TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN NGUYỄN VĂN TẤN PHÂN TÍCH TỒN LƯU KHÁNG SINH DOXYCYCLINE TRONG NGUYÊN LIỆU CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) BẰNG HỆ THỐNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN 2011 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN NGUYỄN VĂN TẤN PHÂN TÍCH TỒN LƯU KHÁNG SINH DOXYCYCLINE TRONG NGUYÊN LIỆU CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) BẰNG HỆ THỐNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Ths TRẦN MINH PHÚ 2011 XÁC NHẬN Luận văn tốt nghiệp với tên đề tài “Phân tích tồn lưu kháng sinh Doxycycline nguyên liệu cá tra hệ thống sắc ký lỏng cao” sinh viên Nguyễn Văn Tấn thực cán hướng dẫn góp ý chỉnh sửa phê duyệt Cần Thơ, ngày 10 tháng 07 năm 2011 Cán hướng dẫn Sinh viên thực ThS Trần Minh Phú Nguyễn Văn Tấn LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp cố gắng thân, nhận nhiều giúp đỡ Tôi xin gởi lời cảm ơn đến: Thầy Trần Minh Phú tận tình giúp đỡ suốt thời gian thực luận văn Tôi xin gởi lời cảm ơn đến Anh Nguyễn Thanh Phong Anh Nguyễn Văn Toàn cán phòng thí nghiệm Bộ môn Dinh dưỡng Chế biến thủy sản giúp đỡ nhiều suốt thời gian thực đề tài phòng thí nghiệm Tôi xin gởi lời cảm ơn đến tất quí Thầy cô Bộ môn Dinh dưỡng Chế biến thủy sản cung cấp cho em kiến thức vô bổ ích thời gian học tập hoàn thành luận văn tốt nghiệp Tôi xin gởi lời cảm ơn đến gia đình bạn bè quan tâm giúp đỡ động viên suốt khoảng thời gian học tập vừa qua Tôi xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, ngày 10 tháng 07 năm 2011 Sinh viên thực Nguyễn Văn Tấn i TÓM TẮT Đề tài: “Phân tích tồn lưu kháng sinh Doxycycline nguyên liệu cá tra hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao” tiến hành với mục đích tìm thời gian tồn lưu kháng sinh Doxycycline nguyên liệu cá tra Đề tài thực gồm thí nghiệm: Thí nghiệm (1): Tối ưu hóa thông số hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) cho phân tích kháng sinh nhóm Tetracycline; Doxycycline với việc khảo sát cột sắc kí phân tích khác nhau; thay đổi tỉ lệ dung môi pha động; Bước sóng phân tích Khảo sát qui trình chiết tách kháng sinh Doxycyclin sản phẩm thủy sản điều kiện phòng thí nghiệm Dinh dưỡng Chế biến thủy sản – Khoa Thủy sản – Đại học cần thơ theo tiêu chuẩn ngành số 28 TCN 177 : 2002 : Hàm lượng kháng sinh nhóm Tetracycline sản phẩm thuỷ sản - Phương pháp định lượng sắc ký lỏng hiệu cao theo định số 10/2002/QÐ- BTS Bộ Thủy Sản Thí nghiệm (2): Xác định tồn lưu kháng sinh Doxycycline cá tra Kết nghiên cứu cho thấy: Thí nghiệm (1) với cột sắc kí Gemini C18 (5µm, 3.00 x 150 mm); Tốc độ dòng 0,5 mL/min, tỉ lệ pha động ACN : Acid oxalic 20:80; Bước sóng 350nm phát tốt kháng sinh Doxycycline Hiệu suất thu hồi qui trình chiết tách đạt 62,6 % Giới hạn phát 250 ppb mẫu thịt cá Kết phân tích hàm lượng Doxycycline mẫu thức ăn nhiễm mức 10,16±8,5 ppm Sau ngày cho ăn kháng sinh ta thấy tồn lưu Doxycycline thịt cá tăng dần đạt mức cao 1289 ± 302 ppb ngày thứ Sau 30 ngày ngừng cho ăn kháng sinh mức độ tồn lưu Doxycycline thịt cá phát mức 219 ± 16,2 ppb Thí nghiệm (2) thời gian tồn lưu kháng sinh Doxycycline cá tra giới hạn phát sau 30 ngày thí nghiệm ii MỤC LỤC Chương ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Thời gian thực Chương LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tìm hiểu nhóm kháng sinh nhóm Tetracycline (TCs) 2.1.1 Sơ lược nhóm Tetracycline 2.1.2 Tình hình sử dụng kháng sinh nhóm Tetracycline 2.1.3 Các ứng dụng nhóm Tetracyclin 2.1.4 Tác hại nhóm TCs 2.2 Phương pháp xác định dư lượng TCs .10 2.2.1 Phương pháp 1: Xác định dư lượng Tetracyclin mẫu tôm sữa nguyên chất cách sử dụng sắc ký lỏng đầu dò UV xác nhận lại đầu dò khối phổ (Andersen et al., 2004) 11 2.2.2 Phương pháp 2: Phân tích dư lượng kháng sinh nhóm Tetracyclin thịt lợn hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao ghép phổ khối lượng (Cherlet et al., 2003) 11 2.2.3 Phương pháp 3: Xác định dư lượng kháng sinh Tetracycline thực phẩm hệ thống sắc ký lỏng khối phổ kết hợp với ion hóa áp suất khí (APCI LC-MS/MS) (Nakazawa et al., 1999) 12 2.3 Mức độ tồn lưu nhóm kháng sinh TCs 13 2.4 Qui định số quốc gia việc sử dụng thuốc hóa chất sản xuất kinh doanh thủy sản 14 Chương 15 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 15 3.1 Địa điểm thời gian thực .15 3.1.1 Địa điểm thực 15 3.1.2 Nguyên liệu 15 3.1.3 Thời gian .15 iii 3.2 Vật liệu phương pháp 15 3.2.1 Vật liệu 15 3.2.2 Phương pháp thí nghiệm 17 3.2.3 Xử lí số liệu 24 Chương 25 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .25 4.1 Tối ưu hóa thông số hệ thống HPLC 25 4.1.1 Cố định cột phân tích với cột Gemini C18 25 4.1.2 Cố định cột phân tích với cột Synersi C18 27 4.1.3 Tối ưu hóa thông số cho phân tích Docycyclin hệ thống HPLC-UV vis .28 4.2 Thí nghiệm tồn lưu kháng sinh Doxycycline cá tra 30 4.2.1 Các yếu tố môi trường 30 4.2.2 Tồn lưu Doxycycline cá Tra 31 CHƯƠNG 33 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 33 5.1 Kết luận .33 5.2 Đề xuất 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO .34 PHỤ LỤC 36 PHỤ LỤC 41 PHỤ LỤC 47 PHỤ LỤC 49 PHỤ LỤC 51 PHỤ LỤC 53 iv DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1 Kết diện tích peak lần spike chuẩn 29 Bảng 4.2 Kết chạy chuẩn Doxycycline 29 Bảng 4.3 Nhiệt độ trình thí nghiệm 30 Bảng 4.4 pH trình thí nghiệm .30 Bảng 4.5 Hàm lượng oxy hòa tan trình thí nghiệm .31 Bảng 4.6 Sự tồn lưu cá tra sau ngày cho ăn kháng sinh 31 Bảng 4.7 Sự tồn lưu cá tra sau 30 ngày ngưng cho ăn kháng sinh 32 v DANH MỤC HÌNH Hình 2.1 So sánh phương pháp phân tích dư lượng OTC mẫu cá 13 Hình 3.1 Sơ đồ bố trí thí nghiệm 19 Hình 3.2 Sơ đồ chiết tách qui trình .22 Hình 3.4 Sơ đồ thu mẫu .24 Hình 4.1 Tối ưu hóa thông số với cột Gemini C18; ACN – NaH2PO4 .26 Hình 4.2 Tối ưu hóa thông số với cột Synersi C18; ACN – NaH2PO4 .27 Hình 4.3 Tối ưu hóa thông số với cột Gemini C18; ACN – Acid oxalic 28 Hình 4.4 Biểu đồ đường chuẩn 30 vi CÁC TỪ VIẾT TẮT TCs Kháng sinh nhóm Tetracycline TC Tetracycline DC Doxycycline OTC Oxytetracycline CTC Chlorotetracycline HPLC High performance liquid chromatography AOAC Association of Official Agricultural Chemists EU European Union EC European Commission