BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẦN THỊ HỒNG HÀ NGHIÊN CỨU CHIẾT TÁCH CÁC CHẤT CĨ HOẠT TÍNH KHÁNG U VÀ ĐIỀU BIẾN MIỄN DỊCH TỪ HAI LOÀI NẤM HẦU THỦ (Hericium erinaceus) VÀ NẤM HƯƠNG (Lentinula edodes) NUÔI TRỒNG Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Hoá học hợp chất thiên nhiên Mã số: 62.44.01.17 LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC HÀ NỘI, 2015 i DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT Kí hiệu Tiếng anh Tiếng việt AST Serum aspartat transaminase ALT Serum alanin transaminase ATCC American Type Culture Ngân hàng chủng giống Mỹ Collection Bạch cầu BC BSA Bovine serum albumin 13 Carbon-13 C-NMR CC Nuclear Albumin huyết bò Magnetic Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Resonance Spectroscopy carbon 13 Column Chromatography Sắc kí cột CCT Chuột cống trắng CNT Chuột nhắt trắng COSY Correlation Spectroscopy Phổ COSY CS% Cell survival % % tế bào sống sót DEPT Distortionless Enhancement by Phổ DEPT Polarisation Transfer DEAE- cellulose Diethylaminoethyl cellulose DMSO Dimethyl sulfoxid Dimetyl sulfoxit EAC Ehrlich ascites Carcinoma Ung thư cổ trướng ECACC The European Collection of Cell Ngân hàng chủng giống châu Cultures Âu Electron Spray Ionization Mass Phổ khối ion hóa phun mù Spectra điện tử EtOAc Ethyl acetate Etyl axetat FBS Foetal bovine serum Huyết bào thai bò Fl GC Human cervical uterine carcinoma Gas Chromatography Tế bào Ung thư tử cung Sắc kí khí ESI-MS ii γGT Serum gamma glutanin transaminase Hb Haemoglobin Hồng cầu HC Hep-G2 Hepatocellular carcinoma HMBC Heteronuclear Tế bào ung thư gan người Multiple Bond nhiều liên kết Connectivity H-NMR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy HPLC High Performance IC50 Heteronuclear Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton liquid Chromatography HSQC Phổ tương tác dị hạt nhân qua Sắc kí lỏng cao áp hiệu cao single-Quantum Phổ tương tác dị hạt nhân qua Conherence liên kết Inhibitory concentration 50% Nồng độ ức chế 50% KLT Khối lượng tạng KN Kháng nguyên LD50 Liều gây chết 50% động vật lethal dose 50% thực nghiệm Lu MIC Human lung adenocarcinoma minimum inhibitory concentration Tế bào Ung thư biểu mô phổi Nồng độ ức chế tối thiểu Nghiên cứu NC OD Optical Density Mật độ quang OVA Ovalbumin Albumin lòng trắng trứng PBS Phosphat buffer saline Dung dịch đệm phosphat RD Human Rhabdomyosarcoma % scavenging capacity Ung thư mô liên kết % khả trung hòa gốc tự SC% Suy giảm miễn dịch SGMD SRB Sulforhodamine B TCA Trichloacetic acid Axit tricloaxetic Tiêu chuẩn sở TCCS iii TCL Thin Layer Chromatography Sắc kí lớp mỏng TL (g) Trọng lượng (gam) TLCT Trọng lượng thể TNFα Yếu tố hoại tử ung thư Tumor necrosis factor Vi sinh vật VSV WHO World Health Organization iv Tổ chức Y tế giới MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TẮT ii DANH MỤC SƠ ĐỒ VÀ HÌNH xiii MỞ ĐẦU CHƯƠNG I TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Nấm dược liệu ứng dụng y học dân tộc 1.1.1 Giới thiệu nấm dược liệu 1.1.2 Ứng dụng y học dân tộc 1.2 Những nghiên cứu giới chất có hoạt tính sinh học nấm dược liệu 1.2.1 Các hợp chất có phân tử lượng nhỏ 1.2.1.2 Các chất có hoạt tính sinh học khác 11 1.2.2 Hoạt tính polysaccharide từ nấm dược liệu 19 1.3 Tình hình nghiên cứu nấm hầu thủ nấm hương 30 1.3.1 Nấm hầu thủ (Hericium erinaceus) 30 1.3.1.1 Trên giới 30 1.3.1.2 Ở Việt Nam 34 1.3.2 Nấm hương (Lentinus edodes) 35 1.3.2.1 Trên giới 36 1.3.2.2 Ở Việt Nam 40 1.4 Mơ hình ni cấy tế bào ung thư ba chiều (3D) nghiên cứu ung thư 41 CHƯƠNG II NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 44 2.1 Đối tượng nghiên cứu 44 2.1.1 Nấm hương 44 2.1.2 Nấm hầu thủ 44 2.2 Dụng cụ, hóa chất mơi trường 44 2.2.1 Dụng cụ thiết bị 44 2.2.2 Môi trường 44 2.3 Các phương pháp phân lập hợp chất 45 v 2.4 Phương pháp tinh β-glucan từ nấm hương nấm hầu thủ 46 2.4.1 Phương pháp tinh β-1,3-glucan từ nấm hương 46 2.4.2 Phương pháp tinh β-1,3-glucan từ nấm hầu thủ 46 2.5 Các phương pháp xác định cấu trúc hoá học 46 2.6 Phương pháp xác định hàm lượng polysaccharide 46 2.7 Phương pháp thủy phân khơng hồn tồn β-1,3-glucan từ nấm hầu thủ -1,3-glucanase 47 2.8 Nghiên