TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TNTN Bộ MỒN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NHÂN GIỐNG LAN Dendrobium anosmum, Dendrobium mini BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔIanosmum, CẤY MÔ.Dendrobium NGHIÊN NHÂN GIÓNG LAN Dendrobium minỉ BẰNG PHƯƠNG NUÔI CẤY MÔ CỨU CÁC LOẠIPHÁP GIÁ THẺ TRỒNG LANNGHIÊN CỨU CÁC LOẠI GIÁ THẺ TRÒNG LAN Dendrobium Dendrobiummini miniTHÍCH THÍCHHƠP HỢP VÀ CHO HIỆU QUẢ CAO Chù nhiệm đề tài: NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN Long Xuyên, tháng 8 năm 2009 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP & TNTN Bộ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NHÂN GIÓNG LAN Dendrobium anosmum, Dendrobium mini BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ NGHIÊN CỨU CÁC LOẠI GIÁ THẺ TRÒNG LAN Dendrobium mini THÍCH HƠP VÀ CHO HIỆU QUẢ CAO Chủ nhiệm đề tài: NGUYỄN THỊ MỸ DUYÊN Cộng tác viên: TRỊNH HOÀI vũ Long Xuyên, tháng 8 năm 2009 LÒI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu, Phòng Quản lý Khoa học, Phòng Ke hoạch và tài vụ, và đặc biệt là Ban chủ Nhiệm Khoa Nông nghiệp & TNTN Truờng Đại học An Giang đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi thực hiện đề tài này Rất biết ơn Thầy Võ Tòng Xuân, Thầy Võ Tòng Anh, Thầy Truông Bá Thảo, Thầy Nguyễn Hữu Thanh đă nhiệt tình động viên và ủng hộ tôi thực hiện đề tài Cùng với Nguyễn Thị Thúy Diễm, Trịnh Hoài Vũ và các đồng nghiệp trong bộ môn đã nhiệt góp sức cùng tôi nghiên cứu thực hiện đề tài này Cô Mai Dung, cô Đặng Phương Trâm là những người Thầy đã chỉ dẫn cho tôi trong hai lĩnh vực trồng lan và cấy mô Nguyễn Thị Mỹ Duyên 1 PHẦN TÓM TẮT Đe tài nghiên cứu được thực hiện tại Khoa Nông Nghiệp & TNTN, Trường Đại học An Giang từ tháng 02 năm 2006 đến tháng 02 năm 2008 Đề tài thực hiện với hai qui trình vi nhân giống lan Dendrobỉum anosmum và Dendrobium mini, và thử nghiệm ra cây Dendrobỉum mini trên nhiều loại giá thể khác nhau Với tổng cộng là 6 thí nghiệm gồm 5 thí nghiệm trong phòng và 1 thí nghiệm ngoài vườn Qui trình vi nhân giống lan Dendrobỉum anosmum - Trái lan Dendrobium anosmum sau khi được tự thụ 4 tháng, khử trùng và gieo cấy hạt vào môi trường thích hợp Sau 3 tháng gieo cấy thì tất cả các hạt đều nẩy mầm tốt, tỉ lệ đạt được là > 85% trên môi trường MS + 1 mg/1 NAA và môi trường MS + 1 mg/1 BA + 0,2 mg/1 NAA - Sang giai đoạn nhân nhanh: Chồi lan Dendrobium anosmum phát triển và nhẩy chồi rất tốt trên môi trường MS + 2mg/l BA, ở thời gian 3 tháng sau khi cấy đạt 3,17chồi, chồi cao 20,6 ram Môi trường MS không bổ sung BA cho kết quả nhân chồi rất thấp Đồng thời khi sử dụng BA ở nồng độ cao (10mg/l) vào môi trường nhân chồi cũng cho kết quả tạo chồi thấp (1,5 chồi), xuất hiện chồi dị dạng, cây phát triển yếu - Giai đoạn tạo cây hoàn chỉnh: Chồi lan Dendrobium anosmum tạo rễ tốt nhất trên môi trường MS + 1 mg/1 NAA Sau 3,5 tháng tạo được cây hoàn chỉnh, đạt tiêu chuẩn để đưa ra ngoài vườn Như vậy, sau thời gian 9,5 tháng thì từ hạt lan gieo cấy đă cho ra được cây lan con hoàn chỉnh có thể đưa ra ngoài vườn trồng Qui trình vi nhân giống lan Dendrobium mỉni - Giai đoạn nhân chồi: Chồi lan Dendrobium mini phát triển và nhẩy chồi rất tốt trên môi trường có bổ sung 1 mg/1 BA Xét về tính kinh tế thì môi trường MS/2 + lmg/1 