, ш ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN VÕ THỊ NGÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY XUÂN HOA ĐỎ, PSEUDERANTHEMUM CARRUTHERSII (SEEM.) GUILL VAR ATROPURPUREUM (BULL.) FOSB., HỌ Ô RÔ (ACANTHACEAE) LUẬN ÁN TIÉN SĨ HÓA HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2011 ầ m ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN VÕ THỊ NGÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY XUÂN HOA ĐỎ, PSEUDERANTHEMUM CARRUTHERSII (SEEM.) GUILL VAR ATROPURPUREUM (BULL.) FOSB., HỌ Ô RÔ (ACANTHACEAE) Chuyên ngành: HÓA HỮU CƠ Mã số: 62.44.27.01 Phản biện 1: GS.TS Nguyễn Minh Đức Phản biện 2: PGS TS Nguyễn Ngọc Hạnh Phản biện 3: PGS TS Trần Lê Quan Phản biện độc lập 1: PGS TS Phạm Khánh Phong Lan Phản biện độc lập 2: TS Trần Thượng Quảng NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC PGS TS NGUYỄN NGỌC SƯƠNG Thành phố Hồ Chí Minh - 2011 ầ CỘNG HÒA Xà HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc oOo LỜI CAM ĐOAN Luận án Tiến sĩ Hóa học “Khảo sát thành phần hóa học Xuân hoa đỏ, Pseuderanthemum carruthersii (Seem.) Guill var atropurpureum (Bull.) Fosb., họ Ô rô (Acanthaceae)” thực cách trung thực Những kết nghiên cứu luận án chưa tác giả khác công bố Việt Nam giới Điều kiểm tra cách tra cứu tài liệu tham khảo cung cấp phần mềm Scifinder Tôi xin cam đoan danh dự công trình khoa học Tp Hồ Chí Minh, ngày 01 tháng 08 năm 2011 Nghiên cứu sinh Võ Thị Ngà - i- LỜI CẢM ƠN Tôi xin gởi lời cảm ơn chân thành đến PGS TS Nguyễn Ngọc Sương , người tận tình hướng dẫn, truyền đạt cho kinh nghiệm quý báu Cô động viên, tạo điều kiện thuận lợi hỗ trợ vật chất tinh thần cho suốt trình nghiên cứu GS TS Nguyễn Kim Phi Phụng , người truyền cho lửa đam mê nghiên cứu khoa học Cô luôn kề cận chia sẻ, khích lệ, đôn đốc nỗ lực vượt qua khó khăn để hoàn thành luận án Cô gương để phấn đấu suốt đường làm việc nghiên cứu GS TS Gerhard M aas chương trình ASIA-Link , giúp cho tiếp xúc với điều kiện làm việc đại, Khoa Hóa Hữu I, Trường Đại học Ulm TS Võ Văn Chi TS Hoàng Việt giúp xác định tên khoa học loài khảo sát GS.TSKH Nguyễn Công Hào, PGS.TS Trương Thế Kỷ, GS.TS Nguyễn Minh Đức , PGS TS Nguyễn Ngọc Hạnh , PGS TS Trần Công Luận, PGS TS Trần L ê Quan, TS Nguyễn Trung Nhân, TS Tôn Thất Quang TS Phạm Nguyễn Kim Tuyến quan tâm, động viên đóng góp nhiều ý kiến quý báu cho chuyên đề tiến sĩ, luận án cấp đơn vị chuyên môn cấp sở đào tạo PGS TS Phạm Khánh Phong Lan TS Trần Thượng Quảng đóng góp ý kiến quý báu giúp hoàn thiện luận án ThS Đặng Vũ Lương kỹ thuật viên phòng máy NMR M S thuộc Viện Hóa học - Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam, Hà Nội; Phòng Phân tích Trung tâm Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh Khoa Hóa Hữu I Trường Đại học Ulm, Đức Tất Quý Thầy Cô Bộ môn Hóa Hữu tận tình dạy dỗ giúp đỡ hoàn thành luận án Phòng Đào tạo Sau đại học Trường Đại học Khoa học Tự nhiên tạo điều kiện thuận lợi giúp giải thủ tục hành Các bạn phòng thí nghiệm chia sẻ kinh nghiệm tạo cho giây phút vui vẻ tháng ngày