4 Đánh giá tương đương sinh học viên nén Fenofibrat 200 mg Võ Quốc Ánh*, Đào Văn Nam*, Lê Xuân Kỳ*, Tạ Mạnh Hùng** *Trường Đọi học Dược Hà Nội **Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương SUMMARY The bioequivalence o f two products, Fenofibrat 200 mg tablets and Lypanthyl 200M capsules, was evaluated on 18 healthy Vietnamese volunteers based on a random - crossover, two - treatments, two - periods designation Plasma concentration offenofibric acid, an active metabolite o f fenofibrate, was determined by HPLC with UV-VISdetectơ.Thefenofibric acid pharmacokinetic parameters o f two dosage forms were calculated including AUCu_^ A u c ^ andti^ base on WinNonlin 2.0 software /Is proven by one way ANOVA, the two products were statistically bioequivalent on Vietnamese healthy volunteers according to acceptable criteria o f ASEAN Guideline For Bioequivalence Study Từ khóa: tương đương sinh học, Fenofibrat, vi hạt, HPLC, huyết tương Đặt vấn đề chứng minh tương đương sinh học tương đương điểu trị với viên nang fenofibrat Fenofibrat (FB) dẫn chất thuộc nhóm acid fenofibric (FA) Hoạt chất có nhiễu ưu điểm 0 mg dạng vi hạt [7], [8 ] Chính vậy, việc đánh giá sinh khả dụng tương đương sinh học chế vượt trội so với dẫn chất nhóm vể tác dụng, tác dụng phụ tẩn suất gặp phải khả phổi hợp với thuốc hạ lipid máu khác [3], [4] Khi dùng theo đường uống, thuốc thủy phân hoàn toàn thành acid fenofibric hấp thu không tìm thấy vết fenofibrat huyết tan sinh khả dụng cán thiết Mục tiêu nghiên cứu đánh giá tương đương sinh học viên nén Fenofibrat 200 mg ứng dụng kỹ thuật tạo vi hạt đông tụ từ nhũ tương (thuốc nghiên cứu - Trường Đại học Dược Hà Nội) tương Đối với dạng thuốc quy ước, fenofibrat có T khoảng giờ, khoảng 20 [1 ], c thay đổi lớn phụ thuộc vào tình trạng tháo rỗng viên nang cứng Lipanthyl 200M bào chế từ vi hạt fenofibrat (Laboratoires Fournier S A - Pháp) người tình nguyện Việt Nam phẩm có ứng dụng kỹ thuật làm tăng độ hòa dày người tình nguyện Một điểm đặc biệt fenofibrat liều dùng Đối tượng phương pháp nghiên cứu phụ thuộc nhiểu vào công nghệ sản xuất thuốc Viên nang FB 300 mg bào chê' từ nguyên liệu thường Thiết bị hóa chất viên nang FB 200 mg bào chế từ \'i hạt FB Acid fenofibric (chất chuẩn - Viện Kiểm nghiệm chứng minh tương đương sinh học tương thuốc Trung ương, hàm lượng 99,6%, độ ẩm 0,64%), đương điểu trị [5], [6 ], [9] Bên cạnh đó, viên nén Acid phosphoric đặc, natri dihydrophosphat, fenofibrat 160 mg ứng dụng công nghệ vi bao 2-naphthol, EDTA (tinh khiết phân tích - Merck, Đức) acetonitril, methanol (tinh khiết HPLC - Merck, Đức) Hệ thống HPLC Agilent 1200, detectơ UV-VIS, autosampler(Đức) thuốc giờ, NTN ăn theo chế độ chuẩn hóa, dùng loại thức