Bộ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỌ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH THÁI ĐẠI QUÂN THÁI ĐẠI QUÂN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH VITAMIN c TRONG THUỐC, TllỤc PHẢM CHỨC NĂNG, HOA QUẢ VÀ NƯỚC GIẢI KHÁT BẰNG PHƯONG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH VITAMIN c TRONG THUÓC, THựC PHẨM CHỨC NĂNG, HOA QUẢ VÀ NƯỚC GIẢI KHÁT BẰNG PHƯƠNGCHUYÊN PHÁP SẮC KÝ LỎNG NĂNG NGÀNH: HÓAHIỆU PHÂN TÍCHCAO MÃ SĨ: 60.44.29 LUDN VDN THĨC SũSHÚA HDC LUDN VDN THDC ũ HÚA HDC Người hướng dẫn khoa học: TS ĐINH THỊ TRƯÒNG GIANG VINH - 2013 MỤC LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIẾT TÁT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH DANH MỤC CÁC sơ ĐỒ LỜI CẢM ƠN MỞ DẦU CHƯƠNG TỐNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu vitamin 1.1.1 Kh ải niệm 1.1.2 Đặ c đỉêm chung phân loại 1.1.2.1 Đặ c điểm chung 1.1.2.2 Ph ân loại 1.2 Vitamin c (Acid ascorbic) 1.2.1 Lư ợc sử .5 1.2.3 Ph ân loại vitamin c 1.2.4 Cẩ u tạo vitamin c .6 1.2.5 Ng 11 1.3.2 Quýt 14 1.3.3 Thuốc IIAPACOL KIDS 75 1.3.4 Thuốc AMPHA BC COMLEX 17 1.3.5 Thực phẩm chức năng: RUTIN-C 18 1.3.6 Thực phàm chức năng: Nam dược giải rượu 19 1.3 Nước giải khát (Faith) nước khoáng chanh muối 21 1.4 Phuơng pháp sac ký lỏng hiệu cao HPLC 21 1.4.1 Giớ i thiệu phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 21 1.4.1.1 Cơ sở lý thuyết 21 1.4.1.2 Ng uyên tắc trình sắc ký cột .22 1.4.1.3 Phăn loại sắc ký ứng dụng 23 1.4.1.4 Cá c đại lượng đặc trưng sắc ký đồ 24 1.4.1.4.1 Thờ i gian lưu: Retention time (tỵ) 24 1.4.1.4.2 số dung lượng K Hệ 25 1.4.1.4.3 Độ chọn lọc a 25 1.4.1.4.4 Số đĩa lý thuyết N 25 III 1.4.2.8 In kết 30 1.4.2.9 Ch ọn điều kiện sắc ký .30 1.4.2.9.1 Lự a chọn pha tĩnh 31 1.4.2.9.2 Lựa chọn pha động .32 1.4.3 Tiến hành đo sắc kỷ 33 1.4.3.1 Chuăn bị dụng cụ mảy móc 33 1.4.3.2 Chuẩn bị dung môi pha động 34 1.4.3.3 Cách đoHPLC 35 1.5 Đinh lượng bang phương pháp(HPLC) 35 1.5.1 Các bước định lượng phương pháp IIPLC 35 1.5.1.1 Lẩy mẫu thử 36 1.5.1.2 Tiến hành đo sắc ký 36 1.5.1.3 Đo tín hiệu detector 36 1.5.2 Các phương pháp định lượng .37 1.5.2.1 Ph ương pháp chuân ngoại (Extemais Standard) .37 1.5.2.2 Ph ương pháp chuẩn nội (Intemais Standard) 39 HPLC MeOH RSD Sắc ký lỏng hiệu cao (High Períormance Liquid Chromatography) Methanol V /V DANH Độ lệch chuẩn tương đối MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ VIÉT TẮT 2.8.2 Kh STT s uv DAD KH2PO4 DMPM HL v% ảo sátdeviation) độ lặp lại 50 (Relative Standard Số thứ tự 2.8.3 Xá c định hiệu suất thu hồi 50 Độ lệch chuẩn CHƯƠNG KÉT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 51 Tử ngoại 3.1 Xác đinh khoảng tuyến tính đường chuan Vitamin c 51 3.2 Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng phương Diode array detector pháp Kalidihidrophotphat phân tích 54 Dung môi phá mẫu 3.2.1 Giới hạn phát (LOD) Hàm lượng Hệ số biến thiên 54 3.2.2 Gi ới hạn định lượng LOO .54 3.3 Xác đinh hàm lượng vitamin c