TRUNG TÂM CHẤT LƯỢNG NÔNG LÂM THỦY SẢN VÙNG ĐẢM BẢO CHẤT LƯỢNG KẾT QUẢ THỬ NGHIỆM VI SINH TS NGUYỄN TIẾN DŨNG Tien Dung - NAFIQAVED NỘI DUNG HOẠT ĐỘNG ĐBKQTN • Thực so sánh liên phòng (PT) • Thử nghiệm thành thạo kiểm tra tay nghề nhân viên theo định kỳ • Các biện pháp đảm bảo chất lượng cho đợt thử nghiệm • Đánh giá liệu phân tích ban đầu • Thống kê đánh giá xu hướng kết phân tích Tien Dung - NAFIQAD THỬ NGHIỆM LIÊN PHÒNG (PT) • Tất tiêu phân tích PTN cần phải tham gia PT • Lựa chọn nhà cung cấp dịch vụ PT có uy tín, nhiều PTN tham gia • Lựa chọn chương trình có mẫu phù hợp với đa số chủng loại mẫu phân tích PTN • Có thể tham gia PT với mẫu khác cho tiêu • Khi có kết PT không đạt, cần phải phân tích nguyên nhân tìm biện pháp khắc phục Tien Dung - NAFIQAVED THỬ NGHIỆM THÀNH THẠO VÀ KIỂM TRA TAY NGHỀ • Tất nhân viên phân tích PTN phải tham gia kiểm tra tay nghề định kỳ theo qui định PTN • Phải kiểm tra tay nghề tất tiêu giao phân tích • Nhân viên phải kiểm tra thành thạo trước giao phân tích mẫu • Tiêu chí kiểm tra – – – – Kiểm tra độ lặp lại (Sr – repeatability) Kiểm tra độ tái lập (SR- Reproducibility) Độ xác Mức chấp nhận qui định PTN • Chỉ giao nhiệm vụ phân tích cho nhân viên có số kiểm tra đạt yêu cầu Tien Dung - NAFIQAVED 4 CÁC BIỆN PHÁP ĐBCL CHO TỪNG ĐỢT THỬ NGHIỆM VI SINH • • • • • • Sử dụng đối chứng trắng Sử dụng mẫu chuẩn (RM – reference material) Sử dụng mẫu âm tính Sử dụng mẫu dương tính Phân tích mẫu lặp lại Xem xét liệu phân tích ban đầu với mẫu chủng loại điều kiện Tien Dung - NAFIQAVED ĐBCL CHO CÁC CHỈ TIÊU VI SINH PHÂN TÍCH ĐỊNH LƯỢNG • Sử dụng đối chứng trắng: – Đĩa môi trường không cấy mẫu cấy dịch pha loãng vô trùng – Sử dụng đối chứng trắng cho bước thử nghiệm khẳng định: không cấy chủng VSV vào môi trường thử nghiệm – Tần suất: lần phân tích, mẫu đầu ca mẫu cuối ca Tien Dung - NAFIQAVED ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Sử dụng đối chứng âm tính – Chọn mẫu âm tính: mẫu tự nhiên khẳng định âm tính với VSV mục tiêu – Khẳng định âm tính: phân tích định tính lặp lại 3-5 lần vi sinh vật mục tiêu – Ghi mã số cho mẫu chọn – Chia nhỏ mẫu âm tính thành phần nhỏ để bảo quản (mỗi mẫu xác 10g) – Tần suất sử dụng mẫu âm tính: theo lô mẫu phân tích, theo tần suất qui định PTN VD: 1lần/tuần Tien Dung - NAFIQAVED ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Sử dụng chủng VSV đối chứng dương khiết – Qui trình thực với chủng chứng dương khiết • Tăng sinh chủng chuẩn MT thích hợp • Pha loãng đến nồng độ thích hợp cho cấy lên đĩa môi trường xuất 10 -100 khuẩn lạc • Thực phân tích dịch pha loãng chọn tương tự với qui trình phân tích mẫu • Ghi nhận đặc điểm khuẩn lạc xuất môi trường phân tích • Thực việc khẳng định khuẩn lạc đĩa đối chứng tương tự mẫu Tien Dung - NAFIQAVED ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Sử dụng chủng VSV đối chứng dương khiết – Tần suất sử dụng: sử dụng song song với lần phân tích (hằng ngày) – Ưu điểm: • Dễ sử dụng • Có thể áp dụng cho tất PTN – Nhược điểm: • Không đại diện cho toàn tiêu cần phân tích VD: E coli đại diện cho tất Coliforms • Không đại diện cho mẫu phân tích • Không sử dụng để kiểm soát số đếm Tien Dung - NAFIQAVED ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Sử dụng mẫu dương tính – Tầng suất: sử dụng mẫu chứng dương theo lô mẫu phân tích theo qui định PTN – Có thể lựa chọn mẫu nhiễm tự nhiên mẫu gây nhiễm – Lựa chọn mẫu nhiễm tự nhiên theo tiêu chí sau: • Chọn mẫu có tính đồng cao, dễ đồng • Kiểm tra lặp lại nhiều lần để xác định mật độ VSV mục tiêu • Có mật độ VSV mục tiêu phù hợp, nên chọn mẫu có mật độ VSV mục tiêu khoảng 100 – 1000CFU/g Tien Dung - NAFIQAVED 10 ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Tạo mẫu gây nhiễm – Chọn mẫu phù hợp, dễ đồng – Ưu tiên chọn mẫu không nhiễm VSV mục tiêu có mật độ VSV mục tiêu thấp – Xác định sơ mật độ VSV mục tiêu ban đầu mẫu – Gây nhiễm VSV mục tiêu từ chủng chuẩn PTN cho mật độ cuối VSV mục tiêu khoảng 1001000CFU/g – Đồng mẫu sau gây nhiễm – Xác định mật độ VSV mục tiêu mẫu cách phân tích lặp lại nhiều lần Tien Dung - NAFIQAVED 11 ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Bảo quản sử dụng mẫu dương tính – Chia mẫu dương tính thành phần nhỏ phù hợp (10g) – Bảo quản điều kiện phù hợp VD: mẫu fillet đông lạnh bảo quản < - 18oC – Thời gian bảo quản tùy thuộc vào tính chất độ ổn định mẫu VD: mẫu đông lạnh bảo quản tháng mẫu chứa E coli Tien Dung - NAFIQAVED 12 ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Ưu nhược điểm việc sử dụng mẫu chứng dương tính – Ưu điểm: • Có thể kiểm tra tính ổn định PTN theo lần phân tích mẫu • Có thể sử dụng để đánh giá xu hướng kết phân tích – Nhược điểm • Khó khăn việc lựa chọn đồng mẫu • Thời gia bảo quản mẫu ngắn, PTN phải thường xuyên chuẩn bị mẫu đối chứng dương tính Tien Dung - NAFIQAVED 13 ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định lượng • Sử dụng mẫu lặp lại – Đánh giá lặp lại mẫu phân tích • Mỗi nồng độ cấy đĩa • Cấy nồng động khác – Nếu phát bất thường lần lặp lại phải kiểm tra lại yếu tố tham gia vào trình phân tích Vd: • • • • • Thể tích pipette Tay nghề nhân viên Sự đồng nhiệt độ tủ ấm Sự đồng MT nuôi cấy … Tien Dung - NAFIQAVED 14 ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định tính • Sử dụng đối chứng dương tính – Đối chứng chủng chuẩn VSV mục tiêu – Thực phân tích đối chứng từ bước tăng sinh – Phân tích đối chứng song song với việc phân tích mẫu • Tần suất: Theo lô mẫu phân tích Tien Dung - NAFIQAVED 15 ĐBCL cho tiêu vi sinh phân tích định tính • Sử dụng đối chứng âm tính – Chủng VSV đối chứng âm tính VSV khác với VSV mục tiêu – Chỉ sử dụng chủng VSV đối chứng âm tính có đặc điểm gần giống với VSV mục tiêu toàn qui trình phân tích • VD: L innocua làm đối chứng âm cho qui trình phân tích L monocytogenes – Xử dụng đối chứng âm tính bước xác nhận sinh hóa – Xử dụng đối chứng trắng bước xác nhận sinh hóa huyết Tien Dung - NAFIQAVED 16 THANK YOU Tien Dung - NAFIQAVED 17 [...]