cứu bao curcumin (Cur) β-1,3/1,6-glucan 47 2.9 Phương pháp đánh giá hoạt tính sinh học 48 2.9.1 Phương pháp thử khả gây độc tế bào (cytotoxicity) 48 2.9.2 Phương pháp ức chế hình thành khối u chiều thạch mềm (anti-tumor promoting assay) in vitro 50 2.10 Các phương pháp thử dược lý 51 2.10.1 Phương pháp đánh giá độc tính cấp 51 2.10.2 Phương pháp đánh giá độc tính bán trường diễn 51 2.10.3 Phương pháp đánh giá số tác dụng sản phẩm 52 2.10.3.1 Nghiên cứu tác dụng bảo vệ gan HG1 mơ hình gây độc gan carbon tetracholorid 52 2.10.3.2 Nghiên cứu tác dụng HG1 đến trình tổng hợp protein động vật dùng bán trường diễn 52 2.10.3.3 Nghiên cứu tác dụng hệ miễn dịch HG1 thực nghiệm 52 2.10.3.4 Phương pháp thử hiệu lực kháng u thực nghiệm 52 2.10.4 Xử lý số liệu 52 CHƯƠNG III THỰC NGHIỆM 53 3.1 Nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học nấm hương 53 3.1.1 Phân lập hợp chất từ thể nấm hương 53 3.1.2 Tách polysaccharide từ dịch lên men nấm hương 55 3.1.3 Các số vật lý số liệu phổ hợp chất phân lập từ nấm hương 55 vi 3.1.4 Tinh β-1,3/1,6 glucan (lentinan) từ nấm hương (sơ đồ 3.3) 56 3.2 Nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học nấm hầu thủ 57 3.2.1 Phân lập hợp chất từ thể nấm hầu thủ (sơ đồ 3.4) 57 3.2.2 Tách polysaccharide từ dịch lên men nấm hầu thủ 60 3.2.3 Các số vật lý số liệu phổ hợp chất phân lập từ nấm hầu thủ 60 3.2.4 Tinh β-1,3/1,6 glucan từ nấm hầu thủ 61 3.2.5 Thủy phân khơng hồn toàn β-1,3-glucan từ nấm hầu thủ enzyme 1,3-glucanase 62 3.2.6 Sử dụng β-1,3/1,6-glucan từ nấm hầu thủ làm chất mang curcumin 64 3.3 Tạo chế phẩm thử nghiệm 66 3.4 Thử dược lý chế phẩm 66 3.4.1 Nghiên cứu độc tính cấp 66 3.4.3 Nghiên cứu số tác dụng sản phẩm HG1 động vật thực nghiệm ……………………………………………………………………………………68 3.4.4 Nghiên cứu thử hiệu lực kháng u thực nghiệm động vật sản phẩm HG2….………………………………………………………………………… 70 CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 73 4.1 Nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học nấm hương 73 4.1.1 Tách phân đoạn đánh giá hoạt tính sinh học 73 4.1.2 Xác định cấu trúc hợp chất NH1, NH2 NH3 76 4.1.2.1 Hợp chất NH1: galactiol 76 4.1.2.2 Hợp chất NH-2: Ergosterol 80 4.1.2.3 Hợp chất NH3: Ergosterol peroxide 84 4.1.2.4 Hợp chất NH-GL: β-1,3/1,6 glucan (lentinan) 88 4.1.3 Đánh giá hoạt tính sinh học hợp chất phân lập từ nấm hương 89 4.2 Nghiên cứu hóa học hoạt tính sinh học nấm hầu thủ 92 4.2.1 Tách phân đoạn đánh giá hoạt tính chống ung thư 92 4.2.2 Xác định cấu trúc hợp chất phân lập từ nấm hầu thủ 94 vii 4.2.2.1 Hợp chất HT1: axit stearic 94 4.2.2.2 Hợp chất HT2: Ergosterol peroxide 97 4.2.2.3 Hợp chất HT3 - Cerebroside B 99 4.2.2.4 Hợp chất HT4 - Hericenone D 104 4.2.2.5 Hợp chất HT5 - Ergosterol 110 4.2.2.6 Hợp chất HT6 - β-Adenosine 112 4.2.3 Đánh giá hoạt tính sinh học hợp chất phân lập từ nấm hầu thủ 118 4.3 Nghiên cứu biến đổi β-1,3-glucan từ nấm hầu thủ thành hoạt chất dễ tan đánh giá hoạt tính chúng 121 4.3.1 Thủy phân enzyme -1,3-glucanase 122 4.3.2 Dùng β-1,3/1,6-glucan từ nấm hầu thủ làm chất mang curcumin 124 4.4 Thử nghiệm tác dụng dược lý chế phẩm HG1 động vật thực nghiệm 128 4.4.1 Kết nghiên cứu độc tính cấp sản phẩm theo đường uống chế phẩm HG1 128 4.4.2 Độc tính bán trường diễn sản phẩm HG1 cho uống động vật thực nghiệm 129 4.4.2.1 Ảnh hưởng HG1, cho CNT uống trường diễn khối lượng gan, lách, thận động vật 130 4.4.2.2 Kết nghiên cứu trọng lượng thể CNT, khối lượng gan, lách, thận tỷ số khối lượng tạng so với trọng lượng thể 131 4.4.2.3 Ảnh hưởng sản phẩm cho uống bán trường diễn đến tiêu huyết học động vật thực nghiệm 132 4.4.2.4 Ảnh hưởng sản phẩm đến thơng số hóa sinh động vật cho uống bán trường diễn 133 4.4.2.5 Ảnh hưởng sản phẩm dùng uống tuần đến chức tim thỏ đo điện tim 134 4.4.2.6 Ảnh hưởng sản phẩm đến thông số mô bệnh học dùng trường diễn 135 4.4.3 Kết nghiên cứu số tác dụng sản phẩm HG1 136 viii 4.4.3.1 Tác dụng bảo vệ gan sản phẩm chuột nhắt gây độc gan carbon tetraclorid 136 4.4.3.2 Ảnh hưởng sản phẩm uống bán trường diễn đến trình tổng hợp protein động vật thực nghiệm 137 4.4.3.3 Tác dụng hệ miễn dịch sản phẩm 138 4.4.3.4 Kết đánh giá tỷ lệ sống/chết CNT sau chiếu xạ tác dụng