theo hai cách sau .55 Tính hàm lượng vitamin c từ dịch lọc mâu cam sành, quýt 3.3.1 theo đường chuân .55 3.3.2 Tính hàm lượng vitamin c mẫu thuốc, thực pham chức theo chuẩn thử song song 56 3.4 Đánh giá phương pháp 59 VI DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Phân loại Vitamin hòa tan chất béo vitamin hòa tan nước Bảng 1.2 Hàm lượng vitamin c có số thực vật Bảng 1.3 Hàm lượng vitamin c có số động vật Bảng 1.4 Lượng vitamin c cần theo độ tuổi Bảng 3.1 Diện tích peak vitamin c tương ứng với nồng độ chuẩn Bảng 3.2 Giá trị LOD LOQ Bảng 3.3 Kết phân tích hàm lượng vitamin c mẫu Bảng 3.4 So sánh kết phân tích hàm lượng vitamin c phương pháp HPLC giá trị ghi bao bì Bảng 3.5 So sánh kết phân tích hàm lượng vitamin c mẫu Cam sành Quýt phương pháp đường chuẩn phương pháp chuân thử song song Bảng 3.6 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên mẫu Cam sành mẫu Quýt Bảng 3.7 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên Bảng 3.8 Kết trung bình, độ lệch chuẩn, hệ số biến thiên Bảng 3.9 Kết khảo sát độ DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Hình ảnh khơng gian cấu trúc vi tam in c Hình 1.2 Cam sành Hình 1.3 Qu>1 Hình 1.4 Thuốc hapacol kids Hình 1.5 Thuốc ampha bc comlex Hình 1.6 Thực phẩm chức rutin c Hình 1.7 Thực phâm chức nam dược giải rượu Hình 1.8 Nước giải khát chanh muối Hình 1.9 Đồ thị phương pháp chuẩn ngoại Hình 1.10 Phương pháp đường chuẩn sử dụng nội chuẩn Hình 1.11 Đồ thị kỹ thuât thêm đường chuẩn Hình 3.1 Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin c có nồng độ 3.06 Hình 3.2 Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin c có nồng độ 6.12 Hình 3.3 Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin c có nồng độ 12.25 Hình 3.4 Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin c có nồng độ 30.62 Hình 3.5 Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin c có nồng độ 61.24 Hình 3.6 Sắc đồ mẫu chuẩn vitamin c có nồng độ 122.49 Hình 3.7 Đường chuẩn định lượng vitamin c Hình 3.8 Sắc đồ mẫu Chuẩn Hình 3.9 Sắc đồ mẫu Chuẩn Hình 3.10 Sắc đồ mâu Trăng Hình 3.11 Sắc đồ mẫu Cam sành viii Hình 3.12 Sắc đồ mẫu Quýt Hình 3.13 Sắc đồ mẫu AMPHA BC COMLEX (TI Hình 3.14 Sắc đồ mẫu AMPHA BC COMLEX (T2) Hình 3.15 Sắc đồ mẫu Hapacol kids (Tl) Hình 3.16 Sắc đồ mẫu Hapacol kids (T2) Hình 3.17 Sắc đồ mẫu TPCN Rutin-C (Tl) Hình 3.18 Sắc đồ mẫu TPCN Rutin-C (T2) Hình 3.19 Sắc đồ mẫu TPCN Nam dược giải rượu (Tl) Hình 3.20 sắc đồ mẫu TPCN Nam dược giải rượu (T2) Hình 3.21 Khảo sát hiệu suất thu hồi mẫu 1.1 Hình 3.22 Khảo sát hiệu suất thu hồi mẫu 1.2 Hình 3.23 Khảo sát hiệu suất thu hồi mẫu 2.1 Hình 3.24 Khảo sát hiệu suất thu hồi mẫu 2.2 Hình 3.25 Khảo sát hiệu suất thu hồi mẫu 3.1 Hình 3.26 Khảo sát hiệu suất thu hồi mẫu 3.2 DANH MỤC CÁC sơ ĐÒ A Sơ đồ xử lý chất chuân B Sơ đồ xử lý mẫu Cam sành Quýt c Sơ đồ xử lý Thuốc Thực phẩm chức IX LỜI CẢM ƠN Đe hồn thành ln văn này, Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn sâu sắc đến: - Cơ giáo