miệt mài với công việc Ban Giám hiệu Ban Chủ nhiệm Khoa Công nghệ Hóa học Thực phẩm, Trường Đại học Sư phạm Kỹ thuật Thành phố Hồ Chí Minh, tạo điều kiện thời gian, bạn đồng nghiệp gánh vác công việc, hỗ trợ thời gian học Con xin cám ơn Ba M ẹ B ố M ẹ hỗ trợ việc nhà để yên tâm hoàn thành việc học Cảm ơn Anh hai Con cho em gia đình êm ấm để em vững tin tiếp tục học tập công tác - 11 - MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm n ii Mục lụ c iii Danh mục chữ viết tắt v Danh mục ký hiệu hợp chất cô lập vi Danh mục hình ảnh vii Danh mục sơ đồ viii Danh mục bảng biểu ix Danh mục phụ lụ c .xi MỞ Đ Ầ U CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 MÔ TẢ THỰC VẬT 1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ DƯỢC HỌC 1.2.1 Kinh nghiệm dân gian sử dụng P palatiferum 1.2.2 Nghiên cứu in vitro dược tính 1.2.3 Nghiên cứu in vivo dược tín h .7 1.2.4 Nhận xét dược tính P palatiferum 1.3 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ HÓA HỌC 1.3.1 Loài Eranthemum pulchellum 1.3.2 Loài Pseuderanthemum latifolium 1.3.3 Loài Pseuderanthemum palatiferum 10 1.3.4 Nhận xét thành phần hóa học chi Pseuderanthemum 11 1.3.5 Đặc điểm hóa - thực vật họ Ô rô (Acanthaceae) 13 NHỮNG VẤN ĐỀ TỒN TẠI VÀ ĐỊNHHƯỚNG NGHIÊN CỨU 16 1.4.1 Những vấn đề tồn 16 1.4.2 Định hướng nghiên u 16 - iii - CHƯƠNG THỰC N G H IỆ M 18 2.1 TRÍCH LY VÀ CÔ LẬP HỢP c h ấ t 18 2.1.1 Hóa chất thiết b ị .18 2.1.2 Nguyên liệu .19 2.1.3 Điều chế loại cao 21 2.1.4 Cô lập hợp chất hữu c 23 2.2 THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC 31 2.2.1 Hoạt tính ức chế enzyme acetylcholinesterase 31 2.2.2 Hoạt tính gây độc tế bào 34 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬ N 37 3.1 KHẢO SÁT CẤU TRÚC HÓA HỌC 37 3.1.1 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm terpenoid 37 3.1.2 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm lignan 58 3.1.3 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm flavonoid 76 3.1.4 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất nhóm phenylethanoid 91 3.1.5 Khảo sát cấu trúc hóa học hợp chất có chứa nitrogen .111 3.1.6 Bàn luận 116 3.2 KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC 125 3.2.1 Hoạt tính ức chế enzyme acetylcholinesterase 125 3.2.2 Hoạt tính gây độc tế bào 126 3.2.3 Bàn luận 126 KẾT LUẬN VÀ KIẾN N G H Ị 130 TÀI LIỆU THAM KHẢO 133 DANH MỤC CÔNG TRÌNH 141 PHỤ LỤC 143 - iv - DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Ac Acetyl AchE A cetylCholin E sterase APCI-M S Atmospheric Pressure Chemical Ionization M ass Spectroscopy br broad, rộng CI-M S Chemical Ionization M ass Spectroscopy COSY COrrelation Spectroscop Y CTPT Công Thức Phân Tử d doublet, mũi đôi DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer DMSO DiM etyl Sulf Oxid Glc Glu copyranosyl HIV Human Immunodeficiency V irus HMBC H eteronuclear Multiple B ond Correlation HPLC High Performance Liquid Chromatography H R -ESI-M S High Resolution Electro Spray Ionization M ass Spectroscopy HSQC Heteronuclear Singlet