sản phẩm 139 4.4.3.5 Kết nghiên cứu tác dụng tên dịng tế bào có chức miễn dịch 140 4.4.3.6 Kết nghiên cứu phản ứng mẫn muộn với kháng nguyên đặc hiệu tác dụng sản phẩm 141 4.4.4 Thử nghiệm tác dụng sản phẩm HG1 lên tế bào ung thư 144 4.4.4.1 Tác dụng sản phẩm HG1 lên hồng cầu tế bào ung thư biểu mô cổ trướng Ehrlich (EAC) in vitro 144 4.4.4.2 Tác dụng hỗn hợp HG1 lên tế bào ung thư biểu mô cổ trướng Ehrlich (EAC) in vivo 144 4.4.4.1 Tác dụng chế phẩm HG1 lên khối tế bào ung thư Ehrlich in vivo 144 KẾT LUẬN 147 KIẾN NGHỊ 149 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 150 TÀI LIỆU THAM KHẢO 152 DANH MỤC CÁC PHỤ LỤC Error! Bookmark not defined ix DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1 Danh sách nấm dược liệu tiêu biểu đặc tính chữa bệnh Bảng 1.2 Các chất phân tử lượng nhỏ có hoạt tính kháng u Bảng 1.3 Nguồn gốc, kiểu hoạt tính polysaccharide từ số nấm dược liệu19 Bảng 1.4 Các thụ thể nhận biết khuôn mẫu với số polysaccharide 28 Bảng 1.5 Giá trị y học số chất hoạt tính từ nấm hương 37 Bảng 3.1 Kết thủy phân khơng hồn tồn β-1,3-glucan từ nấm hầu thủ enzym -1,3-glucanase 63 Bảng 4.1 Polysaccharide phân đoạn tách chiết nấm hương 73 Bảng 4.2 Hoạt tính gây độc tế bào cặn chiết nấm hương 74 Bảng 4.3 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế tạo u thạch mềm phân đoạn polysaccharide 74 Bảng 4.4 Hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn 75 Bảng 4.5 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế tạo u thạch mềm phân đoạn 76 Bảng 4.6 Kết phổ 13C- NMR NH2 83 Bảng 4.7 Số liệu phổ NMR hợp chất NH3 hợp chất tham khảo 86 Bảng 4.8 So sánh phổ 13C-NMR lentinan β-1,3/1,6 tinh 89 Bảng 4.9 Hoạt tính gây độc tế bào hợp chất phân lập từ nấm hương 90 Bảng 4.10 Kết thử nghiệm hoạt tính ức chế tạo u tế bào ung thư gan Hep-G2 thạch mềm hợp chất 91 Bảng 4.11 Hàm lượng polysaccharide phân đoạn tách chiết nấm hầu thủ nấm hương 92 Bảng 4.12 Hoạt tính gây độc tế bào phân đoạn chiết tách từ nấm hầu thủ 93 Bảng 4.13 Hoạt tính kháng u thạch cặn chiết nấm hầu thủ 94 Bảng 4.14 Kết phổ NMR HT3 103 Bảng 4.15 Kết phổ NMR HT4 107 Bảng 4.16 Kết phổ NMR HT6 113 Bảng 4.17 giá trị tín hiệu phổ 13C-NMR -1,3/1,6 glucan hầu thủ 118 x erinaceus mushroom extracts in tumor –bearing mice Journal of Agricultural and Food Chemistry 59:98619869 79 Kim SH., Song YS., Kim SK, Kim BC., Lim CJ, Park EH (2004) Antiinflammatory and related pharmacological activities of the n-BuOH subfraction of mushroom Phellinus linteus Journal of Ethnopharmacology 93:141–146 80 Kimlin LC., Casagrande G., and Virador V.M (2011) In vitro three dimensional (3D) models in cancer research: an update Molecular carcinogenesis Wiley Periodicals, INC 16 pages 81 Kodama N., Harada N., Nanba H (2002) A polysaccharide extract from Grifola frondosa, induces Th-1 dominant responses in carcinoma – bearing BALB/c mice Japanese Journal of Pharmacology 90(4): 357–360 82 Kogan G (2000) (13, 16) β-D glucans of yeast and fungi and their biological activity Studies in Natural Products Chemistry 23: 107– 152 83 Komoda Y., Shimizu M., Sonoda Y , and Sato Y (1989) Ganoderic acid and its derivatives as cholesterol synthesis inhibitors Chemical and Pharmaceutical Bulletin 37:531–3 84 Koyama K., Imaizumi T., Akiba M, Kinoshita K., Takahashi L., Suzuki A et al (1997) Antinociceptive components of Ganoderma lucidum Planta Medica 63:224–227 85 Krystyna S.W., Szypowski J., and Los R (2012) Evaluation of polysaccharides content in fruit bodies and their antimicrobial activity of four Ganoderma lucidum (W Curt.: fr.) P karst Strains cultivated on different wood type substrates Acta Societatis Botanicorum Poloniae 81(1): 17–21 86 Kumar G.P., Navya K., Ramya E.M., Venkataramana M., Anand T., and Anilakumar K.R (2013) DNA damage protecting and free radical 161 scavenging properties of Terminalia arjuna bark in PC-12 cells and plasmid DNA Free Radicals and Antioxidants 3: 3539 87 Le Mai Huong, Ha Phuong Thu, Nguyen Thi Bich Thuy, Tran Thi Hong Ha, Ha Thi Minh Thi, Mai Thu Trang, Tran Thi Nhu Hang, Do Huu Nghi, Nguyen Xuan Phuc, and Duong Tuan Quang (2011) Preparation and antitumor – promoting activity of curcumin