Bộ khoa học công nghệ Viện ứng dụng Công nghệ Trung tâm sinh học thực nghiệm C6 - Thanh Xuân Bắc, Hà Nội _ Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật đề tài Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống nuôi trồng giống hai loài Lan Hài Việt Nam PGS TS Đặng Xuyến Nh 6124 25/9/2006 Hà Nội, 1- 2006 Bản quyền 2006 thuộc TTSHTN Đơn xin chép toàn phần tài liệu phải gửi đến Giám đốc TTSHTN trừ trờng hợp sử dụng với mục đích nghiên cứu BKHVCN TTSHTN BKHVCN TTSHTN BKHVCN TTSHTN Bộ khoa học v công nghệ Viện ứng dụng Công nghệ Trung tâm sinh học thực nghiệm C6 - Thanh Xuân Bắc, H Nội Báo cáo tổng kết khoa học v kỹ thuật đề ti Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống v nuôi trồng giống hai loi Lan Hi Việt Nam PGS TS Đặng Xuyến Nh H Nội, 1- 2006 Bản quyền 2006 thuộc TTSHTN Đơn xin chép ton phần ti liệu ny phải gửi đến Giám đốc TTSHTN trừ trờng hợp sử dụng với mục đích nghiên cứu Danh sánh ngời thực PGS.TS Đặng Xuyến Nh ThS Dơng Hồng Dinh ThS Phạm Tuấn Anh KS Nguyễn Thị Li KS Trần Thị Bình CN Phan Xuân Bình Minh ThS Vũ Thị Lan CN Phạm Mỹ Phơng Những chữ đợc viết tắt báo cáo BAP: 6- Benzylaminopurine NAA: - Naphthaleneacetic Acid TDZ: Thidiazuron VW: Vacin & Went HY: Hyponex MS: Murashige & Skoog BN: Burgeff- 3f RE: Robert Ernst Mục lục Mục lục Danh mục bảng Danh mục biểu đồ Danh mục hình Danh mục hình Phần a: tổng quan tI liệu I Giới thiệu chung II Lan hi Việt Nam 13 III Nuôi trồng Lan Hi 17 IV Sự nẩy mầm hạt Lan 18 V Nhân giống Lan Hi 21 VI Nghiên cứu bảo tồn Lan 25 Phần b - Vật liệu v phơng pháp nghiên cứu 28 I Vật liệu nghiên cứu .28 II Phơng pháp nghiên cứu 31 Phơng pháp gieo hạt in vitro 31 1.1 Tạo vật liệu khởi đầu 31 1.2 Giai đoạn nhân nhanh 33 1.3 Giai đoạn tạo hon chỉnh 36 Nhân giống vô tính cách tách mầm (in vivo) 37 2.1 Nhân giống cách tách mầm có kèm theo thân 37 2.2 Nhân giống cách tách mầm riêng lẻ 37 Chăm sóc vờn ơm 40 3.1 Chăm sóc in vitro 40 3.2 Chăm sóc in vivo 42 Theo dõi nhiệt độ v ánh sáng vờn ơm: 43 Theo dõi sâu bệnh v cách phòng chống 43 III Điều tra trạng hai loi Lan Hi đợc nghiên cứu 43 Phần c - Kết v thảo luận 44 I.Nhân giống phơng pháp gieo hạt in vitro 44 Tạo nguyên liệu ban đầu 44 1.1 ảnh hởng môi trờng khoáng đến tỷ lệ nẩy mầm hạt P hangianum v P gratrixianum 46 1.2 ảnh hởng tuổi đến nẩy mầm hạt P hangianum v P gratrixianum 47 1.3 ảnh hởng chất bổ sung đến nảy mầm hạt P gratrixianum 50 Giai đoạn nhân nhanh 53 2.1 ảnh hởng môi trờng khoáng đến việc nhân nhanh P hangianum v P gratrixianum 53 2.2 ảnh hởng pH 54 2.3 ảnh hởng kinetin v chất bổ sung tới nhân nhanh P hangianum v P gratrixianum 55 2.4 ảnh hởng việc bổ sung BAP, BAP+NAA v dịch táo tới nhân nhanh P gratrixianum 60 Giai đoạn tạo hon chỉnh 63 3.1 ảnh hởng NAA việc tạo hon chỉnh P hangianum v P gratrixianum 63 3.2 ảnh hởng bổ sung dịch chuối lên giai đoạn tạo hon chỉnh P hangianum v P gratrixianum 65 II Nhân giống phơng pháp tách mầm (in vivo) 67 Nhân giống theo cách tách mầm có kèm thân 67 Nhân giống theo cách tách mầm riêng lẻ 68 III Chăm sóc vờn ơm 72 Chăm sóc in vitro đa vờn ơm 73 1.1 ảnh hởng giá thể khác sinh trởng P hangianum v P gratrixianum từ nuôi cấy in vitro đa