Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 phần mở đầu 1.1 Đặt vấn đề Cây cà chua (Lycopersicon esculentum Mill), thuộc họ cà (Solanaceae) có nguồn gốc Trung Mỹ Nam Châu Mỹ Cây cà chua đợc phát vào kỷ VXI [18] Cà chua loại rau ăn đợc trồng phổ biến giới.Về sản lợng, cà chua chiếm 1/6 sản lợng rau hàng năm giới [17] Diện tích trồng cà chua hàng năm giới trung bình 2,5 triệu ha/năm, vị trí thứ hai sau khoai tây [18] Châu đứng đầu sản lợng cà chua, sau Châu Âu, riêng Mỹ đứng đầu suất sản lợng Hy Lạp nớc đứng thứ hai suất, Itali đứng vị trí thứ ba [5] Việt Nam cà chua đợc trồng cách trăm năm, diện tích trồng cà chua biến động từ 12 đến 13 ngàn Miền Bắc, cà chua đợc trồng phổ biến tỉnh thành phố thuộc vùng Đồng Bằng Sông Hồng [5], tỉnh Đồng Bằng Bắc Bộ hình thành ba vụ trồng cà chua, bao gồm vụ: Hè thu, Đông xuân, Xuân hè.[5] Trong vụ Đông Xuân đợc chia làm thời vụ khác nhau: Thời vụ sớm (trà sớm), vụ (trà chính), thời vụ muộn (trà muộn) Cà chua loại rau có giá trị dinh dỡng cao Trong chín chứa nhiều dinh dỡng: Đờng, vitamin A, vitamin C nhiều khoáng chất quan trọng khác Theo tác giả ED.War D.C, Tigche LAAR (1989), thành phần hoá học cà chua chín nh sau: - Nớc: 94-95%, vật chất lại chiếm: 5-6 % gồm chất sau: + Đờng : 55% ( Fructozo, glucozo, saccarozo) + Các chất không hoà tan rợu : 21% (protein, xenllulozo, pectin, polysaccarit) + Axit hữu cơ: 12% (Xitric, malic,galacturonic,pyrolidon, cacboxilic) + Chất vô : 7% + Các chất khác: 5% (carotenoit, ascobic axit, chất dễ bay hơi, aminoaxit) [5] Ngoài giá trị dinh dỡng cà chua có giá trị kinh tế giá trị sử dụng cao so với nhiều loại rau : Xu hào, bắp cải, loại rau họ thập tự khác Bình quân thu nhập Mỹ La Tinh trồng trọt 4610 USD riêng cà chua, rau khác 2537 USD, lúa nớc 1027 USSD Khu vực Đồng Bằng Sông Hồng Việt Nam sản xuất cà chua cho thu nhập bình quân 42,0 - 68,4 triệu đồng vụ, lãi đạt 15 đến 26 triệu đồng cao hẳn trồng lúa [18] Đặc biệt năm gần đây, nhu cầu rau cho tiêu Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 dùng xuất ngày gia tăng Chỉ tính từ năm 1996 đến 2001 Việt nam đạt tốc độ tăng trởng tới 30% Năm 2001 đạt 330 triệu USD gấp 3,6 lần so với năm 1996 Mục tiêu kim ngạch xuất rau Việt Nam đạt tỷ USD vào năm 2010, trọng trâm xuất rau quả, có cà chua [6] Chính mà cà chua loại rau đợc a chuộng, đợc trồng rộng rãi khắp châu lục trở thành ăn thông dụng nhiều nớc Quả cà chua đợc sử dụng dới nhiều hình thức khác nh: ăn sống, nấu chín, chế biến nguyên quả, tơng cà chua, mứt cà chua sản lợng cà chua không ngừng tăng cao Tuy nhiên cà chua bệnh hại yếu tố hạn lớn sản xuất Nông nghiệp, đặc biệt điều kiện tự nhiên nh nớc ta Thành phần sâu bệnh hại cà chua tơng đối đa dạng Bệnh sâu hại: sâu xanh ( helicoveepa armigera Hubner), bọ phấn (Bemisia tabasi), Bệnh hại: Bệnh virus, bệnh héo xanh (Ralstonia Solanacearum Smith), bệnh mốc sơng (Phytophthora infestans) Trong loại sâu bệnh kể bệnh virus hại cà chua nguy hiểm Bệnh virus gây tổn thất suất, phẩm chất nông sản thu hoạch mà nguy hiểm chúng làm thoái hoá giống Do khả phát tán nhanh qua đờng trao đổi giống truyền lan côn trùng môi giới bệnh virus có mức độ phát triển mạnh, dễ gây thành dịch Đây loại bệnh khó phòng trừ Theo Broadbent (1976), bệnh virus hại cà chua làm giảm suất từ 15%-20% Nếu cà chua bị nhiễm từ giai đoạn gây thiệt hại suất từ 80-100% (Direck thongrit supat Attatham and Sutabutta, 1986), quả, ảnh hởng tới nghiêm trọng Quả bệnh chín sớm so với đối chứng nhng không sử dụng đợc nhỏ, vỏ cứng, chất lợng (Gamal Mchamed Fadl Heiz Burgstaller 1986) Bệnh virus hại cà chua bao gồm tập đoàn nhiều bệnh hại: Bệnh xoăn (TYLCV), bệnh khảm vàng (ToMV), bệnh khảm dơng xỉ (CMV) .Để tăng suất phẩm chất mở rộng diện tích gieo trồng cà chua đáp ứng đòi hỏi ngày cao ngời tiêu dùng việc đánh giá xác tình hình bệnh virus đồng ruộng trở thành vấn đề quan tâm Xuất phát từ thực tế trên, đợc phân công khoa Nông học Trờng đại học Nông nghiệp I Hà Nội, dới giúp đỡ GS.TS Vũ Triệu Mân Trung tâm nghiên cứu Bệnh Nhiệt đới K.S Nguyễn Viết Hải Trung Tâm Kiểm Dịch Sau Nhập Khẩu I Từ Liêm Hà Nội tiến Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 hành thực đề tài: " Điều tra, nghiên cứu bệnh virus hại cà chua Hà Nội vùng phụ cận vụ xuân hè 2007" 1.2 Mục đích, yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích Nghiên cứu đánh giá thực trạng bệnh virus hại cà chua Hà Nội vùng phụ cận vụ xuân hè 2007 1.2.2 Yêu cầu - Xác định thành phần virus hại số gióng cà chua - Điều tra diễn biến triệu chứng bệnh virus hại cà chua vụ xuân hè 2007 vùng trồng rau Hà Nội vùng phụ cận - Kiểm tra virus hại cà chua phơng pháp ELISA phơng pháp thị Phần ii tổng quan tài liệu 2.1 Những nghiên cứu nớc Hiện nay, giới ngời ta phát 650 loại bệnh hại thực vật virus gây (L Bos, 1983), số tăng lên không ngừng [22,24] virus thực vật đợc định loại có khoảng 14 họ đó: 13 họ đợc xác định, họ cha đợc xác định Hầu hết virus thuộc 70 giống khác Virus gây triệu chứng khảm chiếm khoảng 27% Trên c chua có tới 40 loại virus phát sinh phát triển gây hại bao gồm nhiều chủng khác nh: CMV, TLCV, ToMV, TYLCV, TRCV, PVX, PVY,Virus S Theo EPPO ( Tổ chức bảo vệ Thực vật châu âu), có nhiều virus xuất gây thiệt hại nghiêm trọng c chua số giống trồng khác đối tợng kiểm dịch nhiều nớc giới 2.1.1 Những