Đang tải... (xem toàn văn)
Ứng dụng phương pháp sinh học để tổng hợp CHITOSAN từ phế liệu chế biến thủy sản
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ỨNG DỤNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC ĐỂ TỔNG HỢP CHITOSAN TỪ PHẾ LIỆU CHẾ BIẾN THỦY SẢN Mã số: Đ2013-02-53 Chủ nhiệm đề tài: TS Bùi Xuân Đông Đà Nẵng, 12/2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ỨNG DỤNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC ĐỂ TỔNG HỢP CHITOSAN TỪ PHẾ LIỆU CHẾ BIẾN THỦY SẢN Mã số: Đ2013-02-53 Xác nhận quan chủ trì đề tài (ký, họ tên, đóng dấu) Đà Nẵng, 12/2013 Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI TT Họ tên Đơn vị công tác lĩnh vực chuyên môn Khoa Hóa - Trƣờng Đại học Bách Khoa, Đại học Đà Nẵng KS Trƣơng Văn Thiên KS Phạm Thị Kim Thảo Khoa Hóa - Trƣờng Đại học Bách Khoa, Đại học Đà Nẵng KS Nguyễn Xuân Hoàng Khoa Hóa - Trƣờng Đại học Bách Khoa, Đại học Đà Nẵng ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH Tên đơn vị nƣớc Công ty cổ phần XNK Thủy sản Miền trung: Công ty chế biến xuất thủy sản Thọ Quang Họ tên ngƣời đại diện đơn vị Nguyễn Anh Tuấn MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC BẢNG BIỂU DANH MỤC HÌNH VẼ CÁC CHỮ VIẾT TẮT THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 10 INFORMATION ON RESEARCH RESULTS 12 MỞ ĐẦU 14 Chƣơng I - TỔNG QUAN TÀI LIỆU 15 1.1 Tổng quan công nghệ sản xuất chitin/chitosan 15 1.1.1 Giới thiệu chitin 15 1.1.2 Giới thiệu chitosan 16 1.1.3 Tính chất vật lý tính chất hóa học chitin/chitosan 17 1.1.4 Các phƣơng pháp thu nhận chitin 19 1.1.5 Thu nhận chitosan 25 1.2 Tổng quan vi khuẩn Bacsillus subtilis enzyme protease 30 1.2.1 Giới thiệu vi khuẩn Bacillus subtilis 30 1.2.2 Giới thiệu enzyme protease 32 1.2.3 Một số nghiên cứu ứng dụng Bacillus subtilis tác giả nƣớc 37 1.3 Các lĩnh vực ứng dụng chitin/chitosan 37 1.3.1 Trong y học 38 1.3.2 Trong xử lý nƣớc thải làm nƣớc sinh hoạt 39 1.3.3 Trong nông nghiệp 39 1.3.4 Trong mỹ phẩm 40 1.3.5 Trong thực phẩm 40 Chƣơng - NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 42 2.1 Nguyên liệu, hóa chất thiết bị 42 2.1.1 Nguyên liệu: 42 2.1.2 Hoá chất thiết bị: 43 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 43 2.2.1 Định lƣợng nƣớc 43 2.2.2 Định lƣợng muối Calci carbonat 43 2.2.3 Định lƣợng chitin 44 2.2.4 Phƣơng pháp xác định độ deacetyl chitosan 44 2.2.5 Một số phƣơng pháp xác định khác: 44 2.3 Sơ đồ mô hình thí nghiệm (hình 2.2) 44 2.4 Xử lý số liệu 46 Chƣơng – KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 47 3.1 Kết nghiên cứu khảo sát thành phần hóa học vỏ tôm, nguyên liệu nội tạng cá phƣơng pháp bảo quản nguyên liệu nội tạng cá 47 3.1.1 Thành phần hóa học số nguyên liệu chứa chitin, phổ biến thành phố Đà Nẵng 47 3.1.2 Kết xác định thành phần hóa học nguyên liệu nội tạng cá 48 3.1.3 Kết nghiên cứu bảo quản nguyên liệu nội tạng cá phục vụ thu hồi chế phẩm enzyme protease 48 3.2 Chọn phƣơng pháp thu hồi chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá, khảo sát hoạt độ chế phẩm enzyme protease thu đƣợc 49 3.3 Ảnh hƣởng nhiệt độ thời gian bảo quản lên hoạt tính chế phẩm enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá 52 3.4 Các kết nghiên cứu sản xuất chitin/chitosan ứng dụng enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá 54 3.4.1 Kết nghiên cứu phƣơng pháp xử lý nguyên liệu vỏ tôm trƣớc loại bỏ protein: 55 3.4.2 Kết nghiên cứu phản ứng thủy phân protein nguyên liệu vỏ tôm 56 3.4.3 Kết đánh giá chất lƣợng chitin đƣợc thu nhận phƣơng pháp ứng dụng enzyme protease từ nội tạng cá 59 3.4.4 Đánh giá chất lƣợng chitosan sản xuất từ chitin ứng dụng chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá 60 3.4.5 Kết nghiên cứu xử lý loại phế thải sinh trình xử lý nguyên liệu thành chitin/chitosan 61 3.5 Kết nghiên cứu ứng dụng vi khuẩn B subtilis để loại bỏ protein nguyên liệu vỏ tôm 61 3.5.1 Kết nghiên cứu nhằm chuẩn bị giống vi khuẩn Bacillus subtilis 61 3.5.2 Kết ứng dụng Bacillus Subtilis để loại bỏ protein vỏ tôm 65 3.6 So sánh chất lƣợng chitosan sản xuất theo phƣơng pháp hóa học ứng dụng công nghệ sinh học 70 3.7 Đề xuất sơ đồ công nghệ sản xuất chitin/chitosan ứng dụng công nghệ sinh học 71 3.6.1 Dây