BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CƠNG NGHỆ  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KIỂM TRA ĐỘ NHIỄM CHÉO MỘT SỐ THUỐC KHÁNG SINH TRONG Q TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC THÚ Y BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV- VIS CÁN BỘ HƯỚNG DẪN: Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Ths Nguyễn Phương Hải SV THỰC HIỆN: Nguyễn Văn Khi; MSSV: 2112146 Lê Minh Vấn; MSSV: 2112221 Ngành: CN Kỹ thuật hóa học-Khóa 37 Tháng 5/2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA CƠNG NGHỆ  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP KIỂM TRA ĐỘ NHIỄM CHÉO MỘT SỐ THUỐC KHÁNG SINH TRONG Q TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC THÚ Y BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV- VIS CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Ths Nguyễn Phương Hải SV THỰC HIỆN: Nguyễn Văn Khi; MSSV: 2112146 Lê Minh Vấn; MSSV: 2112221 Ngành: CN Kỹ thuật hóa học-Khóa 37 Tháng 5/2015 TRƯỜNG ĐẠI H ỌC CẦN THƠ CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA CƠNG NGHỆ Độc lập – Tự – Hạnh phúc BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA H ỌC - Cần Thơ, ngày 09 tháng 05 năm 2015 - - NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Tên đề tài “Kiểm tra độ nhiễm chéo số thuốc kháng sinh q trình sản xuất thuốc thú y phương pháp quang phổ UV- Vis” Cán hướng dẫn Ths Nguyễn Thị Diệp Chi, Bộ mơn Hóa học, Khoa Khoa học Tự Nhiên, Trường Đại học Cần Thơ Ths Nguyễn Phương Hải, Cơng ty SX - KD vật tư & thuốc thú y Vemedim Sinh viên thực Họ tên: Nguyễn Văn Khi Lê Minh Vấn MSSV: 2112146 MSSV: 2112221 Ngành: Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa Học Khóa: 37 Nội dung nhận xét 4.1 Nhận xét hình thức LV 4.2 Nhận xét nội dung LVTN  Đánh giá nội dung thực đề tài  Những vấn đề hạn chế 4.3 Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có) 4.4 Kết luận, đề nghị điểm Cần Thơ, ngày 09 tháng 05 năm 2015 Cán hướng dẫn Ths Nguyễn Thị Diệp Chi TRƯỜNG ĐẠI H ỌC CẦN THƠ CỘNG HỊA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM KHOA CƠNG NGHỆ Độc lập – Tự – Hạnh phúc BỘ MƠN CƠNG NGHỆ HĨA H ỌC - Cần Thơ, ngày 09 tháng 05 năm 2015 - - NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán phản biện Tên đề tài “Kiểm tra độ nhiễm chéo số thuốc kháng sinh q trình sản xuất thuốc thú y phương pháp quang phổ UV- Vis” Cán hướng dẫn Ths Nguyễn Thị Diệp Chi, Bộ mơn Hóa học, Khoa Khoa học Tự Nhiên, Trường Đại học Cần Thơ Ths Nguyễn Phương Hải, Cơng ty SX - KD vật tư & thuốc thú y Vemedim Sinh viên thực Họ tên: Nguyễn Văn Khi Lê Minh Vấn MSSV: 2112146 MSSV: 2112221 Ngành: Cơng nghệ Kỹ thuật Hóa Học Khóa: 37 Nội dung nhận xét 5.1 Nhận xét hình thức LVTN 5.2 Nhận xét nội dung LVTN  Đánh giá nội dung thực đề tài  Những vấn đề hạn chế 5.3 Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có) 5.4 Kết luận, đề nghị điểm Cần Thơ, ngày 09 tháng 05 năm 2015 Cán phản biện Ts Đồn Văn Hồng Thiện Ts Nguyễn Thị Thu Thủy LỜI CẢM ƠN Trong q trình thực luận văn này, chúng tơi học hỏi nhiều kiến thức, kinh nghiệm kỹ thực hành bổ ích Đó nhờ giúp đỡ nhiệt tình gia đình, thầy bạn bè Chúng tơi xin gửi lời cám ơn chân thành đến: Cơ Nguyễn Thị Diệp Chi ln động viên tinh