nghiên cứu CMV (Cucumber mosaic virus) Bệnh đợc phát Doolittle Jagger năm 1916 Mỹ Trong năm gần CMV đợc công bố tác nhân gây bệnh nguy hiểm số trồng chủ yếu Thế giới, đặc biệt nớc nhiệt đới Bệnh có tên gọi khác: Cucumis virus 1, Marrow Cucumis Blight virus , Tomato fern leaf virus Tên thờng sử dụng phổ biến Cucumber mosaic virus (CMV) Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Triệu chứng bệnh: CMV xâm nhiễm hệ thống, gây triệu chứng khảm thờng, khảm biến vàng, cành mọc thành búi rậm rạp còi cọc, có vết vằn, chét biến dạng cong vặn vẹo, hẹp, kéo dài dạng dơng xỉ (Zitter I.A, 1993) [51] Phân bố địa lý: Phân bố rộng khắp Thế giới, đặc biệt vùng nhiệt đới nóng ẩm Các chủng virus: - Chủng of price (1934): Gây khảm thờng thuốc (Nicotinana Spp), chết hoại cục Zinnia elegans - Chủng Y of price (1934): Triệu chứng thuốc (Nicotinana Spp) giống chủng Yellow nhng cờng độ yếu Nhiễm hệ thống Vigna Sinensis - Chủng Spinash bhargara (1951):Gây chết hoại cục thuốc (Nicotinana Tabacum), khảm thờng xanh hệ thống, đốm hình nhẫn biến dạng Các chủng khác CMV tạo thành tập hợp phổ triệu chứng phụ thuộc vào ký chủ mà gây hại Hình thái cấu trúc: - Hình thái: Cucumber mosaic virus thuộc nhóm Cucumo virus loại virus có dạng hình cầu, đờng kính vào khoảng 28 29nm, màng bao - Cấu trúc: + Axit nucleic: RNA sợi đơn với phần có chức riêng biệt xoắn vào có vỏ protein bao bọc bên tạo thành hình cầu Quan sát dới kính hiển virus điện tử gồm lớp phân tử RNA đồng xoắn Ba lớp gen RNA1, RNA2, RNA3, có độ lắng đọng khác Trọng lợng phân tử 106 chiếm 18% trọng lợng phân tử CMV [28] + Protein: Trọng lợng phân tử 3,2 x !04 chiếm 82% trọng lợng phân tử CMV [28 ] Cây thị chủ yếu gồm: - Cây rau muối (Chenopodium amaranticole C quinoa) bệnh biểu triệu chứng vết chết cục - Đậu (Vigena unguiculata): Nhiễm cục với đốm màu nâu nhỏ lá, vài chủng gây ảnh hởng toàn Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 - Thuốc (Nicotiana tabacum, N glutinosa, N clevelandii) biến vàng, chết hoại cục bộ, khảm thờng xcanh khảm thờng vàng hệ thống, đốm hình nhẫn, chết hoại - Cà chua (Lycopersycon esculentum) bị khảm nặng, thuỳ co lại, biến dạng, kéo dài dạng dơng xỉ Truyền lan: - Truyền qua côn trùng môi giới: Theo Quiot et al (1982) Palukaitis et al (1992) có 75 loài rệp truyền CMV phơng thức không bền vững Môi giới truyền chủ yếu rệp đào (Myzes persicae), rệp (Aphis gossypii) Virus sống tuyến nớc bọt rệp tuỳ tuổi rệp mà liên quan đến hiệu truyền lan môi giới truyền Đặc tính truyền lan CMV đợc định lớp vỏ protein (Chen Franki, 1990) [28] Rệp chích nạp virus thời gian 10 giây, khả truyền chúng yếu dần sau phút thờng hẳn sau (Watson Roberts, 1939) - Virus đợc truyền 10 loại dây tơ hồng Cuscuta Spp - Theo Green 1991 [15] CMV dễ dàng truyền phơng pháp tiếp xúc học, truyền qua hạt 19 loại cây, nhiều CMV không dẫn truyền qua hạt múc độ nhiễm thấp: Cucumis melon, C Sativus, Cucurbita pepo Phạm vi kí chủ: CMV có phạm vi kí chủ rộng 30 40 họ thực vật (Attathom T.S ctv, 1986), gây bệnh 800 loài thực vật thuộc lớp mầm mầm kí chủ ban đầu họ bầu bí, họ cà, họ ráy, ớt (Capsicumannum), da chuột (Cucumis sativus), cà chua (Lycopersicon esculentum) [28] Đặc tính virus gây hại: - Ngỡng nhiệt độ hoạt tính: Q10= 700C - Thời gian tồn dung dịch: Sau vài ngày nhiệt độ phòng (Smith, 1972) - Ngỡng pha loãng: 10-5 2.1.2 Những nghiên cứu ToMV Tên thờng gọi: Tomato mosaic virus tên viết tắt ToMV Các tên gọi khác: Lycopersicum virus (Rev appl Mycol 36 : 303) Ngoài ra, có nhiều tên gọi khác dựa vào chủng ToMV Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Virus khảm cà chua ToMV đợc phát mô tả lần Clinton (1909) cay cà chua trồng bang Conecticut (Mỹ) [32,35,48], Wwetrdijk (1910), Allard (1916) (Bang Conecticut, Mỹ) Vị trí phân loại [32]: ToMV thuộc nhóm Tobamovirrus Nhóm có số đặc điểm nh sau: - Hầu hết virus thuộc nhóm có hình gậy thẳng, kích thớc 300x18nm (Chiều dài x đờng kính chiều rộng), hệ số lắng đọng 190S, sợi virus đợc cấu tạo 2000 tiểu đơn vị xếp theo hình sợi xoắn ốc bao quanh genom có chứa phân tử đơn sợi RNA, chiếm 5% trọng lợng virus RNA có trọng lợng phân tử x 106Da Các virus thuộc nhóm có ngỡng nhiệt độ hoạt tính (TIP) 900C, nhựa virus tồn nhiều năm liền, mật độ tập trung cao lên tới 10g/l - Nhóm virus thờng gây triệu chứng đốm chết khảm lá, đờng lan truyền chủ yếu qua tiếp xúc giọt dịch, tiếp xúc giới khoẻ bệnh, truyền qua hạt giốn Sợi virus đợc tìm thấy tế bào chất, lục lạp không bào -ToMV đợc phát Đài Loan, có chủng virus gây hại cà chua gồm: ToMV1, ToMV2, ToMV3, (S.K Green, L.H Wang, 1980, 1982), ba chủng mang gen khác nhau, ToMV gây hại hầu hết giống cà chua thơng mại [31] Theo Smith (1975) ToMV có hai chủng quan trọng Tomato aucuba mosaic Tomato enation mottle [46] Tomato mosaic virus gây hại hầu hết họ cà Triệu chứng ToMV gây cà chua chịu ảnh hởng lớn nhiệt độ, độ dài ngày, tuổi cây, độ độc virus phơng thức trồng (Holling S M., Huttingga, 1976) [35] Triệu chứng xuất phổ biến cà chua vào vụ hè cà chua đợc trồng nhà kính, cà chua bị nhiễm bệnh xuất đốm quả, tạo vết sọc chết hoại thân , Vào mùa đông, thờng bị thối, mùa hè thờng bị khô giai đoạn phát triển [20,35] Mùa đông ngày ngắn, cờng độ ánh sáng yếu, nhiệt độ thấp khoảng 200C, thờng còi cọc, dơng xỉ dạng sợi chỉ, có đốm sáng Thiệt hại suất lên tới 