LOD Limits of detection LOQ Limits of quantification MRL Minimum residue limits ppm Parts per million ppb Parts per billion µL Microliter L Liter µg Microgram Kg Kilogram µm Micrometer nm Nanometer ng Nanogram mL Mililiter ACN Acetonitrile UV-vis Ultraviolet-visible LC-MS/MS Liquid chromatography mass spectrometry SPE Solid phase extraction BNNPTNT Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn DD& CBTS Dinh dưỡng Chế biến thủy sản vii DANH MỤC HÓA CHẤT, KHÁNG SINH HẠN CHẾ SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT, KINH DOANH THỦY SẢN (Ban hành kèm theo Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24 tháng năm 2005 Bộ trưởng Bộ Thủy sản) TT Tên hóa chất, kháng sinh Dư lượng tối đa (MRL)(ppb) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 Amoxicillin Ampicillin Benzylpenicillin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Danofloxacin Difloxacin Enrofloxacin Ciprofloxacin Oxolinic Acid Sarafloxacin Flumequine Colistin Cypermethrim Deltamethrin Diflubenzuron Teflubenzuron Emamectin Erythromycine Tilmicosin Tylosin Florfenicol Lincomycine Neomycine Paromomycine Spectinomycin Chlortetracycline Oxytetracycline Tetracycline Sulfonamide (các loại) Trimethoprim Ormetoprim Tricaine methanesulfonate 50 50 50 300 300 300 100 300 100 100 100 30 600 150 50 10 1000 500 100 200 50 100 1000 100 500 500 300 100 100 100 31 32 33 34 100 50 50 15-330 39 Mục đích sử dụng Thời gian dừng thuốc trước thu hoạch làm thực phẩm Cơ sở SXKD phải có đầy đủ chứng khoa học thực tiễn thời gian thải loại Dùng làm dư lượng hoá chất, nguyên kháng sinh động, liệu sản thực vật nước xuất thuốc lưỡng cư xuống thú y cho mức giới hạn tối đa cho động, thực phép cho đối vật tượng nuôi trồng nước phải ghi thời gian lưỡng cư ngừng sử dụng thuốc trước thu hoạch nhãn sản phẩm Ghi chú: Khi đăng ký sản xuất kinh doanh thuốc thú y cho động vật, thực vật nước lưỡng cư có chứa hoá chất, kháng sinh Danh mục nêu phụ lục sở xin đăng ký phải cung cấp đầy đủ chứng khoa học thực tiễn (hoặc kết thử nghiệm, khảo nghiệm) xác định tính năng, tác dụng, tác hại có sản phẩm mức dư lượng tối đa cho phép (MRL), thời gian thải loại dư lượng hoá chất kháng sinh động, thực vật nước lưỡng cư xuống mức giới hạn tối đa cho phép cho đối tượng nuôi trồng 40 PHỤ LỤC BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Số: 15/2009/TT-BNN Hà Nội, ngày 17 tháng 03 năm 2009 THÔNG TƯ Ban hành Danh mục thuốc, hóa chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng Căn Nghị định số 01/2008/NĐ-CP ngày 03 tháng 01 năm 2008 Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn cấu tổ chức Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn; Căn Pháp lệnh Thú y 2004; Căn Nghị định 33/2005/NĐ-CP ngày 15/3/2005 Chính phủ qui định chi tiết thi hành số Điều Pháp lệnh Thú y; Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn ban hành: - Danh mục hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản (Phụ lục 1) - Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng thú y (Phụ lục 2) - Danh mục hoá chất, kháng sinh hạn chế sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản (Phụ lục 3) - Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh hạn chế sử dụng thú y (Phụ lục 4) Thông tư có hiệu lực sau 45 ngày kể từ ngày ký Thông tư thay Quyết định số 07/2005/QĐ-BTS ngày 24/2/2005 Bộ trưởng Bộ Thuỷ sản việc ban hành Danh mục hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản; Quyết định 26/2005/QĐ-BTS ngày 18/8/2005 Bộ trưởng Bộ Thuỷ sản việc bổ sung Danh mục kháng sinh nhóm Fluoroquinolones cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản xuất vào thị trường Mỹ Bắc Mỹ; Quyết định số 41/2008/QĐ-BNN ngày 41 05/3/2008 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn ban hành Danh mục thuốc thú y phép lưu hành hạn chế sử dụng, cấm sử dụng Việt Nam năm 2008 Chánh Văn phòng, Cục trưởng Cục Thú y, Thủ trưởng đơn vị có liên quan; Giám đốc Sở Nông nghiệp Phát triển Nông thôn; tổ chức, cá nhân nước, nước có hoạt động liên quan đến sản xuất, kinh doanh thuỷ sản, sản xuất, kinh doanh thuốc thú y chịu trách nhiệm thi hành Thông tư này./ Nơi nhận: - Như mục - Văn phòng phủ (Phòng công báo, Website CP) - Cục kiểm tra văn Bộ tư pháp - Vụ pháp chế - Bộ NN&PTNN; - Lưu VT, Cục thú y 42 KT BỘ TRƯỞNG THỨ TRƯỞNG (Đã ký) Diệp Kỉnh Tần DANH MỤC HÓA CHẤT, KHÁNG SINH CẤM SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT, KINH DOANH THỦY SẢN (Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn) TT Tên hóa chất, kháng sinh Aristolochia spp chế phẩm từ chúng Chloramphenicol Chloroform Chlorpromazine Colchicine Dapsone Dimetridazole Metronidazole Nitrofuran (bao gồm Furazolidone) 10 Ronidazole 11 Green Malachite (Xanh Malachite) 12 Ipronidazole 13 Các Nitroimidazole khác 14 Clenbuterol 15 Diethylstilbestrol (DES) 16 Glycopeptides 17 Trichlorfon (Dipterex) 18 Gentian Violet (Crystal violet) Nhóm Fluoroquinolones (cấm sử dụng 19 sản xuất, kinh doanh thuỷ sản xuất vào thị trường Mỹ Bắc Mỹ) 43 Đối tượng áp dụng Thức ăn, thuốc thú y, hoá chất, chất xử lý môi trường, chất tẩy rửa khử trùng, chất bảo quản, kem bôi da tay tất khâu sản xuất giống, nuôi trồng động thực vật nước lưỡng cư, dịch vụ nghề cá bảo quản, chế biến DANH MỤC THUỐC, HÓA CHẤT, KHÁNG SINH CẤM SỬ DỤNG TRONG THÚ Y (Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn) TT Tên hóa chất, kháng sinh Chloramphenicol (Tên khác Chloromycetin;Chlornitromycin; Laevomycin,Chlorocid, Leukomycin) Furazolidon dẫn xuất nhóm Nitrofuran (Nitrofuran, Furacillin, Nitrofurazon, Furacin, Nitrofurantoin, Furoxon, Orafuran, Furadonin, Furadantin, Furaltadon, Payzone, Furazolin, Nitrofurmethon, Nitrofuridin, Nitrovin) Dimetridazole (Tên khác: Emtryl) Metronidazole (Tên khác: Trichomonacid, Flagyl, Klion, Avimetronid) Dipterex (Tên khác: Metriphonat,Trichlorphon, Neguvon, Chlorophos,DTHP); DDVP (Tên khác Dichlorvos; Dichlorovos) Eprofloxacin Ciprofloxacin Ofloxacin Carbadox 10 Olaquidox 11 Bacitracin Zn 12 Tylosin phosphate 13 Green Malachite (Xanh Malachite) 14 Gentian Violet (Crystal violet) 44 DANH MỤC HÓA CHẤT, KHÁNG SINH HẠN CHẾ SỬ DỤNG TRONG SẢN XUẤT, KINH DOANH THỦY SẢN (Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn) TT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Tên hóa chất, kháng sinh Amoxicillin Ampicillin Benzylpenicillin Cloxacillin Dicloxacillin Oxacillin Oxolinic Acid Colistin Cypermethrim Deltamethrin Diflubenzuron Teflubenzuron Emamectin Erythromycine Tilmicosin Tylosin Florfenicol Lincomycine Neomycine Paromomycin Spectinomycin Chlortetracycline Oxytetracycline Tetracycline Sulfonamide (các loại) Trimethoprim Ormetoprim Tricainemethanesulfonate Danofloxacin Difloxacin Enrofloxacin + Ciprofloxacin Sarafloxacin Flumequine 45 Dư lượng tối đa (MRL)(ppb) 50 50 50 300 300 300 100 150 50 10 1000 500 100 200 50 100 1000 100 500 500 300 100 100 100 100 50 50 15-330 100 300 100 30 600 DANH MỤC THUỐC, HÓA CHẤT, KHÁNG SINH HẠN CHẾ SỬ DỤNG TRONG THÚ Y (Ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17 tháng năm 2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn) TT Tên hóa chất, kháng sinh Improvac (số ĐK: PFU-85 nhà sản xuất Pfizer Australia Pty Limited) Spiramycin Avoparcin Virginiamycin Meticlorpidol Meticlorpidol/Methylbenzoquate Amprolium (dạng bột) Amprolium/ethopate Nicarbazin 10 Flavophospholipol 11 Salinomycin 12 Avilamycin 13 Monensin 46 PHỤ LỤC BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Số: 20/2010/TT-BNNPTNT Hà Nội, ngày 02 tháng 04 năm 2010 THÔNG TƯ BỔ SUNG, SỬA ĐỔI THÔNG TƯ SỐ 15/2009/TT-BNN NGÀY 17/3/2009 CỦA BỘ TRƯỞNG BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN BAN HÀNH DANH MỤC THUỐC, HOÁ CHẤT, KHÁNG SINH CẤM SỬ DỤNG, HẠN CHẾ SỬ DỤNG Căn Nghị định 01/2008/NĐ-CP ngày 03 tháng 01 năm 2008 Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn cấu tổ chức Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn; Căn Nghị định 75/2009/NĐ-CP ngày 10/9/2009 Chính phủ sửa đổi Điều Nghị định 01/2008/NĐ-CP ngày 03/01/2008 quy định chức nhiệm vụ, quyền hạn cấu tổ chức Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn; Căn Pháp lệnh Thú y 2004; Căn Nghị định 33/2005/NĐ-CP ngày 15/3/2005 Chính phủ qui định chi tiết thi hành số Điều Pháp lệnh Thú y; Căn Nghị định 119/2008/NĐ-CP ngày 28/11/2008 Chính phủ sửa đổi, bổ sung số Điều Nghị định 33/2005/NĐ-CP ngày 15/3/2005 Chính phủ quy định chi tiết thi hành số Điều Pháp lệnh Thú y; Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn sửa đổi, bổ sung Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17/3/2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn ban hành Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng sau: Điều Bổ sung hoạt chất Trifluralin vào Danh mục hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng sản xuất, kinh doanh thuỷ sản Phụ lục ban hành kèm theo Thông tư số 15/2009/TT-BNN ngày 17/3/2009 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp phát triển nông thôn ban hành Danh mục thuốc, hoá chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng 47 Điều Thông tư có hiệu lực thi hành sau 45 ngày kể từ ngày ký Điều Chánh Văn phòng, Cục trưởng Cục Thú y, Thủ trưởng đơn vị có liên quan; Giám đốc Sở Nông nghiệp Phát triển Nông thôn; tổ chức, cá nhân nước, nước có hoạt động liên quan đến sản