Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus mich ex fr v ĩ thuốc Tục đoạn & Thạch xương bồ lưu hành hỉệu thuốc Đông dược thuộc địa bàn Hà Nội ' Trần Trịnh Công, Nguyễn Xuân Trường Trường Đọi học Dược Hà Hội Đặt vấn đề Dược liệu nói chung sản phẩm làm thuốc có nguồn gốc thực vật nói riêng, thường dễ bị nấm mốc xâm nhiễm phát triển, điểu kiện khí hậu nóng ẩm nước ta Khi bị nấm mốc xâm nhiễm phát triển sản phẩm việc bị giảm chất lượng bị biến đổi thành phẩn hoá học, biến màu, sinh mùi vị khó chịu, thường bị nhiễm độc tổ nấm (mycotoxins) Các độc tố gây nhiều bệnh cho người động vật gọi chung bệnh độc tố nấm (mycotoxicoses), với tác động từ cấp tính đến mạn tính, dẫn đến quái thai, ung thư, [ , 2, 3, 4, ] Aspergillus chi nấm lớn, có nhiểu loài sinh độc tố, lại chiếm tỷ lệ cao số loài hệ nấm bảo quản (storage fungi) Do việc xác định mức độ nhiễm loài chi nấm loại chất có vai trò quan trọng việc phòng tránh tác hại nói Với mục đích, ý nghĩa thực đề tài "Nghiên cứu tính đa dạng loài chi Aspergillus Mich, ex Fr hai vị thuốc Tục đoạn & Thạch xương bồ lưu hành hiệu thuốc đông dược thuộc địa bàn Hà Nội" 12TC 15 phút Môi trường Czapek agar (CBS, g/l): Sacaroza: 30; NaNOji 3; K^HPO^: ; MgSO^JH^: 0,5; KCL: 0,5; FeSO^JH^O: 0,01; thach: 20; nước cất vừa đủ lít, khử trung 121°c, 15 phút, pH = 6,2 ± 0,2 - Phương pháp nghiên cứu: + Phương pháp phân lập nấm mốc: mẫu hai vị thuốc Tục đoạn Thạch xương bổ phân lập nấm mốc phương pháp đặt trực tiếp môi trường PDA Trước phân lập, mẫu trộn đểu, cân 40g, tiệt trùng bề mặt cách lắc kỹ với dung dịch NaCIO 0,4 % phút (sử dụng dung dịch pha), cắt thành mẩu có chiểu dài 1-1,5 cm Sau rửa nước cất tiệt trùng, để đặt nhanh vào đĩa Petri có môi trường PDA kẹp vô trùng, ủ đĩa Petri 25°c, sau 3; 5; ngày tiến hành phân lập chủng nấm nhiễm, chuyển sang nuôi cấy môi trường xác định (Czapek-Dox) để phân loại nấm [6 ], + Phương pháp phân loại nấm mốc: phân ioại loài chi Aspergillus theo khoá phân loại Raper Fennell [5] khoá phân loại Pitt & Hocking [4] Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: 20 mẫu vị thuốc Tục đoạn (Radix Dipsaci) Thạch xương bổ (Rhizoma Acori Graminei) thu thập từ hiệu thuốc đông dược thuộc phố Lãn Ông-Hà Nội, chuyển phòng thí nghiệm, bảo quản nhiệt độ phòng trước phân lập phân loại nấm - Môi trường phân lập, phân ¡oại nấm: Môi trường PDA (Potato Dextrose Agar-g/l): Khoai tây 250; glucoza: 20; thạch: 15; nước cất: 1lít, khử trùng Kết bàn luận VịthuốcTụcđoạn:Tătcả 10 mẫu vị thuốc Tục đoạn nghiên cứu có hàm ẩm dao động từ 7,0-14,8%, bị nhiễm nấm mốc, với tổng số chủng phân lập 315, thuộc loài chi Aspergillus bao gổm: Aspergillus niger van Tieghem, A fiavus Link, A fumigatus Fres, A tamari Kita, A clavatus Desm A ustus (Bain.) Thom and Church (Bảng 1) Trong loài nấm phân lập được, loài A fumigatus xuất / mẫu nghiên cứu, với số chủng phân BÀI NGHIÊN cứu Bâng 1: Hòm ẩm, cóc loài vò sỗ chùng năm phân lộp từ mâu cùa ¥Ị thuổc tục đoạn nghiên cứu (L ồ*: Phó Lõn ồng) Loài số lượng chủng phân lập TT Địa điểm Tổng Hàm ẩm (%) A niger A flavus A tum igatus A ta m arii A clavatus A ustus 36 LÔ* 14,8 17 86 0 106 12 LÔ 11,4 10 1 19 24 LỔ 9,6 28AL.