23%, (Broadbent, 1964; Rast, 1975) Theo Simth (1957) [46] cà chua bị nhiễm đồng thời virus ToMV PVX gây lên khảm sọc đôi ToMV gây hại thân cây, làm còi cọc, dơng xỉ hình sợi có kèm theo vết đốm sáng [47] cuống bị bệnh phát triển gây vết Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 lõm sâu khảm dạng sọc đơn (Jarset, 1930) Điểm chung trở nên cỗi kèm theo vặn vẹo méo mó dạng dơng xỉ biểu cây, yếu ớt Virus nguyên nhân gây đốm vằn, đốm sọc hoại tử cà chua Bệnh không làm chết nhng chúng làm chất lợng sản lợng Cây ớt (Capisicum anauum) có sức đề kháng với ToMV Tuy nhiên, điều kiện canh tác chật hẹp, trồng ớt sau trồng cà chua bị nhiễm ớt bị nhiễm Trên thuốc (Nicotiana tabacum) khoai tây (Solanum turberosum) ToMV gây đốm lá, rụng thối thân còi cọc, rau muối (Chenopodium murale) ToMV nguyên nhân rụng lá, còi cọc chết hoại (Bad and Paulus, 1963) [35] Các tác giả phân nhóm: - Nhóm 1: Lá cà chua bị khảm đốm tạo thành vùng xanh nhạt, xanh đậm, gây biến dạng non Đây triệu chứng chung cà chua nhà kính phản ứng lại điều kiện nhiệt độ thấp - Nhóm 2: Triệu chứng đốm vàng (Bewley, 1923; Smith, 1957) - Nhóm 3: Triệu chứng đốm chết hoại thân lá, cuống Một số chủng virus gây triệu chứng sọc đơn hay sọc nhà kính (Glasshouse Streak) thân cây, cuống lá, gây chết Quả nhiễm bệnh tạo vùng chết hoại cục lõm lại bề mặt Một vài chủng virus gây triệu chứng đốm sọc nhiệt độ 26 0C thấp (Komuno et al, 1996) Một số chủng ToMV kết hợp với PVX lây nhiễm tạo triệu chứng dạng sọc đôi Quả bị nhiễm bệnh bị chết hoại cục bộ, sau lõm lại (Vallean and Jonhon, 1930; Wharton, 1957) số chủng khác gây chết hoại làm vỏ cứng giòn (Rast, 1957) [35] Theo nghiên cứu gần đợc công bố ToMV gây hại số loài hoa cảnh Đã có báo có ToMV gây hại hoa Râm Bụt (Hibiscus rosa sinenis): Gây khảm hệ thống non gây nhăn biến dạng già gây lùn Triệu chứng xuất hay không xuất hiện, rõ ràng hay không rõ ràng phụ thuộc vào điều kiện ngoại cảnh nh: Mùa vụ, ánh sáng, nhiệt độ, sinh trởng phát triển cà chua Từ nhận xét trên, thấy: Phải có phơng pháp hỗ trợ cần xác định xác nguyên nhân gây bệnh loại virus hại cà chua nh phơng phá ELISA, phơng pháp dùng thị, phơng pháp PCR (Polymerase Chain Reaction) Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Phân bố địa lý: ToMV phân bố toàn giới, đăc biệt vùng trồng họ cà Phạm vi ký chủ: ToMV có phạm vi ký chủ rộng, có tơi 127 loài thuộc 23 họ thực vật nhiễm ToMV (Edwards and Christie, 1997) [22] Theo Maitlin (1984) có họ thực vật mẫn cảm với ToMV [28].Năm 1909, Clinton tiến hành lây nhiễm thực nghiệm ToMV nhiều loại xác định nhiều mẫn cảm với ToMV: - Capsicum annuum, Caosicum frustescens, Chenopodium amaranticolor, Chenopodium murale, Nicotiana benhamiana Cây ký chủ mẫn cảm ToMV: - Cây cà độc đợc (Solanum giganteum): gây khảm hệ thống - Cây thuốc (Nicotiana tabacum cv White Burley): Gây vết chết cục - Cây rau muối (Chenopodium murale): Gây rụng lá, còi cọc chết hoại (Bald and Paulus, 1963) [24] Cây ký chủ trì nhân giống: - Cà chua (Lycopersicon esculentum) - Thuốc (Nicotiana tabacum cv Samsun) Cây ký chủ kiểm tra: - Nicotiana benthamiana, Nicotiana glutinosa, Nicotiana tabacum cv Samsun Nhiều tác giả cho rằng: ToMV công nhiều loai ký chủ khác kể cà chua, hồ tiêu, thuốc lá, rau bina, thuốc cảnh cúc vạn thọ Trên cà chua, virus lây nhiễm gây vết đốm sáng xanh tối xen kẽ bề mạt [20, 35] Đặc tính vật lý hoá học: - Điểm đẳng điện (Isoelestric point): ph từ 4,5 4,64 - Nhiệt độ giới hạn hoạt tính TIP (Thermal Inactivaytion Point): Q10= 850C- 900C - Ngỡng pha loãng (Dilution End Point): DEP 10-5 10-7 - Thời gian sống gây hại dịch (Longetivy In Vitro): LIV 500 ngày Trong tàn d cà chua, ToMV tồn 24 năm, nhiệt độ phòng 200C ToMV có khả sống gây bệnh sau vài tháng nhiệt độ xuống thấp 20C ToMV có khả sống (Rast, 1975) [23.45] Hình thái cấu trúc ToMV Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 - Hình thái: ToMV có hình gậy, chiều dài 300nm, đờng kính chiều rộng 18nm Bộ genom RNA, sợi đơn, dạng hình xoắn ốc - Cấu trúc: + Nucleic Acid: 5%, hạt hình virus sợi RNA, thành phần RNA gồm: 23%G, 28%A, 19%C, 305U (Maldeles, 1968) [35] + Vỏ protein (CP): 95%, kích cỡ 17600Da (Fralk Kel and Conrat, 1957), (Wiltmann and Liebold 1967) Truyền lan: - Truyền lan qua hạt giống: Theo David G A Walkey (1985) có chủng 17 loại virus truyền qua hạt giống ToMV loại virus truyền lan qua hạt giống Hạt loại giống khác mức độ xâm nhiễm khác có biến đổi lớn, khoảng 50% số hạt thờng xuyên bị nhiễm có lên tới 94% (Van Winkel, 1965) ToMV chủ yếu tồn vỏ hạt, theo Taylor Wind Colaborater (1996), Broadbent (1965) có nội nhũ, ToMV không nằm phôi mầm hạt bị bệnh, ToMV nhiễm nhẹ vài tháng mẫu hạt thu từ mẹ bị nhiễm lan truyền học sang [20,23,35] - Sự lan truyền qua vectơ.: ToMV không lan truyền qua đờng côn trùng môi giới mà chủ yếu qua đờng tiếp xúc học từ cây, đất, gốc ghép, cành ghép Dụng cụ gieo trồng bị nhiễm ToMV (Broadley, 1972) Virus tồn dịch cây, tàn d thực vật Cây trồng khoẻ bị nhiễm qua vết thơng giới [47] Nguồn nớc tới bị nhiễm ToMV mở rộng phạm vi lan truyền Các chủng ToMV truyền nhờ tơ hồng Vào mùa đông chủng "yellow" "green" dễ bị lây nhiễm mùa hè ( Schmelzer, 1956) [35] Trên giới thiệt hại ToMV gây cà chua khoảng 20%, sản xuất cà chua nhà kính khoảng 25% sản lợng [29,35] Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 