Quantum Correlation IR Infra Red, hồng ngoại IUPAC International Union o f Pure and Applied Chemistry J Hằng số ghép cặp m multiplet, mũi đa M Khối lượng phân tử Me Methyl NMR Nuclear M agnetic Resonance NOESY Nuclear Overhauser Enhancement Spectroscop Y P P seuderanthemum Pđ Phân đoạn s singlet, mũi đơn SRB Sulfo Rhodamine B SKC Sắc Ký Cột SKLM Sắc Ký Lớp M ỏng t triplet, mũi ba UV Ultra Violet, tử ngoại - v- DANH MỤC KÝ HIỆU HỢP CHẤT CÔ LẬP • • • • STT 10 11 12 13 Ký hiệu viêt XHĐ-L.E1 XHĐ-L.E2 XHĐ-L.E3 XHĐ-L.MN1 XHĐ-L.MN2 XHĐ-L.MN3 XHĐ-L.MN4 XHĐ-L.MN5 XHĐ-L.MN6 XHĐ-L.MN7 XHĐ-L.MN8 XHĐ-L.MN9 XHĐ-L.MN10 Ký hiệu phụ lục XHD32 XHD33 XHX19 XHD20 XHD21 XHD14 XHD24 XHD36 XHX5 XHD30 XHD25 XHD28 XHD29 14 XHĐ-L.MN11 XHD27C3 15 XHĐ-L.MN12 XHD27C2 16 XHĐ-L.MN13 XHD27C1 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 XHX-R.C1 XHX-R.C2 XHX-R.C3 XHX-R.C4 XHX-R.C5 XHX-R.C6 XHX-R.C7 XHX-R.C8 XHX-R.C9 XHX-R.C10 XHX-R.C11 XHX-R.C12 XHX-R.C13 XHX-R.E1 XHX-R.E2 XHX-R.MN1 XHX-R.MN2 XHX-R.MN3 XHX-L.D XHX-L.E1 XHX-L.E2 XHX-L.M XHD.Ep1 XHD11 XHX7 XHX8 XHX20 XHX23 XHX9 XHX25 XHX17 XHX16 XHX13 XHX12 XHX29 XHD1 XHX2 XHX5 XHD30 XHD25 VTN2.03.04.01 VTN3.16.2.2.2 38 VTN3.20.2 PA4.2 - vi - Tên hợp chât Osmanthuside B (77) Isomartynoside (81) Luteolin -ơ -p - D -glucopyranoside (67) Antirrhinoside (14) 5p,6p-Dihydroxyantirrhide (56) Linarioside (57) Salidroside (73) Echipuroside A (74) Darendoside B (75) Verbascoside (78) Isoverbascoside (79) Luteolin 7-ơ-rutinoside (68) Apigenin 7-ơ-rutinoside (69) Apigenin -C -a - L-arabinopyranosyl8-C -p- L-arabinopyranoside (70) Apigenin 6,8-di-C -a- Larabinopyranoside (71) Apigenin -C -p - D -xylopyranosyl8 -C -a - L-arabinopyranoside (72) Squalene (17) Acid oleanolic (19) Betulin (23) (+)-Eudesmin (62) Lupeol(22) Acid betulinic (59) (+)-Magnolin (63) Acid pseuderanic (58) (+)-Syringaresinol (61) (+)-Episyringaresinol (60) (+)-1-Hydroxysyringaresinol (64) Pseuderesinol (65) Pseuderanoside (66) Martynoside (80) Leucosceptoside A (76) Darendoside B (75) Verbascoside (78) Isoverbascoside (79) Indole 3-carboxaldehyde (82) Uracil (83) Adenine (84) Betaine (33) DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 1.1 Cây Xuân hoa đỏ đỏ Hình 1.2 Cây Xuân hoa đỏ x a n h Hình 1.3 Cấu trúc hợp chất béo dẫn xuất có chi Pseuderanthemum 11 Hình 1.4 Cấu trúc hợp chất steroid có chi Pseuderanthemum 11 Hình 1.5 Cấu trúc hợp chất terpenoid có chi Pseuderanthemum 12 Hình 1.6 Cấu trúc hợp chất lignan có chi Pseuderanthemum 12 Hình 1.7 Cấu trúc hợp chất flavonoid có chi Pseuderanthemum 13 Hình 1.8 Cấu trúc hợp chất chứa nitrogen có chi Pseuderanthemum 13 Hình 1.9 Cấu trúc hợp chất iridoid glucoside amine bậc bốn diện loài thuộc họ Ô r ô 14 Hình 2.1 Lá Xuân hoa đỏ đỏ 20 Hình 2.2 Rễ Xuân hoa đỏ x a n h 20 Hình 2.3 Lá Xuân hoa đỏ xanh 20 Hình 3.1 Một số tương quan HMBC COSY XHĐ-L.M N2 39 Hình 3.2 Một số tương quan NOESY X H Đ -L.M N 39 Hình 3.3 Một số tương quan HMBC X H X -R C8 49 Hình 3.4 Một số tương quan NOESY X H X -R C 51 Hình 3.5 Độ dịch chuyển hóa học