Đang tải... (xem toàn văn)
ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo ĐỀ tài nảy mầm TRONG ỐNG NGHIỆM và bảo tồn LOÀI LAN dược LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (l ) SW THÔNG QUA hạt NHÂN tạo
TRÂN TRỌNG KÍNH CHÀO CƠ VÀ CÁC BẠN Nhóm Gồm thành viên: Phạm Tiến Dũng B1303649 Nguyễn Văn Phúc B1303706 Võ Huỳnh Kim Ngọc B1303817 Phạm Thị Thúy Quyên B1303837 Đỗ Đình Thao B1303719 BÁO CÁO NUÔI CẤY MÔ CHỦ ĐỀ: HẠT NHÂN TẠO -ARTIFICIAL SEED CBHD: TS NGUYỄN THỊ PHA ĐỀ TÀI: NẢY MẦM TRONG ỐNG NGHIỆM VÀ BẢO TỒN LOÀI LAN DƯỢC LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (L.) SW THÔNG QUA HẠT NHÂN TẠO MỤC LỤC Giới thiệu Vật liệu phương pháp 2.1 Nguồn cấy 2.2 Môi trường ươm 2.3 Tạo vỏ bọc sodium alginate 2.4 Quy trình tạo hạt nhân tạo 2.5 Khử trùng kiểm tra khả nảy mầm hạt nhân tạo sau bảo quản 2.6 Làm cứng Kết Thảo luận Giới thiệu • Đa dạng chủng lồi, hình thái • Có giá trị cao kinh tế đời sống Giới thiệu • Cymbidium aloifolium L Sw (C aloifolium) loài lan dược liệu có giá trị cao bị đe dọa Nepal • Chữa nhiều bệnh: bại liệt, bỏng, lở loét… • Đang tạo hạt giống nhân tạo phương pháp nuôi cấy mô Vật liệu phương pháp 2.1 Nguồn cấy: - Những phong lan khai thác độ cao 500m từ khu vực nhiệt đới miền Trung Napal, sau hái rửa nước 30 phút để loại bỏ hạt bên ngồi - Sau đem rữa chất tẩy Tween 20 (0.1%) 15 phút rửa lại nước để loại bỏ hồn tồn chất tẩy rửa - Sau cắt khử trùng cách ngâm vào cồn 70% phút,dung dịch sodium hypochlorite % 15 phút rửa lại nước vô trùng lần - Những vơ trùng sấy khô giấy lọc Whatman chẻ theo chiều dọc để lấy hạt giống - Sau trải hạt giống vào mơi trường Murashige Skoog (MS) điều kiện vô trùng 10 tuần phát triển thành Protocorm 2.2 Môi trường ươm: Sự nảy mầm phát triển hạt giống nhân tạo đánh giá tác động khác môi trường MS lỏng: đầy đủ 1.0 ; 0.5 ; 0.25 1.0 có bổ sung chất điều hòa sinh trưởng ( 0.5 mg/l BAP 0.5 mg/l NAA) Bảng 1: Sự nảy mầm phát triển hạt giống nhân tạo có chứa protocorm phong lan Số liệu mầm, lá, rễ giống thể dạng trung bình ± SD lần lặp lại sử dụng điều kiện Môi trường MS bổ sung đường sucrose 3% pH môi trường điều chỉnh lên 5.8 trước khử trùng nồi hấp Cho 16-20 ml môi trường vào ống nghiệm( 150x25mm, Borosil) khử trùng áp suất 15 Psi nhiệt độ 121°C 20 phút Tất ống nghiệm trì (25±2)°C chiếu sáng 16/8 (sáng/ tối) ánh sáng trắng Các hạt alginate gọi hạt nhân tạo Hạt nhân tạo (có đường kính ± mm ) đặt trên giấy lọc vô trùng có chứa đựng đĩa petri vơ trùng (30 hạt ), đống gói với parafilm bảo quản 4°C sử dụng Hạt nhân tạo tươi cho vào môi trường MS khác nảy mầm phát triển Tất ống nghiệm trì (25±2)°C chiếu sáng 16/8 (sáng/ tối) ánh sáng trắng 2.5 Khử trùng kiểm tra khả nảy mầm hạt nhân tạo sau bảo quản Hạt nhân tạo sau bảo quản khoảng 7-28 ngày lấy cho vào môi trường MS để thử nghiệm tỉ lệ nảy mầm Quá trình phải thực tủ hút vô trùng hạt nhân tạo khử trùng bề mặt nhiều cách khác để hạn chế ô nhiễm Các cách xử lí khác sử dụng để khử trùng có tên T1, T2, T3, T4, T5: + T1: Hạt giống nhân tạo sau lưu trữ tiêm trực tiếp vào môi trường + T2: Hạt giống rửa nước vô trùng, sấy khô giấy thấm cấy vào môi trường + T3: Hạt giống nhân tạo rửa thuốc diệt nấm bavistine (0,1%) phút sau rửa nước vơ trùng Sau đó, hạt giống sấy khô giấy thấm vô trùng cuối cho vào môi trường + T4: Hạt giống nhân tạo nhúng vào thuốc diệt nấm bavistine (0,1%) phút, sau khử trùng bề mặt natri hypoclorit (1%) phút, ethyl alcohol 70% vòng phút Sau rửa nước vơ trùng thấm khô Cuối cùng, hạt giống nhân tạo cấy vào môi trường + T5: Hạt nhân tạo khử trùng bề mặt với natri hypochlorite (1%) phút, ethyl alcohol 70% phút Sau đó, hạt giống nhân tạo rửa nước vô trùng thấm khô Cuối cùng, hạt giống nhân tạo cấy môi trường Bảng 