HƯỚNG DẪN PHA CHẾ VÀ KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT ISO/ST 11133 -1&2: Microbiology of food and animal feeding stuffs – Guidelines on preparation and production of culture madia NỘI DUNG   Hướng dẫn pha chế đảm bảo chất lượng môi trường nuôi cấy vi sinh vật Hướng dẫn thử nghiệm môi trường nuôi cấy vi sinhvật Part 1: General guidelines on quanlity assurance for preparartion of culture madia in the laboratory Part 2: Practical guidelines on performance testing of culture madia Hướng dẫn pha chế đảm bảo chất lượng môi trường nuôi cấy vi sinh vật dùng cho phòng thí nghiệm Các thuật ngữ  Lô môi trường: đơn vị đồng nhất, truy nguyên đầy đủ số lượng từ nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm mà sản phẩm sản xuất điều kiện kiểm soát đạt chất lượng Thuật ngữ  Môi trường sẵn sàng sử dụng (ready to use) – – – Môi trường hoàn chỉnh sẵn sàng sử dụng Môi trường hoàn chỉnh phải đun tan, đổ đĩa hay phân phối vào đơn vị sử dụng Đun tan, bổ sung vài thành phần khác Thuật ngữ  Môi trường bột khô tổng hợp dạng – –  Đã tổng hợp hòan chỉnh: vd PCA, XLD … Chưa hoàn chỉnh:vd: Baird Parker agar, Fraser broth … Môi trường tổng hợp từ thành phần theo công thức Kiểm soát chất lượng môi trường  Hồ sơ lưu trữ PTN – Hồ sơ từ nhà sản xuất        Tên mã số, công thức thành phần chất bổ sung nhà sản xuất Số lô (batch No) pH pha chế hoàn chỉnh Điều kiện lưu trữ, hạn dùng Chứng nhận chất lượng, chủng VSV kiểm soát Kết kiểm tra nhà sản xuất Cảnh báo an toàn (nếu có) Hồ sơ lưu trữ  Các thông tin cần kiểm soát nhận sản phẩm – – – – Mã số sản phẩm Tính nguyên vện bao gói Ngày hết hạn sản phẩm Các hồ sơ kèm theo Lưu trữ  Khi sử dụng môi trường thương mại phải tuân thủ theo hướng dẫn nhà sản xuất – – – Điều kiện lưu trữ Ngày hết hạn sử dụng Hướng dẫn sử dụng Môi trường tổng hợp dạng bột khô   Tuân thủ nguyên tắc “vào trước trước” (first in first out) Kiểm tra trước mở hộp – – –  Niêm phong Ghi ngày mở lên chai Đánh giá tình trạng môi trường bên Sự biến đổi chất lượng sau mở hộp – – Thay đổi điều kiện lưu trữ Biểu thay đổi: kết cấu vật lý, màu sắc … Kiểm tra sau hoàn chỉnh  Môi trường sau pha chế hòan chỉnh phải kiểm tra – – – – pH Màu Độ vô trùng Biểu vật lý bên Chuẩn bị chất bổ sung    Chất bổ sung thường chất có độc tính cao Còn họat tính hạn sử dụng Không tái đông lạnh nhiều lần Đun chảy môi trường      Đun chảy môi trường agar cách đun cách thủy Ngừng đun môi trường tan chảy Làm nguội bể điều nhiệt 45-50oC Những môi trường đổ trực tiếp vào mẫu phải giữ 44-47oC Không nên giữ môi trường 4h sau tan chảy Khử không khí môi trường   Đun cách thủy nước sôi khoảng 15 phút, nới lỏng nắp ống Vặn chặt nắp làm lạnh nhanh đến nhiệt độ sử dụng Thêm chất bổ sung    Chỉ thêm chất bổ sung môi trường nguội đến 45-50oC Chất bổ sung phải trì nhiệt độ phòng trước cho vào môi trường Thao tác nhanh để tránh MT agar vón cục Chuẩn bị bảo quản môi trường đĩa Petri    Độ dày môi trường: 3mm Phải đổ dày đĩa nuôi ủ ≥ 48h hay ≥ 40oC Dán nhãn ghi tên MT, ngày pha chế/hết hạn – Trong trình ủ làm thay đổi độ ẩm môi trường  thành phần môi trường thay đổi, ảnh hưởng đến phát triển VSV Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ẩm môi trường như: loại tủ ấm, độ ẩm không khí, áp suất tủ, số lượng đĩa ủ … Bảo quản đĩa môi trường     Bảo quản tủ mát 2-8oC Tránh ánh sáng Bảo quản túi nylon lâu Không làm khô mặt đĩa trước bảo quản tủ lạnh Thời hạn bảo quản môi trường sau pha chế   Tùy