vờn ơm 73 1.2 ảnh hởng chế độ bón phân đến P hangianum v P gratrixianum in vitro đa vờn ơm 74 Chăm sóc tách mầm (in vivo) P hangianum v P gratrixianum vờn ơm 77 2.1 Chăm sóc đợc tách mầm có kèm thân 77 2.2 Chăm sóc theo cách nhân giống tách mầm riêng lẻ 79 Theo dõi nhiệt độ v ánh sáng vờn ơm 83 3.1 Điều chỉnh ánh sáng vờn ơm hệ thống lới theo mùa 83 3.2 Theo dõi nhiệt độ trung bình mùa hè v mùa đông vờn ơm 83 Theo dõi sâu bệnh v cách phòng chống 83 IV Vi nét trạng hai loi P hangianum v P gratrixianum 85 Phần D - Kết luận 89 Kiến nghị .96 Ti liệu tham khảo 97 Danh mục bảng Bng 1: T l ny mm ca ht Lan Hi trờn cỏc mụi trng khoỏng khỏc 46 Bng 2: S ny mm ca ht Lan Hi tui khỏc 49 Bng 3: nh hng ca hm lng ng n t l ny mm ca P gratrixianum 51 Bng 4: nh hng ca dch chui n ny mm ca P gratrixianum 52 Bng 5: nh hng ca than hot tớnh n ny mm ca ht P gratrixianum 52 Bng 6: nh hng ca mụi trng khoỏng khỏc n nhõn nhanh (ln) 54 Bng 7: nh hng ca pH i vi nhõn nhanh P hangianum v P gratrixianum 55 Bng 8: nh hng ca kinetin n quỏ trỡnh nhõn nhanh P hangianum v P gratrixianum 56 Bng 9: nh hng ca pepton n nhõn nhanh P hangianum v P gratrixianum .57 Bng 10: nh hng ca dch chui n nhõn nhanh P hangianum v P gratrixianum 58 Bng 11: nh hng ca dch c rt n nhõn nhanh P hangianum v P gratrixianum .59 Bng 12: nh hng ca BAP n nhõn nhanh P gratrixianum .60 Bng 13: nh hng ca vic b sung t hp BAP+NAA n nhõn nhanh P gratrixianum 62 Bng 14: nh hng ca dch tỏo n nhõn nhanh P gratrixianum 62 Bng 15: nh hng ca NAA i vi vic to cõy hon chnh .64 Bng 16: nh hng ca dch chui ti giai on to cõy hon chnh 65 Bng 17: Sinh trng ca mm nhng thi im tỏch mm khỏc 68 Bng 18: Sinh trng v phỏt trin ca mm 69 Bng 19: T l sng ca cõy tỏch mm riờng l sau thỏng nuụi trng 70 Bng 20: nh hng ca nhng giỏ th khỏc i vi sinh trng ca P hangianum in vitro m 73 Bng 21: nh hng ca giỏ th ti sinh trng ca P gratrixianum in vitro m 74 Bng 22: nh hng ca ch phõn bún ti cõy in vitro m 75 Bng 23: nh hng ca giỏ th ti sinh trng ca mm 77 Bng 24: nh hng ca phõn bún ti cõy tỏch mm 78 Bng 25: nh hng ca giỏ th ti cõy tỏch mm 80 Bng 26: nh hng ca phõn bún ti sinh trng ca cõy tỏch mm 81 Danh mục biểu đồ Biu 1: T l ny mm ca P hangianum v P gratrixianum trờn cỏc mụi trng khỏc 47 Biu 2: T l ny mm ca ht sau thỏng gieo 49 Biu 3: T l ny mm ca P gratrixianum sau thỏng gieo cy 51 Biu 4: H s nhõn cỏc mụi trng khoỏng khỏc 54 Biu 5: nh hng ca pH ti h s nhõn 55 Biu 6: nh hng ca kinetin ti giai on nhõn nhanh 56 Biu 7: nh hng ca pepton ti nhõn nhanh Lan Hi 57 Biu 8: nh hng ca dch chui n nhõn nhanh Lan Hi 58 Biu 9: nh hng ca dch c rt ti nhõn nhanh 59 Biu 10: nh hng ca BAP ti nhõn nhanh P gratrixianum 61 Danh mục hình Hỡnh 1: Bn phõn b Lan Hi trờn th gii (vựng mu xanh) .9 Hỡnh 2: Hỡnh thỏi cõy v hoa ca Paphiopedilum (Hỡnh v: L Averyanov) 12 Hỡnh 3: Lan Hi Hng Lan P emersonii 14 Hỡnh 4: Lan Hi Henry P henryanum 15 Hỡnh 5: Lan Hi Hng P delenatii 15 Hỡnh 6: Lan Hi Vit Nam P vietnamense .15 Hỡnh 7: Hi Hng P hangianum 16 Hỡnh 8: Lan Hi Tam o P gratrixianum 16 Hỡnh 9: Cõy P hangianum n hoa m Sinh hc Thc nghim 29 Hỡnh 10: Cõy P hangianum gc m Sinh hc Thc nghim 29 Hỡnh 11: Cõy P gratrixianum n hoa m Sinh hc