thần, giúp đỡ hướng dẫn chúng em suốt q trình làm luận văn Chú Nguyễn Phương Hải tận tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt vật chất lẫn tinh thần giúp chúng tơi hồn thành tốt luận văn Các anh chị phòng thí nghiệm hóa lý, cơng ty Vemedim tạo điều kiện giúp đỡ chúng tơi suốt q trình làm luận văn Tất thầy mơn Cơng nghệ Hóa Học, khoa Cơng Nghệ truyền đạt cho chúng em kiến thức vơ bổ ích học tập nghiên cứu Gia đình người thân hổ trợ giúp đỡ chúng tơi học tập Cuối cùng, chúng tơi xin chân thành cám ơn bạn lớp Kỹ thuật Hóa Học K37 ln bênh cạnh, động viên giúp đỡ chúng tơi suốt thời gian học tập trường Cần Thơ, tháng năm 2015 i MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i MỤC LỤC ii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH v DANH MỤC B ẢNG vi ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG 1: GIỚI THIỆU TỔNG QUAN 1.1 Nhiễm chéo (Cross – Contamination) s ản xuất 1.2 Khái qt nhóm Floroquinolones 1.2.1 Enrofloxacin 1.2.2 Norfloxacin .6 1.2.3 Marbofloxacin 1.3 Khái qt kỹ thuật thêm chuẩn 1.3.1 Cách thực cơng thức tính tốn 1.3.2 Ưu điểm nhược điểm kỹ thuật thêm chuẩn 11 1.4 Phương pháp phân tích quang phổ 11 1.4.1 Khái qt phương pháp quang phổ 11 1.4.2 Định luật Lambert – Beer 12 1.4.3 Ứng dụng quang phổ UV – Vis hóa học phân tích 15 1.5 Thẩm định kỹ thuật thêm chuẩn áp dụng phương pháp quang phổ 16 1.5.1 Mục đích 16 1.5.2 Nội dung 16 1.5.3 Phương pháp thực 17 CHƯƠNG 2: HOẠCH ĐỊNH THÍ NGHIỆM .22 2.1 Phương tiện thực 22 2.1.1 Hóa chất thuốc thử 22 2.1.2 Dụng cụ thiết bị 22 2.2 Cách tiến hành 22 2.3 Hoạch định thí nghiệm 22 2.3.1 Thí nghiệm khảo sát phụ thuộc độ hấp thu theo nồng độ 22 2.3.2 Thí nghiệm thẩm định phương pháp 23 2.3.3 Áp dụng phương pháp mẫu thật 25 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 27 3.1 Thí nghiệm khảo sát phụ thuộc độ hấp thu theo nồng độ 27 ii 3.2 Thí nghiệm thẩm định phương pháp 34 3.2.1 Độ chọn lọc 34 3.2.2 Độ lặp lại 35 3.2.3 Độ 38 3.2.4 Khoảng tuyến tính 39 3.2.5 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) 41 3.3 Áp dụng phương pháp mẫu thật 42 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 49 4.1 Kết luận 49 4.2 Kiến nghị 50 TÀI LIỆU THAM KHẢO 51 iii DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT DD, dd: Dung dịch PTN: Phòng thí nghiệm Abs: Độ hấp thu (Absorption) ADN: Acid Deoxyribonucleic AOAC: Hiệp hội nhà hố phân tích thống (Association of Official Analytical Chemists) ER: Enrofloxacin GMP: Thực hành sản xuất tốt (Good Manufacturing Practice) ICH: Hội đồng hòa hợp Quốc tế (International Conference on Harmonization) HLOQ: Giới hạn định lượng (High Limit of Quantification) LLOQ: Giới hạn định lượng (Low Limit of Quantitation) LOD: Giới hạn phát (Limit of Detection) LOQ: Giới hạn định lượng (Limit of Quantitation) MB: Marbofloxacin NL: Norfloxacin RSD: Độ lệch chuẩn tương đối (Relative Standard Deviation) SD: Độ lệch chuẩn (Standard Deviation) Set-ref: Set reference USFDA: Cục quản lí thực phẩm dược phẩm Mỹ (United States Food and Drug Administration) USP: Dược điển Mỹ (United States Pharmacopeia) UV – Vis: Ultraviolet - Visible WHO: Tổ chức Y tế Thế giới (World Health Organization) iv Chương 3: Thực nghiệm kết b) Kết quả: Bảng 3-9: Kết đánh giá độ lặp lại