thuộc loại môi trường,thành phần họat chất môi trường Thời hạn sử dung môi trường phải đánh giá chủng VSV Thời hạn bảo quản môi trường sau pha chế Loại môi trường Dụng cụ chứa Điều kiện bảo quản Thời hạn sử dụng Môi trường rắn: Chai Tủ lạnh – 80c tháng Ống nghiệm Tủ lạnh – 80c tháng Đĩa Tủ lạnh – 80c tuần hay thứ hai đầu tuần sau Chai 400ml Tủ lạnh – 80c tháng Chai 1000ml Nhiệt độ phòng tháng Ống nghiệm Tủ lạnh – 80c tuần Môi trường lỏng dung dịch phaloãng: Chủng VSV kiểm soát chất lượng môi trường  Mỗi môi trường phải sử dụng chủng VSV sau     Chủng có biểu dương tính Chủng có biểu dương tính yếu Chủng có biểu âm tính Chủng bị ức chế hoàn toàn hay phần Kiểm soát chất lượng môi trường  Theo yêu cầu ISO 11133 – Môi trường ready to use:    – Không cần thử nghiệm chất lượng Có chứng nhận chất lượng NSX Bảo quản sử dụng hướng dẫn Pha chế từ MT khô tổng hợp   Môi trường phân lập hay định lượng: thử nghiệm định lượng hay bán định lượng Môi trường thử nghiệm sinh hóa: thử nghiệm định tính Kiểm soát chất lượng môi trường  Pha chế từ MT khô tổng hợp (tt) – – MT không chứa chất thị hay nhân tố chọn lọc: sử dụng chủng VSV dương tính MT chứa chất thị hay nhân tố chọn lọc: sử dụng chủng có biểu dương tính chủng có biểu âm tính Một số biểu bất thường MT MT agar không đông -Quá nhiệt -pH thấp -Khối lượng agar không đủ - Agar không tan -Không lắc kỹ đun tan pH thay đổi -Quá Màu MT thay đổi -Quá nhiệt -Nước không đạt chất lượng -Pha tạp thành phần khác -Đo pH không nhiệt độ -Máy đo pH không hiệu chuẩn nhiệt -Nước không đạt chất lượng - Môi trường khô/thành phần không đạt CL -Không pH -Pha tạp thành phần khác Một số biểu bất thường MT Kết tủa -Quá nhiệt -Nước không đạt chất lượng - Môi trường khô/thành phần không đạt CL -Không pH MT bị ức chế/VSV phát triển -Quá Tính chọn lọc -Quá nhiệt -Nước không đạt chất lượng, chứa nhiều chất độc - Môi trường khô/thành phần không đạt CL -Pha/tổng hợp không công thức - Bình chứa/ống đĩa không nhiệt -Môi trường khô/thành phần không đạt CL -Pha/tổng hợp không công thức -Chất bổ sung cho vào nóng hay không nồng độ -Chất bổ sung bị nhiễm Một số biểu bất thường MT Bị nhiễm VSV Khử trùng không cách Kỹ thuật khử trùng không đạt yêu cầu Chất bổ sung bị nhiễm [...]...Bảo quản môi trường sau pha chế  Bảo quản tránh sự biến đổi chất lượng – –   Tránh ánh sáng Bảo quản trong tủ mát 2-8oC Môi trường có chất không bền: sử dung trong ngày Đánh giá thời hạn bảo quản thông qua vi c kiểm soát chất lượng Pha chế môi trường tại PTN     Pha chế môi trường đúng là bước đầu quan trọng trong vi c cho kết quả phân tích chính xác Tuân thủ theo hướng dẫn đảm bảo chất lượng của... Có chứng nhận chất lượng của NSX Bảo quản và sử dụng đúng hướng dẫn Pha chế từ MT khô tổng hợp   Môi trường phân lập hay định lượng: thử nghiệm định lượng hay bán định lượng Môi trường thử nghiệm sinh hóa: thử nghiệm định tính Kiểm soát chất lượng môi trường  Pha chế từ MT khô tổng hợp (tt) – – MT không chứa chất chỉ thị hay nhân tố chọn lọc: sử dụng 1 chủng VSV dương tính MT chứa chất chỉ thị hay... tuần Môi trường lỏng và dung dịch phaloãng: Chủng VSV trong kiểm soát chất lượng môi trường  Mỗi môi trường phải sử dụng các chủng VSV sau     Chủng có biểu hiện dương tính Chủng có biểu hiện dương tính yếu Chủng có biểu hiện âm tính Chủng bị ức chế hoàn toàn hay một phần Kiểm soát chất lượng môi trường  Theo yêu cầu ISO 11133 – Môi trường ready to use:    – Không cần thử nghiệm chất lượng. .. và