Đang tải... (xem toàn văn)
báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn. báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.báo cáo hay căn bản vi sinh cho các bạn ngành dược.Các bài thực hành có đầy đủ hình ảnh tham khảo giúp các bạn có thể hiểu sâu hơn.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DUY TÂN KHOA DƯỢC BÁO CÁO THỰC HÀNH MÔN : VI SINH CĂN BẢN MÃ MÔN HỌC : MIB 251 Giáo viên hướng dẫn :Ths Lê Thị Mai Lớp môn học :MIB251F2 Nhóm :3 Nhóm trưởng : - Phan Văn Sĩ Thành viên : - Văn Bá Bình Nguyên - Nguyễn Thị Thương Thương Nguyễn Thị Tình Nguyễn Thị Ngọc Đà Nẵng,tháng 5, năm 2015 Bài CÁC LOẠI HÌNH THỂ CỦA VI KHUẨN Theo hình thái bề ngoài,vi khuẩn thường chia thành loại hình thể chính: cầu khuẩn,trực khuẩn xoắn khuẩn Cầu khuẩn :(Coccus - từ tiếng Hy Lạp Kokkos - hạt quả): loại vi khuẩn có hình cầu Nhưng có nhiều loại không hẳn hình cầu thí dụ hình nến phế cầu khuẩn - Diplococcus pneumoniae hạt cà phê (lậu cầu khuẩn Neisseria gonorrhoeae).Kích thước vi khuẩn thường thay đổi khoảng 0,5x1,2µm (1µ = 10-3 mm) Tuỳ theo loài mà chúng có dạng khác Đặc tính chung cầu khuẩn: - Tế bào hình cầu đứng riêng rẽ hay liên kết với - Có nhiều loài có khả gây bệnh cho người gia súc - Không có quan di động - Không tạo thành bào tử a Giống Monococcus (Đơn cầu) Thường đứng riêng lẻ tế bào một, đa số chúng thuộc loại hoại sinh Thường thấy chúng sống đất, nước không khí (Thí dụ Micrococcus agilis, M roseus, M luteus) b Giống Diplococcus (song cầu) :(Từ tiếng Hy Lạp - Diplos - thành đôi) phân cách theo mặt phẳng xác định dính thành đôi Trong số có số có khả gây bệnh giống Neisseria - Lậu cầu khuẩn N meningitidis gonorrhoeae - Não mô cầu khuẩn) c Giống Tetracoccus (Tứ cầu): Thường liên kết với thành nhóm tế bào Chúng thường gây bệnh cho người số gây bệnh cho động vật d Giống Streptococcus(Liên cầu) Từ tiếng Hy Lạp (Streptos - chuỗi) chúng phân cách theo mặt phẳng xác định dính với thành chuỗi dài Thí dụ Streptococcus lactic Streppyogenes e Giống Sarcina Từ tiếng Hy Lạp Saricio - gói hàng Phân cách theo mặt phẳng trực giao với nhau, tạo thành khối từ - 16 tế bào (hoặc nhiều nữa) Trong không khí thường gặp số loài Sarcinalutea, Sarcina auratiaca Chúng thường nhiễm vào môi trường để phòng thí nghiệm tạo thành màu vàng f Giống Staphilococcus (Tụ cầu) Từ tiếng Hy Lạp Staphile - chùm nho Thường chúng liên kết với thành đám trông chùm nho Chúng phân cách theo mặt phẳng sau dính lại với thành đám hình chùm nho Bên cạnh loài hoại sinh có số loài gây bệnh người động vật (Staph Curcreus, Staph Emidermidis ) Trực khuẩn : Là tên chung tất vi khuẩn có hình que Kích thước chúng thường từ 0,5 - 1,0 x - µm Thường gặp loài trực khuẩn sau đây: a Bacillus (Viết tắt Bac) trực