chuyền công nghệ phức hợp sản xuất chitin/chitosan ứng dụng chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá (hình 3.18) 71 3.6.2 Dây chuyền công nghệ sản xuất chitin/chitosan ứng dụng vi khuẩn B.subtilis (hình 3.19) 72 KẾT LUẬN 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO 75 PHỤ LỤC 78 Phụ lục 1: Phƣơng pháp pha loãng thập phân 78 Phụ lục 2: Môi trƣờng hoạt hoá giống (pH=6,5) 78 Phụ lục 3: Môi trƣờng kiểm tra hoạt lực enzyme 78 Phụ lục 4: Thành phần thuốc nhuộm Amido-Black 78 Phụ lục 5: Môi trƣờng nhân giống cấp 78 Phụ lục 6: Môi trƣờng nhân giống cấp 79 Phụ lục 7: Phƣơng pháp chuẩn độ phooc-môn 79 Phụ lục 8: Phƣơng pháp chuẩn độ Kjeldahl 80 Phụ lục 9: Môi trƣờng kiểm tra hoạt lực enzyme 81 Phụ lục 10: Thu nhận chitin/chitosan phƣơng pháp hóa học (mẫu đối chứng) 81 Phụ lục 11: Thu nhận chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá 82 Phụ lục 12: Nghiên cứu trình thủy phân protein vỏ đầu tôm chế phẩm enzyme protease, thu nhận từ nội tạng cá 82 Phụ lục 13: Nghiên cứu trình thủy phân protein vỏ đầu tôm vi sinh vật Bacillus subtillis 83 Phụ lục 14: Các bƣớc tiến hành nghiên cứu phƣơng pháp tách chiết chitin sử dụng vi khuẩn B Subtilis 83 DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 3.1 Thành phần hóa học nguyên liệu vỏ tôm 47 Bảng 3.2 - Thành phần hóa học nguyên liệu nội tạng cá 48 Bảng 3.3 - Một số tính chất chế phẩm protease thu nhận từ nguyên liệu tƣơi nguyên liệu đông lạnh 51 Bảng 3.4 – Một số tiêu chất lƣợng chitin sản xuất phƣơng pháp ứng dụng enzyme protease từ nội tạng cá 60 Bảng 3.5 – Một số đặc điểm chất lƣợng chitosan thu nhận từ chitin tách chiết từ vỏ tôm ứng dụng enzyme protease từ nội tạng cá 60 Bảng 3.6 – Một số đặc điểm phế thải rắn lỏng 61 Bảng 3.7 - Mật độ khuẩn lạc nuôi cấy môi trƣờng hoạt hoá với độ pha loãng khác 62 Bảng 3.8 - Đƣờng kính vòng thuỷ phân khuẩn lạc 63 Bảng 3.9 - Sự giảm khối lƣợng vỏ tôm qua công đoạn 70 Bảng 3.10 – Một số tiêu chất lƣợng chitin sản xuất phƣơng pháp ứng dụng vi khuẩn B subtilis 70 Bảng 3.11 – So sánh số đặc điểm chất lƣợng chitosan sản xuất theo phƣơng pháp hóa học ứng dụng công nghệ sinh học 71 DANH MỤC HÌNH VẼ Hình 1.1: Công thức cấu tạo chitin 16 Hình 1.2 – Công thức cấu tạo chitosan 17 Hình 1.3 – Sơ đồ tổng quát thu nhận chitin phƣơng pháp hóa học 19 Hình 1.4 - Các phƣơng án thu nhận chitin 20 từ nguồn nguyên liệu khác 20 Hình 1.5 – Kriel 21 Hình 1.6 – Phản ứng tóm tắt trình điều chế chitosan 26 Hình 1.7 - Máy sấy, tạo hạt loại FL 30 Hình 1.8 - Thiết bị nghiền tới kích thƣớc siêu nhỏ Cage-Paktor ® 30 Hình 1.9 - Vi khuẩn Bacillus subtilis sau nhuộm gram 31 Hình 1.10 - Hình ảnh đĩa khuẩn lạc vi khuẩn Bacillus subtilis 31 Hình 2.1 – Sự khác số nguyên liệu tôm, vỏ chúng dùng để thu nhận chitin/chitosan 42 Hình 2.2 – Sơ đồ mô hình bƣớc thực nghiên cứu 46 Hình 3.1 - Ảnh hƣởng thời gian bảo quản lên tiêu chất lƣợng nội tạng cá bảo quản nhiệt độ -18 ÷ -200C 49 Hình 3.2 - Biểu đồ phụ thuộc hoạt độ nhóm enzyme protease 50 vùng pH khác 50 Hình 3.3 - Sơ đồ quy trình tách chiết enzyme protease 51 từ nội tạng cá 51 Hình 3.4 - Chế phẩm enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá đông lạnh 52 Hình 3.5 – Sự phụ thuộc hoạt độ chế phẩm enzyme protease 53 vào nhiệt độ môi trƣờng 53 Hình 3.6 - Ảnh hƣởng thời gian bảo quản lên hoạt độ enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá 53 Hình 3.7 - Ảnh hƣởng thời gian lên độ khử khoáng hàm lƣợng chất khoáng lại vỏ tôm 56 Hình 3.8 – Sự phụ thuộc độ khử protein nguyên liệu vỏ tôm vào thời gian thủy phân 57 Hình 3.9 – Sự phụ thuộc độ khử protein vào nồng độ chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá 58 Hình 3.10 - Ảnh hƣởng nhiệt độ lên phản ứng enzyme thủy phân protein nguyên liệu 59 Hình 3.11 - Đĩa khuẩn lạc sau nhuộm thuốc nhuộm Amido-Black 62 Sau nhuộm quan sát thấy chung quanh khuẩn lạc xuất vòng thuỷ phân màu sáng, vùng môi trƣờng lại có màu xanh đậm thuốc nhuộm nhƣ hình 3.11 63 Hình 3.12 - Hình thái vi khuẩn Bacillus subtilis soi dƣới kính hiển vi 64 Hình 3.13 - Vòng thuỷ phân vi khuẩn Bacillus subtilis sau nhân giống cấp 64 Hình 3.14 - Vòng thuỷ phân vi khuẩn Bacillus subtilis sau nhân giống cấp 64 Hình 3.15 – Sự thay đổi hàm lƣợng đạm hòa