encapsulated by 1,3 beta glucan isolated from Vietnam medicinal mushroom Hericium erinaceum Chemistry Letters 40 (8): 846–848 88 Leatham G.F (1985) Extracellular enzymes produced by the cultivated mushroom Lentinus edodes during degradation of a lignocellulosic medium Applied and Environmental Microbiology 859–867 89 Lee J S., Wee J W., Lee H Y., An H S., Hong E K (2010) Effects of ascorbic acid and uracil on exo-polysaccharide production with Hericium erenacius in liquid culture Biotechnology and Bioprocess engineering 15: 453–459 90 Lee H.H., Jong S.L., Cho J.Y., Kim Y.E and Hong E.K (2009) Study on immunostimulating activity of macrophage treated with purified polysaccharides from liquid culture and fruiting body of Lentinus edodes Journal of Microbiology and Biotechnology 19(6): 566572 91 Lee IK, Yun BS, Cho SM, Kim WG, Kim JP, and Ryoo IJ (1996) Betulinans A and B, two benzoquinone compounds from Lenzites betulina Journal of Natural Products 59:1090–2 92 Lee J.S., Cho J.Y., and Hong E.K (2009) Study on macrophage activation and structural characteristics of purified polysaccharides from the liquid culture broth of Hericium erinaceus Carbohydrate Polymers 78:162–168 93 Lee J.S., Min K.M., Cho J.Y., and Hong E.K (2009) Study of macrophage activation and structural characteristics of purified polysaccharides 162 from the fruiting body of Hericium erinaceus Journal of Microbiology and Biotechnology 19(9):951–959 94 Lee S., Park S., Oh JW., and Yang C (1998) Natural inhibitors for protein prenyltransferase Planta Medica 64:303–8 95 Lee S.J and Hong E.K (2010) Hericium erinaceus enhances doxorubicininduced apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells Cancer Letters 297: 144–154 96 Leung M.Y.K., Liu C., Koon J.C.M and Fung K.P (2006) Polysaccharide biological response modifier Immunology Letter 105: 101–114 97 Li W., Zhou W., Lee D-S., Shim S.H., Kim Y.C., Kim Y.H., Kim Y.C (2014) Hericirine, a novel anti-inflammatory alkaloid from Hericium erinaceum Tetrahedron Letters 55(30): 4086–4090 98 Liers, C., Ullrich R., Steffen K.T., Hatakka, A., and Hofrichter M (2006) Mineralization of 14C-labelled synthetic lignin and extracellular enzym activities of the wood-colonizing ascomycetes Xylaria hypoxylon and Xylaria polymorpha Applied Microbiology and Biotechnology 69:573–579 99 Likhitayawuid K., Angerhofer C.K., Cordell G.A., Pezzuto J.M., and Ruangrungsi N (1993) Cytotoxic and antimalarial bisbenzylisoquinoline alkaloids from Sephania erecta Jounal of Natural Products 56(1): 30–38 100 Lindequist U., Niedermeyer T H., and Jülich W.D (2005) The pharmacological potential of mushrooms Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 2(3): 285–299 101 Lu Q.Q., Tian J.M., Wei J., and Gao J.M (2014) Bioactive metabolites from the mycelia of the basidiomycete Hericium erinaceum Natural Products Research 28(6): 12881292 102 Ma B.J., Yu, H.J., Shen J.W., Ruan Y., Zhao X., Zhou H., Wu TT (2010) Isolation and structure elucidation of two new aromatic 163 compounds, hericenone I (I) and hericene D (II), with marked cytotoxic activity against EC109 cell line The Journal of Antibiotics 63(12): 713715 103 Mah-Lee Ng and Ann Teck Y (2002) Inhibition of human colon carcinoma development by lentinan from shiitake mushrooms (Lentinus edodes) The journal of Alternative and Complementary Medicine 8(5): 581589 104 Mayell M (2001) Maitake extracts and their therapeutic potential – A review Alternative Medicin Reviews 6(1): 4860 105 Medina E.J., Berruguilla E., Romero I., Algarra I., Collado A., Garrido F., and Garcia-Lora A (2008) The immunomodulator PSK induces in vitro cytotoxic activity in tumour cell lines via arrest of cell cycle and induction of apoptosis BMC Cancer 8:78 106 Miller G.L (1959) Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar Analytical Chemistry 31(3): 426–428 107 Min BS, Gao JJ, Hattori M, Lee HK., and Kim YH (2001) Anticomplement activity of terpenoids from the spores of Ganoderma lucidum Planta Medica 67:811–4 108 Miyanishi N., Iwamoto Y., Watanabe E., and Oda T (2003) Induction of TNF-α production from human peripheral blood monocytes with beta 