BA cho hiệu quả cao hơn trong việc nhân nhanh chồi lan Dendrobium mini Sau 2 tháng nhân chồi thì đã 3,8 chồi, chồi cao l,26cm - Sự tạo rễ lan Dendrobium mini: môi trường MS/2 + 0,2 mg/1 NAA cho kết quả ra 11 MỤC LỤC Lời cảm ơn i Phần tóm tắt ii Mục lục iii Danh sách bảng vi Danh sách hình vii Danh mục các chữ viết tắt .viii CHƯƠNG I MỎ ĐÀU 1 I MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1 1 Mục tiêu 1 2 Nội dung .2 II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHẠM VỊ NGHIÊN CỨU 2 1 Đối tuợng 2 2 Phạm vi .2 III Cơ SỞ LÝ LUẬN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .3 1 Cơ sở lý thuyết 3 1.1 Giới thiệu về giống lan Dendrobium 3 1.1.1 Phân loại và phân bố 3 iii 1.8 Các yếu tố liên quan đến phương pháp vi nhân giống .14 1.8.1 Qui trình vi nhân giống 14 1.8.2 Cá c thành phần trong môi trường nuôi cấy mô thực vật 16 2 Mô tả các phương pháp nghiên cứu liên quan đã được thực hiện 18 IV PHƯƠNG PHÁP TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứu 19 1 Thời gian và địa điểm thí nghiệm 19 2 Phương tiện nghiên cứu 19 3 Phương pháp nghiên cứu 20 3 1 Lan Dendrobỉum anosmum 20 3.2.2 là Thí nghiệm 5: Nghiên cứu sự ảnh hưởng của NAA với hai loại môi trường cơ bản MS và MS/2 lên sự tạo rễ từ chồi lan .24 3.2.3 Thí nghiệm 6: Thử nghiệm ra cây lan Dendrobium mỉni trên các loại giá thể khác nhau 25 CHƯƠNG II KẾT QUẢ NGHIÊN cứu VÀ PHÂN TÍCH KÉT QUẢ 27 I Lan Giả hạc (Dendrobium anosmum) 27 Thí nghiệm 1: Khảo sát một số môi trường gieo hạt thích họp cho hạt lan Dendrobium anosmum 27 1 2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng của chất điều hoà sinh trưởng BA (6 - Benzyl - IV 3 Thí nghiệm 6: Thử nghiệm ra cây lan Dendrobium mini trên các loại giá thể khác nhau .7 .40 KẾT LUẬN VÀ KIÉN NGHỊ 45 1 Kết luận 45 V DANH SÁCH BẢNG Bảng Tựa bảng Trang 1.1 Các loại lan rừng có trữ lượng nhiều hoa đẹp được thị trường nước ngoài ưa chuộng 1.2 Ký hiệu các nghiệm thức theo môi trường cấy hạt lan 9 22 1.3 Ký hiệu các nghiệm thức theo môi trường cấy chồi lan Dendrobium anosmum 22 1.4 Ký hiệu các nghiệm thức thí nghiệm nhân chồi lan Dendrobỉum mini 24 1.5 Các nghiệm thức thí nghiệm tạo rễ lan Dendrobỉum mỉni 24 1.6 Các giá thể chọn làm thí nghiệm trồng lan 25 2.1 Kết quả gieo hạt lan Dendrobỉum anosmum 27 2.2 Ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự nhân chồi lan Dendrobium anosmum thời điểm 70 NSKC 28 2.3 Ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự nhân chồi lan Giả hạc Dendrobium anosmum thời điểm 80 NSKC 29 2.4 Ảnh hưởng của nồng độ BA đến sự nhân chồi lan Giả hạc Dendrobium anosmum thời điểm 90 NSKC 30 VI DANH SÁCH HÌNH DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIÉT TẤT Hình Tựa hình 1.1 Hoa lan Dendrobium anosmum 1.2 Hoa lan Dendrobium mỉni Trang 6 7 1.3 Sự tạo thành chồi ngang (a) và chồi bất định (b) 13 1.4 Các bước cơ bản của vi nhân giống 14 1.5 Hiệu quả của sự tương tác NAA và BA trên cây Bowỉea volubilis 18 1.6 Hoa lan Dendrobium anosmum và trái lan được thụ 20 1.7 Qui trình khử trái và gieo hạt lan Dendrobium anosmum 21 1.8 Chuẩn bị vật liệu trồng và bố trí thí nghiệm 26 2.1 Số lượng chồi lan Giả hạc Dendrobỉum anosmum tạo trên môi trường có vii CHƯƠNG I MỞ ĐÀU Nói đến hoa lan thì ai cũng nghĩ ngay đến một loài hoa vương giả, thanh cao vì hoa lan