tan môi trƣờng chứa vi khuẩn B Subtilis vỏ tôm nhiệt độ 480C 66 Hình 3.16 - Hàm lƣợng đạm hòa tan thu đƣợc thủy phân protein vỏ tôm với tỉ lệ bổ sung giống khác 480C 67 Hình 3.17 – Sự phụ thuộc trình thủy phân protein vỏ tôm vào nhiệt độ 68 Hình 3.18 – Sơ đồ công nghệ phức hợp sản xuất chitin/chitosan ứng dụng chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá 72 Hình 3.19 – Sơ đồ công nghệ phức hợp sản xuất chitin/chitosan ứng dụng vi khuẩn B subtilis 73 CÁC CHỮ VIẾT TẮT Chitin Chitosan KK KP KA EDTA G20X Vỏ tôm VSV QMAFAM : : : : : : : : : : poly (1,4) - acetamido - deoxy - - D glucose poly (1,4) -2-amino-2-deoxy-β-D-glucan Quá trình khử khoáng Quá trình khử protein Công đoạn deacetyl Etilendiamin tetraaxetic axit Enzyme proteinase protosubtilina Đầu tôm + vỏ tôm Vi sinh vật Quantity of Mesophilic Aerobic and Facultative Anaerobic Microorganisms ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG TRƢỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thông tin chung: - Tên đề tài: Ứng dụng phƣơng pháp sinh học để tổng hợp chitosan từ phế liệu chế biến thủy sản - Mã số: Đ 2013-02-53 - Chủ nhiệm: TS Bùi Xuân Đông - Thành viên tham gia: KS Phạm Thị Kim Thảo, KS Nguyễn Xuân Hoàng, KS Trƣơng Văn Thiên - Cơ quan chủ trì: Trƣờng Đại học Bách Khoa – Đại học Đà Nẵng - Thời gian thực hiện: từ 10/04 – 30/12/2013 Mục tiêu: Ứng dụng phƣơng pháp sinh học để sản xuất chitin/chitosan nhằm hạn chế sử dụng hóa chất, gây ô nhiễm môi trƣờng Tính sáng tạo: Sử dụng khả xúc tác phản ứng enzyme protease nội tạng cá enzyme protease vi khuẩn B subtilis để loại bỏ protein khỏi chitin vỏ tôm Tóm tắt kết nghiên cứu: Trên sở nghiên cứu trình khử protein vỏ tôm biện pháp ứng dụng công nghệ sinh học thực nghiệm sản xuất chitin/chitosan quy mô pilot theo công nghệ đƣợc nghiên cứu thu đƣợc kết nhƣ sau: - Sản phẩm chitin sản xuất ứng dụng chế phẩm enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá có chất lƣợng tốt với hàm lƣợng protein nhỏ 0,5%, tiêu vi sinh vật đạt chuẩn an toàn (SanPin 2.3.2.1078-01 – LB Nga); chitosan sản xuất từ loại chitin có độ deacetyl 79-89% độ nhớt cao đến 18 dl/g phù hợp với báo cáo khoa học nƣớc quốc tế - Sản phẩm chitin sản xuất ứng dụng vi khuẩn B subtilis có tiêu cảm quan thấp, vi sinh vật tổng số tƣơng đối cao mức 3,3x105 nhƣng nằm giới 10 so với chitosan sản xuất theo phƣơng pháp hóa học Tuy nhiên trình bảo quản chitin sản xuất theo phƣơng pháp ứng dụng vi khuẩn B subtilis phân tích tiêu vi sinh vật, nhận thấy vi sinh vật tổng số (QMAFAM) lớn tháng bảo quản thứ mức 3,3˟105 CFU/g, điều ảnh hƣởng đến chất lƣợng chitin So sánh màu sắc cho thấy chitin/chitosan sản xuất theo phƣơng pháp hóa học ứng dụng chế phẩm enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá có ƣu điểm so với phƣơng pháp ứng dụng vi khuẩn B subtilis Bảng 3.11 – So sánh số đặc điểm chất lƣợng chitosan sản xuất theo phƣơng pháp hóa học ứng dụng công nghệ sinh học Chỉ tiêu chất lƣợng Độ deacetyl, % Độ nhớt [η], dl/g Hàm lƣợng, %: Nƣớc Chất khoáng Các chất không hòa tan Đặc điểm sản phẩm chitosan sản xuất theo phƣơng pháp hóa học ứng dụng protease ứng dụng vi khuẩn từ nội tạng cá B subtilis 79 79-80 82 10,9 14,9 - 18 18,1 8,8 0,1 0,3 8,7 0,2 0,3 8,7 0,2 0,4 Vấn đề xử lý chất màu chitin biện pháp khử khoáng công nghệ sản xuất chitin phƣơng pháp ứng dụng vi khuẩn B subtilis tiếp tục nghiên cứu nghiên cứu 3.7 Đề xuất sơ đồ công nghệ sản xuất chitin/chitosan ứng dụng công nghệ sinh học Từ kết nghiên cứu nhƣ trên, đề xuất dây chuyền công nghệ xử lý vỏ tôm thu hồi hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học: chất màu carotenoid, chitin, chitosan ứng dụng giải pháp công nghệ sinh học nhƣ sau: 3.6.1 Dây chuyền công nghệ phức hợp sản xuất chitin/chitosan ứng dụng chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá (hình 3.18) 71 Vỏ tôm Rửa Sấy (t=400C; τ = 48h) Tách pha nƣớc Nghiền (d = 1-3mm) Tách lipid (bằng cồn 96 độ; t=600C, τ = 2h) Dịch chiết Sấy (t=600C; τ = 5h) Xử lý với hexan Loại bỏ hexan KK (HCl, t=250C, τ = 2h) Carotenoid Điều chỉnh pH =2-2,5 KP CP enzyme (t=400C; τ=72h) Dịch thủy phân Rửa (pH = 7) Thức ăn gia súc Sấy (t=600C; τ = 5h) Chitin Deacetyl với NaOH 50% (t=900; τ = 1h; w/w = 1:3) Sấy (t=600C; τ = 5h) Hình 3.18 – Sơ đồ công nghệ phức hợp sản Chitosan xuất chitin/chitosan ứng dụng chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá 3.6.2 Dây chuyền công nghệ sản xuất chitin/chitosan ứng dụng vi khuẩn B.subtilis (hình 3.19) 72 Vỏ tôm Giống B subtilis Rửa Hoạt hóa giống Sấy (t=40 C; τ = 48h) Nhân giống cấp Nghiền (d = 1-3mm) Cấy giống vi khuẩn (w/w = 20:100) Nhân giống cấp Lên men để KP (t=400C; τ=32h; sục khí) Thu dịch thủy phân Rửa (pH = 7) KK (HCl, t=250C, τ = 2h) Gia nhiệt ( t=1000C, τ = phút) Thu protein kết tủa Chitin Deacetyl với NaOH 50% (t=900; τ = 1h; w/w = 1:3) Thu dịch thủy phân Cô đặc Thức ăn gia súc Sấy (t=600C; τ = 5h) Chitosan Hình 3.19 – Sơ đồ công nghệ phức hợp sản xuất chitin/chitosan ứng dụng vi khuẩn B subtilis 73 KẾT LUẬN Dựa kết nghiên cứu sản xuất thử nghiệm chitin/chitosan ứng dụng biện pháp công nghệ sinh học có rút số kết luận nhƣ sau: - Sản phẩm chitin sản xuất ứng dụng chế phẩm enzyme protease tách chiết từ nội tạng cá có chất lƣợng tốt với hàm lƣợng protein nhỏ 0,5%, tiêu vi sinh vật đạt chuẩn an toàn (SanPin 2.3.2.1078-01 – LB Nga); chitosan sản xuất từ loại chitin có độ deacetyl 79-89% độ nhớt cao đến 18 dl/g phù hợp với báo cáo khoa học nƣớc quốc tế - Sản phẩm chitin sản xuất ứng dụng vi khuẩn B subtilis có tiêu cảm quan thấp, vi sinh vật tổng số tƣơng đối cao mức 3,3˟105 nhƣng nằm giới hạn an toàn (SanPin 2.3.2.1078-01 – LB Nga); chitosan sản xuất từ loại chitin có độ nhớt 18,1 dl/g – có chất lƣợng bảo đảm so với báo cáo nƣớc quốc tế - Công nghệ sản xuất chitin/chitosan ứng dụng công nghệ sinh học sử dụng chế phẩm enzyme từ nội tạng cá vi khuẩn B subtilis góp phần giảm đáng kể lƣợng hóa chất dùng công đoạn khử protein - Bên cạnh sản phẩm thu đƣợc sản phẩm phụ chất màu carotenoid chất màu tự nhiên sử dụng công nghiệp thực phẩm Tuy nhiên, so sánh mức độ phức tạp công nghệ để áp dụng thực tế công nghệ ứng dụng enzyme protease từ nội tạng cá có nhiều ƣu việt 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt 1) Đỗ Thị Bích Thuỷ, Trần Thị Luyến, Nghiên cứu nuôi cấy trực tiếp vi khuẩn Bacillus subtillis để loại protein khỏi phần vỏ phế liệu tôm (PLT), Tạp chí Khoa học – Công nghệ Thuỷ sản số 2/2006 2) Lê Ngọc Tú, Hoá sinh công nghiệp, NXB khoa học- kĩ thuật, Hà Nội 3) Lê Xuân Phƣơng, Vi sinh vật công nghiệp, NXB xây dựng Hà Nội 4) Lƣơng Đức Phẩm, 2003, Công nghệ xử lý nƣớc thải biện pháp sinh học, NXB Giáo dục 5) Nguyễn Đức Lƣợng, Cao Cƣờng, 2003, Thí nghiệm công nghệ sinh học- NXB đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh 6) Nguyễn Văn Mùi (2001), Thực hành hoá sinh học, NXB Đại học Quốc Gia Hà Nội 7) Nguyễn Nhật Thi, 1991 Cá biển Việt nam: Cá xƣơng vịnh Bắc Bộ NXB Khoa học kĩ thuật, Hà Nội 8) Nguyễn Văn Đàn, Ngô Ngọc Khuyến Hợp chất thiên nhiên dùng làm thuốc, Nxb Y học, Hà Nội, 47 - 48 9) Phan Thị Cẩm Vân, Nghiên cứu thu nhận ứng dụng chế phẩm enzyme protease thô dạng bột từ Bacillus subtilis 10) Trần Thị Luyến, Bùi Văn Tú, Nghiên cứu sử dụng Lactobacillus plantarum lên men đầu tôm sú (Penaeus monodon) để thu hồi chitin, Tạp chí Khoa học – Công nghệ Thuỷ sản số 03 – 04/2006 11) Vũ Ngọc Bội, Nghiên cứu trình thuỷ phân protein cá enzyme protease từ Bacillus subtilis, luận án tiến sỹ học, ĐH Quốc Gia TP Hồ Chí Minh Tiếng nƣớc 12) Muzzarelli R.A.A Chitin, Oxford: Pergamon Press, 1977, 309 tr 13) Немцев С В Али Салем Омер Материалы Международной конференции «Технология переработки гидробионтов»ю М.: ВНИРО, 1994, trang 125-127 14) Феофилова Е.П., Терешина В.М., Менорская С.А Микробиология, 1995 75 Т.64, №1, trang 26-30 15) Немцев С.В и др Пчеловодство, 2001 №5, trang 50-51 16) Эрнст Л.К и др Аграрная Россия, 2000 №5, trang 51-57 17) Быков В.П Тезисы, доклады IV Всероссийской конференции « Производство и применение хитина и хитозана» М.,1995, trang 3-5 18) Немцев С.В Материалы III Всесоюз конф «Совершенствование производства хитина и хитозана из панцирьсодержащих отходов криля и пути их использования» М.: ВНИРО, 1992, trang 7-15 19) Hood M.A Absract First Inter Conf Chitin/Chitosan Boston: 1997 P.4445 20) Girand-Guille M.M., Bouligand Y Chitin in Nature and Technology Ed By Muzzarelli R.A.A., C Jenniaux, Gooday G.W.N –Y and L.: Plenum Press, 1986 P.29-35 21) Сафронова Т.