1,3-glucan oligomer prepared from laminarin with β-1,3glucanase from Bacillus clausii NM-1 Journal of Bioscience and Bioengineering 95(2): 192195 109 Mizuno T (1995b) Bioactive biomolecules of mushrooms: food function and medicinal effect of mushroom fungi Food Review International 11(1):7–21 110 Mizuno T (1999) Bioactive substances in Hericium erinaceus (Bull.:Fr.) Pers (Yamabushitake), and its medicinal utilization International Journal of Medicinal Mushrooms 1:105–19 164 111 Mizuno T., Zhuang C., Abe K., Okamoto H., Kiho T., Ukai S., Leclerc S., Meijer L (1999) Antitumor and hypoglycemic activities of polysaccharides from the sclerotia and mycelia of Inonotus obliquus (Pers.: Fr.) Pil (Aphyllophoromycetideae) International Journal of Medicinal Mushrooms 1:301–316 112 Mizuno T., Saito H., Nishitoba T., Kawagishi H (1995a) Antitumoractive substances from mushrooms Food Review International 11:23– 61 113 Moon I.J., Chung S.R., and Jeune K.H (1995) Mitotic stimulation and cancer cell agglutination of the lectin from Lentinus edodes Yakhak Hoeji 39(3):260267 114 Mori K., Inatomi S., Ouchi K., Azumi Y., and Tuchida T (2009) Improving effects of the mushroom yamabushitake (Hericium erinaceus) on mild cognitive impairment: a double bline placebocontrolled clinical trial Phytotherapy Research 23: 367372 115 Mori K., Kikuchi H., Obara Y., Iwashita M., Azumi Y., Kinugasa S., et al (2010) Inhibitory effect of hericenone B from Hericium erinaceus on collagen-induced platelet aggregation Phytomedicine 17:1082– 1085 116 Morigiwa A., Kitabatake K., Fujimoto Y., and Ihekawa N (1986) Angiotensin converting enzyme inhibitory triterpenes from Ganoderma lucidum Chemical and Pharmaceutical Bulletin 34:3025– 3028 117 Mothana RAA, Awadh NAA., Jansen R., Wegner U., Mentel R., and Lindequist U (2003) Antiviral lanostanoid triterpenes from the fungus Ganoderma pfeifferi Fitoterapia 74:177–180 118 Murgo A., Cannon DJ, Blatner G., Cheson BD (1999) Clinical trials of MGI-114 Oncology 13:233–238 165 119 Nagano M., Shimizu K., Kondo R., Hayashi C., Sato D., Kitagawa K., and Ohnuki K (2010) Reduction of depression and anxiety by weeks Hericium erinaceus intake Biomedical Research 31(4): 231– 237 120 Nam K S., Jo Y S., Kim Y H., Hyun J W., and Kim H W (2001) Cytotoxic activities of acetoxyscirpenediol and ergosterol peroxide from Paecilomyces tenuipes Life Sciences 69: 229–237 121 Nikitina V.E., Tsivileva O.M., Pankratov A.N., Bychkov N.A (2007) Lentinula edodes biotechnology–from lentinan to lectins Food Technology and Biotechnology 45(3):230237 122 Novak M and Vetvicka V (2009) Glucan as biological response modifiers Endocrine, Metabolic & Immune disorder – Drug Targets 9: 67–75 123 Ohno N., Miura NN., Nakajima M., and Yadomae T (2000) Antitumor 1,3 beta glucan from cultured fruit body of Sparasis crispa Biological and Pharmaceutical Bulletin 23(7): 866–872 124 Ookoshi Y (2008) Extraction of β-glucan from the water-insoluble residue of Hericium erinceum with combined treatments of enzyme and microwave irradiation Journal of Applied Glycoscience 55: 225– 229 125 Pai-Feng Kao (2012) Structural characterization and antioxidative activity of low-molecular-wights beta-1,3-glucan from the residue of extracted Ganoderma lucidum fruiting bodies Journal of Biomedicine and Biotechnology Article ID 673764, pages 126 Pang Z., Otaka K., Maoka T., Hidaka K., Ishjima S., Oda M., Ohnishi M (2005) Structure of beta glucan oligomer from laminarin and its effect on human monocytes to inhibit the proliferation of U937 cells Biosciene, Biotechnology and Biochemistry 69: 553–558 166 127 Park Y.S (2002) Effect of an exo-polysaccaride from the culture broth of Hericium erinaceuson enhancement of growth and differentiation of rat adrenal nerve cells Cytotechnology 39: 155–162 128 Peucheret P., Fons F., and Rapior S (2006) Biological and pharmacological activity of higher fungi: 20 year retrospective analysis Cryptogamie Mycologie 27(4): 311–333 129 Philip Skehan, Ritsa Storeng, Dominic Scudiero, Anne Monks, James McMahon, David Vistica, Jonathan T.Warren, Heidi Bokesch, Susan Kenney, and Michael R.B (1990) New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening Journal of the National Cancer Institute 82(13):1107 130 Philippousis A., Diamantopoulou P., Papadopoulou K., Lakhtar H., Roussos S., Parissopoulos G., and Papanikolaou S (2011) Biomass, laccase and endoglucanase production by Lentinula edodes during solid state fermentation of reed grass, bean stalks and wheat straw residues World Journal of Microbiology and Biotechnology 27: 285– 297 131 Radzki W and Kalbarczyk J (2010) Water soluble polysaccharide content in three species of edible and medicinal mushrooms: Lentinula edodes, Pleurotus ostreatus, Agaricus blazei Herva poloniea 56: 31– 38 132 Rau U (2009) Production and structural analysis of the polysaccharide secreted by Trametes (Coriolus) versicolor ATCC 200801 Applied Microbiology and Biotechnology 81: 827–837 133 Ren L., Conrad Perera and Yacine Hemar (2012) Anti-tumor activity of mushroom polysaccharides: a review Food and Function 3: 1118– 1130 134 Rincao V.P., Yamamoto K.A., Ricardo N.M., Soares SA., Meirelles LD., Nozawa C., and Linhares RE (2012) Polysaccharide and extracts 167 from Lentinula edodes: structure features and antiviral activity Virology Journal 9: 37 135 Sakaki T., Takasuka N., Chihara G., and Maeda YY (1976) Antimumor activity of degraded products of lentinan: its correlation with molecular weight Gan 67: 191–195 136 Samuel Irwin (1967) Drug screening and evaluation of new compounds in animal, pp 36–55 In “Animal and clinical Pharmacologic Techniques in Drug Evaluation” - Med Pub Chicago 137 Sano M., Yoshino K., Matsuzawa T., and Ikekawa T (2002) Inhibitory effects of edible higher basidiomycetes mushroom extracts on mouse type IV allergy International of Medicinal Mushrooms 4:37–41 138 Santos G.W and Masour H (1968) Cloning of syngeneic Hematopoietic cells in the spleens of mice and rats pretreated with cytotoxic drugs Blood 32: 630–637 139 Sasaki T., Takasuka N., Chihara G., and Maeda Y.Y (1976) Antitumor activity of degraded products of lentinan: its correlation with molecular weight Gan 67: 191–195 140 Seok L.J., Min K.M., Cho J.Y., and Hong E.K (2009) Study of macrophage activation and structural characteristics of purified polysaccharides from the fruiting body of Hericium erinaceus Journal of Microbiology and Biotechnology 19(9): 951–959 141 Seviour R.J, Schmid F., and Campbel B.S (2011) Fungal exopolysaccharides, chaper In Polysaccharides in Medicinal and Pharmaceutical Application Published by Smithers Rapra, UK 142 Shela G., Olga M B., Elena K., Antonin L., Milan C., Nuria G M., Ratiporn H., Yong- Seo P., Soon-Teck J., and Simon T (2004) Bioactive compounds and antioxidant potential in fresh and dried Jaffa sweeties, a new kind of citrus fruit Journal of the Science of Food and Agriculture 84(12): 1459–1463 168 143 Shi B J., Nie X H., Chen L Z., Liu Y L., and Tao W Y (2007) Anticancer activities of a chemically sulfated polysaccharide obtained from Grifola frondosa and its combination with 5-Fluorouracil against human gastric carcinoma cells Carbohydrate polymers 68(4): 687– 692 144 Silman I and Sussman J.L (2005) Acetylcholinesterase: Classical and non-classical functions and pharmacology Current opinion pharmacology 5: 293–302 145 Skehan P., Storeng R., Scudiero D., Monks A., McMahon J., Vistica D., Warren J.T., Bokesch H., Kenney S and Boyd M.R (1991) New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer agents European Journal of Cancer 27:1162–1168 146 Smith J., Rowan and Sullivan R (2002) Medicinal mushrooms: their therapeutic properties and current clinical use with special emphasis on cancer treatments Cancer Research UK, University of Strathclyde Page 2463 147 Smith J E., Rowan N.J., and Sullivan R (2002) Medicinal mushrooms: a rapidly developing area of biotechnology for cancer therapy and other bioactivities Biotechnology letters 24(22): 1839–1845 148 Sobieralski K., Siwulski M., Lisiecka J., Jedryczka M., Golak I., and Fruzyn SJW (2012) Fungi-derived beta glucan as a component of functional food Acta Scientiarum Polonorum 11(4): 111–128 149 Son CG., Shin JW., Cho JH., Cho CH., Yun CH., and Han SH (2006) Induction