thc nghim 30 Hỡnh 12: Cõy P gratrixianum gc m Sinh hc thc nghim .30 Hỡnh 13: Cõy gc m Sinh hc thc nghim 38 Hỡnh 14: Mm kốm thõn chớnh ca P hangianum 38 Hỡnh 15: Mm riờng l c tỏch t P hangianum 39 Hỡnh 16: Mm kốm thõn chớnh ca P.gratrixianum 39 Hỡnh 17: Mm riờng l c tỏch t P gratrixianum 40 Hỡnh 18: Cỏc loi giỏ th trng Lan 41 Hỡnh 19: Tin hnh th phn P hangianum .44 Hỡnh 20: Cõy P hangianum mang qu m 45 Hỡnh 21: Qu P hangianum .45 Hỡnh 22: Qu P gratrixianum 45 Hỡnh 23: Ny mm ca ht P hangianum trờn mụi trng RE .48 Hỡnh 24: Ny mm ca ht P gratrixianum trờn mụi trng RE 48 Hỡnh 25: Lan Hi giai on nhõn nhanh 53 Hỡnh 26: nh hng ca dch chui ti nhõn nhanh P gratrixianum 59 Hỡnh 27: Lan Hi giai on to cõy hon chnh 64 Hỡnh 28: P gratrixianum tỏch mm 69 Hỡnh 29: P gratrixianum tỏch mm riờng l 69 Hỡnh 30: Cõy P hangianum a m .72 Hỡnh 31: Cõy P gratrixianum a m 72 Hỡnh 32: P gratrixianum in vitro trng trờn cỏc giỏ th khỏc m 76 Hỡnh 33: P hangianum v P gratrixianum in vitro m .76 Hỡnh 34: P hangianum tỏch mm trờn cỏc giỏ th khỏc 80 Hỡnh 35: Cõy P gratrixianum tỏch mm c thỏng 82 Hỡnh 36: Cõy P gratrixianum tỏch mm c nm 82 Hỡnh 37: Khu h t nhiờn ca P hangianum - Tuyờn Quang 86 Hỡnh 38: P hangianum t nhiờn 86 Hỡnh 39: P gratrixianum t nhiờn (nh L Averyanov) 87 Phần a: tổng quan tI liệu I Giới thiệu chung Lan Hi thuộc họ Lan Orchidaceae l họ lớn thực vật có hoa Họ phụ Lan Hi Cypripedioidae bao gồm chi v có khoảng 150 loi phân bố khắp vùng - âu, Bắc Mỹ v Nam Mỹ Năm chi l: - Cypripedium L - Mexipedilum V A Albert & M W Chase - Paphiopedilum Pfitzer - Phragmipedium Rolfe - Selenipedium Rchb.f Trong chi Paphiopedilum l chi Lan Hi lớn nhất, tên Latinh có nghĩa l hi Paphos (Paphos l nơi sinh Aphrodite - vị thần tình yêu v sắc đẹp thần thoại Hy Lạp, gọi l thần Vệ nữ (Venus) theo thần thoại La Mã) Lan Hi l nhóm khác biệt cấu trúc hoa khác thờng với cánh hoa (còn gọi l môi hay cánh môi) hình túi sâu trông giống nh hi nằm vị trí thấp hoa - trở thnh tên chung nhóm Lan ny Chi Lan Hi Paphiopedilum có nguồn gốc châu nhiệt đới, đợc phân bố trải di từ đông ấn Độ, Nepal, Bhutan, Miến Điện qua Nam Trung Hoa đến Đông Nam á, quần đảo Malay, Philippin, Tân Ghinê v quần đảo Solomons Có lẽ từ vùng châu nhiệt đới, Lan Hi di chuyển dần phía Đông tới tận Sulawesi, Tân Ghinê v quần đảo Solomons Thái Bình Dơng nhờ hạt giống nhẹ đợc phát tán Trên sờn đá biến chất, độ cao 800-1000m so với mặt nớc biển nhận thấy dấu vết Hi Hằng bị khai thác rễ Lan Hi Hằng lại bám trực tiếp đá v gần nh treo vách đá dựng đứng Theo Averyanov, P gratrixianum (Hi Tam Đảo) đợc cho l phân bố Bắc Việt Nam (vùng Lo Cai, Lai Châu, Vĩnh Phúc v Thái Nguyên) v Đông Nam Lo (tỉnh Atopeu) Nhng thực thập kỷ vừa qua, loi ny đợc phát ngoi tự nhiên vo năm 1985 dãy núi Tam Đảo, ranh giới hai tỉnh Vĩnh Phúc v Thái Nguyên nh khoa học Việt Nam - Liên Xô (cũ) đợt khảo sát Trong năm gần đây, tất quần thể P gratrixianum bị suy kiệt hon ton Hỡnh 39: P gratrixianum t nhiờn (nh L Averyanov) Tanaka (1998) cho P gratrixianum l loi phổ biến Bắc Việt Nam Nhng theo Averyanov, có lẽ Tanaka quan sát ny 87 điểm buôn bán Lan ngời thu mẫu địa phơng chuyển tới Có thể chúng đợc đa đến từ nh