2.1.3 Những nghiên cứu virus xoăn cà chua (Tomato yellow leaf curl virus: TYLCV) TYLCV thuộc nhóm Gemini virus Triệu chứng bệnh: Cà chua bị bệnh thờng sinh trởng chậm, thấp cây, cành cuống thẳng đứng, bệnh cong lõm hình thìa, non bệnh nhỏ non khoẻ, có màu vàng bệnh chậm hoa, nhỏ.Tuỳ thuộc vào giai đoạn mà bị virus xâm nhiễm [34] sản lợng cà chua thờng thiệt hại từ 50 75% (Yassin Nour, 1965),[47], có lên tới 100% [37a] Phân bố địa lí: Vào năm 1960 bệnh xoăn vàng lần dầu tiên đợc báo cáo bệnh hại chủ yếu cho sản xuất cà chua Near East (Cohen Harpez, 1964, Cohen Nitzany,1966) [36], bệnh phát thấy Thổ nhĩ Kì (Abaketal, 1991), bán đảo ả Rập (Mazyad CTV, 1979) [20] Phía đông Tây Châu Mỹ (Defraneqd Hondt Russo , 1985; Cozeck CTV,1991, Dembcle, 1993) [26,25,27] Hình thái cấu trúc virus: Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV), thuộc nhóm Gemini virus, có kích thớc 20x30 nm [34], có hai đầu lớn thót lại hình tạ Tại Isarel, qua nhân dòng vô tính tìm đợc genom DNA sợi đơn vòng TYLCV gồm 2787 nucleotit (Cozeck H CTV, 1988) [24] Truyền lan: Theo Green S.K Kalloo, 1994 [37], TYLCV đợc lan truyền tự nhiên nhờ bọ phấn (Bemisia tabasi) theo kiểu bền vững, thời gian bọ phấn chích nạp virus tối thiểu 15 30 phút Sau chích nạp, virus không tồn đợc suốt vòng đời côn trùng mà tồn đợc 20 ngày (Cohen Nitazy,1966) [34] Thời gian bọ phấn truyền virus 15 phút, thời kỳ tiềm dục 20 (Green S.K, 1991) [33] Virus TYLCV lan truyền qua tiếp xúc học cha có báo cáo nói lây truyền virus qua hạt giống Phạm vi kí chủ: TYLCV có phổ kí chủ rộng, chủ yếu nhiễm họ cà (Solanaceae), họ caprifoliaceae họ Composite 2.1.4 Những nghiên cứu virrus khoai tây (Potato laef roll virus: PLRV) Virus khoai tây có tên gọi khác là: Potato phloem necrovirus (Quanger 1913), Solanum virus I4 (Smith) Ngoài PLRV đợc gọi virus L hay virus E khoai tây 10 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Perfe ct89 savio r 10 Đ/c(-) Đ/c(+ ) Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 n 0,360 0,320 0,264 0,127 0,478 0,376 0,242 0,414 0,621 0,110 0,175 0,281 + + + + + - 0,137 0,241 0,218 0,116 0,542 0,104 0,184 0,108 1,210 0,109 0,199 1,575 + + - 0,105 0,111 0,348 0,360 0,366 0,214 0,125 0,287 2,977 0,150 0,146 1,079 + - 0,183 0,096 0,026 0,106 0,089 0,091 0,141 0,122 0,157 0,130 0,146 0,208 + + - 0,151 0,108 0,168 0,111 0,088 0,091 0,091 0,094 0,137 0,093 0,320 1,061 Kết kiểm tra virus địa bàn Vĩnh Phúc ta thấy: Tỷ lệ mẫu nhiễm PVX tổng số mẫu kiểm tra trung bình 20%, xét riêngtừng giống tỷ lệ nhiễm bệnh PVX mẫu 40% giống perfect 89 60% giống savior Tỷ lệ mẫu nhiễm PVY trung bình 10% tổng số mẫu đièu tra, xét riêng tong giống giống đề nhiễm PVY với tỷ lệ tơng đơng 20% Trong giống savior lại xuất mẫu nhiễm loại virus PLRV ToMV với tỷ lệ tơng ứng 20% giống perfect 89 mẫu bị nhiễm PLRV ToMV Khi kiểm tra CMV giống không thấy xuất mẫu nhiễm Đặc biệt kiểm tra mẫu ( triệu chứng tạo vết đốm đen sau lẩn toàn làm cho bị đen nám) phản ứng với loại kháng huyết PVX, PVY, PLRV với giá trị OD cao tơng ứng là: 0,621; 1,210; 2,977 Nh vậy: - Tỷ lệ mẫu nhiễm PVX, PLRV, ToMV giống savior cao so với giống perfect 89 - giống không thấy xuất mẫu nhiễm CMV 4.6 Triệu chứng cà chua bị nhiễm ToMV, CMV, PVX, PLRV, PVY Từ kết kiểm tra virus, xác định đợc số nhiễm bệnh virus ToMV, CMV gây cà chua điểm điều tra Mô tả triệu chứng điển hình trồng loại dịch hại nói chung ToMV, CMV cà chua nói riêng có ý nghĩa quan trọng việc nhận diện bệnh hại đồng ruộng Từ theo dõi diễn biến, quy luật phát triển gây hại virus, để đề biện pháp phòng trừ hợp lý theo nguyên tắc hay áp dụng IPM để quản lý bệnh hại 4.6.1 Triệu chứng cà chua bị nhiễm ToMV 37 - Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Triệu chứng cà chua bị nhiễm ToMV thờng dễ phát từ lúc bắt đầu quan sát Lá bị bệnh xuất vét đốm sáng, ban đầu vết đốm sáng nhợt nhạt sáng xanh vàng, sau vết đốm có mấúng vàng Lúc đầu sinh trởng tơi tốt bình thờng sau nh nhỏ lại nh thiếu nớc, mỏng Số lợng kích thớc vết đốm nhiều hay to hay nhỏ tuỳ thuộc vào bị nhiễm Các vết đốm thờng xuất tập trung thành chòm bề mặt phiến Các phía bị khảm nhiều phía dới có kèm theo biến dạng, nhỏ lại co dúm dạng dơng xỉ, sau số vết đốm bị chết hoại Cây bị bệnh ban đầu bình thờng sau trở nên cằn cỗi Hoa bị bệnh nhỏ, bị bệnh nhỏ , cứng khoẻ Trên cuống bị bệnh thời kì non xuất vài đốm sáng dễ bị rụng Triệu chứng phù hợp với kết mô tả (Jarset, 1930), Vũ Triệu Mân (1999) nhiều tác giả nớc khác 4.6.2 Triệu chứng CMV cà chua Cây bị nhiễm CMV có triệu chứng còi cọc, mọc thành búi rậm rạp Lá chét bị biến dạng thuỳ, phiến co lại gần gân Màu sắc lấ xanh xỉn kéo dài dạng dỡngỉ Khi bị nhiễm CMv làm sinh trởng phát triển Hoa bị biến dạng, thờng không cho Nếu hình thành nhỏ màu nhợt nhạt Cây nhiễm bệnh sớm thiệt hại nặng 4.6.3 Triệu chứng cà chua bị nhiễm PVX Trỉệu chứng ban đầu cà chua nhiễm bệnh virus PVX gây đốm sáng xanh hơI trong, phần lớn có hình bầu dục tròn trông tựa nh vết dầu loang mặt giấy, ngắt bệnh lên quan sát nhìn thấy lờ mờ phía bên mặt Có bắt gặp đốm sáng vàng phiến lá, sau xuất rải rác đốm chết hoại màu tối Các vết đốm xuất nhanh, nhiều lan phân bố khắp bề mặt Một số triệu chứng xuất sau thời gian trở lại bình thờng, mặt lại vết hoại tử Trên thân vài nhiễm có vết khảm sọc