khuẩn gram dương, sinh bào tử Chiều ngang bào tử không vượt chiều ngang tế bào Vì tạo thành bào tử tế bào không thay đổi hình dạng chúng thường thuộc loài hiếu khí kị khí không bắt buộc b Bacterium (viết tắt Bact) Trực khuẩn gram âm không sinh bào tử Thường có tiên mao mọc xung quanh tế bào người ta gọi chu mao Các giống Salmonella, Shigella, Erwina, Serratia có hình thái giống Bacterium c Pseudomonas (viết tắt Ps) Trực khuẩn gram âm, không sinh bào tử, có tiên mao (hoặc chùm tiên mao) đầu Chúng thường sinh sắc tố Các giống Xanthomonas Photobacterium, Azotomonas, Aeromonas, Zymononas, Protaminobacter, Alginomonas, Mycoplazma, Halobacterium, Methanomonas, Hydroginomonas, Carloxydomonas, Acetobater, Nitrosomonas, Nitrobacter có hình thái giống Pseudomonas d Corynebacterium Không sinh bào tử, hình dạng kích thước thay đổi nhiều Khi nhuộm màu tế bào thường tạo thành đoạn nhỏ bắt màu khác Trực khuẩn bạch cầu (Corynebacterium diphtheriae) có bắt màu hai đầu làm tế bào có hình dạng giống tạ Một số khác có hình thái giống Corynebacterium gồm có Listeria, Erysipelothric, Microbacterium, Cellulomonas, Arthrobacter e Clostridium (Viết tắt Cl, tiếng Hy Lạp Kloster - thoi) Thường trực khuẩn gram dương Kích thước thường vào khoảng 0,4 - x3- Sinh bào tử, chiều ngang bào tử thường lớn chiều ngang tế bào, làm tế bào có hình thoi hay hình dùi trống Chúng thường thuộc loại kỵ khí bắt buộc, có nhiều loài có ích Thí dụ loài cố định nitơ Một số loài khác gây bệnh Thí dụ vi khuẩn uốn ván Cl Botulium Vi khuẩn hình xoắn: gồm dạng sau : a Phẩy khuẩn: Là tên chung vi khuẩn hình que uốn cong giống dấu phẩy Giống điển hình giống Vibro (Từ chữ La tinh Vibrare - dao động nhanh) Một số giống phẩy khuẩn có khả phân giải xenluloza (Cellvibrio, Cellfalcicula) có khả khử sunfat (Desulfovibrio) b Xoắn khuẩn:Gồm vi khuẩn dài,mảnh,có nhiều vòng xoắn.Một số có khả gây bệnh cho người xoắn khuẩn giang mai(Treponema pallidum),xoắn khuẩn Leptospira,xoắn khuẩn hồi quy(Borrelia) c Spirillum - Từ chữ Spira - Hình cong, xoắn gồm tất vi khuẩn có hai vòng xoắn trở lên Là loại gram dương, di động nhờ có hay nhiều tiên mao mọc đỉnh Đa số chúng thuộc loại hoại sinh, số có khả gây bệnh (SP Minus) có kích thước thay đổi 0,5 - 3,0 - - 40µ Hình ảnh quan sát thực nghiệm : *Mẫu lấy từ mảng bám Mẫu vi khuẩn sữa chua nhuộm đơn violet safranin: Bài : PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT *NGUYÊN TẮC: Nhuộm màu trình làm cho tế bào thành phần tế bào vi sinh vật có màu tác dụng loại thuốc nhuộm *MỤC ĐÍCH Giúp việc quan sát hình dạng tế bào, thành phần cấu trúc tế bào vi sinh vật dễ dàng • Giúp phân biệt chủng vi sinh vật với việc bắt màu khác loại thuốc nhuộm tạo điều kiện cho việc phân loại, định dạng