vờn P gratrixianum đợc trồng từ nhiều năm vờn Lan t nhân Sapa hay số vùng khác Cũng theo Averyanov (2003), P gratrixianum bị tuyệt chủng tơng lai gần việc thu mẫu ạt để bán nớc nh nớc ngoi Theo quan sát chúng tôi, điểm thu mua v bán Lan, P gratrixianum trở nên gặp từ năm 2004-2005 Cũng may mắn l ny đợc thu giữ v nuôi trồng số vờn Lan t nhân Sapa m đến đợt thực địa Những dẫn liệu thực tế nh thông tin nh nghiên cứu có uy tín Lan Hi khiến cng củng cố niềm tin l: việc nghiên cứu nhân giống v nuôi trồng Lan Hi nh loi Lan quý khác nớc ta l việc lm cần thiết, nên lm v góp phần vo việc trì đa dạng sinh học, trì chu trình tự nhiên v góp phần vo việc nâng cao chất lợng sống, đời sống tinh thần ngời 88 Phần D - Kết luận Đã xác định đợc môi trờng khoáng v chất bổ sung thích hợp cho giai đoạn nhân giống phơng pháp gieo hạt in vitro P hangianum nh sau: - Môi trờng thích hợp để tạo vật liệu khởi đầu l: RE + (20g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 7g thạch) / lít Tỷ lệ nảy mầm P hangianum môi trờng ny đạt 67% - Môi trờng thích hợp để nhân nhanh P hangianum l: RE + (20g đờng +150ml nớc dừa +2g than hoạt tính + 7g thạch) / lít + 0,4ppm Kinetin, pH=6 Hệ số nhân sau tháng thí nghiệm l 7,0 lần - Môi trờng thích hợp để tạo hon chỉnh P hangianum l: RE + (20g đờng +150ml nớc dừa + 2g than hoạt tính + + 7g thạch) / lít + 60g/l dịch chuối, sau 12 tuần tiêu sinh trởng cao cây, số lá, số rễ trung bình tơng ứng đạt 6,1 cm; 4,4 cái; 5,1 Đã xác định đợc môi trờng khoáng v chất bổ sung thích hợp cho giai đoạn nhân giống phơng pháp gieo hạt in vitro P gratrixianum nh sau: - Môi trờng thích hợp để tạo vật liệu khởi đầu l: RE + (25g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 7g thạch) / lít Tỷ lệ nảy mầm P gratrixianum môi trờng ny đạt 50% - Môi trờng thích hợp để nhân nhanh P gratrixianum l: RE + (20g đờng +150ml nớc dừa +2g than hoạt tính + 7g thạch) / lít + 0,4ppm kinetin, pH= Hệ số nhân sau tháng thí nghiệm l 6,7 lần 89 - Môi trờng thích hợp để tạo hon chỉnh P gratrixianum l: RE + (20g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 7g thạch + 60 g khoai tây) / lít + 0,8ppm NAA, pH = Sau tháng P gratrixianum có số trung bình l 5,7 lá, cao trung bình 6,9cm, số rễ trung bình 2,5 Độ tuổi thích hợp để hạt P hangianum v P gratrixianum cho tỷ lệ nảy mầm cao (tơng ứng l 68% v 75%) l 10 tháng tuổi Trên sở kết nghiên cứu thu đợc, xây dựng đợc quy trình nhân giống hai loi P hangianum v P gratrixianum phơng pháp gieo hạt in vitro nh sau: 90 Quy trình nhân giống P hangianum phơng pháp gieo hạt in vitro Quả 10 tháng tuổi Hạt Khử trùng HgCl2 0,1% 15 phút Gieo hạt nảy mầm (3 tháng) Tạo vật liệu khởi đầu (3 tháng) RE + (20g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 7g thạch) / lít pH = Nhân nhanh (3 tháng) RE + (20g đờng +150ml nớc dừa +2g than hoạt tính + 7g thạch) / lít + 0,4ppm kinetin, pH= Tạo hon chỉnh (12 tháng) RE + (20g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 7g thạch) / lít + 60g dịch chuối, pH = 6, Cây đa vờn ơm Số lá: 3-4 Cao cây: 5-6cm Số rễ: 4-5 rễ 91 Quy trình nhân giống P gratrixianum phơng pháp gieo hạt in vitro Quả 10 tháng tuổi Hạt Khử trùng HgCl2 0,1% 15 phút Gieo hạt nảy mầm (3 tháng) Tạo vật liệu khởi đầu (3 tháng) RE + (25g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 7g thạch) / lít pH = Nhân nhanh (3 tháng) RE + (20g đờng +150ml nớc dừa +2g than hoạt tính + 7g thạch) / lít + 0,4ppm kinetin, pH= Tạo hon chỉnh (12 tháng) RE + (20g đờng +2g than hoạt tính +150ml nớc dừa + 60g khoai tây + 7g thạch) / lít + 0,8ppm NAA, pH = 6, Cây đa vờn ơm Số lá: 5-6 Cao cây: 5-6cm Số rễ: 2-3 rễ 92 Đã nhân giống thnh công phơng pháp tách mầm (in vivo) theo hai kiểu tách: tách mầm kèm theo thân v tách mầm riêng Xác định đợc thời điểm tách mầm thích hợp l sau nở hoa Với P hangianum tách mầm sau nở hoa có kèm thân có tỷ lệ sống 100%, tách mầm riêng l 97% P gratrixianum có tỷ lệ sống tơng ứng l 100% v 76.3% Đã xây dựng đợc quy trình nhân giống phơng pháp tách mầm cây: Quy trình nhân giống P hangianum v P gratrixianum phơng pháp tách mầm Cây trởng thnh có mầm Tách (mầm + thân chính) mầm riêng sau nở hoa Trồng vo giá thể thích hợp P.hangianum: Rêu ngoại + xơ dừa P.gratrixianum: Rêu ngoại + đá bọt núi lửa Vờn ơm 93 Đã bớc đầu nghiên cứu kỹ thuật nuôi trồng in vitro vờn ơm v xác định đợc: Cây P hangianum in vitro đa vờn ơm sinh trởng tốt giá thể: Rêu ngoại + dớn (70:30), có tỷ lệ sống 75% Cây P gratrixianum in vitro đa vờn ơm sinh trởng tốt giá thể: Rêu ngoại + đá bọt núi lửa (70:30) với tỷ lệ sống 95% Chế độ bón phân thích hợp N:P:K (30:10:10) nồng độ 0,5g/l tới lần/ tuần, che sáng l 60-70% Cây trồng vờn ơm 3-4 tháng đủ điều kiện để trồng đại tr v chăm sóc nh trởng thnh Đã xây dựng đợc quy trình chăm sóc in vitro vờn ơm: Quy trình chăm sóc P hangianum v P gratrixianum In vitro đa vờn ơm Cây Trồng vo giá thể thích hợp P.hangianum: Rêu ngoại + dớn P.gratrixianum: Rêu ngoại + đá bọt núi lửa Vờn ơm Phân bón: N:P:K (30:10:10), tới lần/1 tuần Nồng độ 0,5mg/l ánh sáng: Che sáng 60-70% Nớc: Tới lần / ngy vo mùa hè lần / ngy ngy / lần vo mùa đông Cây P hangianum tách mầm trồng vờn ơm sinh trởng tốt giá thể Rêu ngoại + Xơ dừa (70:30), P gratrixianum sinh trởng tốt giá 94 thể: Rêu ngoại + Đá bọt núi lửa (70:30) Chế độ bón phân thích hợp l N:P:K (30:10:10) nồng độ 0,5g/l, tới lần/ tuần, che sáng l 60-70% 10 Đã xây dựng đợc quy trình chăm sóc giống đợc tách mầm vờn ơm Quy trình chăm sóc P hangianum v P gratrixianum Tách mầm vờn ơm Cây Trồng vo giá thể thích hợp P.hangianum: Rêu ngoại + xơ dừa P.gratrixianum: Rêu ngoại + đá bọt núi lửa Vờn ơm Phân bón: N:P:K (30:10:10), tới lần/1 tuần Nồng độ 0,5mg/l ánh sáng: Che sáng 60-70% Nớc: Tới lần / ngy vo mùa hè lần / ngy ngy / lần vo mùa đông 95 Kiến nghị Đề nghị đợc tạo điều kiện để tiếp tục nghiên cứu hon thiện trình nhân giống hai loi Lan Hi nói 96 Ti liệu tham khảo tiếng việt Averyanov L V, Averyanova A L Trích yếu đợc cập nhật hóa loi Việt Nam Nxb Đại học Quốc gia H Nội, 2003 Đặng Xuyến Nh, Phạm Tuấn Anh, Nguyễn Thị Li Nghiên cứu nhân giống số loi Lan Hi Việt Nam Những vấn đề nghiên cứu khoa học sống (Báo cáo khoa học Hội nghị ton quốc 2004, Nghiên cứu khoa học sống, Thái Nguyên, 23/9/2004) H Nội 2004, Nxb khoa học v kỹ thuật, trang 552 555 Ngô Quang Vũ Lm no để bảo vệ nguồn lan tự nhiên Hoa cảnh, 2002, 7: Ngô