E COLI GÂY HỘI CHỨNG TÁN HUYẾT, TĂNG URÊ (HUS) – PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN NGUYỄN TIẾN DŨNG Hội chứng tán huyết, tăng urê (Hemolytic-uremic syndrome - HUS) • Biểu bệnh: – Giai đoạn đầu có biểu tiêu lỏng, phân có máu, kèm triệu chứng giống cảm cúm – Thiểu niệu nặng, nước tiểu có máu – Thiếu máu vi mạch tan máu – Suy thận cấp – Ure máu tăng cao – Số lượng tiểu cầu giảm – Một số bệnh nhân có triệu chứng thần kinh • Đối tượng mắc bệnh: người lớn trẻ em, tỷ lệ cao đối tượng nhi khoảng tháng đến tuổi • Đường truyền bệnh: chủ yếu qua đường thực phẩm, nước uống • Tỉ lệ tử vong khoảng 5-10%, phần lớn bệnh nhân khỏi bệnh không để lại di chứng • Tỉ lệ thấp bệnh nhân chuyển sang suy thận mạn, phải thay thận Lịch sử phát hội chứng HUS • Phát lần đầu vào năm 1955 E coli có độc tố Verotoxin (hay cịn gọi Shiga-like-toxin) • Năm 1990: lần xác định E coli O157:H7 • Năm 2001: lần xác định E coli O104:H4 • Đợt dịch HUS Hàn quốc năm 2006 E coli O104:H4 • Đợt dịch HUS Mỹ năm 2009 E coli O157:H7 Tác nhân gây bệnh • Tác nhân trực tiếp gây hội chứng HUS độc tố Verotoxin (VT) cịn gọi Shiga-like-toxin (Stx) • Độc tố Stx có 02 loại: Stx1 Stx2 (VT1/VT2) • Vi khuẩn tạo độc tố Enterohemorrhagic E coli (EHEC), cịn gọi Shiga toxin-producing E coli (STEC) • Mỗi kiểu huyết EHEC tạo loại Stx1 Stx2; Stx • EHEC O157:H7 tạo loại Stx1 Stx2; Stx • E coli O104:H4 có Stx2 Đặc điềm gây bệnh • E coli O104:H4 tập trung cụm thành ruột không bám vào thành ruột theo chế giống EAEC (Enteroaggregative E coli) • Sản sinh Shiga-like-toxin (Stx2) tiết vào máu gây hội chứng HUS • Khơng gây triệu chứng bệnh EAEC • Các triệu chứng bệnh giống EHEC O111:H2 Đặc điểm sinh học E coli O104:H4 • Khơng lên men sorbitol • Có khả kháng tellurite, • Khơng có enzym β-glucuronidase • Phát tiển ni cấy 44,5oC • Kháng lại loại kháng sinh Amoxicillin, Cefuroxime, Cefixime, Cefotaxime, Novobiocine, Tetracyclin, Trimethoprim, Sulfamethoxazol, Ceftazidim … Đặc điểm di truyền • 93% trình tự gen giống EAEC • Khơng giống với EHEC phát trước • Mang gen đặc trưng stx2 mã hóa cho độc tố Stx2 • Gen terD giúp vi khuẩn kháng lại tellurite • Gen rfbO104 mã hóa phần lõi kháng ngun O104 • fliC H4 mã hóa protein tiên mao đặc trưng cho kháng ngun H4 • Khơng mang gen eae chuyên biệt giúp cho vi khuẩn gắn vào tế bào biểu mô ruột ký chủ Các kiểu huyết nhóm EHEC • O22:H5 O91:H21 O119:H4 O157:H7 • O22:H8 O103:H2 O119:H25 O165:NM • O26:NM O104:H21 O121:H19 O165:H25 • O26:H11 O111:NM O128:NM O172:NM • O28:H25 O111:H2 O128:H2 O174:H21 • O45:H2 O111:H8 O128:H45 O174:H28 • O55:H7 O113:H21 O145:NM O104:H4 ??? • O84:NM O118:H2 O146:H21 • O88:H25 O118:H12 O153:H2 • O91:NM O118:H16 O153:H25 • O91:H14 O119:NM O157:NM Nguyên tắc qui trình phát (1) Mẫu Tăng sinh PCR: stx1,stx2,eae - + SMAC - CT EHEC (-) + EHEC (-) KHT O104/157 Duopath Non-EHEC O104/157 + - + EHEC O104/157 Non-EHEC O104/157 Nguyên tắc qui trình phát (2) Mẫu Tăng sinh Duopath - + EHEC (-) + SMAC - CT EHEC O104/157 - + PCR: stx1,stx2,eae Non –EHEC O104/157 + + PCR: stx1,stx2,eae - Non –EHEC O104/157 Non –EHEC O104/157 KHT O104/157 EHEC O104/157 - Non –EHEC O104/157 Vật tư cho phân tích • Mơi trường ni cấy – mEC broth có Novobiocine – Mac Conkey II sorbitol agar with cefixim and tellurite – CAYE broth • Kit thử chuyên dụng Duopath Verotoxin • Kháng huyết E coli O104, H4 • Kít chiết tách DNA vi khuẩn – Foodproof StarPrep One Kit • Master mix kit cho phản ứng PCR /realtime PCR – Foodproof E.coli 0104 – Foodproof EHEC screening (stx 1/ stx / eae ), Các mồi sử dụng khẳng định E coli O104:H4 Kit Doupath verotoxin • Kết đánh giá AOAC xác nhận – Độ nhạy phát Stx1 100%, Stx2 98,8% – Độ đặc hiệu phát Stx1 98,1%, Stx2 96,8% Diễn giải kết với kit thử phát stx 1/ stx / eae Kết phát gen mục tiêu stx1 stx2 eae + + + + + + + + + + + - Kết luận EHEC O104 EHEC O157 Non-EHEC/STEC Diễn giải kết với kit thử phát stx2 / rfpO104 / flcH4 Gen thử nghiệm Kết luận stx2 rfpO104 flicH4 + + + EHEC O104:H4 + + - EHEC O104:H- + - + EHEC O-:H4 - +/- +/- Non-EHEC O104:H4 .. .Hội ch? ?ng tán huyết, t? ?ng urê (Hemolytic-uremic syndrome - HUS) • Biểu bệnh: – Giai đoạn đầu có biểu tiêu l? ?ng, phân có máu, kèm triệu ch? ?ng gi? ?ng cảm cúm – Thiểu niệu n? ?ng, nước tiểu... máu – Thiếu máu vi mạch tan máu – Suy thận cấp – Ure máu t? ?ng cao – Số lư? ?ng tiểu cầu giảm – Một số bệnh nhân có triệu ch? ?ng thần kinh • Đối tư? ?ng mắc bệnh: ng? ?ời lớn trẻ em, tỷ lệ cao đối tư? ?ng. .. tập trung cụm thành ruột kh? ?ng bám vào thành ruột theo chế gi? ?ng EAEC (Enteroaggregative E coli) • Sản sinh Shiga-like-toxin (Stx2) tiết vào máu gây hội ch? ?ng HUS • Kh? ?ng gây triệu ch? ?ng bệnh