vi sinh vật • *PHÂN LOẠI Nhuộm màu vi sinh vật Nhuộm cố định Nhuộm đơn Nhuộm không cố định Nhuộm kép Nhuộm Gram Nhuộm Ziehl Neelsen Nhuộm bào tử Nhuộm tiên mao Ở tìm hiểu phương pháp nhuộm đơn nhuộm Gram thuộc phương pháp nhuộm cố định A DỤNG CỤ, MÔI TRƯỜNG VÀ HÓA CHẤT Các dung dịch nhuộm gồm: Dung dịch xanh methylene Dung dịch tím kết tinh ( Crystal violet ) Dung dịch lugol Dung dịch tẩy màu Dung dịch nhuộm bổ sung ( Safranin O Fuchsin ) CÁCH LÀM TIÊU BẢN Cách lấy vi sinh vật để làm tiêu bản: Muốn làm loại tiêu vi sinh vật phải thực thao tác lấy mẫu vi sinh vật để làm vết bôi tiêu Các thao tác sau: - Đốt đèn cồn - Đặt ống nghiệm mẫu hay đĩa Petri có vi sinh vật vào ngón ngón trỏ bàn tay trái, lòng bàn tay ngửa Ống nghiệm để nghiêng không để canh trường vi sinh vật chạm vào nút ống nghiệm - Tay phải dùng que cấy vô trùng cách hơ lửa đèn cồn Để que cấy thẳng đứng lửa đèn cồn đầu que cấy nóng đỏ từ từ đặt di chuyển que cấy theo chiều nằm ngang lửa - Kẹp nút vào ngón út lòng bàn tay phải, xoay nhẹ nút vòng kéo nút Giữ nguyên nút đậy nút vào - Đốt miệng ống nghiệm đèn cồn - Khéo léo đưa que cấy (đã nguội) vào ống giống để lấy mẫu nhẹ nhàng đưa que cấy + Nếu ống mẫu môi trường lỏng cần nhúng đầu que cấy vào canh trường rút + Nếu ống giống môi trường đặc dùng que cấy lấy chút sinh khối vi sinh vật mặt thạch(nếu quan sát loại vi khuẩn nên lấy khuẩn lạc) hoà vào giọt nước cất vô trùng phiến kính Chú ý thao tác nhẹ nhàng để lấy mẫu mà không cầy mặt thạch lên - Rút que cấy ra, đốt miệng ống nghiệm, đậy ống nghiệm nghiệm lại để ống vào giá - Đưa giọt canh trường (hoặc sinh khối) vi sinh vật đầu que cấy đặt vào phiến kính để làm vết bôi - Khử trùng lại que cấy đèn cồn cất vào giá Làm vết bôi: Đặt giọt nước vào phiến kính, sau dùng que cấy khử trùng lấy vòng que cấy vi sinh vật cho vào giọt nước dàn Trường hợp nuôi cấy môi trường lỏng dùng pipet để lấy dung dịch nghiên cứu Hơ khô phiến kính có vi sinh vật lửa đền cồn để khô tự nhiên ta • • • • • B 10 b Khả tạo thành H2S : Nguyên tắc : Nhiều vi khuẩn sử dụng hợp chất chứa Sodium thiosunfuate tạo thành H2S Môi trường : Môi trường KIA gồm glucose lactose (có thể lên men carbohydrat), đỏ phenol (chỉ thị pH), pepton (nguồn carbon/nitrogen) muối sắt cộng với thiosulfate natri Kết :Dương tính làm cho môi trường thạch thành màu đen c Phản ứng phân giải Urê : Nguyên tắc: Sử dụng để phát khả phân cắt urea thành ammonia hoạt tính urease từ vi sinh vật kết môi trường bị kiềm hóa NH3 tạo 17 Môi trường: Urea broth (hoặc Urea agar) Kết : – Dương tính: môi trường có màu hồng – Âm tính: môi trường không đổi màu (vàng cam) Những phản ứng liên quan tới nguồn thức ăn có Carbon : a Khả lên men đường: 18 Cấy vi khuẩn vào ống đường chứa pepton,cao