М., Выговская Г.П Щиголива Т.Д Биохимические свойства хитинсодержащего сырья Э.И ЦНИИТЭИРХ М., 1974, в.11 trang 3-7 22) А.с 665683 СССР С 08В 37.8 23) Бржески М.М Материалы II Междунар Конф По хитину и хитозану Саппоро, Япония, 1982 Пер С англ КЕ-57232 Киев: Всесоюзный центр перевод, 1983 15 trang 24) Волкова Н.И., Орлова Т.А Тез I Всесоюз Науч Техн Конф По производству и использованию хитина и хитозана из панциря и других ракообразных Владивосток: Дальрыбвтуз, 1983, trang 19-22 25) Пат 4199496 USA Пер с.Англ КЕ-49589 Киев: Всесоюзный центр переводов, 1984 20 trang 26) Пат 3862122 USA Перю с.Англ КЕ-49584 Киев: Всесоюзный центр переводов, 1984 25 trang 27) Chitin and Chitosan: production, properties and usage/ Ed By Academician of the Russian Academy of Agricultural sciences K.G Skriabin, G.A Vikhoreva Dr Sc (Chem), V.P Varlanmov Dr Sc (Chem) Moscow nouka 2002, 360 trang 28) Ricardo A.A, Muzzarelli Fabio Tanfani Carbohydrate Resea rch, No 107 (1982) 189 - 214 76 29) Shigehiro Hirano Chitin biotechnology applications, Elsevier Science, (1996) 237 - 257 30) Shigemasa Y, Morimoto M, Saimoto H, Okamoto Y and Miami S, Applications of chitin and chitosan for biomaterials, Tottori, Japan, 680-855 31) Wenlung Chen and Robin Y - Y Robin A modified chemical procedure for rapid determination of glucosamine and its application for estimation of mold growth in Peanut Kernels and Koji, Agri Food Chemistry, 47 (1999) 32) Timothy J Maher Glucosamine continuing Education Module, New Hope Institute of Retailing (5/2000) - 33) Noirot P (2007) "Replication of the Bacillus subtilis chromosome", Bacillus: Cellular and Molecular Biology (Graumann P, ed.), Caister Academic Press ISBN 978-1-904455-12-7 34) Theruvathil K Sini, Sethumadhavan Santhosh* and Paruthapara T Mathew (2007), Study on the production of chitin and chitosan from shrimp shell by using Bacillus subtilis fermentation, Science Direct 77 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phƣơng pháp pha loãng thập phân Cách tiến hành: hút ml dung dịch từ ống giống cho vào ống nghiệm thứ chứa sẵn ml dung dịch nƣớc muối sinh lý đƣợc tiệt trùng, đảo trộn Sau đó, ta hút ml dung dịch từ ống nghiệm thứ cho vào ống nghiệm thứ hai chứa sẵn ml dung dịch nƣớc muối sinh lý đƣợc tiệt trùng… trình tiếp tục đến ống nghiệm thứ Tƣơng ứng với độ pha loãng, hút 30 µl cho vào đĩa petri chứa sẵn môi trƣờng hoạt hoá giống đƣợc tiệt trùng (phụ lục 2), dùng que trang để phân bố dịch mặt đĩa Cuối cho vào tủ ấm nuôi 35oC, 24 Phụ lục 2: Môi trƣờng hoạt hoá giống (pH=6,5) Cao thịt :0,3% NaCl :0,5% Pepton :1% Aga :2% Cao nấm :1% Phụ lục 3: Môi trƣờng kiểm tra hoạt lực enzyme Aga Casein :2% :2% Phụ lục 4: Thành phần thuốc nhuộm Amido-Black Amido-Black 0,1% pha dung dịch axit acetic 7% Phụ lục 5: Môi trƣờng nhân giống cấp Pepton :1% Cao thịt :0,3% NaCl :0,5% Cao nấm :1% 78 Tinh bột tan :1,75% Phụ lục 6: Môi trƣờng nhân giống cấp Cao thịt :0,05% Pepton :0,5% Cao nấm :0,1% NaCl :0,5% Bột sắn thô :5,2% PLT :1,1% Phụ lục 7: Phƣơng pháp chuẩn độ phooc-môn Nguyên tắc: Nhóm carboxyl amino acid lƣỡng tính, peptid lớn protein đƣợc xác định kĩ thuật chuẩn độ dung dịch nƣớc-etanol formalin Môi trƣờng nƣớc-etanol gây cản trở phân ly nhóm amin, kết trơ môi trƣờng nƣớc, amino acid trở thành acid, nhóm carboxyl amino acid đƣợc chuẩn độ lại kiềm Với đặc tính này, định lƣợng amino acid phƣơng pháp micro Hoá chất: 1.Dung dịch KOH 0,01N ethanol 90% 2.Dung dịch CuCl2 amoniac 0,0025M 3.Cồn tuyệt đối 4.Dung dịch tymolphtalein 0,1% ethanol 90% Cách tiến hành: Lấy 2ml dung dịch chứa amino acid, cho thêm giọt dung dịch tymolphtalein 0,1% ethanol 90% chuẩn độ KOH 0,01 N ethanol 90% đến xuất màu xanh Sau cho thêm 10 ml thể tích cồn tuyệt đối vào 1ml thể tích dung dịch cần chuẩn độ Màu dung dịch biến mất, chuẩn độ lại xuất màu xanh Màu để so sánh với màu chuẩn độ sử dụng dung dịch amoniac CuCl2 0,0025M 79 Tính kết quả: ml dung dịch KOH 0,01N tƣơng đƣơng với 1,4 mg Nitơ Vậy số mg nitơ 1ml dung dịch là: (x*1,4)/ (mg/ml) Phụ lục 8: Phƣơng pháp chuẩn độ Kjeldahl Nguyên tắc: Vô hoá thực phẩm H2SO4 đậm đặc chất xúc tác Dùng kiềm mạnh NaOH để đẩy NH3 từ muối Định lƣợng NH3 dung