Enrofloxacin Thí nghiệm Lần Lượng tìm lại (mg/L) 5,059 Độ (%) 100,079 Lượng tìm lại trung bình Độ lệch chuẩn SD Độ lệch chuẩn tương đối RSD Lần 5,053 99,96 Lần Lần Lần 5,06 5,059 5,061 100,098 100,079 100,118 5,059 (mg/L) Lần 5,047 99,841 0,0054 0,107% Bảng 3-10: Kết đánh giá độ lặp lại Norfloxacin Thí nghiệm Lần Lần Lần Lần Lần Lần Lượng tìm lại (mg/L) 5,042 5,029 5,051 5,038 5,045 5,040 Độ (%) 100,454 100,197 100,628 100,197 100,302 100,412 Lượng tìm lại trung bình 5,039 (mg/L) Độ lệch chuẩn SD Độ lệch chuẩn tương đối RSD 0,0062 0,164% Bảng 3-11: Kết đánh giá độ lặp lại Marbofloxacin Thí nghiệm Lần Lần Lần Lần Lượng tìm lại (mg/L) 5,036 5,032 5,033 5,028 Độ (%) 100,119 100,040 100,060 99,960 Lượng tìm lại trung bình 5,034 (mg/L) Độ lệch chuẩn SD Độ lệch chuẩn tương đối RSD Lần Lần 5,041 5,038 100,219 100,159 0,0046 0,101% c) Nhận xét:  RSD < 2%, phù hợp với u cầu thẩm định phương pháp  Kỹ thuật thêm chuẩn phương pháp quang phổ có độ lặp lại SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 37 Chương 3: Thực nghiệm kết 3.2.3 Độ Thí nghiệm 6: Đánh giá độ kỹ thuật thêm chuẩn phương pháp quang phổ a) Thực hiện: – Cách chuẩn bị mẫu giả dung dịch chuẩn Enrofloxacin tương tự thí nghiệm – Đo máy quang phổ: điều kiện đo phổ tương tự thí nghiệm – Vẽ đồ thị xác định lại hàm lượng Enrofloxacin mẫu giả: + Vẽ đồ thị hàm số Abs = f(Cc) + Xác định giá trị nồng độ Enrofloxacin thực nghiệm Abs = + Tính tỉ lệ thu hồi Rc b) Kết quả: Bảng 3-12: Kết qt phổ đánh giá độ Mẫu Vm (ml) CER (mg/L) Abs 0,052 8,016 12,024 16,032 5 20,04 0,882 1,285 1,71 2,107 – Đồ thị hàm số Abs = f(Cc) Hình 3-12: Đồ thị phụ thuộc Abs vào nồng độ dãy mẫu thêm chuẩn – Xác định giá trị Cm Abs = 0: Dựa vào đồ thị thêm chuẩn, ta tính nồng độ thực nghiệm Enrofloxacin, Cm = 5,078 mg/L – Tính tỷ lệ thu hồi hàm lượng Enrofloxacin: SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 38 Chương 3: Thực nghiệm kết Rc  Cthực nghiệm Clý thuyết 100%  5, 078 100%  100, 454% 5, 055 c) Nhận xét:  Tỉ lệ thu hồi nằm khoảng 95% - 105%, phù hợp với u cầu thẩm định  Kỹ thuật thêm chuẩn áp dụng phương pháp quang phổ có độ 3.2.4 Khoảng tuyến tính a) Thực hiện: Xác định khoảng tuyến tính Abs theo nồng độ chất dựa kết thí nghiệm Dùng phần mền Excel để tính tốn b) Kết quả: Bảng 3-13: Kết khảo sát độ tuyến tính Enrofloxacin Khoảng nồng độ ER 0,05 mg/L – mg/L 0,25 mg/L – mg/L mg/L – mg/L mg/L – 20 mg/L mg/L – 25 mg/L 0,25 mg/L – 20 mg/L Hàm số Abs = a.CER + b 0,1027x + 0,0004 0,1133x – 0,0008 0,1033x + 0,0005 0,1025x + 0,009 0,095x + 0,0868 0,1030x + 0,0094 Hệ số tương quan tuyến tính R 0,9944 0,9998 0,9999 0,9999 0,9968 0,9999 y = 0,103x + 0,0094 R2 = 0,9999 Hình 3-13: Đồ thị khoảng tuyến tính Abs theo nồng độ Enrofloxacin SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 39 Chương 3: Thực nghiệm kết Bảng 3-14: Kết khảo sát độ tuyến tính Norfloxacin Khoảng nồng độ NL (mg/L) 0,05 mg/L – mg/L 0,5 mg/L – mg/L mg/L – mg/L mg/L – 20 mg/L mg/L – 25 mg/L 0,5 mg/L – 20 mg/L Hàm số Abs = a.CNL + b 0,1134x + 0,0021 0,1162x - 0,0003 0,1030x + 0,0240 0,1034x + 0,0345 0,0970x + 0,1065 0,1051x + 0,0145 Hệ số tương quan tuyến tính R 0,9987 0,9997 1,000 0,9999 0,9977 0,9998 Hình 3-14: Đồ thị khoảng tuyến tính Abs theo nồng độ Norfloxacin Bảng 3-15: Kết khảo sát độ tuyến tính Marbofloxacin Khoảng nồng độ MB (mg/L) 0,05 mg/L – mg/L 0,25 mg/L – mg/L mg/L – mg/L mg/L – 25 mg/L 0,25 mg/L – 25 mg/L SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Hàm số Abs = a.CMB + b 0,1027x + 0,0004 0,1006x – 0,0095 0,0724x + 0,0210 0,0727x + 0,0285 0,0738x + 0,0045 Hệ số tương quan tuyến tính R 0,9944 0,9998 0,9999 0,9999 0,9998 Trang: 40 Chương 3: Thực nghiệm kết Hình 3-15: Đồ thị khoảng tuyến tính Abs theo nồng độ Marbofloxacin c) Nhận xét: Đối với Enrofloxacin:  Trong khoảng nồng độ từ 0,25 mg/L – 20 mg/L, hệ số tương quan R thỏa mãn u cầu độ tuyến tính  Hàm số tương quan tuyến tính là: Abs = 0,1030.CER + 0,0004 Đối với Norfloxacin:  Trong khoảng nồng độ từ 0,5 mg/L – 20 mg/L, hệ số tương quan R thỏa mãn u cầu độ tuyến tính  Hàm số tương quan tuyến tính là: Abs = 0,1051.CNL + 0,0045 Đối với Marbofloxacin:  Trong khoảng nồng độ từ 0,25 mg/L – 25 mg/L, hệ số tương quan R thỏa mãn u cầu độ tuyến tính  Hàm số tương quan tuyến tính là: Abs = 0,0738.CMB + 0,0004 3.2.5 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) Dựa vào kết thí nghiệm để xác định giới hạn phát giới hạn định lượng kỹ thuật thêm chuẩn phương pháp quang phổ chất  Giới hạn phát giới hạn định lượng Enrofloxacin:  Giới hạn phát (LOD): Với độ lệch chuẩn: SD  SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn   xi  x  n 1  0,0054 Trang: 41 Chương 3: Thực nghiệm kết LOD xác định dựa theo cơng thức: 3,3.SD 3,3.0, 0054 = = 0,173 (mg/L) a 0,1030 LOD =  Giới hạn định lượng (LOQ): xác định tương tự LOD, theo cơng thức: LOQ = 10.SD 10.0, 0054 = = 0,524 (mg/L) a 0,1030  Giới hạn phát giới hạn định lượng Norfloxacin: Tính tốn tượng tự Enrofloxacin  LOD = 0,195 mg/L  LOQ = 0,589 mg/L  Giới hạn phát giới hạn định lượng Marbofloxacin: Tính tốn tượng tự Enrofloxacin  LOD = 0,205 mg/L  LOQ = 0,623 mg/L 3.3 Áp dụng phương pháp mẫu thật Thí nghiệm 7: Xác định mức độ nhiễm chéo Enrofloxacin bồn trộn VMDX1068 a) Thực hiện:  Bồn trộn VMDX1068 sau trộn mẻ thuốc VIMENRO concentrated có chứa hàm lượng Enrofloxacin 50% vệ sinh  Tráng bồn 25 kg tá dược trơ lactose 15 phút  Định lượng Enrofloxacin tá dược tráng bồn: Lấy 25,078 gam tá dược tráng bồn cho vào BĐM 200 mL thêm NaOH 0,1N đến vạch, đem siêu âm lọc lấy dung dịch suốt Chuẩn bị dung dịch chuẩn Enrofloxacin có nồng độ 254,50 mg/L Lập dãy thêm chuẩn bảng sau: Bảng 3-16: Dãy mẫu thêm chuẩn mẫu thật thí nghiệm Mẫu Vtá dược (mL) Vchuẩn ER (mL) Cchuẩn ER (mg/L) 25 0 25 5,090 25 10,180 25 15,270 25 20,360  Qt phổ: điều kiện qt phổ tượng tự thí nghiệm SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 42 Chương 3: Thực nghiệm kết b) Kết quả: Bảng 3-17: Kết qt phổ thí nghiệm Mẫu Cchuẩn ER (mg/L) 0,061 Abs 5,09 10,18 15,27 20,36 0,594 1,125 1,637 2,123 Hình 3-16: Phổ đồ kết thí nghiệm y = 0,1053x + 0,059 R2 = 0,9999 Hình 3-17: Đồ thị Abs = f(C) thí nghiệm  Hàm lượng Enrofloxacin 25,078 gam tá dược trơ lactose: mER  0, 059   0,  0, 224 (mg) 0,1053  Hàm lượng Enrofloxacin kg tá dược là: SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn 0, 224×1000 = 8,932 (mg/kg) 25, 078 Trang: 43 Chương 3: Thực nghiệm kết c) Nhận xét:  Hàm lượng Enrofloxacin tá dược tráng bồn đạt u cầu đặt (< 10 mg/kg)  Bồn trộn