Quang Vũ Thực trạng loi lan hi Việt Nam Hoa cảnh, 2002, 7: Nguyễn Văn Uyển v cộng Nuôi cấy mô thực vật phục vụ công tác giống trồng Nxb Nông Nghiệp, 1993 Nguyễn Thiện Tịch Lan Việt Nam Q.1 Nxb Nông Nghiệp, Thnh phố Hồ Chí Minh, 2001 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Lâm Hải Lan Hồ Điệp Kỹ thuật chọn tạo, nhân giống v nuôi trồng Nxb Nông Nghiệp, H Nội, 2005 Phạm Bình Quyền, Trơng Quang Học, Phạm Việt Hùng Các nguyên nhân sâu xa suy thoái đa dạng sinh học Việt Nam Quy tắc thẩm định Lan Hi hiệp hội lan hi tỉnh Đi Loan (Thông tin cá nhân) 97 10 Trần Văn Bảo Kỹ thuật nuôi trồng phong lan Nxb Trẻ, Thnh phố Hồ Chí Minh, 1999 11 Tuyển chọn, nhân nhanh v chuyển giao công nghệ trồng hoa (Lan Hi Hồ điệp, Đồng tiền, Lay ơn) Báo cáo tổng kết đề ti khoa học công nghệ Trung tâm kỹ thuật Rau Hoa Quả, 2003 TIếNG ANH 12 Angli, Song Ge, Yi-bo Luo A preliminary study on conservation genetic of an endangered Orchid (Paphiopedilum micranthum) from Sothwestern China Biochemical Genetic, Vol 40, No 5/6, June 2002 P 195 201 13 Averyanov L A, Nguyen Tien Hiep, Phan Ke Loc, Duong Duc Huyen Endangered Vietnamese Paphiopedilums Orchids, 1997, 66(2): 150 155 14 Averyanov L A, Cribb P, Phan Ke Loc, Nguyen Tien Hiep Slipper Orchids of Vietnam, Royal Botanic Gardens, Kew, 2003 15 Braem G J, Baker C.O, Baker M.L The Genus Paphiopedilum Natural History and Cultivation Vol.1 Botanical Publisher Inc, Florida, 1998 16 Bubeck S K (1973) A study of Paphiopedium meristem culture Ph D Dissertation, Rutgers University, New Brunswick 17 Bui Van Le, N T Hang Phuong, L T Anh Hong, K Tran Thanh Van Hight frequency shoot regeneration from Rhynchostylis gigantea (Orchidacae) using thi cell layers Plant Growth Regulation, 1999, 28: 179 185 98 18 Chen J T and Chang W C (2004) In vitro morphogenenesis of fire orchids Procedings of the 8th Asia Pacific Orchid Conference (APOC 8), 308- 313 19 Chen T Y, Chen J T and Chang W C (2004) Plant regeneration through direct shoot bud formation from leaf culture of Paphiopedium orchidf Plant cell, Tissue and Organ culture, 76: 11- 15 20 Duong Tan Nhut et al A wouding method and liquid culture in Paphiopedilum delenatii propagation Propagation of ornamental Plants, (3): 158 163, 2005 http:// www Journal pop Org/ 2005 158 163 htm 21 Huang L C , Lin C J , KuO C I., Huang B L and Murashige T (2001) Paphiopedilum cloning in vitro Scienta Horticuturae, 91 (1- 2): 111121 22 Huettman C A, Preece J E (1993) Thidiazuron: a protein cytokinin or woody plant tissue culture Plant Cell Tiss Organ Cult , 33: 105- 119 23 Ket N V , Hahn E J , Park S Y , Chakrebarty D , Paek K Y Micropropagation of an endangered orchid Anoectochilus formosanus Biological Palantarum, 2004, 48(3): 339 - 344 24 Lee N., Lee Y I.,(1999) Effect of capsual maturity, medium composition and liquid culture on seed germination in vitro of Paphiopedium sp in Taiwan II Taiwan Paphiopedium Society, 10- 12 25 Lin Y H., Chang C and Chang W C (2000) Plant regeneration from callus cuture of a Paphiopedium hybrid Plant Cell, Tissue and Organ Cuture, 62: 21- 25 99 26 Phạm Tuấn Anh, Đặng Xuyến Nh The Genus Paphiopedilum in Vietnam