Ô 7,0 0 0 0 10 0 23 0 31 15 40 57L.Ô 9,7 55 LO 10,5 11 17 30 LÔ 10,4 3 38 LÔ 9,8 9 52 LÔ 14,3 12 0 20 ũ 0 53 LÔ 13,9 13 28 49 Tổng sỗ chủng phân lập 40 65 196 5 315 % có mặt loài 12,7 20,6 62,2 1,6 1,6 1,3 100 10 13 Hmtì l:L o iA flo w s nhiêm Yịthuỗctụcđoợn Bảng 2: Hàm ẩm, cácloời vò sổ chủng năm phân lập từ môu ứ a vị thuốc Thợctì xương bỗ nghiên cứu (L *: Phố Lãn ồng) Loài số lượng chủng phân lập TT Địa điểm 36 LỔ* Tổng Hàm ẩm (%) A íum igatus k ta m arii 19 A niger A ílavus 10,2 A aculeatus A ustus 26 0 18 12 LÔ 12,3 24 LÔ 6,8 0 n 28“ LÔ 11,5 5 0 18 57 LÔ 10,0 0 10 14 55 LÔ 9,0 0 11 30 LÕ 9,2 0 38L.Õ 7,3 52 LÔ 11,0 12 0 23 10 53 LÔ 6,9 0 0 27 21 61 15 137 19,7 15,3 44,5 10,9 3,6 5,8 100 Tổng số chủng phân lập % có mặt loài ề Hình 2: Loài A fumigdus nhiêm vịthu K Thạch xương bô lập chiếm tỷ lệ 62,2% (196/315) Loài A flavus (Hình 1) chiếm vị trí thứ2, xuất 8/10 mẫu nghiên cứu, với số chủng phân lập chiếm tỷ lệ ,6 % (65/315) Xếp thứ loài A niger, xuất 10/10 mẫu nghiên cứu, có số chủng phân lập 40/315 (chiếm tỷ lệ 12,7%) (Hình 1) (A: khuẩn lạc nấm; B, C: cấu trúc sinh conidi tầng & tầng) Các loài A tamarii, A clavatus A ustus đểu xuất 4/10 mẫu nghiên cứu, với số chủng phân lập lẩn lượt chiếm tỷ lệ 1,6 (5/315); 1,6 (5/315) 1,3% (4/315) tổng số chủng nấm phân lập Vị thuốc Thạch xương bổ: Tất 10 mẫu vị thuốc Thạch xương bổ nghiên cứu có hàm ẩm dao động từ 6,8-12,3%, bị nhiễm nấm mốc, với tổng số chủng phân lập 137, thuộc loài chi Aspergillus bao gồm: Aspergillus flavus Link, A niger vanTieghem, A fumigatus Fres,A ustus (Bain.) Thom and Church, A aculeatus lizuka A tamarii Kita (Bảng 2) Trong loài nấm phân lập được, loài A fumigatus (Hình 2) xuất 7/10 mẫu nghiên cứu, với số chủng phân lập nhiều 61/137 (chiếm tỷ lệ 44,5% tổng số chủng nấm) Loài A niger chiếm vị trí thứ 2, xuất / mẫu nghiên cứu, với số chủng phân lập 27/137 (chiếm tỷ lệ 19,7%) xếp thứ loài A flavus, xuất 4/10 mẫu nghiên cứu, có số chủng phân lập 21/137 (chiếm tỷ lệ 15,3%) (Hinh2) (A: khuẩn lạc nấm; B, C: cấu trúc sinh conidi tầng) Các loài A tamarii, A ustus A aculeatus, thứ tự có số xuất 6/10,3/10 5/10 mẫu nghiên cứu, với số chủng phân lập lẩn lượt chiếm tỷ lệ 15/137 (10,9%); 8/137 (5,8%) 5/137 (3,6%) tong số chủng nấm phân lập Một số ý kiến bàn luận: - Trong 20 mẫu vị thuốc Tục đoạn Thạch xương bồ thu thập để nghiên cứu, đa số mẫu có hàm ẩm đạt yêu cáu vể hàm ẩm DĐVN IV ( ... Vị thuốc Thạch xương bổ: Tất 10 mẫu vị thuốc Thạch xương bổ nghiên cứu có hàm ẩm dao động từ 6,8- 12, 3%, bị nhiễm nấm mốc, với tổng số chủng phân lập 137, thuộc loài chi Aspergillus bao gồm: Aspergillus. .. thuốc đông dược địa bàn Hà Nội, bị nhiêm đa dạng loài nấm bảo quản chi Aspergillus Mich, ex Fr. ; A niger,A flavus,A fumigatus, A tamarii, A clavatus, A ustus vụ A aculeatus Kết cho thấy vị thuốc. .. chi m tỷ lệ 15/137 (10,9%); 8/137 (5,8%) 5/137 (3,6%) tong số chủng nấm phân lập Một số ý kiến bàn luận: - Trong 20 mẫu vị thuốc Tục đoạn Thạch xương bồ thu thập để nghiên cứu, đa số mẫu có hàm