đủ điều kiện sử dụng để trộn mẻ thuốc Thí nghiệm 8: Xác định mức độ nhiễm chéo Enrofloxacin bồn trộn VMDX1078 a) Thực hiện:  Bồn trộn VMDX1078 sau trộn mẻ thuốc VIMENRO có chứa hàm lượng Enrofloxacin 10% vệ sinh  Tráng bồn 25 kg tá dược trơ lactose, trộn 15 phút  Định lượng Enrofloxacin tá dược tráng bồn: Lấy 25,054 gam tá dược tráng bồn cho vào BĐM 200 mL thêm NaOH 0,1N đến vạch, đem siêu âm lọc lấy dung dịch suốt Chuẩn bị dung dịch chuẩn Enrofloxacin có nồng độ 254,50 mg/L Lập dãy thêm chuẩn tương tự thí nghiệm b) Kết quả: Bảng 3-18: Kết qt phổ thí nghiệm Mẫu Cchuẩn ER (mg/L) Abs 0 0,025 5,09 0,556 10,18 1,085 15,27 1,607 20,36 2,119 Hình 3-18: Phổ đồ kết thí nghiệm SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 44 Chương 3: Thực nghiệm kết Hình 3-19: Đồ thị Abs = f(C) thí nghiệm  Hàm lượng Enrofloxacin 25,054 gam tá dược trơ lactose: mER  0, 0306   0,  0,117 (mg) 0,105  Hàm lượng Enrofloxacin kg tá dược là: 0, 0117 1000  4, 750 (mg/kg) 25, 054 c) Nhận xét:  Hàm lượng Enrofloxacin tá dược tráng bồn đạt u cầu đặt (< 10 mg/kg)  Bồn trộn đủ điều kiện sử dụng để trộn mẻ thuốc Thí nghiệm 9: Xác định mức độ nhiễm chéo Norfloxacin bồn trộn VMDX1070 a) Thực hiện:  Bồn trộn VMDX1070 sau trộn mẻ thuốc NORFLOXACIN 50 có chứa hàm lượng Norfloxacin 50% vệ sinh  Tráng bồn 25 kg tá dược trơ lactose, trộn 15 phút  Định lượng Norfloxacin tá dược tráng bồn: Lấy 25,038 gam tá dược tráng bồn cho vào BĐM 200 mL thêm nước đến vạch, đem siêu âm lọc lấy dung dịch suốt Chuẩn bị dung dịch chuẩn Norfloxacin có nồng độ 279,25 mg/L Lập dãy thêm chuẩn bảng 3-19: SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 45 Chương 3: Thực nghiệm kết Bảng 3-19: Dãy mẫu thêm chuẩn mẫu thật thí nghiệm Mẫu Vtá dược (mL) Vchuẩn NL (mL) Cchuẩn NL (mg/L) 25 0 25 5,585 25 11,17 25 16,755 25 22,340  Qt phổ tương tự thí nghiệm b) Kết quả: Bảng 3-20: Kết qt phổ thí nghiệm Mẫu CNL (mg/L) 0,050 Abs 5,585 11,17 16,755 22,34 0,651 1,221 1,792 2,32 Hình 3-20: Phổ đồ kết thí nghiệm Hình 3-21: Đồ thị Abs = f(C) thí nghiệm SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 46 Chương 3: Thực nghiệm kết  Hàm lượng Norfloxacin 25,038 gam tá dược trơ lactose: mNL  0, 054   0,  0, 203 (mg) 0,1065  Hàm lượng Norfloxacin kg tá dược là: 0, 203 1000  8,108 (mg/kg) 25, 038 c) Nhận xét:  Hàm lượng Norfloxacin tá dược tráng bồn đạt u cầu đặt (< 10 mg/kg)  Bồn trộn đủ điều kiện sử dụng để trộn mẻ thuốc Thí nghiệm 10: Xác định mức độ nhiễm chéo Marbofloxacin bồn trộn VMDX1077 a) Thực hiện:  Bồn trộn VMDX1077 sau trộn mẻ thuốc MARBO VIRYL ONE có chứa hàm lượng Marbofloxacin 20% vệ sinh  Tráng bồn 25 kg tá dược trơ lactose, trộn 15 phút  Định lượng Marbofloxacin tá dược tráng bồn: Lấy 25,046 gam tá dược tráng bồn cho vào BĐM 200 mL thêm nước đến vạch, đem siêu âm lọc lấy dung dịch suốt Chuẩn bị dung dịch chuẩn Marbofloxacin có nồng độ 282,0 mg/L Lập dãy thêm chuẩn bảng sau: Bảng 3-21: Dãy mẫu thêm chuẩn mẫu thật thí nghiệm 10 Mẫu Vtá dược (mL) Vchuẩn MB (mL) Cchuẩn MB (mg/L) 25 0 25 5,640 25 11,280 25 16,920 25 22,560  Qt phổ tương tự thí nghiệm b) Kết quả: Bảng 3-22: Kết qt phổ thí nghiệm 10 Mẫu CMB (mg/L) Abs 0,044 SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn 5,64 0,469 11,28 0,893 16,92 1,296 22,56 