Proceedings of 7th Asia Pacific Orchid Conference, 2001, Nagoya, Japan 27 Perner H, Gruss O Paphiopedilum hangianum, a new species of the genus from Vietnam Die Orchide Suppl, 1999, 6: - 28 Phillip Cribb The Genus Paphiopedilum National History Publications (Borneo) & Royal Botanic Gardens, Kew, 1998 29 Pierik R L M In vitro Culture of Higher plants, Martinus Nijhoff Publisher, 1987 30 Ravindra B Malabadi, Gangadhar S Mulgund & K Nataraja Efficent regeneration of Vanda coerulea, an endangered orchid using thidiazuron Plant cell Tissue and Organ culture, 2004, 76, 289 291 31 Shui En Kao The breeding of Paphiopedilum in Taiwan Proceedings of 8th Asia Pacific Orchid Conference, 3/2004: 138 140 32 Sheelavantmath S S, Murthy H N, Pyati A N, Ashok Kuma H G, Ravishankar B V In vitro propagation of the endangered orchid, Geodonum densiflor (Lam.) Schltr through rhizome section culture Plant Cell Tissue and Organ Culture, 2000, 60: 151 154 33 Steward J., Button J (1975) Tissue culture Studies in Paphiopedium Amer Orchid Soc Bull , 44: 591- 599 34 Stimart D P Ascher P D (1981) In vitro germination of Paphiopedilum seed on a completely defined medium Scientia Horticulturae, 14 (2): 165170 35 Tanaka Cultivation of Paphiopedilum 100 http://www Orchid or jp/ orchid / researcs/ tanaka/ content/ enculture html 36 Yu- Ching Tsai, Junne & Jith Chen Curent status of Paphiopedilum industry and the regulations systems in Taiwan In Proceedings of 8th Asia Pacific Orchid Conference, Taipei, 2004: 442 447 101 [...]... cứu nhân giống bảo tồn các loi Lan trong đó có Lan Hi có thể sẽ l mắt xích nhỏ đóng góp vo việc bảo tồn thiên nhiên v cũng chính l bảo tồn đa dạng sinh học Chính vì vậy, chúng tôi đã đặt vấn đề nghiên cứu đề ti: Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống v nuôi trồng cây giống của hai loi Lan Hi Việt Nam nhằm mục đích đa ra đợc kỹ thuật nhân giống v chăm sóc cây giống hai loi P hangianum v P gratrixianum, góp phần... trờng lớn Kỹ thuật nuôi trồng Lan Hi tại các nớc ny phát triển khá tốt đáp ứng đợc nhu cầu buôn bán v thởng ngoạn loi Lan ny ở nớc ta các thông tin về nuôi trồng Lan Hi v đặc biệt l nuôi trồng cây giống hầu nh cha có IV Sự nẩy mầm của hạt Lan Biện pháp chủ yếu hiện nay đợc áp dụng để nhân giống Lan Hi vẫn l nhân giống hữu tính Có lẽ không phải nhiều ngời biết rằng phần lớn Lan đã đợc nhân giống bằng... trong nhân giống Lan Hi Đặng Xuyến Nh v cộng sự (2004) đã có những nghiên cứu mở đầu trong công tác nhân giống v bảo tồn Lan Hi ở Việt Nam: tiến hnh nghiên cứu nhân giống một số loi Lan Hi đặc trng của Việt Nam nh P gratrixianum, P hangianum, P hirsutissimum v P tranlienianum bằng phơng pháp gieo hạt in vitro Các tác giả đã nghiên cứu đợc môi trờng tạo vật liệu khởi đầu thích hợp cũng nh ảnh hởng của. .. cũng nghiên cứu tìm ra đợc môi trờng nhân nhanh một số loi Lan Hi lai khác 23 Việc nhân giống Lan ở Việt Nam mới chỉ đợc chú ý trong khoảng hai thập kỷ gần đây v phần lớn tập trung vo các giống Lan nhập từ nớc ngoi nh Phalaenopsis, Dendrobium hoặc một số giống địa lan Nói chung những nghiên cứu về nhân giống Lan Hi ở nớc ta còn khá ít ỏi Gần đây cũng đã có một số thông