dịch axit có nồng độ xác định Hoá chất: H2SO4 đậm đặc ( D= 1,84), NaOH 30%, H2SO4 0,1N, NaOH 0,1 N Chất xúc tác: hỗn hợp CuSO4.5H2O: K2SO4= 3,15: 0,35 Thuốc thử : - phenolphtalein cồn tuyệt đối - Thuốc thử hỗn hợp : bromtymol xanh 0,1% nƣớc cất, crezola 0,1% nƣớc cất tỉ lệ hai dung dịch 1:1 Cách tiến hành : Giai đoạn vô hoá: cân g thực phẩm cho vào bình Kjeldahl với 10ml H2SO4 đậm đặc 3,5 xúc tác Lúc đầu đun nhiệt độ thấp sau 30 phút tăng dần nhiệt độ lên cho dung dịch sôi Trong trình đun dịch chuyển từ màu nâu sẫm sang màu cánh gián, đến vàng nhạt cuối dung dịch trắng trong, kết thúc giai đoạn vô hoá Pha loãng dung dịch vô cơ: để nguội bình Kjeldahl sau chuyển toàn mẫu vô hoá vào bình định mức 100ml định mức Giai đoạn cất đạm: lấy 10 ml dung dịch mẫu vô hoá cho vào bình cầu thêm giọt thuốc thử phenolphtalein 30 ml dung dịch NaOH 30% đến dung dịch chuyển sang màu hồng đƣợc Đặt bình cầu lên hệ thống cất đạm Tiến hành cất mẫu cách đun sôi dung dịch bình cầu khoảng 30 phút dùng giấy pH thử xem NH3 hết chƣa Kết quả: Hàm lƣợng nitơ toàn phần X1 theo %: 80 X1 (V V 2) * 0,0014 *1000 G Hàm lƣợng nitơ toàn phần tính X2 1000 ml: X2 (V V 2) * 0,0014 *1000 G V1 : số ml NaOH 0,1 N tiêu tốn cho mẫu trắng V2 : số ml NaOH 0,1 N tiêu tốn cho mẫu thí nghiệm G : số gam thực phẩm cần định lƣợng V : số ml thực phẩm cần định lƣợng 0,0014 : số gam nitơ tƣơng ứng với ml NaOH 0,1 N 1000 : hệ số quy đổi lít Phụ lục 9: Môi trƣờng kiểm tra hoạt lực enzyme Aga :2% Gelatin :2% Phụ lục 10: Thu nhận chitin/chitosan phƣơng pháp hóa học (mẫu đối chứng) Để thu nhận chitin/chitosan phƣơng pháp hóa học tiến hành bƣớc sau: khử protein, khử khoáng, tảy màu lipid Sau phƣơng pháp deacetyl chitin thu đƣợc chitosan Trong nghiên cứu sử dụng phƣơng pháp thu nhận chitin/chitosan đƣợc công ty TNHH Phƣơng Duy (Suntze chemical Co.,LTD) có trụ sở TP Cần Thơ làm mẫu đối chứng -Nghiền vỏ tôm: nghiên cứu phụ phẩm đƣợc nghiền tới kích thƣớc 1-3 mm, điều có hai mặt lợi, thứ đảm bảo đƣợc vận tốc phản ứng xảy ra, mặt khác giảm tổn thất hạt nhỏ loại bỏ dung dịch sau phản ứng -Khử protein: Vỏ tôm đƣợc khử protein pH=7 dung dịch NaOH 0,5-1M nhiệt độ 800C - Khử khoáng: Sau khử protein, tiến hành khử khoáng dung dịch HCl 11,5M nhiệt độ 20-250C Theo quan điểm hóa học, trình khử khoáng dừng lại không khí 81 CO2 thoát từ thiết bị phản ứng Phƣơng trình phản ứng trình khử khoáng - Khử màu: dùng dung dịch 0,25% NaOCl phút - Deacetyl chitin để thu nhận chitosan: trình đƣợc tiến hành môi trƣờng kiềm đậm đặc nhiệt độ cao để khử hoàn toàn nhóm acetyl mạch polymer, từ thu nhận chitosan Quá trình deacetyl đƣợc tiến hành dung dịch NaOH 50% nhiệt độ 90-1350C Phụ lục 11: Thu nhận chế phẩm enzyme protease từ nội tạng cá Nội tạng cá sau giá đông nhiệt độ phòng đến nhiệt độ -1 ÷ 00C đƣợc xay nhỏ máy xay thịt với kích thƣớc 1-3 mm Hỗn hợp nội tạng cá sau xay nhỏ đƣợc phối trộn với nƣớc cất theo tỉ lệ 1:0,5 (w nội tạng: w nƣớc) Cho dung dịch HCl đậm đặc vào hỗn hợp để điều chỉnh pH 1,5 – 2, pH tối ƣu để thu nhận enzyme hoạt động môi trƣờng axit Hỗn hợp đƣợc đặt tủ ấm nhiệt độ 40-500C 40-60 phút để thực trình lên men, trình lên men cần thực khuấy đảo sau phút Sau lên men, hỗn hợp đƣợc ly tâm máy ly tâm với vận tốc 5000 vòng/phút 15 phút Sau tách phần cặn, lọc để thu đƣợc dịch enzyme Dịch enzyme thô đƣợc xác định hoạt độ phƣơng pháp Anson cải tiến Sau bảo quản tủ lạnh để sử dụng để thủy phân loại bỏ protein vỏ tôm Phụ lục 12: Nghiên cứu trình thủy phân protein vỏ đầu tôm chế phẩm enzyme protease, thu nhận từ nội tạng cá Để nghiên cứu trình khử protein chế phẩm enzyme protease thu nhận từ nội tạng cá, tiến hành xác định hoạt độ chế phẩm enzme protease, xác định phụ thuộc hoạt độ enzyme protease vào nhiệt độ môi trƣờng mốc nhiệt độ 20, 30, 40, 50 ,60, 70 800C Từ xác định nhiệt độ tối ƣu để tiến hành thủy phân protein Sau đó, tiến hành khảo sát phụ thuộc độ thủy phân protein vỏ tôm vào nồng độ chế phẩm enzyme protease Từ xác định nồng độ protease tối ƣu để khử protein vỏ đầu tôm 82 Hiệu trình thủy phân protein đƣợc xác định việc xác định hàm lƣợng protein vỏ tôm sau thực trình thủy phân Phụ lục 13: Nghiên cứu trình thủy phân protein vỏ đầu tôm vi sinh vật Bacillus subtillis Để