thịt,1% đường thị màu.Trong trình phát triển,vi khuẩn lên men đường tạo thành acid đổi màu phenol đỏ từ màu đỏ sang màu vàng ĐỐI VỚI GLUCOSE S.aureus (+) Sinh acid E.coli (+) Sinh acid,gas Streptococcus pyogenes lên men đường, không sinh Đối với Lactose S aureus (+) Sinh acid E.coli (+) Sinh acid,gas Streptococcus pyogenes lên men đường, không sinh Hình ảnh thực hành : hai ống nghiệm dương tính 19 b Phản ứng MR (methyl red) Mục đích: Vi khuẩn lên men tạo acid làm PH môi trường giảm mạnh,Khi cho đỏ methyl vào môi trường xuất màu đỏ dương tính Chủng vi sinh vật Môi trường MR-VP Methyl Red 24h, 37oC Kết quả, màu đỏ (Dương tính), màu vàng: (âm tính) Nuôi cấy 48h sau cho vài giọt methyl đỏ Chủng Vi Sinh Vật Môi Trường Clack-lubs Dương tính Âm tính Cơ sở sinh hóa: Chất thị pH: methyl red Dưới 4,4 5,0 – 5,8 Trên 6,0 20 Cơ chế: số vi sinh vật có khả chuyển hóa Glucose qua trình đường phân tạo thành acid pyruvic, từ Acid pyruvic chuyển hóa thành acetyl coenzyme A, qua chu trình Kreps tạo acid: acid citric, acid succinic, acid fomic, a cid malic, a cid oxalic… từ Acid pyruvic chuyển trực tiếp thành acid lactic, acid fomic,… Trong môi trường MR-VP có PH= 6.9±0.2 có K2HPO4 (đệm phosphat) giúp ổn định PH, có mặt acid hữu mạnh công phá vỡ PH ổn định làm cho PH giảm mạnh, PH[...]...được một vết mờ trên phiến kính gọi là vết bôi Chú ý: - Lượng vi sinh vật lấy vừa phải - Vết bôi tròn, gọn, thật mỏng - Các tế bào vi sinh vật được dàn đều, dễ quan sát Cố định vết bôi: - Vi c cố định vết bôi nhằm các mục đích sau: + Giết chết vi sinh vật để chúng dễ bắt màu và an toàn khi tiếp xúc (nếu là vi sinh vật gây bệnh) + Gắn chặt vi sinh vào phiến kính để lúc nhuộm không bị rửa trôi - Các cách... Thử nghiệm Catalase:Phát hiện các vi sinh vật có emzyme Catalase.Phản ứng dùng phân biệt tụ cầu,liên cầu cũng như những vi khuẩn khác H2 O2 Catalase H 2O + ½ O2 Kết quả hình ảnh dương tính Catalase 26 b Ngoài ra còn các thí nghiệm hóa sinh khác :Thử nghiệm Coagulase,oxidase,gelatinase…(không được thực hành) 27 Bài 4: KHÁNG SINH ĐỒ 1 Mục đích và các kỹ thuật kháng sinh đồ 1.1 Mục đích của kháng sinh. .. quan sát dưới kính hiển vi 2 Phương pháp nhuộm Gram: Đây là phương pháp thường được dùng trong thực nghiệm vi sinh vật học Phương pháp nhuộm kép do nhà bác học người Đan mạch Christian Gram và những người cộng tác đưa ra năm 1884 Với cách nhuộm này ta có thể phân biệt vi sinh vật thành 2 nhóm: Gram dương (G+) và Gram âm (G-) Vi sinh vật bắt màu xanh tím sau khi nhuộm gọi là vi sinh vật Gram dương (bao... vi sinh vật Môi trường MR-VP Methyl Red 24h, 37oC Kết quả, màu đỏ (Dương tính), màu vàng: (âm tính) Nuôi cấy 48h sau đó cho vài giọt methyl đỏ Chủng Vi Sinh Vật Môi Trường Clack-lubs Dương