... Tien Dung - NAFIQAVED 4 11 ĐBCL cho các chỉ tiêu vi sinh phân tích định lượng • Bảo quản và sử dụng mẫu dương tính – Chia mẫu dương tính thành các phần nhỏ phù hợp (10g) – Bảo quản trong điều kiện phù hợp VD: mẫu các fillet đông lạnh bảo quản ở < - 18oC – Thời gian bảo quản tùy thuộc vào tính chất và độ ổn định của từng nền mẫu VD: mẫu đông lạnh có thể bảo quản được 2 tháng đối với mẫu chứa E coli Tien... coli Tien Dung - NAFIQAVED 4 12 ĐBCL cho các chỉ tiêu vi sinh phân tích định lượng • Ưu và nhược điểm của vi c sử dụng mẫu chứng dương tính – Ưu điểm: • Có thể kiểm tra tính ổn định của PTN theo các lần phân tích mẫu • Có thể sử dụng để đánh giá xu hướng của kết quả phân tích – Nhược điểm • Khó khăn trong vi c lựa chọn và đồng nhất mẫu • Thời gia bảo quản mẫu ngắn, PTN phải thường xuyên chuẩn bị mẫu đối... Tien Dung - NAFIQAVED 4 14 ĐBCL cho các chỉ tiêu vi sinh phân tích định tính • Sử dụng đối chứng dương tính – Đối chứng là chủng chuẩn VSV mục tiêu – Thực hiện phân tích đối chứng ngay từ bước tăng sinh đầu tiên – Phân tích đối chứng song song với vi c phân tích mẫu • Tần suất: Theo từng lô mẫu phân tích Tien Dung - NAFIQAVED 4 15 ĐBCL cho các chỉ tiêu vi sinh phân tích định tính • Sử dụng đối chứng âm... Dung - NAFIQAVED 4 13 ĐBCL cho các chỉ tiêu vi sinh phân tích định lượng • Sử dụng mẫu lặp lại – Đánh giá sự lặp lại trong chính mỗi mẫu phân tích • Mỗi nồng độ cấy 2 đĩa • Cấy ở các nồng động khác nhau – Nếu phát hiện các bất thường ở các lần lặp lại thì phải kiểm tra lại các yếu tố tham gia vào quá trình phân tích Vd: • • • • • Thể tích pipette Tay nghề nhân vi n Sự đồng nhất của nhiệt độ tủ ấm Sự đồng...ĐBCL cho các chỉ tiêu vi sinh phân tích định lượng • Tạo mẫu gây nhiễm – Chọn nền mẫu phù hợp, dễ đồng nhất – Ưu tiên chọn những mẫu không nhiễm VSV mục tiêu hoặc có mật độ VSV mục tiêu thấp – Xác định sơ bộ mật độ VSV mục tiêu ban đầu... giống với VSV mục tiêu trong toàn bộ qui trình phân tích • VD: L innocua làm đối chứng âm cho qui trình phân tích L monocytogenes – Xử dụng đối chứng âm tính trong bước xác nhận sinh hóa – Xử dụng đối chứng trắng trong bước xác nhận sinh hóa và huyết thanh Tien Dung - NAFIQAVED 4 16 THANK YOU Tien Dung - NAFIQAVED 4 17 ... Bảo quản điều kiện phù hợp VD: mẫu fillet đông lạnh bảo quản < - 18oC – Thời gian bảo quản tùy thu c vào tính chất độ ổn định mẫu VD: mẫu đông lạnh bảo quản tháng mẫu chứa E coli Tien Dung -