of murine interleukin-1 β-expression by water soluble components from Hericium erinaceum Acta Pharmacologica Sinica 27(8):10581064 150 Su C.Y, Shiao M.S and Wang C.T (1999) Predominant inhibition of ganodermic acid S on the thromboxane A2-dependent pathway in 169 human platelets response to collagen Biochimica et Biophysica Acta 1437:223–34 151 Sugiyama K., Akachi T., and Yamakawa A (1995) Eritadenine induced alteration of hepatic phospholipid metabolism in relation to its hypocholesterolemic action in rats Nutritional Biochemistry 6: 8087 152 Surenjav U., Zhang L., Xu X., Zhang X., and Zeng F (2006) Effects of molecular structure on antitumor activities of (1-3) β- glucans from different Lentinus edodes Carbohydrate Polymer 63:97–104 153 Tabata K., Ito W., Kojima T., Kawabata S., and Misaki A (1981) Ultrasonic degradation of schizophyllan, an antitumor polysaccharide produced by Schizophyllum commune Fries Carbohydrate Research 89(1): 121–135 154 Tan R X., and Chen J H (2003) The cerebrosides Natural product reports 20(5): 509–534 155 Thoma C.R., Zimmermann M., Agarkova I., Kelm JM., and Krek W (2014) 3D cell culture systems modeling tumor growth determinants in cancer target discovery Advanced Drug Delivery Reviews 6970:29–41 156 Turner A (1965) Screening methods in pharmacology, Academic press, New York and London, pp 60–68 157 Villares A., Vivarancho L.M., and Guillamon E (2012) Structural features and healthy properties of polysaccharides occurring in mushrooms Agriculture 2: 452–471 158 Vincen E.C., and Liu F (2000) Immunomodulation and anticancer activity of polysaccharide-protein complexes Current Medicinal Chemistry 7: 715–729 159 Volman J.J., Ramakers J.D., and Plat J (2008) Dietary modulation of immune function by beta glucan Physiology and Behavior 94: 276284 170 160 Volpon L., Young C.R., Matte A and Gehring K (2006) NMR structure of the enzyme GatB of the galactitol-specific phosphoenolpyruvatedependent phosphotransferase system and its interaction with GatA Protein Science 15(10): 2435–2441 161 Wang J., Zhang L., Yu Y., and Cheung PC (2009) Enhancement of antitumor activities in sulfated and carboxymethylated polysaccharides of Ganoderma lucidum Journal of Agriculural and Food Chemistry 57:10565–10572 162 Wang J and Zhang L (2009) Structure and chain conformation of five water-soluble derivatives of a b-D-glucan isolated from Ganoderma lucidum Carbohydrate Research 344: 105–112 163 Wang J.C., Shu H.H., Wang J.T., Chen K.S., and Chia Y.C (2005) Hypoglycemic effect of extract of Hericium erinaceus Journal of the Science of Food and Agriculture 85: 641646 164 Wang X., Xu X., and Zhang L (2008) Thermally induced conformation transition of triple – helical lentinan in NaCL aqueous solution The Journal of Physical Chemistry 112: 1034310351 165 Wang X Z., Wu Y L., Jiang S., and Singh G (2000) General and efficient syntheses of C18-4, 8-Sphingadienines via SN2'-Type homoallylic coupling reactions mediated by thioether-stabilized copper reagents The Journal of organic chemistry 65(24): 8146–8151 166 Wasser S P and Weis A L (1999) Medicinal properties of substances occurring in higher basidiomycetes mushrooms: current perspectives, International Journal of Medicinal Mushrooms 1:31–62 167 Wasser S.P (2002): Medicinal mushrooms as a source of antitumor and immunomodulating polysaccharides Application of Microbiological Biotechnology 60: 258–274 168 Wasser S.P (2005) Shiitake (Lentinus edodes) In Encyclopedia of dietary supplements Marcel Dekker, Inc New York, pp 653664 171 169 WHO (2000) Working group on the safety and efficacy of herbal medicine Report of regional office for the Western Pacific of the World Health Organisation 170 Williamson G., Kroon P.A., and Faulds C.B (1998) Hairy plant polysachcaride: a close shave with microbial esterases Microbiology 144:2011–2023 171 Wong K.H., Naidu M., David P., Abdulla MA., Abdullah N., Kuppusamyl UR., and Sabaranam V (2011) Peripheral nerve regeneration following crush injury to rat peroneal nerve by aqueous extract of medicinal mushroom Hericium erinaceus (Bull.:Fr) Pers (Aphyllophoromycetideae) Evidence