xuất, kinh doanh thuỷ sản, sản xuất, kinh doanh thuốc thú y thuỷ sản chịu trách nhiệm thi hành Thông tư này./ Nơi nhận: - Như mục - Văn phòng phủ (Phòng công báo, Website CP) - Cục kiểm tra văn Bộ tư pháp - Vụ pháp chế - Bộ NN&PTNN; - Lưu VT, Cục thú y 48 KT BỘ TRƯỞNG THỨ TRƯỞNG (Đã ký) Diệp Kỉnh Tần PHỤ LỤC BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc Số: 4099/QĐ-BNN-KHCN Hà Nội, ngày 29 tháng 12 năm 2006 Quyết định Ban hành Quy trình tiêu chuẩn thức ăn chăn nuôi BỘ TRƯỞNG BỘ NÔNG NGHIỆP VÀ PHÁT TRIỂN NÔNG THÔN Căn Nghị định số 86/2003/NĐ-CP ngày 18 tháng năm 2003 Chính phủ quy định chức năng, nhiệm vụ, quyền hạn cấu tổ chức Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn; Căn Nghị định số 179/2004/NĐ-CP ngày 21 tháng 10 năm 2004 Chính phủ Quy định quản lý nhà nước chất lượng sản phẩm, hàng hoá; Căn Quyết định số 74/2005/QĐ-BNN ngày 14 tháng 11 năm 2005 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn việc ban hành Quy chế xây dựng, ban hành kiểm tra áp dụng tiêu chuẩn ngành; Theo đề nghị Vụ trưởng Vụ Khoa học công nghệ; QUYẾT ĐỊNH Điều Nay ban hành tiêu chuẩn ngành: 10TCN 831 : 2006 Quy trình chế biến bột máu làm nguyên liệu thức ăn chăn nuôi 10TCN 832 : 2006 Quy trình chế biến bột xương làm nguyên liệu thức ăn chăn nuôi 10TCN 833 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng chlotetracycline, oxytetracyline tetracycline phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 10TCN 834 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng zinc bacitracin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 49 10TCN 835 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng monensin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 10TCN 836 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Xác định hàm lượng tylosin phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao 10TCN 837 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Tiêu chuẩn hàm lượng vitamin thức ăn hỗn hợp 10TCN 838 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Tiêu chuẩn hàm lượng khoáng thức ăn hỗn hợp 10TCN 860 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Độ dao động phân tích cho phép tiêu chất lượng 10TCN 861 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Hàm lượng kháng sinh dược liệu tối đa cho phép thức ăn hỗn hợp 10TCN 862 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Thuật ngữ định nghĩa 10TCN 863 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Hàm lượng vi sinh vật tối đa cho phép thức ăn hỗn hợp 10TCN 864 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Cám gạo - yêu cầu kỹ thuật 10TCN 865 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Khô dầu đậu tương - yêu cầu kỹ thuật 10TCN 866 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Khô dầu lạc - yêu cầu kỹ thuật 10TCN 868 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Quy trình sản xuất thức ăn chăn nuôi công nghiệp đảm bảo vệ sinh an toàn thực phẩm 10TCN 869 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Sắn khô - yêu cầu kỹ thuật 10TCN 984 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Bột