TS Đinh Thị Trường Giang người trực tiếp hướng dẫn tạo điều kiện cho nghiên cứu hồn thành luận văn - Chị ThS Bùi Thị Hịa ThS Dương Thị Hằng với anh chị kỹ thuật viên viện thực phẩm chức trung tâm kiểm nghiệm họp chuẩn, tận tình hưỡng dẫn tạo điều kiện cho thực tốt luận văn - Thầy giáo PGS.TS: Nguyễn Khắc Nghĩa Thấy giáo TS Nguyễn Trung Dũng dành nhiều thời gian đọc viết nhận xét cho luận văn - Thầy cô Hội đồng chấm luận văn cao học Ban chủ nhiệm Khoa Hóa học trường Đại Học Vinh giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi q trình học tập hoàn thành luận văn Và xin cảm ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè đồng nghiệp động Vinh, tháng 10 năm 2013 Người thực MỞ ĐẦU Vitamin nhóm chất hữu có phân tử lượng lớn tính chất vật lý, hoá học khác Tác dụng chúng thể sinh vật khác cần thiết cho sống sinh vật, người động vật So với nhu cầu chất dinh dưỡng protein, lipit, gluxit nhu cầu vitamin thấp Vitamin cung cấp vào thể người để đáp ứng nhu cầu dinh dưỡng giúp thê khỏe mạnh Trong nhiều kỉ, thiếu số vitamin gây nên bệnh mù lòa (thiếu vitamin A), bệnh beri-beri (thiếu vitamin Bl), bệnh scobut (thiếu vitamin C), thiếu axit folic thời kì thai nghén gây khuyết tật ống thần kinh thai nhi Theo thống kê, riêng Mỹ, có tới 7/10 người phải “cầu cứu” tới vitamin, cịn người sử dụng chúng cách có định hướng thường xuyên Từ năm 70, phủ Mỹ cho phép sử dụng phụ gia thực phẩm có chứa vitamin liều cao Kết là, hàng năm Mỹ, người ta tiêu tốn khoảng tỉ đô la cho loại vitamin Nhiều người cho vitamin thần dược chữa ung thư kéo dài tuổi thọ Hiện nay, khoa học tiến hành nghiên cứu thực nghiệm quy mô rộng lớn vitamin Cơ quan quản lý thuốc thực phẩm Mỹ đưa lời khuyên là, đa dạng hóa ăn uống biện pháp tốt để đáp ứng nhu cần vitamin thể Sử dụng bổ sung loại vitamin chất khống cần phải có mức độ Liều lượng sử dụng nhiều hay vấn đề có tính riêng biệt, tùy thuộc vào lối sống, khấu phần ăn uống, tình trạng sức khỏe người vô số nhân tố khác Vitamin c có vai trị quan trọng Thiếu vitamin c thể bị bệnh hoại huyết, ảnh hưởng tiêu cực đến tự vệ thể với bệnh nhiễm trùng khác Cơ thể hồn tồn khơng tự tổng hợp vitamin c mà phải lấy từ nguồn thức ăn vào Vì việc phân tích vitamin c thực phẩm điều cần thiết Tuy nhiên hợp chất hữu thuộc đối tượng khó phân tích, mẫu phân tích tồn nhiều chất hữu vô dạng khác ... Xuất phát từ tình hình th? ?c tế trên, lựa chon đề tài: ? ?Nghiên c? ??u x? ?c định vitamin c thu? ?c, th? ?c phàm ch? ?c năng, hoa nư? ?c giải khát phương pháp s? ?c ký lỏng hiệu cao? ?? Trong luận văn này, triển... VitaminC < 1.4 Phương pháp sac ký lỏng hiêu cao HPLC 1.4.1 Giới thiệu phương pháp s? ?c ký lỏng hiệu cao (HPLC) 1.4.1.1 C? ? sở ụ thuyết HPLC chữ viết tắt c? ?a 04 chữ đầu Tiếng Anh phương pháp s? ?c ký lỏng. .. đê kéo chất tan khỏi c? ??t - S? ?c ký hấp phụ (NP-HPLC RP-HPLC) - S? ?c ký phân bố - s? ?c ký chiết (LLC) - S? ?c ký trao đổi ion (IE-HPLC) - S? ?c ký rây phân tử - s? ?c ký gel (IG-HPLC) 24 Nhimg th? ?c tế hiên