đôi, bệnh tomato double virus streak PVX TMV gây theo mô tả trớc nhiều tác giả 4.7 Kết lây nhiễm virus thị kí chủ phụ phòng thí nghiệm 38 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Các tài liệu nghiên cứu trớc ghi nhận công gây hại nhiều virus cà chua, việc cà chua có biểu triệu chứng đặc trng hay không phụ thuộc vào nhiều yếu tố nh: Điều kiện nhiệt độ, ánh sáng, độ dài ngày, sinh trởng phát triển cà chua Bên cạnh để tìm hiểu bệnh virus ToMV, CMV ảnh hởng đến cà chua vụ sản xuất Chúng tiến hành lây nhiễm virus thị nhằm xác định nhanh rõ xác nguyên nhân gây bệnh Đặc điểm lớn thị chúng mẫn cảm với nguyên nhân gây bệnh, triệu chứng xuất đặc trng, rõ, thời gian phát bệnh ngắn Có nhiều tác giả coi triệu chứng gây hại virus xuất thị đợc coi triệu chứng đặc trng virus Khi lây nhiễm virus thị, ngời ta thấy virus nhiễm phận (necrosis), nhiễm hệ thống (systemic), hay vừa nhiễm hệ thống vừa nhiễm cục (hay phận) [10] Sử dụng phơng pháp thị nhằm xác định bệnh virus gây nên, ngời ta sử dụn thị để nhân virus tách lọc virus số trờng hợp.Kết lây nhiễm đợc trình bày bảng Bảng 4.10 Kết lây bệnh nhân tạo ToMV thị Stt Số TN Tên KH SCPB/SCTN TLPB TKTD trị số (cây) (%) (ngày) ELISA Kết luận Thuốc N.glutinosa 0/5 0,00 - - - Thuốc N.benthamiana 0/5 0,00 - - - Thuốc N tabacum cv samsum 4/5 80,00 12-14 1,623 + Thuốc N tabacum cv white Buley 0/5 0,00 - - - Rau muối Chenopodium amaranticolour 3/5 60,00 13-14 0,567 + Rau muối 4/5 60,00 78 0,685 + Cúc bách nhật Đ/c(-) Đ/c(+) Chenopodium qino Gomphera globosa 4/5 80,00 14 -16 0,280 0,984 0,472 + Ghi chú: Đ/C (-) không nhiễm bện Đ/C (+) bị nhiễm bệnh ODtb giá trị mật độ quang trung bình phản ứng SCPB: Số phát bệnh SCTN: Số thí nghiệm 39 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Số liệu lây nhiếm nhân tạo ToMV bảng thị có số vấn đề lên nh sau: Các loài tham gia thí nghiệm xuất triệu chứng bệnh, họ cà (solanacea) 1/4, họ rau muối 2/2, họ rau giền 1/2 Cây thuốc N tabacum cv samsum có giá trị OD cao đạt 1,623, TKTD từ -12 ngày, tỷ lệ phát bệnh 80% Cây cú bách nhật có giá trị OD thấp 0,472, TKTD 14 16 ngày Kiểm tra phơng pháp ELISA thấy tỷ lệ nhiếm bệnh đạt 40% Kết thu đợc thể rõ ràng độ mẫn cảm thị khác tùy thuộc vào loài khác Theo dõi quan sát, mô tả triệu chứng thị kí chủ phụ lây nhiễm ToMV: Cây thuốc (N tabacum cv samsum): bị nhiễm hệ thống, bị khảm vết khảm có màu xanh đậm riệng biệt Lá ngọn, bánh tẻ bị khảm rõ phía dới gốc Lá non tạo nên u lòi lõm làm cho biến dạng bánh tẻ vết bệnh vùng xanh đậm, gờ lên, sinh trởng phát triển chậm lại Cây rau muối (Chenopodium amaranticolour): triệu chứng ban đầu vết chấm nhỏ không rõ màu sắc, bệnh vết bệnh to dần làm chết nhu mô Vết bệnh có màu nâu tròn tròn Sau lan rộng toàn Cây rau muối (Chenopodium qino): vết bệnh vết chết hoại cá màu nâu tròn tròn, sau vết bệnh lan rộng làm chết Cúc bách nhật (Gomphera globosa): Cây bị nhiễm cục xuất chấm nhỏ nằm rải rác ttrên mặt bệnh sau vết đốm chết hoại to dần, có hình tròn hình nhẫn Xung quanh vết bệnh có màu vàng úa sinh trởng phát triển chậm lại Kết lây bệnh nhân tạo kí chủ phụ ToMV (bảng 4.10) có thay đổi xuất triệu chứng bệnh loài tham gia thí nghiệm có 1/5 loài không thấy xuất triệu chứng bệnh giền 40 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 xanh Còn lại có xuất triệu chứng bệnh là: cà độc dợc, rau giền đỏ, ớt, tầm bóp Kết kiểm tra ELISA đợc trình bày bảng sau Bảng 4.11 Xác định kí chủ phụ ToMV số trồng cỏ dại phơng pháp lây nhiễm nhân tạo Stt Số TN Tên KH Amaran thusviridis L Cây dền xanh Cây dền đỏ Cây ớt SCPB/SCTN TLPB TKTD trị số (cây) (%) (ngày) ELISA Kết luận 0/5 0,00 - - - 2/5 40,00 7-8 0,466 + Capscum annuum L 1/5 20,00 11 - 12 0,525 + Cà độc dợc Datura Stramodium 3/5 60,00 12 - 22 0,532 + Cây tầm bóp Physalis angulata 2/5 40,00 19 - 20 0,512 + Đ/c(-) 0,280 Đ/c(+) 0,984 Ghi chú: Đ/C (-) không nhiễm bệnh Đ/C (+) bị nhiễm bệnh ODtb giá trị mật độ quang trung bình phản ứng SCPB: Số phát bệnh SCTN: Số thí nghiệm Bảng 4.12 Kết lây bệnh nhân tạo thị kí chủ phụ CMV Stt Số TN Tên KH SCPB/SCTN TLPB TKTD trị số (cây) (%) (ngày) ELISA Kết luận Thuốc N.glutinosa 0/5 0,00 - - - Thuốc N.benthamiana 0/5 0,00 - - - Thuốc N tabacum cv samsum 0/5 0,00 - - - Thuốc N tabacum cv white Buley 0/5 0,00 - - - Rau muối Chenopodium amaranticolour 2/5 40,00 13-14 1,079 + 41 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Rau muối Cúc bách nhật ớt Đ/c(-) Đ/c(+) 10 Chenopodium qino Gomphera globosa Capscum annuum L Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 0/5 0,00 - - 3/5 80,00 18 - 20 1,079 + 1/5 20,00 17 - 19 0,280 0,984 0,598 + Từ bảng kết ta nhận thấy: Khi lây nhiễm CMV thị tham gia thí nghiệm có3/8 loài thấy xuất triệu chứng lại 5/8 loài không thấy xuất triệu chứng bệnh Khi tiến hành kiểm tra phơng pháp ELISA thấy: Các không biểu triệu chứng có giá trị OD thấp (0,091) Cây cúc bách nhật có giá trị OD cao (1,194), TKTD 18 20 ngày Triệu chứng cúc bách nhật: ban đầu xuất đóm nhỏ bề mặt lá, vết đốm ngày xuất nhiều sau lan toàn bọ làm cho bị đốm trắng Triệu chứng cay rau muối (Chenopodium amaranticolour): 4.7 Biện pháp phòng trừ bệnh virus gây cà chua Qua kết nghiên cứu đạt đợc tìm hiểu thông tin nghiên cứu tác giả nớc Chúng tiến hành tập hợp số biện pháp phòng trừ bệnh virus gây cà chua vụ xuân hè Hà Nội vùng phụ cận nh