ăn Cột sắc ký: RP18 Inertsil ODS-3 (4,6 X 250 mm, um - Nhật) phê duyệt ngày 28/01/2011 Hội đạo đức nghiên cứu y sinh, Trường Đại học Dược Các thiết bị khác: Hệ thống cất nước Elgastat UHQ, Elga (Anh); máy ly tâm Hermle (Đức); máy Hà Nội Lấy mẫu bảo quản mâu: Lấy ml máu lắc vortex VM300 (Gemmy, Đài Loan); máy đo pH Metrohm 827 (Đức); tủ lạnh sâu -40°C; bể siêu âm người tình nguyện thời điểm: 0, 1, 2, 3,4, 5, , 7, ,1 ,1 , 24, 36,48 72 sau uống thuốc Các WUC-A10H(Tây Ban Nha) mẫu máu chống đông EDTA, ly tâm 3500 hai giai đoạn thử nghiệm Đề cương nghiên cứu Thuốc thử thuốc đối chứng vòng/phút Thuốc thử: Viên nén Fenofibrat 200 mg (Thuốc quản - 40°c chờ phân tích Quy trình xử lý mẫu: Rã đông mẫu huyết tương nghiên cứu - Trường Đại học Dược Hà Nội) Mầu sản xuất quy trình thiết bị quy mô sản xuất công nghiệp, ngày sản xuất 18/11/2011 Thuốc kiểm nghiệm đạt Tiêu chuẩn sở (hàm lượng 99,6%) Thuốc đối chứng.-Viên nang Lipanthyl 200M (chứa phút, loại bỏ hổng cấu bảo nhiệt độ phòng Lấy vào ống ly tâm 1000 |jl huyết tương; 1000 ụl 2-naphtol (IS) 2,0 Ịjg/ml acetonitril Lắc vortex 10 phút Ly tâm 6000 vòng/phút 10 phút Hút lấy phần dịch để chạy HPLC 200 mg fenofibrat dạng vi hạt) Thuốc sản xuất Điểu kiện HPLC: Pha động: acetonitril - dung dịch Công ty Laboratoires Fournier S.A - Pháp (Số đăng ký VN-0459-06; số kiểm soát 17629; ngày sản đệm phosphat pH 2,5 (dung dịch NaH^PO^ 0,1% điều chỉnh đến pH 2,5 HjPO^ đặc) (75:25); tốc xuất 28/03/2011; hạn sử dụng: 28/03/2014) Thuốc kiểm nghiệm đạt Tiêu chuẩn nhà sản độ dòng , ml/phút; thể tích tiêm mẫu: |jl; bước sóng; 286 nm; nhiệt độ 20-25°C Nồng độ FA xuất (hàm lượng 99,8%) tính theo đường chuẩn nồng độ FA tỷ lệ Người tình nguyện (NTN) Người Việt Nam, nam giới, có độ tuổi từ 20 - 45 diện tích píc FA/IS Phương pháp định lượng FA huyết tương tuổi, tiền sử bệnh đặc biệt, khòng dùng thuốc khác vòng 30 ngày, không dị ứng với nhóm acid fenofibric, có số sinh hóa chức gan thận bình thường không bị nhiễm HBV, HIV Phương pháp nghiên cứu Mô hình nghiên cứu: Áp dụng mô hình nghiên cứu thẩm định đạt yêu cẩu theo hướng dẫn US-FDA vể thẩm định phương pháp phân tích mù đơn, chéo đôi, ngẫu nhiên, đơn liều, hai giai đoạn 60 ngày điểu kiện bảo quản -40°c (thay đổi < 4%) Tính toán: Thời gian nghỉ hai lấn dùng thuốc 14 ngày dịch sinh học [10] Các tiêu chí thẩm định gồm có: Độ chọn lọc, khoảng tuyến tính, độ đúng, độ lặp lại, độ tìm lại độ ổn định Trong đó, giới hạn định lượng 0,5 ng/inỉ, khoảng nống độ khảo sát từ 0,5 |ag/ml đến 25,0 ^jg/ml, mẫu huyết tương ổn định Quy trình uống thuốc: Người tình nguyện - Nồng độ FA mẫu huyết tương NTN đánh số chia ngẫu nhiên vào hai nhóm Nhóm tính dựa vào đường chuẩn xây dựng uống thuốc thử đợt thứ thuốc đối chứng