1,705 Trang: 47 Chương 3: Thực nghiệm kết Hình 3-22: Phổ đồ kết thí nghiệm 10 Hình 3-23: Đồ thị Abs = f(C) thí nghiệm 10  Hàm lượng Marbofloxacin 25,046 gam tá dược trơ lactose: mMB  0, 050   0,  0, 267 (mg) 0, 0749  Hàm lượng Marbofloxacin kg tá dược là: 0, 267 1000  10, 660 (mg/kg) 25, 046 c) Nhận xét:  Hàm lượng Marbofloxacin tá dược tráng bồn khơng đạt u cầu đặt (< 10 mg/kg)  Bồn trộn khơng đủ điều kiện sử dụng để trộn mẻ thuốc tiếp theo, bồn trộn phải vệ sinh lại SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 48 Chương 4: Kết luận Kiến nghị CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Qua q trình thực luận văn, chúng tơi rút kết luận sau:  Kỹ thuật thêm chuẩn thực tương đối đơn giản, nhanh chóng nên hữu ích cho cơng tác kiểm sốt nhiễm chéo sản xuất Kỹ thuật thêm chuẩn hồn tồn áp dụng với phương pháp khác HPLC, sắc ký ion,…  Xây dựng phương pháp định lượng chất Enrofloxacin, Norfloxacin Marbofloxacin để kiểm tra độ nhiễm chéo chúng q trình sản xuất thuốc thú y cách áp dụng kỹ thuật thêm chuẩn vào phương pháp quang phổ UV-Vis, với đặc điểm:  Độ đạt u cầu, với hệ số tìm lại 95% < Rc < 105%  Độ lặp lại cao: + RSD = 0,107% Enrofloxacin + RSD = 0,164% Norfloxacin + RSD = 0,101% Marbofloxacin  Độ tuyến tính cao: + Hệ số tương quan tuyến tính: R = 0,9999 + Phương trình tương quan tuyến tính: Với Enrofloxacin: Abs = 0,1030.CER + 0,0004 Với Norfloxacin: Abs = 0,1051.CNL + 0,0145 Với Marbofloxacin: Abs = 0,0738.CMB + 0,0045  Giới hạn phát giới hạn định lượng thấp (phương pháp nhạy): + Với Enrofloxacin: LOD = 0,173 mg/L; LOQ = 0,524 mg/L + Với Norfloxacin: LOD = 0,195 mg/L; LOQ = 0,589 mg/L + Với Marbofloxacin: LOD = 0,205 mg/L; LOQ = 0,623 mg/L  Kết kiểm tra thực tế bốn mẫu bồn trộn sản xuất, có ba bồn đạt u cầu để tiếp tục sản xuất bồn cần phải thực vệ sinh lại SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 49 Chương 4: Kết luận Kiến nghị 4.2 Kiến nghị Do thời gian thực có hạn nên đề tài số hạn chế:  Chỉ xây dựng phương pháp định lượng ba đối tượng Enrofloxacin, Norfloxacin Marbofloxacin Vì vậy, cần mở rộng thực đối tượng khác  Chỉ thực phương pháp phân tích quang phổ UV-Vis Vì vậy, cần phải tiếp tục thực phương pháp phân tích khác HPLC để đưa kết so sánh  Có thể mở rộng phạm vi áp dụng phương pháp cho quy trình thẩm định khác SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 50 Tài liệu tham khảo TÀI LIỆU THAM KHẢO Hồng Minh Châu,Từ Vọng Nghi Từ Văn Mạc, 2007 Cơ sở hóa học phân tích NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội 377 trang Nguyễn Thị Diệp Chi, 2008 Giáo trình "Các phương pháp phân tích đại" Khoa Khoa học Tự Nhiên, Đại học Cần Thơ Cục quản lý dược, 2014 Hướng dẫn thực hành tốt sản xuất thuốc theo WHO Trần Tứ Hiếu, 2003 Phân tích trắc quang : Phổ hấp thụ UV - Vis NXB Đại học quốc gia Hà Nội 226 trang Lê Thị Mùi, 2008 Bài giảng Phân tích cơng cụ Trường Đại học Sư phạm - Đại học Đà Nẵng Võ Văn Ninh, 2002 Kháng Sinh Trong Thú Y NXB Trẻ 138 trang Nguyễn Thị Thanh Nga, 2009 Nghiên cứu quy trình xác định dư lượng ciprofloxacin enprofloxacin thực phẩm phương pháp HPLC-MS/MS Thạc sĩ, mã số: 1.04.03 ĐH Khoa học Tự Nhiên Trần Cao Sơn, 2010 Thẩm định phương pháp phân tích hóa học vi sinh vật NXB Khoa Học Kỹ Thuật Hà