Các mẫu viên nén qui ước sau 45 phút thử GPDC in vitro in vivo đểu giải phóng gần hoàn toàn dược chất (trên 90 %) Kết so sánh khả GPDC in vitro viên 200 mg ACV GPKD 24 12 với mẫu viên nhỏ tương ứng (40 mg) khả GPDC in vivo thỏ cho thấy có tương mô hình đánh giá GPDC in vitro in vivo động vật thí nghiệm (chỉ số f2 đểu thuộc khoảng 50 - 100) Như vậy, kết nghiên cứu đả cho phép kết luận mô hinh đánh giá GPDC có tính khả thi, tin cậy áp dụng nghiên cứu tương tự Viên nén ACV KDSH đặt phụ khoa bào chế có khả KDSH tốt, GPDC kéo dài 24 Kết luận Nghiên cứu đả đạt số kết sau: Đả xây dựng công thức bào chê' viên nén acyclovir 200 mg KDSH đặt phụ khoa GPKD 24 phương pháp dập thẳng Bước đẩu xây dựng mô hình đánh giá giải phóng in vivo viên nén bào chế thỏ Kết nghiên cứu chứng tỏ viên nén bào chế có khả náng KDSH tốt kiểm soát GPDC kéo dài 24 TÂI LIỆU THAM KHẢO Bộ môn Hóa dược (2004), Hóa dược, Trường ĐH Dươc Hà Nội,tr, 326-328 Bộ Y tế (2009), Dươc thư quốc gia việt nam,tr 102-104 Mai Thu Đường (2004), "Herpes sinh dục - số vấn đề vể quản lý điếu tri", Bệnh viện Da liễu thành phố Hổ chí Minh Vũ Thị Thu Giang, Phạm Thị Minh Huệ cộng (2010), Nghiên cứu bào chế viên nén acyclovir kết dính sinh họcđặt phụ khoa giải phóng kéo dài, Đề tài nghiên cứu khoa học cấp trường, trường đại học Dược Hà Nôi Kast C.E., Valenta c., et al (2002), "Design and ỉn vitro evaluation of a novel bioadhesive vaginal drug delivery system for clotrimazole", J Controll ReL, 81,3, pp 347 - 354 Sweetman S.C., et al (2009), Martindale 36, Pharmaceutical Press, pp 862-854,911 Wang L.,Tang X (2008), "A novel ketoconazole bioadhesive effervescent tablet for vaginal delivery: Design, in vitro and in vivo evaluation", Int J Pharm., 350,1-2, pp 181-187, Phân tích đồng phân đối quang ofloxacin phương pháp điện di mao quản Tống Thị Thanh Vượng*, Lê Đình Chi** *Trường Đại học Dược Hà Hội **Viện Kiểm nghiệm thuốc Trung ương T kh ó a : capillary electrophoresis, cyclodextrìn, enantioseparation, ofloxacin SUM M ARY A simple, selective cyclodextrin-based CE method has been developed for the determination o f enantiomer o f ofloxacin, This method was carried out in a fused-silica capillary (effective length 30 cm, inner diameter 50 ụm) with a 75 mM solution oforthophosphoric acid, adjusted to pH 3.5, containing 4.5 mg ofcarboxymethyl^li-cycloclextrin per mililitre as electrolyte The m ethod was validated in term of specificity, linerity, accuracy and precision Đặt vấn để Ofloxacin hợp chất có hoạt tính kháng khuẩn thuộc nhóm dẫn xuất fluoroquinolon đượcsửdụng song hành dạng hỗn hợp racemic (ofloxacin) dạng phân tả tuyển đơn thuẩn (levofloxacin) Cho tới nay, Dược điển Việt Nam IV Dược điển nước (Anh, Mỹ ) chưa có phương pháp thống để phân tích đống phân đối quang ofloxacin Do đó, sử dụng phương pháp điện di mao quản (Capillary electrophoresis-CE) với chất chọn lọc hoạt quang carboxymethyl-p-cyclodextrin (CMCD), hướng nghiên cứu sử dụng nhiều phân tích phân đối quang [1], [2] để xây dựng quy trình tách hai đóng phân đối quang ofloxacin, từ cho phép phân biệt cách đặc hiệu dạng ofloxacin racemic levofloxacin tả tuyển Đối tượng phương pháp nghiên cứu Nguyên vật liệu - Các chất đối chiếu: Ofloxacin (Chuẩn Viện Kiểm nghiệm thuốc trung