ngày phân tích Đối với mẫu có nổng độ FA đợt thứ hai nhóm uống theo thứ tự ngược giới hạn định lượng (0,5 ng/ml), gán giá trị lại Người tình nguyện tập trung ngủ lại tính toán giá trị trung bình độ lệch chuẩn với n = nơi thử thuốc muộn 18 (tổng so NTN) 2 tối hôm trước - Các thông số dược động học: AUCị,^; AUCjj ; phải tuân thủ tuyệt đối quy định người tình nguyện Sau ăn sáng với mức dinh dưỡng số tốc độ thải trừ Ke thời gian bán thải t1/2 trung bình, NTN cho uống viên với xác định phẩn mềm WinNonlin 2.0 Giá trị c 200 ml nước Các bữa lại cách thời điểm uống T 98 Nghiên CỨU diiọc Thống tin thuõc Số 3/2013 thu từ thực nghiệm ; ề Kết bàn luận đáng kể chl số sinh hóa, tim mạch trước sau thửthuốc Chúng không phát phản ứng phụ đáng kể xảy đổi với người tình nguyện sau nghiên cứu Mẫu huyết tương 18 người tình nguyện Nghiên cứu thực 18 người tình nguyện có tuổi trung bình 23,2 tuổi (SD = 1,98), chiểu cao trung bình 167,2 cm (SD = ,6 ), cân nặng bảo quản -40°c phân tích vòng 45 trung bình 58,5 kg (SD = 6,31) số BMI trung bình 20,9 kg/m^ (SD = 1,59) Không có trường hợp ngày Một số sắc ký đồ tiêu biểu dược trình bày hình : rút khỏi nghiên cứu thay đổi íĩlĩlh / S ứ C UI/1.UU II lu I lu v /iiy 1111 < I I LI I\I II II iư i ị i I/ / m u I iLjjr iư u i điểm (0 , mẫu huyét tương NTN sổ 14 sau uóng thuốc áứng thời đểm (ũ) Kết nồng độ FA trung bình huyết tương NTN sau uống thuốc thử thuốc đổi chứng trình bày bảng hình Bỏng 1: Nóng độ thuỗc tmnq bình (ịig/ml) cùa tììuỗc thử thuỗc đói chứng Thời gian (giờ) A A D D 10 12 24 36 48 72 TB 4,72 13,23 15,07 14,69 11,97 10,04 8,48 7,58 6,26 5,28 2,44 1,35 0,84 0,17 SD 2,82 4,32 3,55 3,32 2,89 2,53 2,03 1,60 1,38 ^ 1,23 0,63 0,51 0,51 0,32 TB 2,15 8,76 13,67 16,19 14,38 11,63 9,93 8,74 6,99 5,73 2,68 1,46 0,87 0,15 SD 2,71 5,76 4,31 4,42 4,13 3,23 2,72 2,55 2,04 1,65 0,76 0,52 0,47 0,29 Các thông sổ dược động học theo cá thể tính toán dựa phần mềm WinNonlin 2.0 Kết thống kê bảng Báng 2: Thông sỗ dược động học theo cá thể Thuốc đối chứng Thuỗc thử NTN AUCo (|jg.h/ml) AUC.- (|ig.h/ml) k) AUC„ (|]g.h/ml) AUC,„ ((ig.h/ml) (»■ ;« 12,98 9,06 12,43 203,53 223,12 17,80 19,21 255,49 265,77 21,20 228,10 236,83 9,30 19,41 223,78 232,12 3 15,87 175,93 182,73 9,34 15,09 163,09 172,35 9,67 14,48 150,92 158,66 7,76 16,71 173,88 184,72 10,06 18,62 295,16 312,89 15,46 18,11 291,44 311,22 16,12 16,17 168,14 175,37 9,32 16,68 182,84 193,00 9,72 16,50 180,55 191,46 10,01 18,53 190,77 202,55 9,94 15,40 210,23 221,77 10,41 20,35 244,87 260,49 10,55 15,46 165,72 172,52 9,10 18,60 162,34 172,21 7,70 221,89 242,75 11,76 10 17,45 212,38 226,99 10,83 16,48 11 15,39 161,96 168,69 9,09 15,50 170,30 177,37 9,13 12 17,84 207,28 224,22 11,07 17,94 203,04 216,71 