2: Ảnh hưởng phương pháp xử lí khử trùng khác đến nảy mầm hạt nhân tạo Ở cách xử lí 10 hạt giống sử dụng( bảng 2) Sau khử trùng, hạt giống nhân tạo cho vào môi trường MS Tất ống nghiệm trì (25±2)°C chiếu sáng 16/8 (sáng/ tối) ánh sáng trắng Các môi trường quan sát thường xuyên nảy mầm đầy đủ phát triển rễ, chồi, từ hạt giống nhân tạo 2.6 Làm cứng - Cây phát triển từ hạt giống nhân tạo có chồi rễ phát triển tốt giữ phịng ni cấy tuần trước chuyển sang chậu Lưu ý : + Cây rửa thuốc diệt nấm bavistin 0.1% phút rửa lại với nước vơ trùng Sau làm khô chuyển vào chậu + Chậu chứa hỗn hợp gồm xơ dừa, phân rơm, rêu (2:1:1) - Các trồng chậu (có đục lỗ để trì độ ẩm) tưới nước ngày bón phân khoảng thời gian tuần, phun phân bón hỗn hợp gồm nitơ, photpho, kali (20:10:10) Kết - Sự nảy mầm bắt đầu sau tuần nuôi cấy tất môi trường - Đến tuần thứ thể chồi phát triển tất môi trường - Lá mầm phát triển sau tuần thứ môi trường 0,25 MS - Mầm rễ quan sát thấy sau 13 tuần nuôi cấy môi trường 1,0 MS + 0,5 mg/l BAP + 0.5 mg/l NAA Kết B A C D E Hình 1: nẩy mầm tái sinh từ hạt nhân tạo A: hạt nhân tạo chứa protocorm C.aloifolium; B: hạt nhân tạo phát tiển thành chồi mầm môi trường 1,0 MS; C: thể chồi rễ phát triển môi trường 0,25MS; D: Thể chồi rễ phát triển tốt môi trường 1,0MS; E: Trồng vườn ươm Kết Qua kết nghiên cứu môi trường 0,25 MS lỏng chồi mầm mọc sớm môi trường 0,5 MS lỏng 1,0 MS lỏng Hình thành non tuần hình thành rễ tuần 14 Sau 24 tuần ni cấy có chiều cao 5-6 cm hệ thống rễ phát triển tốt chọn làm giống Kết Cây giống trồng chậu nhựa có đục lỗ (để trì độ ẩm theo yêu cầu) chứa hỗn hợp xơ dừa, phân rơm rêu theo tỉ lệ 2:1:1 có khoảng 85% sống sót Hạt nhân tạo vừa tạo bảo quản 40C 28 ngày để kiểm tra khả tồn hạt Kết cho thấy điều kiện T1 (khơng có nước) T2 (nước vô trùng) cho kết cao 97,5% hạt nẩy mầm sau 28 ngày lưu trữ Thảo luận - Trong tự nhiên có 2-5% giống phong lan nẩy mầm có hiện nấm cộng sinh Rhizectonia - Trong điều kiện thực nghiệm Môi trường 1,0MS lỏng bổ sung hormone mơi trường có hiệu cho việc chuyển đổi hoàn toàn hạt nhân tạo thành sau 16 tuần nuôi cấy Thảo luận Trong nghiên cứu Pradhan et al., 2013 báo cáo protocorm khơng có vỏ bao 30 tuần để cấy chuyển hoàn toàn thành giống môi trường 1,0MS Điều cho thấy hạt nhân tạo chứa protocorm cho phản ứng sớm protocorm khơng có vỏ bao Có thể hiện hỗn hợp alginate tăng cường phát triển hạt nhân tạo Thảo luận - Auxin cytokinin ngoại sinh cần cho tái sinh PLBs (protocorm like bodies) nảy mầm chồi phát triển non - Sự kết hợp tỷ lệ nồng độ chúng tùy lồi có ý nghĩa quan trọng - Các tác dụng kết hợp BAP NAA với mơi trường MS trì hỗn phát triển giống từ hạt nhân tạo C.aloifolium Thảo luận Hạt giống nhân tạo chứa protocorm cho 97,5% nẩy mầm tối đa sau thời gian lưu trữ 28 ngày trước nảy mầm Một kết quan trọng nghiên cứu việc quan sát thấy hạ nhân tạo giữ hình thái khả tái sinh sau 28 ngày bảo quản 40C => Do đó, báo dự kiến nghiên cứu mở cánh cửa bảo quản trì nguồn gen với khối lượng lớn loài lan dược liệu bị đe dọa C aloifolium dạng hạt nhân tạo CẢM ƠN CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE CHÀO TẠM BIỆT ... CẤY MƠ CHỦ ĐỀ: HẠT NHÂN TẠO -ARTIFICIAL SEED CBHD: TS NGUYỄN THỊ PHA ĐỀ TÀI: NẢY MẦM TRONG ỐNG NGHIỆM VÀ BẢO TỒN LỒI LAN DƯỢC LIỆU CYMBIDIUM ALOIFOLIUM (L. ) SW THƠNG QUA HẠT NHÂN TẠO MỤC LỤC... cùng, hạt giống nhân tạo cấy môi trường Bảng 2: Ảnh hưởng phương pháp xử lí khử trùng khác đến nảy mầm hạt nhân tạo Ở cách xử lí 10 hạt giống sử dụng( bảng 2) Sau khử trùng, hạt giống nhân tạo. .. đời sống 1 Giới thiệu • Cymbidium aloifolium L Sw (C aloifolium) loài lan dược liệu có giá trị cao bị đe dọa Nepal • Chữa nhiều bệnh: bại liệt, bỏng, lở loét… • Đang tạo hạt giống nhân tạo phương