nghiên cứu khả phân giải protein chủng Bacillus subtillis lên vỏ tôm nhằm tìm điều kiện tối ƣu cho trình xảy hiệu nhất, tiến hành thí nghiệm loại protein vỏ tôm cách sử dụng dịch khuẩn Bacillus subtilis điều kiện thí nghiệm khác để chọn kiện tối ƣu Sau so sánh sản phẩm phƣơng pháp với phƣơng pháp hóa học Phụ lục 14: Các bƣớc tiến hành nghiên cứu phƣơng pháp tách chiết chitin sử dụng vi khuẩn B Subtilis Bƣớc 1: Hoạt hoá giống phƣơng pháp pha loãng thập phân Giống sau lấy từ tủ lạnh -20oC, tiến hành hoạt hoá giống phƣơng pháp pha loãng thập phân (phụ lục 1), cấy trải độ pha loãng tƣơng ứng môi trƣờng hoạt hoá (phụ lục 2) Từ việc pha loãng này, chọn đƣợc khuẩn lạc riêng biệt để phục vụ cho bƣớc thí nghiệm Bƣớc 2: Xác định khả tổng hợp protease Bacillus subtilis phƣơng pháp đo đƣờng kính vòng thuỷ phân Sau thu đƣợc khuẩn lạc riêng biệt từ phƣơng pháp pha loãng, tiến hành xác định hoạt lực vi khuẩn nhằm chọn dòng có hoạt lực sinh tổng hợp mạnh Sử dụng môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung chất cảm ứng casein (phụ lục 3) thuốc nhuộm Amido – black (phụ lục 4), đo đƣờng kính vòng thuỷ phân dòng từ so sánh chọn dòng có hoạt lực mạnh Bƣớc 3: Nhân giống cấp Sau chọn đƣợc dòng vi khuẩn có hoạt lực mạnh nhất, tiến hành nhân giống cấp môi trƣờng lỏng có chứa cao nấm, cao thịt, pepton muối (phụ lục 5) Nuôi máy lắc 24 35oC Với môi trƣờng này, vi khuẩn đƣợc cung cấp đầy đủ chất dinh dƣỡng để đảm bảo sinh trƣởng phát triển tốt 83 Giống cấp thu đƣợc đƣợc đem kiểm tra hoạt tính môi trƣờng có chứa gelatin (phụ lục 9) nhuộm dung dịch Amido – black Bƣớc 4: Nhân giống cấp Từ giống cấp 1, tiến hành nuôi giống cấp môi trƣờng có bổ sung bột phế liệu tôm, bột sắn thô (phụ lục 6) Điều kiện nuôi cấy tƣơng tự nhƣ nuôi giống cấp Môi trƣờng giúp vi sinh vật làm quen dần với môi trƣờng có chứa phế liệu vỏ đầu tôm sau Giống sau đem nhân giống cấp đƣợc kiểm tra hoạt lực lần Bƣớc 5: Khảo sát ảnh hƣởng tỉ lệ giống bổ sung vào vỏ đầu tôm lên trình thuỷ phân protein Vỏ đầu tôm đƣợc bổ sung giống cấp với tỉ lệ khảo sát lần lƣợt 10%, 20%, 30% nhiệt độ nuôi cấy 48oC 35 có sục khí Tiến hành xác định lƣợng đạm hoà tan thu đƣợc thuỷ phân vỏ đầu tôm với ba tỉ lệ giống bổ sung phƣơng pháp chuẩn độ phooc –mol nhƣ Từ so sánh chọn tỉ lệ giống bổ sung thích hợp Bƣớc 6: Khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ lên trình thuỷ phân protein Vỏ đầu tôm chọn đƣợc cách xử lý bổ sung lƣợng giống thích hợp, tiếp tục khảo sát ảnh hƣởng nhiệt độ lên trình thuỷ phân Bốn mức nhiệt độ đƣợc chọn để nghiên cứu lần lƣợt 35oC, 42oC, 48oC, 52oC Các bƣớc xác định đạm hoà tan đƣợc tiến hành nhƣ Từ kết thu đƣợc, chọn mức nhiệt độ mà lƣợng protein vỏ đầu tôm đƣợc thuỷ phân cao Bƣớc 7: Khảo sát ảnh hƣởng thời gian lên trình thuỷ phân protein Thời gian thuỷ phân yếu tố ảnh hƣởng lên hiệu trình thuỷ phân mà ảnh hƣởng đến vấn đề kinh tế trình sản xuất Ở khảo sát trình thủy phân thứ trình nuôi cấy, lần lấy mẫu dịch kiểm tra hàm lƣợng đạm hoà tan tạo thành thứ 35 kể từ cho giống cấp vào Dựa kết thu đƣợc, chọn thời gian vỏ tôm đƣợc thuỷ phân protein đạt hiệu kinh tế Bƣớc 8: Phƣơng pháp định hƣớng nghiên cứu xử lý dịch sau thuỷ phân vỏ đầu tôm Sau thuỷ phân tiến hành thu nhận phần vỏ phần dịch Phần dịch 84 đƣợc đem cô đặc nhiệt độ 80oC giờ, sau đem xác định hàm lƣợng đạm toàn phần phƣơng pháp Kjeldahl (phụ lục 8) nồng độ chất khô có mẫu Bƣớc 9: Phƣơng pháp nghiên cứu thu nhận chitin từ vỏ đầu tôm sau thuỷ phân Phần vỏ tôm thu đƣợc sau thuỷ phân đƣợc rửa nƣớc sau đem phơi khô Chúng thử loại khoáng sản phẩm thu đƣợc dung dịch HCl 1N thời gian 350C để thu nhận chitin Lọc rửa sản phẩm dƣới nƣớc máy, sấy khô nhiệt độ 600C sản phẩm khô hoàn toàn 85 [...]