Nội 103 trang Lâm Ngọc Thụ, 2005 Cơ sở hóa học phân tích NXB Đại học quốc gia Hà Nội 10 Vincent T Andriole, 2000 The Quinolones ed, Academic Press 11 M.C Bermúdez-Almada A Espinosa-Plascencia, 2012 The Use of Antibiotics in Shrimp Farming Health and Environment in Aquaculture tr 199-214 12 Graham R Bruce Paramjit S Gill, 1999 Estimates of Precision in a Standard Additions Analysis Journal of Chemical Education số 76(6), tr 805 13 S L Ellison M Thompson, 2008 Standard additions: myth and reality Analyst số 133(8), tr 992-7 14 EU-GMP, 2015 Cross Contamination: New EU requirements for use of multipurpose equipment 15 David Harvey, 2000 Modern analytical chemistry, McGraw-Hill tr 104-134 16 Bayer AG Leverkusen, 1999 History of Antimicrobial Therapy 17 L M Pallo-Zimmerman,J K Byron T K Graves, 2010 Fluoroquinolones: then and now Compend Contin Educ Vet số 32(7), tr E1-9; quiz E9 18 Chemistry 321, 2013 Calibration Methods http://www.csun.edu/~hcchm003/321/32191213.pdf, truy cập ngày 5/01/2015 19 Nguyễn Thanh Tùng Kháng sinh nhóm flouroquinolone điều cần lưu ý http://uv-vietnam.com.vn/NewsDetail.aspx?newsId=1497, truy cập ngày 5/01/2015 20 Wikipedia Marbofloxacin http://en.wikipedia.org/wiki/Marbofloxacin, truy cập ngày 04/01/2015 21 Wikipedia Norfloxacin http://en.wikipedia.org/wiki/Norfloxacin, truy cập ngày 04/01/2015 22 Wikipedia Standard addition http://en.wikipedia.org/wiki/Standard_addition, truy cập ngày 5/01/2015 23 David L Zellmer, 1998 Standard Addition http://zimmer.csufresno.edu/~davidz/Chem106/StdAddn/StdAddn.html, truy cập ngày 5/01/2015 SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 51 [...]... n y chính là phổ, từ phổ chúng ta có thể xác định ngược lại cấu trúc phân tử và hàm lượng chất phân tích Phương pháp quang phổ được chia thành:  Phương pháp quang phổ hấp thụ phân tử:  Phương pháp phổ quay và dao động: Phương pháp quang phổ hồng ngoại  Phương pháp phổ Raman  Phương pháp phổ UV- Vis  Phương pháp phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR  Phương pháp phổ khối lượng Mỗi phương pháp quang phổ. .. thuốc kháng sinh trong quá trình sản xuất thuốc thú y bằng phương pháp quang phổ UV- Vis Mục đích nghiên cứu chính của đề tài: X y dựng quy trình định lượng Enrofloxacin, Norfloxacin và Marbofloxacin có hàm lượng thấp trong thiết bị, dụng cụ pha chế bằng kỹ thuật thêm chuẩn áp dụng trên phương pháp quang phổ, nhằm tránh sự nhiễm chéo của chúng vào các loại thuốc th y sản, cũng như đảm bảo chất lượng thuốc. .. Như v y nhiễm chéo là việc tạp nhiễm của một nguyên liệu ban đầu, sản phẩm trung gian, hoặc thành phẩm với một nguyên liệu ban đầu hay sản phẩm khác trong quá trình sản xuất (Cục quản lí dược, 2014) Nhiễm chéo trên các sản phẩm sẽ g y ra nhiều tác hại nghiêm trọng Theo Cơ quan quản lý dược phẩm và các sản phẩm y tế Anh thì nhiễm chéo trên các sản phẩm thuốc là một trong những nguyên nhân hàng đầu trong. .. thêm chuẩn cho một d y chuẩn 1.4 Phương pháp phân tích quang phổ 1.4.1 Khái quát về phương pháp quang phổ Ng y nay các phương pháp vật lý, đặc biệt là các phương pháp phổ được sử dụng rộng rãi để nghiên cứu các hợp chất hóa học cũng như các quá trình phản ứng hóa học Những phương pháp n y đặc biệt có ý nghĩa đối với việc