Phương pháp xác định polyphenol tổng số chè Xác định polyphenol tổng số chè theo phương pháp ISO 145021 :2005 Chiết xuất polyphenol - Cân xác 0.2 +- 0.001 g chè khô ( độ ẩm khoảng 5%, kích thước 0.5 – 1mm, phải trộn lấy đại diện) cho vào ống nghiệm ống chiết (10 ml) - Cho bình tam giác có chứa dung môi methanol 70% vào bể ổn nhiệt 70°C 30 phút - Đặt ống nghiệm chứa mẫu vào bể ổn nhiệt 70°C, để khoảng phút cho 5ml methanol 70% 70°C vào chiết Sau đó, lấy khuấy trộn Vortex - Tiếp tục nâng nhiệt độ ống chiết bể ổn nhiệt (70°C) khuấy trộn lại Vortex thời điểm 10 phút trích ly - Sau chiết ( 10 phút), dịch chiết hạ xuống nhiệt độ phòng phương pháp tự nhiên ly tâm tốc độ 3500 vòng/phút 10 phút - Gạn cẩn thận phần dịch phía ống chiết ống nghiệm khắc độ 10ml ( bình định mức 10ml) Phần bã tiếp tục chiết lại lần với thủ tục Sau dịch chiết sau ly tâm lần chiết dồn với lần chiết ( bình định mức 10 ml) dùng methanol 70% nhiệt độ thường lên thể tích tới vạch Pha loãng Lấy ml dịch chiết + 99ml nước cất lần, lắc ( chuẩn bị bình định mức 100mml) Dịch pha loãng sử dụng để xác định hàm lượng polyphenol tổng số Xây dựng đường chuẩn acid gallic Đường chuẩn acid gallic xây dựng khoảng nồng độ từ 10 đến 50µg/ml ( dung dịch sử dụng ngày) Xác định hàm lượng polyphenol - Dùng pipette chuyển ml nước cất vào ống nghiệm 10 ml ( nhắc lại lần) – mẫu trắng - Dùng pipette chuyển ml dịch chiết mẫu pha loãng vào ống nghiệm 10 ml ( nhắc lại lần) – mẫu phân tích - Dùng pipette cho ml dung dịch Folin-ciocalteu 10% vào ống nghiệm lắc - Sau cho Folin-ciocalteu phút, tiếp tục cho ml Na2CO3 7.5% vào ống nghiệm, nút miệng ống , lắc - Để ống phản ứng nhiệt độ phòng 60 phút sau đo mật độ quang 765 nm (cuvet 10 mm, cửa đối chứng nước cất) 5 Tính kết Hàm lượng pomyphenol tổng số ( WT, %CK) tính theo công thức: Phân tích polyphenol theo phương pháp xanh phổ ( Prussian Blue) Nguyên tắc Polyphenol phản ứng với thuốc thử tạo nên dung dịch có màu xanh phổ Từ cường độ màu thí nghiệm đồ thị đường chuẩn, ta suy nồng độ polyphenol có mẫu cần phân tích Hóa chất: Dung dịch FeCl3 0.02M HCl 0.1M; dd K3Fe(CN)6 0.016M Chất ổn định : nước cất : H3PO4 85% : gum arabic 1% ( tỷ lệ thể tích 3:1:1) Chất chuẩn: acid garlic nước cất ( 25 – 50 – 100 – 200 – 300 – 400 – 500 ppm) Cách tiến hành Lấy 0.1 ml dịch ( chất chuẩn mẫu cần đo pha loãng đến nồng độ thích hợp vào ống nghiệm, cho tiếp 3ml nước cất, lắc đều, cho nhanh 1ml K3Fe(CN)6 1ml FeCl3 , lắc dung dịch Để yên dung dịch 15 phút Bổ sung chất ổn định cho đủ 10 ml, đo độ hấp thu A bước sóng 700nm Dựng đường chuẩn với acid garlic nồng độ nêu 3 Tính kết Dựa vào đường chuẩn để tính so sánh hàm lượng polyphenol dịch cốt ...5 Tính kết Hàm lượng pomyphenol tổng số ( WT, %CK) tính theo công thức: Phân tích polyphenol theo phương pháp xanh phổ ( Prussian Blue) Nguyên tắc Polyphenol phản ứng với thuốc thử tạo... thí nghiệm đồ thị đường chuẩn, ta suy nồng độ polyphenol có mẫu cần phân tích Hóa chất: Dung dịch FeCl3 0.02M HCl 0.1M; dd K3Fe(CN)6 0.016M Chất ổn định : nước cất : H3PO4 85% : gum arabic 1% (... phút Bổ sung chất ổn định cho đủ 10 ml, đo độ hấp thu A bước sóng 700nm Dựng đường chuẩn với acid garlic nồng độ nêu 3 Tính kết Dựa vào đường chuẩn để tính so sánh hàm lượng polyphenol dịch cốt