... pháp xử lý nguyên liệu vỏ tôm tạo điều kiện thu hồi chitin và toàn bộ các hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học có trong nó, bên cạnh việc hƣớng tới phát triển bền vững trên cơ sở giảm thiểu ô nhiễm môi trƣờng Mục tiêu của nghiên cứu này là ứng dụng phƣơng pháp sinh học để tổng hợp chitosan từ phế liệu chế biến thủy sản nhằm thu đƣợc các sản phẩm chính nhƣ: chitin, chitosan và các sản phẩm phụ nhƣ... 40% tổng lƣợng enzyme bán trên thế giới [2], chúng có nhiều ƣu điểm hơn so với protease của động vật và thực vật do các tính chất của chúng phù hợp với khả năng ứng dụng công nghệ sinh học Các protease có thể đƣợc thu nhận từ vi khuẩn, nấm và xạ khuẩn e) Các yếu tố ảnh hƣởng đến quá trình sinh tổng hợp protease từ vi sinh vật Quá trình tổng hợp enzyme nói chung cũng nhƣ tổng hợp protease ở vi sinh. .. sinh trƣởng phát triển, khả năng sinh tổng hợp enzyme của vi sinh vật cũng nhƣ tính chất của enzyme đƣợc tổng hợp Tùy từng vi sinh vật, nhiệt độ thích hợp có khác nhau: các loại nấm mốc phát triển thích hợp ở nhiệt độ 22-320C, còn các vi khuẩn ở nhiệt độ cao hơn 36-550C Nói chung đa số vi sinh vật sinh tổng hợp enzyme không bền với nhiệt và bị kìm hãm nhanh chóng ở nhiệt độ cao hơn nhiệt độ thích hợp. .. cơ bản: nhóm 1 - phƣơng pháp hóa học, xử lý bằng acid, kiềm…; nhóm 2 - các phƣơng pháp công nghệ sinh học, ứng dụng các chế phẩm enzyme và các vi sinh vật phân giải protein Hình 1.3 – Sơ đồ tổng quát thu nhận chitin bằng phƣơng pháp hóa học a) Xử lý hóa học: 19 Phần lớn các phƣơng pháp thu nhận của nhóm này xây dựng trên một hoặc hai bƣớc làm sạch chitin khỏi protein và các hợp chất khoáng - gọi là... sự sinh trƣởng của vi sinh vật nhƣng lại làm tăng quá trình sinh tổng hợp protease và có thể ngƣợc lại Độ thông khí của môi trƣờng có ảnh hƣởng lớn đến quá trình tổng hợp protease Tuy nhiên ảnh hƣởng này có khác nhau tuỳ theo vi sinh vật Trong một số trƣờng hợp, thiếu oxy tuy có kiềm hãm sự sinh trƣởng của vi sinh vật nhƣng lại làm tăng quá trình tổng hợp protease Lƣợng oxy thích hợp cho quá trình tổng. .. hại đến an toàn sản xuất và môi trƣờng Protein sau khi tách khỏi acid và bazơ từ dịch thủy phân chứa nhiều muối, làm hạn chế khi sử dụng chúng b) Tổng quan các quá trình sinh học sản xuất chitin Ứng dụng enzyme tạo điều kiện “mềm” để xử lý nguyên liệu chứa chitin, có thể gộp nhiều công đoạn làm một nên đơn giản hóa công nghệ Đồng thời giảm thiểu tính khắc nghiệt của môi trƣờng phản ứng lên thiết bị... phần môi trƣờng ảnh hƣởng rất lớn đến khả năng sinh tổng hợp enzyme Để tăng lƣợng enzyme trong môi trƣờng cần lựa chọn nguồn C, N, muối khoáng thích hợp, chọn tỷ lệ nồng độ thích hợp giữa các thành phần này và đặc biệt là cần sử dụng các chất cảm ứng vì protease là enzyme cảm ứng Đối với một vi sinh vật nhất định, điều kiện thích hợp cho quá trình sinh tổng hợp các enzyme khác nhau thì không giống nhau... điều khiển vi sinh vật sinh tổng hợp định hƣớng một loại enzyme xác định * Ảnh hƣởng của nguồn cacbon: Nguồn cacbon thƣờng dùng để nuôi cấy vi sinh vật thƣờng dùng là các glucid: monosacarit, disacarit và cả polysacarit Các chất này ảnh hƣởng khác nhau đến sự sinh tổng hợp enzyme nói chung cũng nhƣ tổng hợp protease ở vi sinh vật Đặc tính tác dụng của nguồn cacbon tuỳ thuộc vào bản chất hoá học của chúng... phụ gia thực phẩm, thành phần chế phẩm y dƣợc đƣợc điều chế bằng cách phân giải chitosan bằng enzyme chitosanase từ vi khuẩn Bacillus № 7-M bền ở pH từ 5-11 Chitosan hòa tan cũng đƣợc điều chế bằng phƣơng pháp enzyme nhƣ sau: xử lý chitosan với độ deacetyl 60-90% bằng enzyme chitosanase trong môi trƣờng acid ở nhiệt độ 30-60 0C Sản phẩm thu nhận đƣợc, tách ra bằng phƣơng pháp siêu âm, có khả năng hòa... việc sử dụng sản phẩm dịch thủy phân gặp phải nhiều hạn chế, ví dụ không sử dụng đƣợc trong thực phẩm hay trong sản xuất thức ăn chăn nuôi Các hƣớng sử dụng chitin và dẫn xuất từ chitin trong thực tế trong những năm gần đây không ngừng đƣợc mở rộng dẫn tới cần tìm kiếm và thử nghiệm các phƣơng pháp mới để thu nhận các polymer sinh học này Một vấn đề có tính thời sự còn tồn tại là nghiên cứu phƣơng pháp ... cứu ứng dụng phƣơng pháp sinh học để tổng hợp chitosan từ phế liệu chế biến thủy sản nhằm thu đƣợc sản phẩm nhƣ: chitin, chitosan sản phẩm phụ nhƣ chất màu carotenoid chế phẩm enzyme protease từ. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ỨNG DỤNG PHƢƠNG PHÁP SINH HỌC ĐỂ TỔNG HỢP CHITOSAN TỪ PHẾ LIỆU CHẾ BIẾN THỦY SẢN Mã số: Đ2013-02-53... KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thông tin chung: - Tên đề tài: Ứng dụng phƣơng pháp sinh học để tổng hợp chitosan từ phế liệu chế biến thủy sản - Mã số: Đ 2013-02-53 - Chủ nhiệm: TS Bùi Xuân Đông - Thành viên