làm lạnh nhanh đến nhiệt độ sử dụng Thêm chất bổ sung    Chỉ thêm chất bổ sung khi môi trường nguội đến 45-50oC Chất bổ sung phải duy trì ở nhiệt độ phòng trước khi cho vào môi trường Thao tác nhanh để tránh MT agar vón cục Chuẩn bị và bảo quản môi trường trên đĩa Petri    Độ dày môi trường: ít nhất 3mm Phải đổ dày hơn nếu đĩa được nuôi ủ ≥ 48h hay ≥ 40oC Dán nhãn và ghi tên MT, ngày pha chế/ hết... các môi trường có thành phần nhạy nhiệt – – –  Brilliant green Muối mật Muối sắt Vd: XLD agar, TCBS agar, VRB/VRBD agar Khử trùng môi trường  Lọc khử trùng   Dùng để khử trùng các chất/ môi trường nhạy nhiệt Thiết bị lọc có lỗ ≤ 0,2µm Kiểm tra sau khi hoàn chỉnh  Môi trường sau khi pha chế hòan chỉnh phải kiểm tra – – – – pH Màu Độ vô trùng Biểu hiện vật lý bên ngoài Chuẩn bị chất bổ sung    Chất. .. bảo quản trong tủ lạnh Thời hạn bảo quản môi trường sau pha chế   Tùy thuộc loại môi trường, thành phần các họat chất trong môi trường Thời hạn sử dung của từng môi trường phải được đánh giá bằng các chủng VSV Thời hạn bảo quản môi trường sau pha chế Loại môi trường Dụng cụ chứa Điều kiện bảo quản Thời hạn sử dụng Môi trường rắn: Chai Tủ lạnh 2 – 80c 6 tháng Ống nghiệm Tủ lạnh 2 – 80c 2 tháng Đĩa Tủ... là các chất có độc tính cao Còn họat tính khi trong hạn sử dụng Không tái đông lạnh nhiều lần Đun chảy môi trường      Đun chảy môi trường agar bằng cách đun cách thủy Ngừng đun ngay khi môi trường đã tan chảy Làm nguội ngay trong bể điều nhiệt 45-50oC Những môi trường đổ trực tiếp vào mẫu phải được giữ ở 44-47oC Không nên giữ môi trường quá 4h sau khi tan chảy Khử không khí trong môi trường ... pH -Pha tạp các thành phần khác Một số biểu hiện bất thường của MT Kết tủa -Quá nhiệt -Nước không đạt chất lượng - Môi trường khô/thành phần không đạt CL -Không đúng pH MT bị ức chế/ VSV phát triển kém -Quá Tính chọn lọc kém -Quá nhiệt -Nước không đạt chất lượng, chứa nhiều chất độc - Môi trường khô/thành phần không đạt CL -Pha/ tổng hợp không đúng công thức - Bình chứa/ống đĩa không sạch nhiệt -Môi trường. .. ẩm môi trường  thành phần môi trường thay đổi, ảnh hưởng đến sự phát triển của VSV Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ẩm môi trường như: loại tủ ấm, độ ẩm không khí, áp suất trong tủ, số lượng đĩa ủ … Bảo quản đĩa môi trường     Bảo quản trong tủ mát 2-8oC Tránh ánh sáng Bảo quản trong các túi nylon sẽ lâu hơn Không làm khô mặt đĩa trước khi bảo quản trong tủ lạnh Thời hạn bảo quản môi trường sau pha chế. .. vón cục khi cho nước vào Pha chế tại PTN  Hòa tan Hòa tan càn nhanh càn tốt – Môi trường agar: ngâm trước khi đun tan –  Đo và chỉnh pH Chỉnh pH trước khi thanh trùng – Đo kiểm tra sau khi thanh trùng và hòan chỉnh môi trường – Đo pH sau khi làm nguội đến 25oC – Chỉnh pH bằng NaOH 1N (40g/lít); hoặc HCl 1N (36,5g/l) –  Phân phối – Không chứa quá 80% thể bình chứa Khử trùng môi trường  Hấp khử trùng ...NỘI DUNG   Hướng dẫn pha chế đảm bảo chất lượng môi trường nuôi cấy vi sinh vật Hướng dẫn thử nghiệm môi trường nuôi cấy vi sinhvật Part 1: General guidelines on quanlity... quản môi trường sau pha chế   Tùy thuộc loại môi trường, thành phần họat chất môi trường Thời hạn sử dung môi trường phải đánh giá chủng VSV Thời hạn bảo quản môi trường sau pha chế Loại môi trường. .. thông qua vi c kiểm soát chất lượng Pha chế môi trường PTN     Pha chế môi trường bước đầu quan trọng vi c cho kết phân tích xác Tuân thủ theo hướng dẫn đảm bảo chất lượng PTN nhà sản xuất