10,15 13 15,93 251,44 272,10 17,40 15,13 228,46 240,32 14,92 14 18,68 247,86 259,94 13,98 21,70 291,85 305,80 13,60 186,45 193,97 9,19 15 15,90 166,19 173,68 9,29 17,50 16 18,53 239,29 254,84 10,55 18,48 231,22 244,65 10,49 17 13,57 172,38 188,78 12,07 12,90 184,03 203,83 13,08 18 4,60 75,52 92,41 14,12 1,53 42,75 54,91 24 11,41 Kết bảng cho thấy, thông số dược động Bàng 4: So sánh phương sẩcácyéu tố ònh hư ầ g (mức tin cậỵ 95%) học cá thể tương đối phân tán Tuy nhiên, so sánh theo cặp có tương uống thuốc thử thuốc chứng cá thể Đặc biệt, có hấp thu thấp khác biệt cá thể số 18 đổi với hai thuốc Các thông số dược động học trung bình Thuốc 0,13 0,23 hai thuốc trình bày bảng Giai đoạn 2,78 3,93 Giá trị F Yếu tố AUC_ Trình tự AUC„, 0,06 0,16 Cá thê’ 19,80 19,63 F0,05 Kết luận 0,54 4,49 Không ảnh hưởng 8,71 2,33 Có ảnh hưởng 0,00 4,49 Không ảnh hưởng 0,88 4,49 Không ảnh hưởng Kết cho thấy: yếu tổ trình tự thử Bòng ỉ : Mật 5Ổthông sỗ dược động học củo thuỗc đốl chứng ¥Ờ thuốc thừ Trung bình SD Trung bình SD thuốc, giai đoạn thử thuốc thử ảnh hưởng ý nghĩa thống kê (F 8,7 > F0,05 = 2,33) AUC„„(fig/ml.giờ) 207,61 50,87 215,26 58,18 L ( g iờ ) 3,00 0,77 4,94 4,80 T,„{giờ) K J.10-2g iờ -l) 11,49 3,00 11,09 2,24 6,37 1,43 6,48 1,21 Thông số Thuốc thử Thuỗc đối chứng Ảnh hưởng yếu tố: cá thể, trình tự thử thuốc, giai đoạn thuốc đến thông số AUCg , AUCg, c đánh giá theo phương pháp phân tích phương sai Kết trình bày bảng Khoảng tin cậy thông số dược động học dạng logarit hóa thuốc thử so với thuốc đổi chứng tính toán trình bày bảng 5: Bổng 5: Két quâ đánh giá tương đương sinh học Dû kiên T ỷ lê ln (C ) T ỉlê ln ( A U C J Tỉlẽln(A U C „ ) Khoảng tin 88,01 -113,39% 92,27- 105,41% 92,56-104,48% 90% - M Từ kết phân tích thống kê vể khoảng tin cậy kết luận thuốc thử thuốc đối chứng tương đương sinh học theo hướng dẫn ASEAN đánh giá tương đương sinh học [2 ], thời gian nghỉ hai giai đoạn Các thông sổ dược động học K AUC(^ tính theo mô hình động học thải trừ bậc với hệ số tương quan lớn 0,95 chứng tỏ dược động học thuốc phù hợp với mô hình động học ngăn Bàn luận Kết luận Các thời điểm lấy mẫu nghiên cứu phù có Kết đánh giá tương đương sinh học cho thấy, giá trị từ đến giờ, khoảng thời gian mà mật khoảng tin cậy tỷ lệ thông sổ dược động học nhóm thử so với nhóm chứng đểu nằm hợp với đặc tính dược động học thuốc T độ lấy mẫu dày nên kết thu khách quan Giá trị hai thuốc khoảng 1 Như vậy, thời điểm kết thúc lấy máu khoảng lấn tương ứng với thời điểm nồng độ thuốc huyết tương khoảng 1,5% so với giá trị c Trên giới hạn cho phép từ 80% -125% Từ kết luận, viên nén fenofìbrat 0 mg tương đương sinh học với viên nang Lyphanthyl 200 M người tình nguyện theo qui định ASEAN thực tế, tất