báo về những kết quả nghiên cứu. .. V Nhân giống Lan Hi Từ lâu đã có nhiều cố gắng để nhân giống Lan Hi nhng cho đến nay đây vẫn l một công việc khó khăn Do các đặc điểm riêng của loi nên nuôi cấy nhân tạo Lan Hi vẫn luôn l một thách thức Việc nghiên cứu nhân giống vô tính Lan Hi mới chỉ đạt những kết quả bớc đầu, cha thấy có thông báo về việc nhân nhanh với số lợng lớn Lan Hi bằng phơng pháp nuôi cấy mô Năm 1973, Bubeck đã có những nghiên. .. một số loi Lan vo nơi nguyên thủy của nó - Gieo hạt hoặc nuôi cấy mô các loi Lan quý hiếm đang có nguy cơ bị tiêu diệt - Thnh lập các khu bảo tồn, vờn ơm hoa Lan để bảo tồn nguồn gen Đồng thời cần trao đổi thông tin v hợp tác với nớc ngoi để bảo tồn nguồn Lan cũng nh cần nhân giống v lai tạo các giống Lan có giá trị cao để cung cấp cho ngời trồng Lan Việc nghiên cứu nhân giống bảo tồn các loi Lan trong... tiêu diệt Theo Averyanov, loi Lan ny hầu nh đã bị tuyệt chủng ngoi thiên nhiên Đây l loi Lan hi quý v việc nhân giống rất khó Vì tất cả những nguyên nhân trên đây việc nghiên cứu nhân giống để bảo tồn quỹ gien Lan ny l rất cấp thiết P gratrixianum (Hi Tam Đảo) đã đợc Masters M mô tả đầu tiên vo năm 1905 trên cây mang về từ Việt Nam Đây l loi Lan đặc hữu của Đông dơng (Việt Nam v Lo) Hi Tam Đảo có hoa... rằng tính đa dạng của Lan Hi Việt Nam cao hơn bất cứ nơi no khác trên thế giới Nhiều loi Lan Hi của Việt Nam không chỉ rất hiếm m còn có những loi đặc hữu hẹp, l báu vật quốc gia có tầm quan trọng quốc tế Việc thu mẫu Lan Hi sớm nhất ở Việt Nam có lẽ thuộc về nh truyền giáo ngời Bồ Đo Nha M Ban vo khoảng cuối những năm 80 của thế kỷ 19 với mẫu Lan Hi P concolor, Lan ny sau đó đã đợc nuôi trồng v cho nở... đã đợc lai giống để trồng rất phổ biến ở các nớc âu Mỹ trong khoảng từ 140 năm nay Cây Lan Hi lai nhân tạo nở hoa lần đầu tiên ở vờn ơm của Messrs Veitch năm 1869, đó l cây lai của hai loi P villosum v P barbatum Hiện nay đã có hơn 10.000 loi Lan Hi lai l kết quả lai tạo đợc thực hiện ở các nớc châu Âu, Mỹ, Nhật ở Đi Loan, Hội Lan Hi đã đợc thnh lập để xúc tiến việc nuôi trồng v nhân giống Lan Hi trên... gratrixianum gc trong vn m Sinh hc thc nghim 30 II Phơng pháp nghiên cứu Các bớc nghiên cứu chung để nhân giống hai loi Lan Hi P gratrixianum v P hangianum: Nhân giống hữu tính Nhân giống vô tính Thụ phấn Cây trởng thnh Quả Gieo hạt Nhân nhanh Tách mầm Mầm con Tạo cây hon chỉnh Vờn ơm Vờn ơm 1 Phơng pháp gieo hạt in vitro 1.1 Tạo vật liệu khởi đầu Quả Lan Hi sau khi thụ phấn đạt 6, 8, 10 tháng tuổi đợc thu ... Chính vậy, đặt vấn đề nghiên cứu đề ti: Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống v nuôi trồng giống hai loi Lan Hi Việt Nam nhằm mục đích đa đợc kỹ thuật nhân giống v chăm sóc giống hai loi P hangianum v... số giống địa lan Nói chung nghiên cứu nhân giống Lan Hi nớc ta ỏi Gần có số thông báo kết nghiên cứu bớc đầu nhân giống Lan Hi Đặng Xuyến Nh v cộng (2004) có nghiên cứu mở đầu công tác nhân giống. .. C6 - Thanh Xuân Bắc, H Nội Báo cáo tổng kết khoa học v kỹ thuật đề ti Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống v nuôi trồng giống hai loi Lan Hi Việt Nam PGS TS Đặng Xuyến Nh H Nội, 1- 2006 Bản quyền 2006