cá - yêu cầu kỹ thuật 10TCN 985 : 2006 Thức ăn chăn nuôi - Ngô hạt - yêu cầu kỹ thuật Điều Quyết định có hiệu lực thi hành sau 15 ngày kể từ ngày ký Điều Vụ trưởng Vụ Khoa học công nghệ, Chánh Văn phòng Bộ, Thủ trưởng đơn vị có liên quan chịu trách nhiệm thi hành Quyết định này./ KT BỘ TRƯỞNG THỨ TRƯỞNG (Đã ký) Bùi Bá Bổng 50 PHỤ LỤC Số liệu thu mẫu yếu tố môi trường  Nhiệt độ Các ngày cho cá ăn kháng sinh THỜI GIAN SÁNG TRƯA CHIỀU NGÀY 28,3 29,6 29,2 NGÀY 29,4 30,2 28,5 NGÀY 28,4 30,1 29,8 SÁNG TRƯA CHIỀU NGÀY 28,3 29,6 29,2 NGÀY 28,4 30,1 28,5 NGÀY 28,4 29,7 29,8 NGÀY 15 28,7 30,2 29,9 NGÀY 30 28,5 29, 29,7 TRƯA CHIỀU Các ngày không cho cá ăn kháng sinh THỜI GIAN  pH Các ngày cho cá ăn kháng sinh THỜI GIAN SÁNG NGÀY 7,3 7,4 7,6 NGÀY 7,7 6,8 7,2 NGÀY 6,3 6,9 7,5 TRƯA CHIỀU Các ngày không cho cá ăn kháng sinh THỜI GIAN SÁNG NGÀY 7,3 7,4 7,6 NGÀY 7,5 7,6 7,2 NGÀY 7,6 7,2 7,5 NGÀY 15 6,9 6,8 7,6 NGÀY 30 7,5 7,2 7,4 51  Oxy hòa tan Các ngày cho cá ăn kháng sinh THỜI GIAN SÁNG TRƯA CHIỀU NGÀY 4,8 5,3 5,4 NGÀY 5,3 5,4 5,2 NGÀY 5,1 5,3 5,4 TRƯA CHIỀU Các ngày không cho cá ăn kháng sinh THỜI GIAN SÁNG NGÀY 5,3 5,8 5,4 NGÀY 5,4 5,4 5,3 NGÀY 5,1 5,5 5,2 NGÀY 15 5,6 5,4 5,4 NGÀY 30 5,4 5,4 5,3 52 PHỤ LỤC SẮC KÍ ĐỒ TRONG QUÁ TRÌNH PHÂN TÍCH TỒN LƯU KHÁNG SINH DOXYCYCLINE 53 [...]... Phân tích tồn lưu kháng sinh Doxycycline trong nguyên liệu cá tra bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao được tiến hành là rất cần thiết nhằm đảm bảo tốt vấn đề về chất lượng sản phẩm thủy sản và phương thức sử dụng kháng sinh một cách hợp lí trong công tác nuôi trồng thủy sản 1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Xây dựng quy trình phân tích nhóm kháng sinh Tetracycline bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao. .. gian tồn lưu và dư lượng tồn lưu của kháng sinh Doxycycline trong sản phẩm cá tra 1.3 Nội dung nghiên cứu Tối ưu hóa các thông số hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao cho phân tích kháng sinh TCs; Doxycycline và khảo sát qui trình chiết tách Xác định thời gian tồn lưu của kháng sinh doxycyline trong sản phẩm cá tra 1.4 Thời gian thực hiện Từ tháng 01/2011 đến tháng 07/2011 2 Chương 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU... lần trong 7 ngày liên tục, sau đó cho cá ăn thức ăn không chứa kháng sinh trong các ngày tiếp theo  Thu mẫu Thu mẫu các yếu tố môi trường: Nhiệt độ, oxy, pH mỗi ngày 2 lần trong suốt các ngày cho cá ăn thức ăn chứa kháng sinh và định kỳ vào các ngày thu mẫu Thu mẫu cơ thịt cá để phân tích tồn lưu kháng sinh: Thu mẫu cá (5con/1lần/1bể) vào các khoảng thời gian như sau: Dừng cho ăn thức ăn chứa kháng sinh. .. 