C-23 C-24 hợp chất triterpene 51 Hình 3.6 Một số tương quan HMBC COSY X H X -R C 12 71 Hình 3.7 Mối liên hệ hóa học lập thể độ dịch chuyển hóa học carbon C -7 C -7 ’ lignan 72 Hình 3.8 Một số tương quan HMBC COSY X H X -R C 13 75 Hình 3.9 Một số tương quan NOESY X H X -R C 13 76 - vii - DANH MỤC SƠ ĐỒ Trang Sơ đồ 2.1 Quy trình điều chế loại cao cô lập hợp chất từ Xuân hoa đỏ đỏ 25 Sơ đồ.2.2 Quy trình điều chế loại cao cô lập hợp chất từ rễ Xuân hoa đỏ xanh 26 Sơ đồ 2.3 Quy trình điều chế loại cao cô lập hợp chất từ Xuân hoa đỏ xanh 27 Sơ đồ 2.4 Quy trình khảo sát hoạt tính ức chế enzyme acetylcholinesterase phương pháp Ellman 33 Sơ đồ 2.5 Quy trình khảo sát hoạttính gây độc tế bào phương pháp S R B 36 - viii - Peeuảeranthemum carrutherôìì var atropurpureum O OH Phụ lục З1а: Phổ lH -N M R XHĐ-L.E l "CH2 CH2 W23ỳ —OH Phụ lục З1Ь 31c: Phổ l3C kết hợp phổ DEPT-NM R X H Đ -L.E l -229- PHỤ LỤC Pseuảeranthemum carruthersìì var atropurpureum PHỤ LỤC XHD32-MeOD-HSQC 5' 6” 6'b 1" ị 1Й 4' 4" i 1 ß Phụ lục ЗЫ: Phổ HSQC-NM R X H Đ -L E l 7.5 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 Phụ lục З1е: Phổ H M BC-NM R X H Đ -L E l -230 - 2.01.51.00.5 Peeuderanthemum carruthersn var atropurpureum PHU LUC Phu lue 31f: Phô ‘H -'H COSY-NM R cûa XHD-L.E1 D isp la y R e p o rt A n a ly s is Info Analysis Name Method Sam ple Name Com m ent D:\Data\TU\XHD32_ 1-A,5_01_1091.d iune_wide.m XH D32 A c q u is itio n P aram eter Source Type ESI Focus Not active Scan Begin 100 m/z Scan End 3000 m/z , ' [ M + 8/23/2010 6:42:39 PM Operator Instrument THANHTU m icrO TO F-Q Set Set Set Set Positive 4500 V -500 V 550.0 Vpp Ion Polarity Set Capillar/ Set End Plate Offset Set Collision Cell RF 2079 Acquisition Date Nebulizer Dry Heater Dry Gas Divert Valve O , OH O Q 1-0 Bar 180 eC 5.0 l/min Source N a ] + H ^ H 3C ^ j ' V ^ - f o ^iv — HO f2 OH [ ( C z s H a s O b ^ “ ß ' " C H 2~ CH^ - , — B ru k e r C o m p a s s D a ta A n a ly s is I _ OH Osmanthuside B (XHD-L.E1) n + N a ) ; ,2 ] I 539.1679 v -iv— 10187 845.4674 ll, ,1.-1., , i 683 !922 739.6058 I.-L Ii i .,i i [■ ■ p rin te d : i, I | Ii.ll Hi /2 /2 :2 :2 PM Phu lue 31g: Phô H R -E SI-M S cua XHD-L.E1 -231- , Pseuderanthemum carruthersii var atropurpureum PHỤ LỤC VTN 2.O3.O4.OI-MEOD-IH СЧСООГ-ГООСОСОт— lO'\r-V£>CS]C'ì'£>0'£>CN]COr'-COCO'31 COLnOr-~ r ^r ^^LnLD^ơi ơ^cũcDcor - vù^DOơ^í cr - ^^ưì Lnoi r ocNr - CO t— I CO CO O D H H H H H H O 'T 'T 'T ^'i'i^n fM C ^ ^M C N J O g iN O J C N C N C N 0^ œ œ œ œ 0D0D0Dr^r^r^[^[^[^r^r^r^r'-r~~r~~r~-r~-r~-r~-r~-~r~~r~~ ^ о 40 CM t— It— I CZ5 600 #peaks: 583 373.0 RIC : 20365835 1000.00 mmu Defect: @1, 300 @1000 +/48>77 - / 1>46 SPEC: Samp : Mode: Oper: Base: Norm: Peak: Data: #9 213 [M+H]+ l x 000 0 146 100 - E+ 01 4.80 H CHO 80 - Indole 3-carboxaldehyde (XHX-L.D) [(C9H7NO+H); 146] 60 - 40 174 20 118 144^ , >j.I | 100 i *.U i i i 186 ! L i i I i i i | i i i 200 i I i i i i | i i 300 Phu luc 32d Ph6 CI-MS cua XHX-L.D -233- i i I i i i i | 400 Pseuderanthemum carruthers'u var atropurpureum