sau: - ToMV, CMV lan truyền nhanh qua tiếp xúc giọt dịch, vết thơng giới, qua dụng cụ sản xuất hay tay chân , quần áo bị nhiễm, cần phải ý trồng, chăm sóc thu hoạch cà chua tránh không để lây lan virus từ - Không để củ khoai tây, trồng khoai tây, thuốc lào trồng họ cà sát cạnh Trớc trồng phải vệ sinh đồnh ruộng, nhổ bỏ cỏ dại, đặc biệt họ rau muối, kí chủ phụ loại virus - Dùng giống chống bệnh, giống bệnh - Phun thuốc trừ rệp, khử trùng phơng tiện thu hái, hạn chế gây vết thơng sây sát trình chăm sóc 42 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 - Chăm sóc để sinh trởng, phát triển tốt, bảo vệ để tránh khỏi bị nhiễm bệnh vào giai đoạn - Các mô hình sản suất cà chua trớc triển khai gieo trồng cần phải kiểm tra ELISA hạt giống để loại bỏ lô hạt giống nhiễm virus - Không sử dụng nguồn nớc bẩn đặc biệt nguồn nớc tới vùng sản xuất cà chua đại trà, có nguồn nớc chung Điều hạn chế đợc nhiều lan truyền virus từ bệnh sang khoẻ, từ ruộng nhiễm bệnh sang ruộng cha nhiễm 43 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Tóm lại: Các bớc phòng trừ bệnh virus cà chua Kiểm tra virus phơng pháp ELISA hạt giống Sản xuất giống khu vờn cách ly tốt nhà lới ngăn côn trùng động vật khác Giá trể gieo trồng nên sử lý bệnh nhiệt, vận chuyển hạn chế tối đa vết thơng giới Làm đất trồng đồng ruộng thật kĩ, thu gom tàn d bệnh, nhỏ bỏ cỏ dại trớc đem cà chua trồng Thờng xuyên làm cỏ trình chăm sóc Trong trình chăm sóc cần lu ý hạn chế, để dụng cụ lao động, quần áo tay chân nhiễm dịch bệnh Sử dụng nguồn nớc sạch, chủ yếu lấy nguồn nớc tới tự nhiên qua bể lọc để hạn chế bệnh virus bệnh khác có nớc tới áp dụng có hiệu biện pháp phòng trừ loại côn trùng gây hại cà chua, đặc biệt côn trùng gây vết thơng giới côn trùng vecter truyền bệnh virus nói 44 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Kết luận tồn đề nghị * Kết luận Trong thời gian thực tập từ 15/3/2007 đến ngày 30/6/2007 có nhận xét sau: - địa điểm điều tra thấy xuất đồng ruộng dạng triệu chứng: Xoăn lá, dơng xỉ, khảm vàng lá, khảm nhăn, khảm lồi lõm Trong dạng triệu chứng xuất đồng ruộng triệu chứng xoăn vàng chiếm u bệnhnày gây hại mạnh dịa điểm - Cây cà chua thời vụ hà Nội phụ cận bị nhiễm triệu chứng bệnh virus cao Bệnh thờng có tỷ lệ bệnh nhỏ 10% giai đoạn bắt đầu trồng đến có chùm hoa đầu tiên, dới 60% có non đến thu hoạch đợt sau bệnh nặng chiếm tỷ lệ cao hầu nh đạt tới tỷ lệ nhiễm tối đa 100% - Hầu hết giống cà chua điều nhiễm bệnh virus biểu triệu chứng dạng khác Bệnh virus đợc phát đợc 12 thật trở - 22 giống trồng khảo nghiệm TTKDSNKI bị nhiễm bệnh cao giống hầu nh 100% số bị nhiễm bệnh xoăn Giống bị nhiễm nặng giống Đài Loan, từ giai đoạn thật thấy xuất bệnh virus, đến giai đoạn chín đạt tới tỷ lệ tối đa 100% số bi nhiễm bệnh - Các thị xuất triệu chứng đặc trng với tỷ lệ phát bệnh từ 60 100% * Tồn dề nghị: Đề tài thực thời gian ngắn, kết điều tra nhiều hạn chế, nên cần đợc nghiên cứu thêm để có kết cao việc phòng trừ bệnh virus cà chua, đặc biệt bệnh xoăn vàng 45 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 - Tiếp tục nghiên cứu bệnh virus khác đồng ruộng đặc biệt nghiên cứu diễn biến bệnh virus xoăn vàng để có biện pháp phòng trừ bệnh virus đạt hiệu quả, hạn chế gây hại củavirus đồng ruộng tài liệu tham khảo Lê Đức Đồng (Dịch) (1990), " Phơng pháp ELISA xác định virus khoai tây", Tạp chí bảo vệ thực vật, tháng 12 năm 1990 Tạ Thu Cúc, Hồ Hữu An, Nghiêm Thị Bích Hà (2000), Giáo trình rau NXB Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Văn Cự (2004), Giáo trình Maketing Nông nghiệp - Trờng Đại học Nông nghiệp I Hà Nội Ngô Bích Hảo, Sven Erik Albrechtsen (2000), " Phát virus cà chua, ớt cay, ớt ngọt, nhận dạng Tomato mosaic virus Miền Bắc Việt Nam" Hội thảo bệnh Sinh học phân tử lần trờng Đại học Nông lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, ngày 20/6/2002 NXB Nông nghiệp, Tr 6-11 Ngô Bích Hảo ctv (2003), " Một số nghiên cứu virus khảm cà chua (ToMV) vùng Hà Nội phụ cận" Hội thảo bệnh Sinh học phân 46 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 tử lần thứ Trờng Nông nghiệp I- Hà Nội, ngày 23-25/10/2003 NXB Nông nghiệp, tr 41-45 Lê Thị Liễu (2004) Nghiên cứu đăc điểm sinh vật học biện pháp hoá học phòng trừ bọ phấn Bemisia tabacu Gennadius cà chua Gia Lâm Hà Nội, luận văn thạc sĩ Nông nghiệp, Trờng Đại học Nông nghiệp I- Hà Nội Vũ Triệu Mân (1984) Một số kết nghiên cứu virus PVX, PVY khoai tây giống Ackersegen vùng Đồng Bằng Miền Bắc Việt Nam Luận án phó tiến sĩ khoa học Nông nghiệp, trờng Đại Học Nông nghiệp I - Hà Nội Vũ Triệu Mân (1986) Bệnh virus khoai tây NXB khoa học kỹ thuật Nông nghiệp Hà Nội Vũ Triệu Mân, Lê Lơng Tề (chủ biên) (2001) Giáo trình bệnh Nông nghiệp NXB Nông nghiệp, Hà Nội 10 Vũ Triệu Mân (2003) Chẩn đoán nhanh bệnh hại thực vật NXB Nông nghiệp, Hà Nội 11 Lê Lơng Tề, Vũ Triệu Mân (1999) Bệnh vi khuẩn virus hại trồng NXB Giáo dục, Hà Nội 12 Nguyễn Văn Tuất (2002) Kỹ thuật chuẩn đoán giám định bệnh hại trồng Viện Bảo Vệ Thực Vật NXB Nông nghiệp, tr 69 13 Đoàn Thị Thuyền, Lu Việt Dũng, Vũ Triệu Mân (2003), " Sử dụng kháng huyết Trung tâm Bệnh Nhiệt đới (ĐHNNI) xản suất chẩn đoán số bệnh virus hại trồng' Hội thảo bệnh Sinh học phân tử lần thứ Trờng Nông nghiệp I- Hà Nội, ngày 23-25/10/2003, Hà Nội tr 38-40 14 Nguyễn Thơ (1984) Điều