tính Âm tính Cơ sở sinh hóa: Chất chỉ thị pH: methyl red Dưới 4,4 5,0 – 5,8 Trên 6,0 20 Cơ chế: một số vi sinh vật có khả năng chuyển hóa Glucose qua quá trình đường phân tạo thành acid pyruvic, rồi từ Acid pyruvic... kháng sinh đồ: Kỹ thuật kháng sinh pha loãng trong thạch hoặc canh thang nhằm xác định nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) của kháng sinh đối với vi khuẩn (định lượng) Kỹ thuật kháng sinh khuếch tán trong thạch thường được áp dụng để xác định độ nhạy cảm của vi khuẩn với những kháng sinh khác nhau (định tính) Ở đây kháng sinh thường được thấm trong những khoanh giấy với hàm lượng nhất định 2.Kỹ thuật kháng sinh. .. kháng sinh 29 Mỗi khoanh giấy thấm một lượng kháng sinh nhất định của một loại kháng sinh Thông thường các kháng sinh cùng họ được thấm lượng như nhau Mỗi kháng sinh có độ bền vững khác nhau Nhiệt độ và độ ẩm cao làm bất hoạt kháng sinh nhanh, nhất là họ kháng sinh β-Lactam Vì vậy vi c cất giữ tốt nhất là ở nhiệt độ -200C hoặc ở 40C trong các lọ kín nút, chống ẩm Có thể mua khoanh giấy thấm kháng sinh. .. 15 Mẫu đã nhuộm D Kết quả thí nghiệm quan sát vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram đối với 3 chủng vi khuẩn mẫu: Ecoli,Bacillus,Pseudomonas a Chủng E.coli bắt màu Gram âm 13 b Chủng Bacillus bắt màu Gram dương (không rõ lắm do vi khuẩn còn non) 14 c Chủng Pseudomonas bắt màu Gram âm: Bài 3 : PHẢN ỨNG SINH HÓA A MỤC TIÊU: Nắm được mục đích khảo sát những tính chất sinh hóa của vi khuẩn 15 Trình bày được... ở các phòng thí nghiệm hàng ngày không cần nhiều trang thiết bị và máy móc 2.1 Nguyên lý: Dùng khoanh giấy có đường kính và độ dày nhất định, vô trùng đã tẩm sắn kháng sinh với một nồng độ nhất định ( dựa vào hiệu lực của từng kháng sinh ), đặt lên một đĩa môi trường đã nuôi cấy vi khuẩn Nồng độ vi khuẩn cũng đã được qui định trước Để tủ ấm cho vi khuẩn mọc và đo đường kính vòng ức chế vi khuẩn xung... đỏ sang màu vàng ĐỐI VỚI GLUCOSE 2 S.aureus (+) Sinh acid 5 E.coli (+) Sinh acid,gas Streptococcus pyogenes lên men đường, không sinh hơi Đối với Lactose 2 S aureus (+) Sinh acid 5 E.coli (+) Sinh acid,gas Streptococcus pyogenes lên men đường, không sinh hơi Hình ảnh thực hành : cả hai ống nghiệm đều dương tính 19 b Phản ứng MR (methyl red) Mục đích: Vi khuẩn lên men tạo acid làm PH môi trường giảm... bác sỹ lâm sàng chọn lựa kháng sinh tốt nhất cho từng bệnh nhân(kháng sinh công hiệu nhằm ức chế hoặc tiêu diệt vi khuẩn) - Tìm nồng độ ức chế tối thiểu,hoặc nồng độ diệt khuẩn tối thiểu của một loại kháng sinh đối với một loại vi khuẩn nhất định.Khảo sát hiệu năng của một phối hợp của các loại kháng sinh - Nhằm thu thập những thông tin dịch tễ học về sự đề kháng của vi khuẩn gây bệnh quan trọng ở