rCOCO PHU LUC VTN3.16.2.2.2-MeOD-lH r- CO CO 'sT O >X) (N t— It—It— Io o I—I 'X) LD LOLT) co co co co oo co co co co oo Phu luc 33a Ph6 1H -N M R cua XHX-L.E1 YTN3.16.2.2.2 MeOD-13C (Ti (Ti Oi COCOCOCO D EPT 135 Phu luc 33b va 33c Ph6 13C k§t hop ph6 D EPT-N M R cua XHX-L E1 -2 - Peeuderanthemum carruthereW var atropurpureum 4000 3500 3000 2500 PHU LUC 2000 1500 1000 500 Wavenumber cm-1 i Frequency Range : 4000.23 - 399.252 Measured on : 21/09/2006 Sample Scans : 16 Instrument : VECTOR22 Sample : 3.16.2.2 j Resolution : Technique : KBr-Pressling Customer : Acquisition : Double Sided,Fonvard-Backward [ Zerofilling : Phu lue 33d Phö IR cua X HX-L E l DER I V E D S P E C T R U M 19:31 :3 Start : - N O V - 98 voO 3.16.2.2 CI +Q1MS LMR UP LR Clien t Wunderlin 113 113 10 0.00 mmu +/64> 17 SPEC Samp Mo d e O per Base Norm Peak Da t a : OCI I n ten : R IC : De f e c t : Inlet : 135 047 936 S Mass e s : 1907658 34 #peaks: @ 1, 300 @ 1000 #9 214 60 > 600 683 ii3 [M+H]+ 100 h ^ E+ 08 1.35 - - H 60 U racil (XHX-L E l) 40 [(C4H4N2O2+H); 113] 20 ' - 153 95 70 '1 ' 1 1'1 ■ ' 100 | 1, 141 , i ! 1 200 225 ‘ 1 1 1 ' 300 Phu lue 33e Phô CI- MS cua XHX - L E l -235- ' ' n 400 Pseuderanthemum carruthersii var atropurpureum PHỤ LỤC V T N 3.20.2-M eO D -lH NH N3 N Adenine (XHX-L.E2) -rjT-n 12 11 ppn 10 Phụ lục 34a Phổ 1H -N M R XHX-L.E2 DEPT135 180 160 140 120 100 80 60 I 40 20 Phụ lục 34b 34c Phổ 13C kết hợp phổ DEPT-NM R X HX-L.E2 -2 - Pseuderanthemum carruthersü var atropurpureum HM BC, V T N —A V , o p tim ie r t a u f PHU LUC H z ppm NH2 H N ■115 n N A denine (XHX-L.E2) z i,c7 fo î j) i l) 8.« 8.7 8.6 8.5 59 54 fo) © \ f 8.4 8.3 J 8.2 8.1 8.0 7.9 7 7 Phu lue 34d Phô H M BC-NM R cua XHX-L.E2 4000 3500 2000 2500 3000 1500 1000 500 O c o o (Ü LO o Wavenumber cm-1 Sample : 3.20.2.2 Frequency Range : 4000.23 - 399.252 Measured on : 21/09/2006 Sample Scans : 16 Technique : KBr-Pressling Resolution : Instrument : VECTOR22 Customer : Zerofilling : Acquisition : Double Sided,Fon vard-Backward Phu lue 34e Phô IR cua XHX-L.E2 -237- Pseuderanthemum carruthersü var atropurpureum SPEC: Samp: Mode : Oper: Base: Norm: Peak: Data: vo_01 2 CI +Q1MS LMR UP LR W underlin C lie n t: OC1 135.9 In te n 136.0 RIC 1000.00 mmu D efect +/100>137 136 100 PHU LUC 25-SEP-98 DERIVED SPECTRUM 19:39:28 S ta r t I n le t Masses 140951920 S ipeaks 258802796 @ 1, 300 @ 1000 #9 215 60 > 600 668 [M+H]+ _ E+ 08 1.41 80 NH60 N /4 1^N1 N Adenine (XHX-L.E2) 40 164 [(C H 5N +H); 136] I 20 85 176 100 150 200 250 Phu lue 34f Phö CI-M S cua XHX-L.E2 -238 - "T 300 Pseuderanthemum carrutherô'û var atropurpureum NGA-PA4 2-MeOD-lH со со го го со со го го го (Г) СПСПСПСП о г - го Г" О] см сг> го го го Cs] д Phụ lục 35a Phổ 1H -N M R X H X-L.M Phụ lục 35b 35c Phổ 13C kết hợp phổ DEPT-NM R XH X -L.M -23 9- PHỤ LỤC Pseuderanthemum carruthersii var atropurpureum PHU LUC Display Report - Selected Window Selected Analysis NamePA -2 D Method: QUANG06.M Sam ple Na PA 4-2 Analysis Inf PA 4-2 - LC-MS Instrum e LC-MSD-Trap-SL Operator: Phuong Print Dal/20/20 9:25:08 Acq Dat§7l9/20(#M 1:06:03 PM +M S, 1.9m in #71 x107 235 [2M+H] H 3C 3C\ © N — CH2— COO H 3C / ' H 3C Betaine (XHX-L.M) [(C H 11 NO +H); 118,1] [M+H] 469.1 [4M +H] 352 [3M+H] 586 156.0 100 L , 390.0 I [5M+H] 35 52 _L 400 600 Phu luc 35d Phö APCI-M S cua XH X -L.M Phu luc 36 Phö 1H -N M R cua cao nuoc tü la cay Xuan hoa la -2 - 702.6 Peeuderanthemum carruthereii var atropurpureum PHU LUC Phòng TNSHPT - Bộ môn Di truyền - ĐHKHTN KẾT QUẢ XÁC ĐỊNH ĐỘC TÍNH TẾ BÀO Người gửi mẫu: Võ Thị Ngà Đơn vị: Khoa Hóa Mã số: 51 Ngày nhận: 12/2010 Ngày trả kết quả: 19/01/2011 Ket Sàng lọc thô nồng độ íoo ng/ml Dòng tế bào: MCF-7 (ung thư vú) STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Mẩu XHX8 XHX9 XHX12 XHX17 XHD14 XHD20 XHD21 XHX19 XHD28 XHD29 XHD27C1 XHX5 • XHD24 XHD25 XHD30 XHD32 XHD33 XHX7 HI H2 Chứng dương (camptothecin 0.01 ng/ml) Tỷ lệ (% ) gây độc tê bào Lần Lân Lân 39.44 22.46 26.53 59.62 56.68 47.20 63.35 49.49 66.70 29.64 45.35 37.39 12.02 8.45 16.37 -1.98 -2.51 -1.19 -1.99 13.06 -4.58 62.17 51.65 55.20 -5.85 4.65 8.16 4.15 -7.63 1.66 14.84 0.89 5.97 -1.48 -6.36 -0.66 1.04 -3.94 3.87 73.03 81.75 88.13 70.62 73.60 82.69 3.21 11.07 8.31 6.74 5.20 7.12 22.04 22.05 19.85 3.21 1.48 0.89 19.29 14.89 23.67 41.15 42.47 ±2.333 Tỷ lệ (% ) gây độc tê bào L ân L ân L ân 39.02 44.78 26.79 11.77 20.20 5.95 19.29 9.12 15.48 TB ± Đ LC 36.86 ± 12.64 ±7.161 14.63 ± 5.139 41.10 45.17 TB ± ĐLC 29.48 ± 867 54.50 ± 6.491 59.85 ± 9.126 37.46 ±7.855 12.28 + 3.965 -1.89 ± 0.662 2.16 + 9.523 56.34 ± 5.348 2.32 ±7.291 -0.61 ± 6.212 7.23 + 7.058 -2.84 ± 3.080 0.32 ± 3.957 80.97 ± 7.581 75.64 ± 6.289 7.53 ± 3.988 6.35 ± 1.018 21.31 ± 1.269 1.86 ± 1.204 19.28 ± 4.394 Ghi nhiêm khuân * * * * * * * Dòng tế bào: HeLa (ung thư cổ tử cung) STT M ẩu XHX8 XHX9 XHX12 Ghi * * ỉ Phụ lục 37a Kết xác định độc tính tế bào (trang 1) -241- Peeuderanthemum carruthereii var atropurpureum PHU LUC Phòng TNSHPT - Bộ môn Di truyền - ĐHKHTN 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 XHX17 XHD14 XHD20 XHD21 XHX19 XHD28 XHD29 XHD27C1 XHX5 XHD24 XHD25 XHD30 XHD32 XHD33 XHX7 HI H2 Chứng dương (camptothecin 0.01 ng/ml) 22.77 8.40 8.25 -2.26 71.48 -16.62 -16.26 -10.15 -8.29 -13.99 16.64 12.78 17.85 -10.26 10.63 -21.78 35.48 17.49 -13.67 -10.14 -13.77 60.19 -11.81 - n -11.44 -6.98 -15.72 -4.28 -6.60 -4.47 -4.00 -0.70 0.19 18.05 21.69 -9.55 -12.23 -3.43 64.32 4.54 -14.27 -8.53 -1.76 2.69 5.75 -4.08 4.26 -7.88 1.96 -7.60 28.45 20.65 ±2.789 -4.94+ 11.734 -4.71 + 11.268 -6 3 65.33 ± 5.716 -7.96 ± 11.094 -13.93 ± 2.518 -10.04 ± 1.461 -5.67 ± 3.452 -9.01 ± 10.167 + 10.463 0.70 ± 10.540 5.88 ± 11.246 -7.38 ±3.161 3.96 + 5.923 -9.73 ±11.136 27.33 + 8.770 55.98 59.81 60.89 58.89 + 2.583 Sàng lọc thô * * * * * * nồng độ 50 ng/m l Dòng tế bào: M CF-7 (ung th vú) STT M âu XHX16 XHD27C3 XHX1 XHX2 Tỷ lệ (% ) gây độc tê bào L ân L ân L ân 32.63 14.27 21.22 8.52 -5.73 6.68 2.54 -7.38 2.23 -2.54 2.21 1.34 TB ± Đ LC 22.71 ±9.273 3.16 ±7.747 -0.87 ± 5.640 0.33 ±2.531 G hi * * * * TB ± Đ LC 1.61 ±9.668 9.17 ±5.359 -14.54 +3.049 -16.89 ±3.116 G hi * * * * Dòng tế bào: H eLa (ung th cổ tử cung) STT M âu XHX16 XHD27C3 XHX1 XHX2 Tỷ lệ (°/'o) gây độ c tế bào L ân L ân L ần -0.56 12.18 -6.79 -5.93 -15.36 -6.23 -14.74 -11.40 -17.49 -13.40 -19.37 -17.92 TB, ĐLC: trung bình, độ lệch chuấn Ghi chú: (*) mẫu tạo tủa môi trường nuôi cấy, mẫu nhiễm khuẩn nên pha DMSO, hòa vào môi trường nuôi cấy, sau môi trường nuôi cấy lọc với màng lọc 0,22 |j.m Phụ lục 37b Kết xác định độc tính tế bào (trang 2) -242- Peeuderanthemum carruthereii var atropurpureum PHỤ LỤC Phòng TNSHPT - Bộ môn Di truyền - ĐHKHTN Đánh giá hoạt tính gây độc tế bào Trên dòng tế bào ung thư vú (MCF-7): - Mầu XHD 25 XHD 30 có hoạt tính gây độc tế bào cao nồng độ lOOppm - Các mẫu XHX9, XHX12, XHX19 có hoạt tính gây độc tế bào nồng độ - lOOppm Các m ẫu lại hoạt tính gây độc tế bào lOOppm 50ppm Trên dòng tế bào ung thư cổ tử cung (HeLa) - M ầu XHX1 có hoạt tính gây độc tế bào nồng độ 1OOppm - Các m ẫu lại hoạt tính gây độc tế bào lOOppm 50ppm Trưởng Bộ m ôn Di truyên PG S.TS Hồ H uỳnh Thùy Dương Phụ lục 37c Kết xác định độc tính tế bào (trang З) -243- [...]... bốn (5 2 ), (5 3) (5 2 ), (5 4) (5 2) (5 2) (5 5) (5 5) (5 5) (5 5) (4 0 ), (4 7) (5 5) (3 3 ), (5 5) (3 3 ), (5 5) (1 5) (5 0) (3 6 ), (4 9) (4 5) (3 3) (3 3 ), (5 5) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (5 1) (3 3) (3 7 ), (3 8 ), (3 9 ), (4 6) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (3 3) (4 0 ), (4 1 ), (4 2 ), (4 3 ), (4 4) (4 0 ), (4 2 ), (4 3) (4 8) (3 3) (3 3) (3 3 ), (5 5) (3 3 ), (5 5) (3 3 ), (5 5) (3 3 ), (5 5) (3 3 ), (5 5) (3 3) (3 3) (3 3 ), (5 5) -15- Pseuderanthemum. .. này khảo sát thành phần hóa học của cây Xuân hoa đ , nên chúng tôi chỉ trình bày mô tả thực vật của loài này [1 ],[ 4] Tên khoa học: Pseuderanthemum carruthersii (Seem. ) Guill var atropurpureum (Bull .) Fosb Họ Ô rô (Acanthaceae) Tên thông thường : Xuân hoa đ , Ô rô đ , Nhớt tím Tiểu-mộc cao 1-2 m, phân nhánh nhiều, không lông Lá có phiến xoan bầu dục, mỏng, không lông, dài 7-10 cm, đỏ bầm có bớt đậm, đôi... Pseuderanthemum carruthersii (Seem. ) Guill var atropurpureum (Bull .) Fosb. , để khảo sát vì cây được sử dụng trong dân gian với đặc tính chữa lành vết thương, trị thương đòn tổn, [4] nhưng chưa được nghiên cứu về thành phần hóa học Nội dung chính được thực hiện trong luận án này là khảo sát thành phần hóa học của cây Xuân hoa đ , Pseuderanthemum carruthersii (Seem. ) Guill var -1- Pseuderanthemum carruthersii var. .. carruthersii (Seem. ) Guill var atropurpureum (Bull .) Fosb bởi nhà Thực vật học TS Võ Văn Chi và TS Hoàng Việt, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Thành phố Hồ Chí Minh Chúng tôi tạm gọi hai cây này là Xuân hoa đỏ lá đỏ và Xuân hoa đỏ lá xanh, hình ảnh của chúng lần lượt được trình bày trong Hình 1.1 và Hình 1.2 -3- Pseuderanthemum carruthersii var atropurpureum Hình 1.1 Cây Xuân hoa đỏ lá... của cây thuốc Xuân hoa Sau khi tham khảo các tài liệu liên quan đến các loài cây thuộc chi