mẫu thời điểm cuối đểu có Lời cảm ơn: Chúng xin trân trọng cảm ơn nồng độ nhỏ lẩn so với phẩn ngoại suy AUC|J^ chiếm không 10% Do vậy, việc Cục Khoa học Công nghệ Đào tạo - Bộ Y tế tài trợ kinh phí cho nghiên cứu Chúng cảm kết thúc lấy mẫu 72 phù hợp Thời gian nghỉ ơn Trung tâm Tương đương sinh học - Viện Kiểm hai giai đoạn 14 ngày, tương ứng với 30 lần nghiệm thuốc Trung ương phối hợp với chúng đảm bảo thuốc thải trừ hoàn toàn sau thực nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2002), Dược thư Quốc gia Việt Nam ASEAN Consultative Committee for Standards and Quality Pharmaceutical Product Working Group (2012), ASEAN Guidelines for The Conduct o f Bioavailability and Bioequivalence Studies Athyros V.G., Papageorgiou A.A., Athyrou v.v (2002), "Atorvastatin and micronized fenofibrate alone and in combination in type diabetes with combined hyperlipidemia", Diabetes Care, 25{7):1198-202 Davidson MH (2006), "Statin/fibrate combination in patients with metabolic syndrome or diabetes: evaluating the risks of pharmacokinetic drug interactions", Expert Opin Drug Saf., 5(1 ):145-56 Guay D.R (1999), "Micronized fenofibrate: a new fibric acid hypolipidemic agent", Ann Pharmacother., 33(10):1083-103, Guichard IP & Sauson R.Levy-Prades (1993), "A comparison of the bioavailability of standard or micronized formulations of fenofibrate", Current Therapeutic Research, 54(5): 610-4 Najib J (2002), "Fenofibrate in the treatment of dyslipidemia: a review of the data as they relate to the new supra bioavailable tablet formulation", Clinical Therapeutics, 24(12): 2022-50 Ramjattan B R., Callaghan D J.G., Theiss u (2002), "Efficacy and Tolerability of a "Suprabioavailable" Formulation of Fenofibrate in Patients with Dyslipidemia: A Pooled Analysis of Two Open-Label Trials", Clin Ther., 24(7):1105-16 Sharpe M„ Ormrod D., Jarvis B (2002), "Micronized fenofibrate in dyslipidemia: a focus on plasma high-density lipoprotein cholesterol (HDL-C) levels", Am J Cardiovasc Drugs, 2(2):125-32 10 U.S Food and Drug Administration, CDER (2001), Guidance for Industry: Bioanalytical Method Validation  ... thuốc đối chứng tương đương sinh học theo hướng dẫn ASEAN đánh giá tương đương sinh học [2 ], thời gian nghỉ hai giai đoạn Các thông sổ dược động học K AUC(^ tính theo mô hình động học thải trừ... nồng độ thuốc huyết tương khoảng 1,5% so với giá trị c Trên giới hạn cho phép từ 80% -125% Từ kết luận, viên nén fenofìbrat 0 mg tương đương sinh học với viên nang Lyphanthyl 200 M người tình nguyện... số tương quan lớn 0,95 chứng tỏ dược động học thuốc phù hợp với mô hình động học ngăn Bàn luận Kết luận Các thời điểm lấy mẫu nghiên cứu phù có Kết đánh giá tương đương sinh học cho thấy, giá