tra nghiên cứu số bệnh virus chủ yếu trồng có giá trị kinh tế (thuốc lá, cà chua, khoai tây) Luận án Phó tiến sĩ khoa học Nông nghiệp, trờng Đại Học Nông nghiệp I - Hà Nội 15 AVRDV 1985 Progress report 1983 Asian vegetable research and Development center Shanhua Tăiwan, ROC 444p 16 Bander, J (1964), Mitt Biologycal., Bundesanst., Land Forstw.,p 110-130 17 Baratova L.A., Grebenschchi KV N.I.,Shish K.V.A, Kcostri radavsky J.L., Jarvekulg L., Scrarma M (1992), "The torography of the surface of PVX, Tritium planigraphy and immunologycal analysis" Journal of General virology, 72(2):299-235 47 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 18 Bercks R (1976) Potato virus x, Descriptions of plant virus, No.4, commonwealth mycologycal Institule and Association of appied Biologist, Kew, Surrey, England 19 Branttari E.E., Good win P (1985), "Detection of potato virus S, X and Y enzyme, linked immuno on imtrocelluioaemer (Dot- ELISA)", plant disease, p 200-250 20 Broadbent L (1976), "Epidemiology and control of tomato mosaic virus" Annu Rev Phytopathol 14:76-96 21 Brunt A.A., k Crabtree M.J., Dall wite, A.J Gibbs and L Wortson (1997) viruses of plant, CAB International 22 Brunt A.A., Grabtree K., Dall Witz M.J., Gibbs A.J., Watson L., and Zurcher E.J.(eds) (1996 on wards), pant viruses online, potato X potex virus, version, 20thAugust 1996, http:// image Fs Uidaho.edu/ vide/ descr 615 htm 23 Brunt A.A., Grabtree K., Dall Witz M.J., Gibbs A.J., Watson L., and Zurcher E.J.(eds) (1996 on wards), plant viruses online, tomato mosaic, http:// image Fs Uidaho.edu/ vide/ descr 832 htm 24 Cohen, S and Nitzany, F.E.1996 Transmission and host range of the tomato yellow leaf curl virus, Phytopathology 56 25.Cozshek H., Ber, R., Antignus, Y., Cohen, S., Navot.N, and Zamid.D 1988 Isolation of the tomato yellow leaf curl virus, ageminivirus Phytopathology 78 26 Cozshek H., Navot.N., Zamid.D, and late rrot ,11.1981.Diagnosis of tomato yellow leaf curl virus with cloned DNA probe: A geographical assessment of the disease 27 Defrancq d, Hondt, M and Russuo, M 1985 Tomato yellow leaf curl in Senega Phytopath.Z 112 28 Dembele, D.1993 TYLCV in Mali Tomato leaf curl Newsl 29 Prancki, R.I.B, D.W Mossop and T Hatta 1979 Cucumber mosaic virus in Descriptions of plant viruses No 213 (No.1 revised) Comon wealth, Mycologycal institute and association of Applied biologists, Kew, Surrey, England 30 Thongrit, D., Atthom, S., and Sutabutra, T 1986 Tomato yellow leaf curl virus in Thailad In: Plant virus Disease of Horticullural crops in the Tropics and Subtropics FFTC Book Series No.33 Food and Fertilizer Techrology Center for the Asian and pacific Region, Taipei, Tăiwan, ROC 48 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 31 Gamal Mohamed Fadl and Heinz Burgstaller, 1986, Reduction of tomato leaf curl virus in sudan though variety selection and insecticide application, In "Tomato on Arid land Acta Horticulture, 1986" 32 Green S.K., SulyoY., and lesemann D.E (1987), "Leaf curl virus on tomato in Tăiwan province", FAO plant prot Bull 33 Gibb A.J (1997) Tobamovirus group, Description of plant viruses, No.184, Comonwealth Mycological Institute and Association of Applied Biologists, Kew, Surrey, England.Bullentin.No.15 Acian vegetable reseach and development center 34 Green, S.K and Kalloo.G.1994 Leaf curl and yllowing viruses of pepper and tomato: an overview Asian Vegetable Research and Development Center Technical Bulletin.No 21,51p 35.Green, S.K Guidelines for diagnotic work in plant virology Technical Bullentin.No.15 Acian vegetable resech and development center 36 Holling M and Hutting H (1976) Tomato mosaic virus, Description of plant viruses, No.156, Comonwealth Mycological Institute and Association of Applied Biologists, Kew, Surrey, England 37 Cohen,.S and Nitzany, F.E.1996.Transmission and hots range of the tomato yellow leaf curl virus Phytopathology 56 38 Holmes, F.O Local lesions in tabaco mosaic Botan Gas 1921,87 39 http:/// www.Umext maine Edu/onlinepubs/htmpubs/2492.htm 40 Linasalmi A., (1964) The characterristics of some ioolates of tobaco mosaic virus and potato virus X causing Streak on tomato, p224-234 41 Makkouk, K.M., Shehab, S., and Majdalan, S.E I979 Tomato yellow leaf curl: incidence yield losses and Transmission in Lebanon Phytopathol 96 42 Miki, T and Larson, R.H.(1962), phytopathology 36:168 Nitzany, F.E 1975 Tomato yellow leaf curl virus Phytopath Medit.14 43 Renate Koenig and Leisemann D.E (1978) Potex virus group, Description of plant viruses No.200, Comonwealth Mycological Institute and Association of Applied Biologists, Kew, Surrey, England 44 Renate Koenig and Leisemann D.E (1989) Potato virus group,Description of plant viruses No.200, Comonwealth Mycological Institute and Association of Applied Biologists, Kew, Surrey, England 45 Shaw, T.G and Larson, R.H (1962) phytopathology 52:170 49 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 46 Smith K.M (1975) Textbook of plant virus Disease (3nd Edition), London, UK, Longman 412 - 418 47 Yassiin, A.M and Nour, M.A.1965 Tomato leaf curl disease, its effect or yield and varietal Susceptibility Sudan Agric J 48 Zitter T.A,(1991) Tomato mosaic and tobaco mosaic, Compendium of tomato diseases, APS press, St Paul, MN,p39, , Jones J.B., Jones J.P., Stall R.E., Zitter T.A 49 Zitter T.A, Jones J.B., Jones J.P., Stall R.E (1991) Compendium of tomato diseases, Minnesota, American phytopathologycal Society, 73p 50 Zdravka Sholeva, Angela Yordanova and Elisaveta Stoimenova (1998), "Electrophoretic differenliation of some Tabamoviruses", Jouranl of Culture Collection, Volume 2, 1997 - 1998, p66 - 72 51 Zitter T.A Diseases caused by viruses Compendium of tomato diseases, APS press, 1993 Mục lục 50 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 51 [...]