ương), levofloxacin (Chuẩn làm việc) - Mẫu thử: + Dung dịch nhỏ mắt Oflovid, chứa 0,3 % ofloxacin, nhà sản xuất Santen Pharmaceutical Co, Ltd + Viên nén Ofloxacin STADA, chứa 200 mg ofloxacin, nhà sản xuất Công ty Liên doanh TNHH STADA Việt Nam +Viên nén Levotamaxe,chứa 100 mg levofloxacin, nhà sản xuất Công ty TNHH Dược phẩm DTM - Hóa chất tinh khiết phân tích: Acid orthophosphoric, natri hydroxyd, carboxymethyl-pcyclodextrin (CMCD) Thiết bị - Máy điện di mao quản Hewlett Packard3ECE, detector PDA - Máy đo pH Metrohm (Đức) - Bộ lọc nước siêu tinh khiết Elga (Đức) - Cân phân tích Mettler Toledo AB204S có độ xác tói 0,1 mg - Dụng cụ thủy tinh xác loại A (bình định mức, pipet ), màng lọc 0,2 |jm Phương pháp nghiên cứu - Dựa vào cấu tạo, tính chất hóa lý phân đối quang ofloxacin nghiên cứu thực nghiệm để xây dựng, thẩm định phương pháp phân tích phân đỗi quang ofloxacin - Xử lý kết phương pháp thống kê có sử dụng phẩn mềm Microsoft Excel Thực nghiệm kết Xây dựng phương pháp phân tích phân đối quang ofloxacin CE Qua tiến hành khảo sát điểu kiện về: nóng độ CMCD, pH dung dịch điện ly nền, loại dung dịch điện ly sử dụng, điểu kiện xử lý, cân mao quản, điểu kiện thiết bị (điện chạy điện di, bước sóng detector), thiết lập quy trình điện di sau: - Mao quản silic nung chảy (Chiểu dài hữu ích 30 cm, đường kính 50 ịjm) -Điện thế: +15 kv - Nhiệt độ mao quản; 25°c - Áp suất, thời gian tiêm mẫu: 50 mbar X giây - Detector PDA đặt bước sóng 290 nm - Dung dịch điện di: Dung dịch acid orthophosphoric 75 mM điều chỉnh đến pH 3,5 NaOH 1M chứa CMCD nồng độ 4,5 mg/ml - Quy trình rửa mao quản: + Mao quản mới: trước sử dụng, mao quản hoạt hóa dung dịch natri hydroxyd 0,1 M 60 phút, sau rửa nước trao đổi ion 10 phút + Trong trình phân tích: trước lẩn chạy điện di, rửa mao quản theo thứ tự: nước trao đổi ion phút, dung dịch natri hỵdroxyd phút, nước trao đổi ion phút, dung dịch điện di phút Khi kết thúc ngày làm việc, rửa mao quản theo thứ tự: nước trao đổi ion phút, dung dịch natri hydroxyd phút, nước trao đổi ion phút Bảo quản mao quản nước trao đổi ion - Dung dịch chuẩn gốc: Cân xác khoảng 75 mg chuẩn ofloxacin 37,5 mg chuẩn levofioxacin vào bình định mức 50 ml, thêm ml acetonitril, lắc siêu âm hòa tan hoàn toàn, thêm nước trao đổi ion vừa đủ thể tích, lắc đểu -Dung dịch chuẩn: Để định lượng hoạt chất chế phẩm, pha loãng xác dung dịch chuẩn gốc nước trao đổi ion để thu dung dịch chuẩn có nổng độ khoảng 150 |jg/ml với ofloxacin 75 ng/ml với levofloxacin Lọc qua màng lọc 0,2 |jm - Dung dịch thử: + Chế phẩm dạng viên: Cân 20 viên thuốc, xác định khối lượng trung bình viên, nghiền thành bột mịn Cân lượng bột viên tương ứng với khoảng 150 mg ofloxacin 75 mg levofloxacin vào bình định mức 100 ml, thêm 10 ml acetonitril, lắc siêu âm cho tan hết, thêm nước trao đổi ion vừa đủ thể tích, lắc đểu Lọc qua giấy lọc, pha loãng xác dịch lọc nước trao đổi ion để thu dung dịch có nồng độ khoảng 150 |jg/ml với ofloxacin hoậc 75 |ag/ml với levofloxacin Lọc qua màng lọc 0,2 ụm + Chế phẩm dạng dung dịch nước pha loãng xác chế phẩm nước trao đổi ion để thu dung dịch có nồng độ khoảng 150 ng/ml với ofloxacin 75 |jg/ml với levoHoxacin Lọc qua màng iọc 0,2 |jm Thẩm định phương pháp phán tích đồng phân đối quang ofloxacin