Pseuderanthemum, chúng tôi nhận thấy rằng, trong số 10 loài cây thuộc chi Pseuderathemum hiện diện ở Việt Nam, chỉ có cây Xuân hoa, P palatiferum, đang được quan tâm nghiên cứu sâu rộng về cả lĩnh vực hóa học lẫn lĩnh vực dược học, còn các cây khác chưa có tài liệu nào đề cập Chúng tôi chọn cây Xuân hoa đ , Pseuderanthemum. .. nitrogen có trong chi Pseuderanthemum 1.3.5 Đăc điểm hóa- thưc vât ho Ô rô (Acanthaceae) Năm 198 8, Henrik Fischer W Jensen [23] đã dựa trên các kết quả nghiên cứu về hóa học của 40 loài thuộc họ Ô rô (Acanthaceae) để phân loại hóa học của họ này Kết quả nghiên cứu đã đưa ra hai điểm đặc trưng của họ Ô rô như sau: Có chứa các hợp chất iridoid glucoside Trong số 40 loài được khảo sát thì 14 loài có chứa... HeLa, do cây P palatiferum đang được sử dụng trong dân gian như cây thuốc để chữa một số bệnh ung thư và những thử nghiệm này nằm trong khả năng với điều kiện nghiên cứu tại Việt Nam Việc khảo sát thành phần hóa học của cây Xuân hoa đ , P carruthersii var atropurpureum góp phần làm sáng tỏ hóa - thực vật của chi Pseuderanthemum, hiện có rất ít thông tin Những kết quả thử nghiệm hoạt tính sinh học góp phần. .. [37] đã cô lập từ rễ cây P palatiferum hai hợp chất lignan là palatiferin A (2 6) và palatiferin B (2 7) Ngoài ra, còn có năm triterpene, bao gồm epifriedelanol (2 0 ), lupeol (2 2 ), betulin (2 3 ), lupenone (2 4) và pomolic acid (2 1); và một dipeptide là asperglaucide (3 5) 1.3.4 Nhân xét về thành phần hóa hoc chi Pseuderanthemum Qua việc phân tích các tài liệu tham khảo về thành phần hóa học của các cây thuộc... cứu trên cây P palatiferum, đã công b , chủ yếu tập trung nghiên cứu ở các phân đoạn phân cực kém và phân cực trung bình Từ nhận định trên, chúng tôi đưa ra định hướng khảo sát thành phần hóa học của cây P carruthersii var atropurureum ở các phân đoạn từ phân cực trung bình đến phân cực mạnh, đặc biệt ở cao methanol-nước, với hy vọng cô lập được các hợp chất đặc trưng của họ Ô rô (Acanthaceae) Về mặt... chất từ lá cây P palatiferum bao gồm: p-amyrin (1 8 ), oleanolic acid (1 9 ), p-sitosterol ( 7 ), stigmasterol ( 9 ), hỗn hợp p-sitosterol 3 - ỡ - P - D-glucopyranoside ( 8) và stigmasterol 3 - ỡ - P - D-glucopyranoside (1 0) Năm 200 7, Trần Kim Thu Liễu [8] đã cô lập từ lá cây P palatiferum các hợp chất squalene (1 7 ), dotriacontane ( 1 ), phytol (1 6 ), palmitic acid ( 4 ), p-sitosterol ( 7 ), stigmasterol ( 9 ), hỗn hợp ... ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN VÕ THỊ NGÀ KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY XUÂN HOA ĐỎ, PSEUDERANTHEMUM CARRUTHERSII (SEEM.) GUILL VAR ATROPURPUREUM (BULL.). .. nghiên cứu thành phần hóa học Nội dung thực luận án khảo sát thành phần hóa học Xuân hoa đỏ, Pseuderanthemum carruthersii (Seem.) Guill var -1- Pseuderanthemum carruthersii var atropurpureum MÔ ĐẨU... thực vật loài [1],[4] Tên khoa học: Pseuderanthemum carruthersii (Seem.) Guill var atropurpureum (Bull.) Fosb Họ Ô rô (Acanthaceae) Tên thông thường : Xuân hoa đỏ, Ô rô đỏ, Nhớt tím Tiểu-mộc cao