2.2.2 Phương pháp 2: Phân tích dư lượng kháng sinh nhóm Tetracyclin trong cơ thịt lợn bằng hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao ghép phổ khối lượng (Cherlet et al., 2003) Theo phương pháp này giới thiệu thì nhóm kháng sinh tetracyclin bao gồm 4 loại: Tetracyclin (TC), Chlortetracyclin (CTC), Oxytetracyclin (OTC) và Doxycyclin (DOX) được sử dụng rất nhiều trong thuốc thú y vì khả năng kháng khuẩn phổ rộng... lượng kháng sinh nhóm tetracyclin trong sản phẩm thuỷ sản - Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao theo quyết định số 10/2002/QÐ- BTS của bộ Thủy Sản  Mục đích Tối ưu hóa các điều kiện phân tích kháng sinh tetracycline trong sản phẩm thủy sản ở điều kiện phòng thí nghiệm dinh dưỡng và chế biến thủy sản 18  Phương pháp gây nhiễm Tiến hành gây nhiễm bằng cách cho trực tiếp chất kháng sinh. .. hành phân tích trên hệ thống HPLC b Xác định thời gian tồn lưu kháng sinh Doxycycline trong nguyên liệu cá tra  Bố trí thí nghiệm Thí nghiệm được được tiến hành trên 3 bể cá 500 L, mỗi bể chứa 50 con, được sục khí liên tục, khối lượng mỗi con khoảng 20 g Cá thí nghiệm được mua về và được nuôi trong bể 2 tuần trước khi tiến hành thí nghiệm 23  Tiến hành thí nghiệm Cho cá ăn thức ăn có chứa kháng sinh. .. của pha động c Tìm điều kiện cột phân tích Thí nghiệm được thực hiện với 2 cột sắc ký:  Synersi C18 (4µm, 2.00 x 50 mm)  Gemini C18 (5µm, 3.00 x 150mm) Trong thí nghiệm này thì các chất chuẩn được sử dụng tại các nồng độ tăng dần từ thấp đến cao Các điều kiện phân tích đều được cố định d Khảo sát qui trình chiết tách kháng sinh nhóm Tetracycline trong nguyên liệu cá tra ở điều kiện phòng thí nghiệm... sạch trong 2 phút 5 mL nước cất 5,0 mL dung dịch acid oxalic – methanol Dịch chiết chảy qua cột, bị loại bỏ Ống thủy tinh 10mL Phân tích trên HPLC Hình 3.2 Sơ đồ chiết tách qui trình 1 22 3.2.2.2 Thí nghiệm 2: Xác định thời gian tồn lưu kháng sinh Doxycycline trên nguyên liệu cá tra a Xác định thời gian tồn lưu của kháng sinh Doxycycline trong mẫu thức ăn thí nghiệm  Thức ăn thí nghiệm Thức ăn dùng trong. .. Thủy Sản - Trường Đại Học Cần Thơ 3.1.2 Nguyên liệu Nguyên liệu cá tra được mua từ trại cá giống Cần thơ 3.1.3 Thời gian Từ 01/2011 đến 07/2011 3.2 Vật liệu và phương pháp 3.2.1 Vật liệu 3.2.1.1 Dụng cụ Hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Shimadzu với đầu dò UVvis  Cấu tạo một số bộ phận cơ bản Bình chứa dung môi: Có thể tích khoảng 500mL đến 2L, thường làm bằng thủy tinh màu để chứa chất nhạy... al., 2004) Theo số liệu của viện Thú y Hoa Kì (AHI), lượng kháng sinh được sử dụng trong chăn nuôi ở Mỹ năm 1999 là khoảng 20,42 triệu pound (9270 tấn) trong đó nhóm kháng sinh Tetracyclin chiếm 15,67% (Trần Quốc Việt, 2007) Trong năm 1997 tổng lượng kháng sinh dùng trong dân y và chăn nuôi ở các nước châu Âu là 10500 tấn Trong số lượng kháng sinh dùng trong chăn nuôi thì nhóm Tetracyclin chiếm khoảng ... VĂN TẤN PHÂN TÍCH TỒN LƯU KHÁNG SINH DOXYCYCLINE TRONG NGUYÊN LIỆU CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) BẰNG HỆ THỐNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH CHẾ BIẾN THỦY SẢN CÁN BỘ... 2011 Sinh viên thực Nguyễn Văn Tấn i TÓM TẮT Đề tài: Phân tích tồn lưu kháng sinh Doxycycline nguyên liệu cá tra hệ thống sắc kí lỏng hiệu cao tiến hành với mục đích tìm thời gian tồn lưu kháng. .. NHẬN Luận văn tốt nghiệp với tên đề tài Phân tích tồn lưu kháng sinh Doxycycline nguyên liệu cá tra hệ thống sắc ký lỏng cao sinh viên Nguyễn Văn Tấn thực cán hướng dẫn góp ý chỉnh sửa phê duyệt