không chỉ rất đẹp mà giá trị lại rất cao Ngày nay, nhờ kỹ thuật nhân giống hiện đại bằng phương pháp nuôi cấy mô hồ trợ cho phương pháp nhân giống cổ truyền theo kiểu tách chiết, nên đă nhân được số lượng lớn lan giống cung cấp cho thị trường hoa lan, vì thế giá thành của cây lan cũng tương đối dễ chịu hơn Cũng từ đó thú chơi lan trong dân ta ngày càng phát triển thông qua các Hội thi hoa lan ngày càng đa dạng và phong phú hơn Hơn thế nữa, Hoa lan đã dần dần chiếm vị trí cao trong các bàn tiệc, hội nghị, lễ, đám cưới, bằng cách trang trí giỏ hoa, lẵng hoa, bình hoa, và hoa cài áo, trang điểm cô dâu Do đó Hoa lan đang được xem là một loại hoa trang trí quan trọng và có giá trị kinh tế cao, là mặt hàng xuất khẩu chiến lược của nhiều quốc gia Chẳng hạn chỉ với loại hoa chủ lực là Dendrobium, Thái Lan đã xuất khẩu đạt doanh thu gần 600 triệu USD mỗi năm Theo thống kê của Bộ Nông nghiệp Hoa Kỳ, năm 2000, tổng sản lượng lan bán ra thị trường đạt xấp xỉ 100.000.000 USD, trong đó Phaỉaenopsis chiếm 75% (Griesbach, R.J 2002) Bên cạnh đó, ở các nước phát triển như: Anh, Mỹ, Đức, Ý, Singgapore, Hồng Kông, đều nhập khẩu rất nhiều phong lan Việt Nam chúng ta cũng có nhiều triển vọng kinh doanh xuất khẩu phong lan (Huỳnh Văn Thới, 2005) Với kỹ thuật nhân giống bằng nuôi cấy mô - tế bào thực vật, thì ngoài các ưu điểm là khả năng nhân giống nhanh với hệ số nhân cao trong thời gian ngắn, có thể nhân được từ nhiều bộ phận khác nhau của thực vật, tạo ra cây giống sạch bệnh Xa hơn nữa, thông qua kỹ thuật nuôi cấy mô sẽ tạo ra nguồn vật liệu lai tạo ra cây giống mới có được các đặc tính ưu việc chỉ với thời gian ngắn Ưu điểm nữa của nuôi cấy mô là giúp cho việc nẩy mầm của hạt lan Vì hạt lan có đặc tính là chỉ có phôi mà không có (hoặc có quá ít) phôi nhũ và kích thước hạt quá nhỏ khó nẩy mầm ngoài tự nhiên Nên ngoài phương pháp nhân giống cổ truyền là tách chiết với tốc độ nhân giống rất chậm, người ta phải sử dụng kỹ thuật gieo hạt trong ống nghiệm Ngoài ra, nhân giống bằng hạt cũng được áp dụng cho công tác lai tạo giống mới, đặc biệt là hoa Lan Tuy nhiên, một yếu tố không kém phần quan trọng quyết định đến sự thành công của qui trình nhân giống bằng nuôi cấy mô là việc đưa cây mô ra vườn ươm với tỷ lệ sống cao Do đó, đề tài “Nhân giống lan Dendrobim anosmum và Dendrobỉum minỉ bằng phương pháp nuôi cấy mô Nghiên cửu các loại ệiá thể trồng lan Dendrobỉum mỉnỉ thích họp và cho hiệu quả cao” được thực hiện nhăm nhân nhanh hai loài lan này và nghiên cứu qui trình ra cây lan mô cho tỷ lệ sống cao để cung cấp cây giống cho thị trường hoa lan trong và ngoài tỉnh I MỤC TIÊU VÀ NỘI DUNG NGHIÊN cứu 1 Mục tiêu: ... MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP TRƯỜNG NHÂN GIÓNG LAN Dendrobium anosmum, Dendrobium mini BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ NGHIÊN CỨU CÁC LOẠI GIÁ THẺ TRỊNG LAN Dendrobium mini. .. Dendrobỉum minỉ phương pháp nuôi cấy mô Nghiên cửu loại ệiá thể trồng lan Dendrobỉum mỉnỉ thích họp cho hiệu cao? ?? thực nhăm nhân nhanh hai loài lan nghiên cứu qui trình lan mơ cho tỷ lệ sống cao để cung... ĐÀU Nói đến hoa lan nghĩ đến lồi hoa vương giả, cao hoa lan không đẹp mà giá trị lại cao Ngày nay, nhờ kỹ thuật nhân giống đại phương pháp nuôi cấy mô hồ trợ cho phương pháp nhân giống cổ truyền