồn 60% Trong mơi trường axit có màu hồng nhạt Trong mơi t rường kiểm có màu xanh mạ nhạt Đỏ tru n g tính Ig đỏ trung tính pha lOOml cồn 60% Trong mơi trường pH nhỏ 6,5 có màu đố, pH từ ,8-8,0 có màu vàng nhạt Phenolphtalein Nồng độ từ 0,1 - % tan cồn 60% Nếu pH mơi trưịng rứiỏ hđn , khơng có màu, pH = ,2 -ỉ- , có màu hồng tươi Tym olphtalein Nồng độ từ 0,05 - , % tan cồn 60% trở lên Trohg môi trường pH nhỏ 9, khơng có màu, pH từ 9,4 - 10,6 có màu xanh tím Hổ tin h bột Chỉ thị hồ tinh bột kiểm tra có mặt iot lot dạng tự khơng có màu Kliơng có iot tự do, có màu nâu xanh tím 167 Cách pha: cân lượng tixứi bột tan (nồng độ % theo ý mn) hon vào nưốc cất, tiếp tục đổ thêm lượng nước cất sơi (vừa đổ vừa khuấy) theo thê tích có nồng độ phần trăm tính trưóc, đun sơi tiếp - phút, lọc cho bão hoà NaCl Thuốc th N essler Phát có mặt nitơ theo hai cách: a) Cách th ứ 15g HgĨ2 lOg KI hoà vào 15ml nưốc cất, thêm 80ml dung dịch NaOH 50%, tiếp tục thêm nưốc cất (khơng có nitđ CO2) đến thể tích 500ml Sau 24 lọc lấy nưổc bảo quản lọ màu Thuốc thử có màu vàng nhạt, tác dụng với nitd có màu vàng tươi b)C ách th ứ - Dung dịch KI: 35g KI hoà tan lOOml nước cất nóng - Dung dịch HgCl2: 17g HgCl2 hoà tan 300ml nưốc cất - Dung dịch NaOH hay KOH 20% Đổ dung dịch HgCl2 vào dung dịch KI đến có kết tủa đỏ Hgl^ tạo thành, khơng thấy tan dừng lại Thêm dung dịch kiềm % đến lít, thêm tiếp 5ml d\mg dịch HgCl2, kết tủa đỏ xuất Để dung dịch lắng hồn tồn s't (có màu hđi vàng nhạt), lấy nước trong, bảo quản lọ mầu nâu đậy nút cao su Khi tác dụng vối nitđ, dimg dịch có màu vàng tưđi Nếu dimg dịch nghiên cứu có nồng độ nitđ lốn - lOmg/1 có kết tủa Nếu dung dịch cố lốìi hdii lOOmgA hay lán Ơ,ỗ - lmg/1 có kết tủa E)ể tránh tưỢng này, phải pha lỗng dung dịcK nghiên cứu để có nồng độ nitd nhỏ ỈOmgA DC CÁC DUNG DỊCH RỬA DỤNG c ụ BẨN t r o n g p h ị n g t h í n g h iệ m TT Thành phần dung dịch rửa Loại ch ất bẩn Máu, protein Dung dịch NaOH KOH 10% Dung dịch NaOH cồn nóng (120g NaOH hồ tan Mô 120ml nước cất dẩn đến lOOOml cồn) Axeton Mỡ Cồn - HCl ( 3ml HCl đặc + lOOml cồn) Thuốic nhuộm Dung dịch triosunfat (khoảng 3%) Dấu iot, brom 168 Loại c h ấ t bẩn T h n h p h ần d u n g d ịc h rử a TT Dung dịch axit oxalic (khoảng %) MnƠ2 (có ỏ pin) Dung dịch n atri xitrat NaOH 10% T ất Dung dịch Na3PƠ4 nóng %, 10 % 20 % T ất Hỗn hdp crom (50 g K^Cr^O^hoà lOOml nưốc nóng, cho T ất vào cơc sứ trộn với b't H.2S0,^ đặc) Chú ý; Chuẩn bị hỗn hỢp crom phải có kính bảo vệ găng tay cao su X NGUYÊN TỬ KHỐI CỦA MỘT s ố NGUYÊN T ố Tên Ký hiệu Khối lượng Antimon Sb 121,76 Asen As Nitơ Ký hiệu Khối lượng Kẽm Zn 65,38 74,91 Flo F 19,00 N 14,008 Photpho p 30,971 Bari Ba 137,136 Nhôm AI 26,98 Bitmut Bi 209,00 Heli He 4,003 Bo B 10,82 lot I 126,91 Brom Br 79,916 Cađimi Cd 112,41 Clo C1 35,457 Coban Co 58,94 Crom Cr 52,01 Silic Si 28,09 Thiếc Sn 118,70 Liti Li 6,94 Magie Mg 24,32 Bạc Ag 107,88 Mangan Mn 54,43 Stronti Sr 87,63 Đồng Cu 63,54 Oxi o 16,00 Molypđen Mo 95,95 Uran u 238,07 Niken Ni 58,69 Vanađi V 50,95 Chì Pb 207,21 Canxi Ca 40,08 Kali K 39,10 Cacbon c 12 ,0 Thuỷ ngân Hg 200,61 Hiđro H 1,008 Selen Se 78,96 Voưram w 183,92 Luu huỳnh s 31,006 Vàng Au 197,20 Na 22,997 Sắt Fe 55,85 Natri Tên 169 XL NỒNG ĐỘ DUNG DỊCH AMONl SUNPAT BÃO HOÀ NHIỆT ĐỘ KHÁC NHAU Nhiệt độ SỐlượnggam(NH 4)2S0 pha thành lít 0" 10 “ 20° 25" 30' 707 730 756 767 777 XII CÁCH TÍNH L ự c LI TÂM Trong q trình li tâm người ta thường tính sơ"vịng/phút, sơ" “vịng qua}'"’ (d) th e o th ò i g ia n , n g o i r a côn có đ i lưỢng k h c lực li t â m tư n g đ ố ì đưỢc b iể u th ị b ằ n g b ộ i sô" tr ọ n g lự c (g) đưỢc tín h th e o n g th ứ c : g= 11 ,2 ' Trong đó: r - bán kính “vịng quay”, nghĩa khoảng cách (tính cm) từ trục lực li tâm đến điểm xác định lực li tâm tương đốỉ (ví dụ đáy ỗíig li tâm) X - sơ' vịng quay phút XIII CÁC KÝ HIỆU QUY ĐỊNH KÍCH THƯỚC VÀ CÁC PHẦN t h ậ p p h â n Quy địiứi Tiếp đầu ngữ Bội sô Exa- E lo'*' 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Peta- p ’^'^ 0 0 0 0 0 0 0 Teta^ T ’" l.OGO;OGO;O0O.OOO Giga- G lo ” 1.0 0 0 0 0 Mega- M 10 ^’ 0 0 0 Kilo- k 10 ^ 1.000 Hecto- h 10 = ^ 100 Deca- điều kiện lo ’ 10 Deci- d 10 ’ 0,1 Centi- c 10'^ 0,01 Mili- m lO-"^ 0,001 10^’ 0,000.001 MicroNano- n lo'* 0,000.000.001 Pico- p 10 0,000.000.000.001 170 XIV CÁC CHỬ CÁI HY LẠP A a alpha I iôta p p rho B p beta K kappa s s sigma r Y gamma A lambda T T tau A ô d delta M mu r u upsiỉon E E epsiỉon N nu o