Đô đác hiêu Để đánh giá độ đặc hiệu phương pháp, tiến hành phân tích dung dịch chuẩn ofloxacin racemic, chuẩn levofloxacin, mẫu viên nén Ofloxacin STADA (chứa ofloxacin racemic) mẫu viên nén Levotamax (chứa levofloxacin), ghi lại điện di đổ Điện di đổ mẫu Ofloxacin STADA cho hai pic tương ứng với hai pic điện di đổ chuẩn ofloxacin racemic (Hình 2) Tương tự, điện di đổ mẫu Levotamax cho pic tương ứng với pic điện di đổ chuẩn levofloxacin (Hình 4) Đổng thời, so sánh điện di đổ chuẩn ofloxacin racemic chuẩn levofloxacin, nhận thấy pic levofloxacin di chuyển tới detector trước, dextrofloxacin phân tới detector muộn Nhưvậy, phương pháp phân tích cho phép tách riêng hai phân đối quang ofloxacin phân biệt đặc hiệu hai dạng ofloxacin racemic levofloxacin V 'w - Hìntì 1.Điện di đố chuẩn ofioxQdn Hmh 2.ĐÌỆÍÌ ă đỗ m u Ofloxodn STADA Hinh Ỉ.ĐIêìì đỗ chuáíì levofloxQcIn Hìỉìíì 4.Điện dì đô ỉĩìáu Im tũ ỉiìũ Đô tuvến tính Chuẩn bị dãy dung dịch chuẩn ofloxacin racemic (có thành phẩn gồm 48,83% levofloxacin 51,17% dextrofloxacin) gổm dung dịch có nổng độ levofloxacin từ 24,42 |jg/ml đến 122,08 |ag/ml nổng độ dextrofloxacin từ 25,59 fag/ml đến 127,93 |jg/ml Các dung dịch chuẩn đưa vào hệ thống điện di để phân tích theo điểu kiện mục Kết thu (Bảng 2) cho thấy khoảng nống độ khảo sát có tương quan tuyến tính chặt chẻ nồng độ hai đóng phân đối quang ofloxacin diện tích pic điện di đổ, với hệ số tương quan r = 0,9959 trường hợp levofloxacin, r = 0,9971 với dextrofloxacin Bâĩiũ l Quan hệ diện tích pic íìôĩìq độ levoßoxücin Nốngđộlevoíloxacin (|jg/ml) Diện tích pic(mAU.s) 24,16 48,32 72,48 96,64 ; 120,81 29,73 42,83 60,07 76,59 98,86 Phương trình hổi (Ịuyĩuyén M : ỵ = ,7 1 x+ 10,012 Hèsỗtươíìg(ỊUOíì:r = 0,9959 Bảng Ouũn tìệ giữũ diêĩi tích pic nóng đỗ àxtrofloxQcin Nóng độ dextrofloxacin (|jg/ml) 76,76 25,59 ' 51,17 » 102,34 68,94 * 81,77 ; i 127,93 102,19 Lượng !, Đô lăp lai Để đánh giá độ lặp lại phương pháp, tiến hành phân tích độc lập lấn mẫu viên nén Ofloxacin STADA sử dụng điểu kiện điện di m ụ c l Bảng ] Kết quà đánh giá độ lộp lợi Lượng cánthử (gam) Dextrofloxodn Hàm lượng (mg/ viên) Diện tkhpk (ĩìiAU.s) Diện tíchpic (mAU.s) Hàm lượng (mg/ viên) Tổng hàm lượng (mg/ viên) ị 0,2020 i 62,24 100,84 ị 64,14 103,93 204,77 0,2050 62,54 100,93 64,36 103,88 204,81 0,2110 63,09 98,92 65,99 103,48 202,40 0,2011 61,29 100,88 63,07 103,82 204,70 i 0,1985 60,59 100,98 62,38 103,98 204,96 0,2042 61,62 100,93 63,21 103,54 204,46 103,77 204,35 0,20 0,47 100,58 TB RSD% ^ 0,81 i Kết đánh giá thực nghiệm (Bảng 3) cho thấy định lượng levoAoxacin dextroíloxacin, 24 Báng 4.Két quà đánh gỉá độ vă levofloxQcin : Phương trình hỗi quỵ tuỵén tính: y = Q M x + 20Ạ19 H êsổtương(jUũĩì:r=0,9971 Lmíìoxacin phương pháp xây dựng cho độ lặp lại tốt (RSD lán lượt 0,81% 0,20% cho levofloxacin dextrofloxacin) Đô đúnạ Để đánh giá độ quy trình phân tích, chuẩn bị nển mẫu thử từ mẫu viên nén Ofloxacin STADA cho nổng độ phân đổi quang ofloxacin nển mẩu vào khoảng 60 |ag/ml Sau đó, thêm xác chuẩn ofloxacin racemic vào nển mẫu để nồng độ mổi phân thêm vào nển mẩu chế phẩm khoảng 15 pg/ml Mẫu tự tạo có thêm chuẩn chuẩn bị phân tích lẩn độc lập Độ phương pháp thể qua tỷ lệ (%) nóng độ phân tìm lại mẩu tự tạo so với nổng độ thêm vào