xác định các hợp chất hữu cơ Cơ sở của phương pháp phổ là quá trình tương tác... có một ứng dụng riêng Trong luận văn n y, chúng tôi khảo sát các quá trình thí nghiệm trên phương pháp quang phổ UV – Vis SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 11 Chương 1: Giới thiệu tổng quan Phương pháp quang phổ tử ngoại và khả kiến, viết tắt là UV – Vis (Ultraviolet Visible) là phương pháp phân tích được sử dụng rộng rãi từ lâu Phổ UV – Vis có được do sự tương tác của các điện tử hóa trị ở trong. .. các kháng sinh thuộc nhóm fluoroquinolones, theo Thông tư số 08/VBHN-BNNPTNT ng y 25/02/2014 của Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn đã bị cấm sử dụng trong ngành th y sản nhưng vẫn được cho phép sử dụng có giới hạn trong ngành thú y Chính vì v y, khi sản xuất thuốc thú y và thuốc th y sản trên cùng thiết bị, dụng cụ thì nguy cơ nhiễm chéo chúng vào các loại thuốc th y sản rất dễ x y ra... càng nhỏ thì phương pháp phân tích càng ít bị nhiễu Tín hiệu Phương pháp 1 Phương pháp 2 Cùng giá trị S Giá trị nồng độ nhỏ hơn => Pp nh y hơn Giá trị nồng độ lớn hơn => Pp kém nh y hơn Hình 1-15: So sánh độ nh y của phương pháp bằng đồ thị Theo hình 1-15, phương pháp 1 có hệ số góc lớn hơn nên có độ nh y hơn so với phương pháp 2 1.5.3.5 Giới hạn phát hiện (LOD) Giới hạn phát hiện là nồng độ thấp nhất... các m y quang phổ UV- Vis hiện nay là 0,001  3,000 hoặc 0,0001  4,0000 Như v y sai số tương đối về Abs nằm trong khoảng 0,01%  0,1%  Dễ thao tác và thực hiện nhanh chóng  Chi phí tương đối thấp (thấp hơn phương pháp HPLC) Trong đề tài luận văn n y, chúng tôi sử dụng m y quang phổ UV – Vis Ultrospec 2000 của Pharmacia – Anh, thuộc phòng thí nghiệm Vimedim của Công ty SX - KD vật tư & thuốc thú y Vemedim... phương pháp quang phổ bằng các kỹ thuật thông thường Với kỹ thuật thêm chuẩn áp dụng cho phương pháp quang phổ có thể khắc phục được nhược điểm đã nêu và đáp ứng được nhu cầu sản xuất Vì v y, để đảm bảo kết quả định lượng Enrofloxacin, Norfloxacin và Marbofloxacin có hàm lượng thấp trong thiết bị, dụng cụ pha chế có độ chính xác cao, chúng tôi chọn thực hiện đề tài: Kiểm tra độ nhiễm chéo một số thuốc. .. không có quy trình thu gom và xử lí chất thải rắn – Quy trình vệ sinh không được thẩm định dẫn đến không phát hiện sự tồn dư các vết nguyên liệu (nhiễm chéo giữa các sản phẩm), các chất t y rửa, và khả năng nhiễm vi sinh từ môi trường SVTH: Nguyễn Văn Khi & Lê Minh Vấn Trang: 3 Chương 1: Giới thiệu tổng quan Để hạn chế tình trạng nhiễm chéo trong sản xuất, cần phải khắc phục các nguyên nhân trên bằng cách ... TỐT NGHIỆP KIỂM TRA ĐỘ NHIỄM CHÉO MỘT SỐ THUỐC KHÁNG SINH TRONG Q TRÌNH SẢN XUẤT THUỐC THÚ Y BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUANG PHỔ UV- VIS CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths Nguyễn Thị Diệp Chi Ths Nguyễn Phương Hải... có độ xác cao, chúng tơi chọn thực đề tài: Kiểm tra độ nhiễm chéo số thuốc kháng sinh q trình sản xuất thuốc thú y phương pháp quang phổ UV- Vis Mục đích nghiên cứu đề tài: X y dựng quy trình. .. ng y 09 tháng 05 năm 2015 - - NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Tên đề tài Kiểm tra độ nhiễm chéo số thuốc kháng sinh q trình sản xuất thuốc thú y phương pháp quang phổ UV- Vis