based Complementary and Alternative Medicine Article ID 580752, 10 pages 172 Wong K.H., Sabaratnam V., Abdullah N., Kuppusamy U.R., and Naidu M (2009) Effects of cultivation techniques and processing on antimicrobial and antioxidant activities of Hericium erinaceus (Bull.:Fr.) Pers Extract Food Technology and Biotechnology 47(1):4755 173 Xu Z., Chen X., Zhong Z., Chen L., and Wang Y (2011) Ganoderma lucidum polysaccharides: immunomodulation and potential anti-tumor activities The American Journal of Chinese Medicine 39(1): 15–27 174 Yamamoto Y (1977) Immunopotentiating activity of the water-soluble lignin rich fractions prepared from LEM, the extract of the solid culture medium of Lentinus edodes mycelia Bioscience, Biotechnology and Biochemistry 61: 19091912 175 Yanaki T., Ito W., Tabata K., Kojima T., Norisuye T., Takano N., and Fujita H (1983) Corelation between the anti-tumor activity of a polysaccharide schizophyllan and its triple-helical conformation in dilute aqueous solution Biophysical Chemistry 17: 337–342 172 176 Yang BK, Park JB, and Song CH (2003) Hypolipidemic effect of an Exobiopolymer produced from a submerged mycelial culture of Hericium erinaceus Bioscience Biotechnology and Biochemistry 67: 1292–1298 177 Yim M.H., Shin J.W., Son J.Y., Oh SM., Han SH., Cho JH., Cho CK., Yoo HS., Lee YW., and Son CG (2007) Soluble components of Hericium erinaceum induce NK cell activation via production of interleukin 12 in mice splenocytes Acta Pharmacologica Sinica 28(6):901907 178 Shin J.Y., Lee S., Bae IY., Yoo SH., and Lee HG (2007) Structural and biological study of carboxymethylated Phellinus linteus polysaccharides Journal of Agricultural and Food Chemistry 55: 3368−3372 179 Yoshida O., Nakashima H., Yoshida T., Kaneko Y., Yamamoto I., Matsuzaki K., Uryu T., and Yamamoto N (1988) Sulfation of the immunomodulating polysaccharide lentinan: A novel strategy for antivirals to human immunodeficiency virus (HIV) Biochemical pharmacology 37(15): 2887–2981 180 Yu P., Maenz D.D., McKinnon J.J., Racz V.J., and Christensen D.A (2002) Release of ferulic acid from oat hulls by Aspergillus ferulic acid esterase and Trichoderma xylanase Journal of Agricultural and Food Chemistry 50:1625–1630 181 Yue J.M., Chen S.N., Lin Z.W and Han-Dong Sun (2001) Sterols from the fungus Lactarium volemus Phytochemistry 56: 801–806 182 Yusoo S., Yutaka T and Minoru T (2001) Chemical constituents of Inonotus obliquus IV Eurasian Journal of Forest Research 2: 27 –30 183 Zhan, Z J., and Yue, J M (2003) New glycosphingolipids from the fungus Catathelasma ventricosa Journal of Natural products 66(7): 1013–1016 173 184 Zhang M., Cui S.W., Cheung P.C.K., and Wang Q (2007) Antitumor polysaccharides from mushrooms: a review on their isolation process, structural characteristics and antitumor activity Trend in Food Science and Technology 18: 4–19 185 Zhang Z., Lv G., Pan H., Panday A., He W., and Fan L (2012) Antioxidant and hepatoprotective potential of endo polysaccharide from Hericium erinaceus grown on tofu whey International Journal of biological Macromolecules 51: 1140–1146 186 Zhou L., Zhang O., Zhang Y., Liu, J., and Cao Y (2009) The shiitake mushroom-derived immuno-stimulant lentinan protects against murine malaria blood-stage infection by evoking adaptive immuneresponses Int Immunopharmacology 9: 45562 187 Zaidman, B.; Yassin, M.; Mahajana, J.; Wasser, S.P Medicinal mushroom modulators of molecular targets as cancer therapeutics Appl Microbiol Biotechnol., 2005, 67, 453-468 174 i ... đi? ?u trị ung thư số nấm dược li? ?u nuôi trồng Việt Nam, tiến hành thực đề tài ? ?Nghiên c? ?u chiết tách chất có hoạt tính kháng u đi? ?u biến miễn dịch từ hai loài nấm h? ?u thủ (Hericium erinaceus). .. erinaceus) nấm hương (Lentinula edodes) nuôi trồng Việt Nam? ?? Trong khuôn khổ luận án, tập trung nghiên nội dung chủ y? ?u sau: Tách chiết số hợp chất trao đổi thứ cấp, polysaccharide gi? ?u glucan từ thể... Karst Hericium erinaceus (bull.:Fr.) Pers Inonotus obliquus (Pers.:Fr.) Bond.et Sing Lenzites betulina (L.:Fr.) Fr Laetiporus sulphurous (Bull.:Fr.) Murr Ganodermatales Ganoderma lucidum (Curt.:Fr.)