ban đẩu (Bảng 5) iMghlén CỨU dược Th ố n g tín th u ố c : Diện (iomin ; * Tổng nồng độ levofloxadn trongmâu thêmchuẩn (¡jg/ml) Hông độ levofloxocin tìmlợi (ụg/m!) Tỷlệ tìm loi (%) 0,1724 14,50 63,36 74,91 14,27 98,4 0,1773 14,50 i 65,17 77,43 14,68 101,3 0,1761 14,50 65,02 77,22 14,99 103,4 0,1707 14,50 62,81 74,15 14,23 98,1 0,1735 14,50 63,91 75,68 14,56 100,4 0,1742 14,50 63,85 75,59 ' 14,18 97,8 Báng Kết quà đánh giá độ vđ dextrofloxocin Diện tlch Tổngnồng đậdexừoíloxơán ĩỷlệ tìm loi (%) (ụg/ml) Nống độ dextrofloxacin tìmlại iụqlmị) p ic (itìAu.s) m àu thêm chuẩn 71,89 15,10 99,4 66,09 74,26 15,07 99,2 15,20 65,74 73,72 15,12 99,5 0,1707 15,20 64,22 71,38 15,42 101,5 0,1735 15,20 65,17 : 72,84 15,51 ! 102,1 0,1742 15,20 65,32 ^ 73,07 15,40 101,4 Lượng côn mẫu nển (g) Nồng độ dextrofloxadn thêmrào (ụg/mí) 0,1724 15,20 64,55 Ị 0,1773 15,20 0,1761 i Với tỷ lệ tìm lại dao động từ 97,8% đến 103,4%, phương pháp phân tích đả xây dựng cho độ tốt định lượng hai phân đối quang ofloxacin Áp dụng phương pháp đá xây dựng, thẩm định chế phẩm Sau thẩm định, phương pháp phân tích áp dụng định tính, định lượng ofloxacin levofloxacin số chế phẩm (Bảng 6) vể mặt định tính, dạng hoạt chất tìm thấy chê' phẩm (ofloxacin racemic levofloxacin) hoàn toàn phù hợp với dạng hoạt chất nhà sản xuất công bố vể mặt định lượng, hàm lượng hoạt chất xác định phù hợp so với hàm lượng công bố (từ 93,6% đến 101,4% so với hàm lượng công bổ, xem Bảng 6) Báng Két định lượng ofioxam mộtsốchẽphẩĩĩì Hàm lượng Hàm lượng Tổng hàm Sũ với Chế phẩm levofloxadextrolượng công bố cin floxacin ofloxacin (%) Oflovid® 0,15% 0,15% 0,30% 101,4 0,3% Ofloxacin 99,85 mg/ 102,70 mg/ 202,55 mg/ 101,3 STADA viên viên viên Levota102,93 mg/ 102,93 mg/ 93,6 maxe viên viên Kết luận Trong nghiên cứu này, kỹ thuật điện di mao quản, kỹ thuật phân tích chưa ứng dụng nhiểu kiểm nghiệm thuốc, ứng dụng thành công để phân tích phân đối quang ofloxacin Kết thẩm định cho thấy phương pháp xây dựng hoàn toàn phù hợp để áp dụng định lượng hai đồng phân đối quang ofloxacin định tính phân biệt dạng ofloxacin racemic dạng levofloxacin nhiểu dạng chê' phẩm thuốc (viên, thuốc nhỏ mắt) TÀI LIỆU THAM KHÀO Wei Wang, Jiande Lu, Xiaoyun Fu and Yaozu Chen (2001), Carboxylmethyl- p- Cyclodextrin for chiral separation of basic drugs by capillary electrophoresis, Analytical Letters, 34, pp 569- 578 Xue Yan Shi, Rui Fang Fan, Yue Qin Zhang, Jun Ling Gu, Ruo Nong Fu (2000), Synthesis and Characterization of Water- Soluble Carboxymethyl- Cyclodextrin Polymer as Capillary Electrophoresis chiral Selector, Chinese Chemical Letters, 11(1), pp 69-70  ... (Anh, Mỹ ) chưa có phương pháp thống để phân tích đống phân đối quang ofloxacin Do đó, sử dụng phương pháp điện di mao quản (Capillary electrophoresis-CE) với chất chọn lọc hoạt quang carboxymethyl-p-cyclodextrin... định phương pháp phán tích đồng phân đối quang ofloxacin Đô đác hiêu Để đánh giá độ đặc hiệu phương pháp, tiến hành phân tích dung dịch chuẩn ofloxacin racemic, chuẩn levofloxacin, mẫu viên nén Ofloxacin. .. nhiều phân tích phân đối quang [1], [2] để xây dựng quy trình tách hai đóng phân đối quang ofloxacin, từ cho phép phân biệt cách đặc hiệu dạng ofloxacin racemic levofloxacin tả tuyển Đối tượng phương