... thành công 1 số kit ELISA ở Vi t Nam để m chẩn đoán bệnh virus điều này góp phần giảm giá thành nhập khẩu, nâng cao chất lợng nghiên cứu chẩn đoán và bảo vệ sản xuất Nông nghiệp ở Vi t Nam Phần 3 Đối tợng, địa điểm, vật liệu, nội dung và phơng pháp nghiên cứu 3.1 Đối tợng nghiên cứu - Bệnh virus khảm lá cà chua (Tomato mosaic virus ToMV) - Bệnh virus khảm lá dơng xỉ (Cucumber mosaic virus CMV) - Bệnh. .. biểu hiện biến đen Các vết đốm không xuất hiện ở nhiệt độ cao, bệnh do phối hợp của 2 loại virus X và Virus Y [ 20,28] Bệnh xoăn lá cà chua có quan hệ mật thiết với bệnh đốm xoăn, bệnh do virus x và virus A gây ra [53] Có khoảng 40 loại virus gây hại trên cây c chua trên các vùng trồng c chua trên thế giới, làm giảm năng suất từ 15 25% [22,39] 4.2 Điều tra diễn biến bệnh virus hại cà chua trên đồng ruộng... hại do bệnh virus gây ra trên đồng ruộng đối với cà chua, chúng tôi tiến hành điều tra bệnh virus trên 2 địa bàn: Xã Song Phơng Hoài Đức Hà Tây và HTX sản xuất và tiêu thụ rau an toàn Đạo Đức Xã Vân Nội - Đông Anh Hà Nội 4.2.1 Diễn biến bệnh virus trên giống cà chua Mỹ 902 tại Xã Song Phơng Hoài Đức Hà Tây Trên cơ sở đánh giá chung về mức độ phát sinh, phát triển và gây hại của virus trên cà chua. .. gây hại nh: CMV, ToMV, PVV [4] - Ngô Bích Hảo và CTV (2003) đã điều tra nghiên cứu bệnh khảm vàng lá ở vùng Hà Nội và phụ cận đã xác định ToMV gây hại khá phổ biến, bệnh xuất hiện từ giai đoạn phân cành, gây hại mạnh vào giai đoạn ra hoa, hình thành quả có xu hớng giảm vào giai đoạn thu hoạch Theo tác giả, triệu chứng do ToMV gây ra chủ yếu là loại hình khảm vàng, dạng dơng xỉ có xuất hiện nhng ít và. .. hè - 2007 ở Hà Nội và vùng phụ cận Xác định bệnh virus ToMV, CMV, PVX, PVY, PLRV trong thời gian thực tập Kiểm tra nguyên nhân gây bệnh virus bằng phơng pháp ELISA và phơng pháp cây chỉ thị Mô tả triệu chứng của ToMV, CMV, PVX, PVY, PLRV hại cà chua 3.3.4 Phơng pháp điều tra 3.3.4.1 Phơng pháp nghiên cứu ngoài đồng - Lựa chọn khu ruộng chuyên canh rau màu thuộc địa điểm nghiên cứu - Điều tra theo phơng... xuất hiện của virus Chúng tôi tiến hành điều tra diễn biến triệu chứng bệnh virus tại 2 thời vụ trên giống cà chua savior tại HTXSX và tiêu thụ rau an toàn Đạo Đức- Đông Anh Hà Nội Kết quả đợc trình bày ở bảng 2 và đồ thị 2 Với kết quả ở bảng 2 và đồ thị 2 chúng tôi nhận thấy: trên giống cà chua Savior có sự khác nhau rệt về sự phát sinh, phát triển của bệnh virus cả 2 mùa vụ tại điểm điều tra Sự khác... suất và tiêu thụ rau an toàn đạo đức - Đông Anh Hà Nội Các tác giả trong và ngoài nớc nghiên cứu về virus trớc đây đã ghi nhận và khẳng định về sự xuất hiện và hiện tợng bệnh ẩn, hiện tợng mất triệu chứng và sự tồn tại của nhiều virus có trong cùng một cây cà chua bị bệnh Thời vụ và giống cũng là những yếu tố ảnh hởng quan trọng đến bệnh để có những đánh giá chung về mức độ gây hại của virus và xác... vàng ngọn, xoăn lùn, xoăn cuốn lá, khảm lá [7] Theo Vũ Triệu Mân (1984) trên cà chua ngoài bệnh xoăn vàng lá cà chua (Tomato yellow leaf curl) còn có bệnh virus khác thờng gặp là : TMV, CMV, ToMV Trên ruộng cà chua thờng xuất hiện với những triệu chứng hỗn hợp do nhiều virus gây ra thờng 1 cây có thể có tới 2 virus trở lên, có trờng hợp tới 4 5 virus [9] Bệnh xoăn vàng lá thờng gặp ở cà chua Các bệnh. .. suất, bệnh héo rũ cũng xuất hiện nhng với tỷ lệ thấp Kết quả điều tra tại HTXSX và tiêu thụ rau an toàn đạo Đức Đông Anh Hà Nội trên giống cà chua Savior cho thấy cà chua trên đồng ruộng biểu hiện các dạng triệu chứng khác nhau và gây hại trên tất cả các giai đoạn sinh trởng của cây triệu chứng khảm trên cà chua rất phổ biến xuất hiện từ giai đoạn phân cành, gây hại mạnh vào giai đoạn ra hoa- hình thành... hoạch Ngoài điều tra bệnh virus trên đồng ruộng, chúng tôi tiến hành điều tra bệnh virus trên tập đoàn giống nhập nội trồng tại TTKDTVSNKI Hà Nội Tập đoàn giống nhập nội trồng ngày 28/3/2007 gồm 22 giống Kết quả điều tra đợc trình bày ở bảng4.3 đồ thi 3 28 Báo cáo thực tập tốt nghiệp Nguyễn Thị Duyên CNSH K1 Qua kết quả ở bảng 4.3 chúng tôi nhận thấy trên tất cả các giống điều tra đều bị nhiễm virus Tuy ... nghiên cứu bệnh virus hại cà chua Hà Nội vùng phụ cận vụ xuân hè 2007" 1.2 Mục đích, yêu cầu đề tài 1.2.1 Mục đích Nghiên cứu đánh giá thực trạng bệnh virus hại cà chua Hà Nội vùng phụ cận vụ... - Xác định thành phần virus hại số gióng cà chua - Điều tra diễn biến triệu chứng bệnh virus hại cà chua vụ xuân hè 2007 vùng trồng rau Hà Nội vùng phụ cận - Kiểm tra virus hại cà chua phơng pháp... (2003) điều tra nghiên cứu bệnh khảm vàng vùng Hà Nội phụ cận xác định ToMV gây hại phổ biến, bệnh xuất từ giai đoạn phân cành, gây hại mạnh vào giai đoạn hoa, hình thành có xu hớng giảm vào giai