BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÀNH TÂY KHOA CÔNG NGHỆ NÔNG - LÂM - THỰC PHẨM ………… KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI: NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH GIỐNG CÂY HÔNG ( Paulownia fortunei) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO THỰC VẬT ĐỂ PHỤC VỤ TRỒNG RỪNG NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS LÊ XUÂN ĐẮC VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BỘ MÔN - KHOA: CÔNG NGHỆ NÔNG - LÂM - THỰC PHẨM NGƯỜI THỰC HIỆN: NGUYỄN THỊ TRÀ MY LỚP: K2- CNSH2 HÀ NỘI- 2012 Lời cảm ơn Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, xin chân thành cảm ơn TS Lê Xuân Đắc, Viện Công nghệ sinh học tận tình giúp đỡ cà hướng dẫn suốt trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn toàn thể cán Trại Thực nghiệm sinh học, Viện Công Nghệ Sinh Học tạo điều kiện tốt giúp đỡ suốt thời gian thực tập Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo khoa Công Nghệ Nông Lâm - Thực Phẩm trường Đại Học Thành Tây truyền đạt cho tri thức mới, lòng say mê nghiên cứu khoa học suốt thời gian học tập trường Cuối cùng, xin gửi đến gia đình bạn bè người ủng hộ động viên suốt trình học tập nghiên cứu khoa học lời biết ơn chân thành sâu sắc Hà nội, … ngày… tháng… năm Sinh viên Nguyên thị trà my Mục lục Phần 1: Mở đầu 1.1 Lý chọn đề tài Hiện toàn giới diện tích rừng bị suy giảm cách nghiêm trọng Tính tời thời điểm năm 2011, rừng chiếm 31% tổng diện tích đất giới Nguyên nhân khai thác rừng bừa bãi, khai thác mức, cháy rừng, tàn phá thiên tai… , tái sinh lâm nghiệp chưa cao Nhưng nhân tố ảnh hưởng đến diện tích rừng đất rừng bị chuyển đổi mục đích sử dụng phục vụ cho lên công nghiệp hóa, hiên đại hóa Diện tích rừng suy giảm ảnh hưởng lớn đến môi trường sống, tính đa dạng sinh học hệ sinh thái Tính đến thời điểm tại, suy giảm mật độ rừng che phủ giới mang đến hậu nặng nề Biến đổi khí hậu toàn cầu, lượng cacbon dioxite không khí cao thử thách lớn hệ sinh thái Thiếu hụt nguồn nước ngọt, không khí bị ô nhiễm nặng, lượng nhiên liệu khan hiếm, kéo theo vấn đề y tế ảnh hưởng trực tiếp đến sinh tồn phát triển người Diện tích rừng bị thu hẹp, biến đổi hậu toàn cầu làm tăng nhanh thiệt hại đến từ thảm họa thiên nhiên - Đợt bão năm 2005, bang Louisiana ( Mỹ) bị thiệt hại đến 135 tỉ đô la, tháng tiếp theo, thu nhập toàn bang giảm đến 15% - Mùa lũ 2011 Việt Nam, theo số liệu thống kê tỉnh bị ảnh hưởng lũ lụt, triều cường đồng sống Cửu Long Tính đến hết ngày 9/10: thiệt hại vật chất gần tỉ đồng, 60.000 nhà đổ sập , trôi ngập nước Theo thống kê có 24 người chết đố 21 người trẻ em, người bị thương - Núi lửa Mayon( Philippines, 1814) phun trào chôn vùi thị trấn, làm khoảng 1.200 người thiệt mạng Năm 1993, phun trào giết chết 79 người - Sự phun trào núi lửa Tambora( Indonesia, 1815) vùi lấp cư dân đảo Sumbawa tro bụi, khí độc đá, 88.000 người thiệt mạng - Núi lửa Merapi( Indonesia ,31/10/2010) phun trào nham thạch, gây biển khói lớn, hàng nghìn người dân khu vực phải sơ tán cảnh hoảng loạn Tính tới hết ngày, theo thống kê sơ bộ, số người thiệt mạng núi lửa động đất Indonesia tuần vừa qua lên tới 500 người - Thảm họa động đất, sóng thần xảy đông bắc Nhật Bản( 11/3/2011) vừa qua thiệt hại ước tính lên đến 235 tỉ USD, số người thiệt mạng lên đến 8.450 người; 12.931 người khác tích - Đợt nắng nóng quét qua Châu Âu hồi( 2003) làm thiệt mạng khoảng 35.000 người, tăng nguy cháy rừng, bệnh tật nhiệt độ cao gây ra, đóng góp vào việc làm tăng nhiệt độ trung bình trái đất Biến đổi khí hậu làm cân đa dạng sinh học, có nguy kìm hãm phát triển dẫn đến tiệt chủng nhiều loài sinh vật Chuyển đổi mục đích sử dụng đất rừng cho trình công nghiệp hóa, đại hóa vận động tất yếu dù mang lại nhiều hậu nặng nề Tuy nhiên ta phủ nhận điều tốt đẹp mang lại cho biến chuyển kinh tế khoa học kỹ thuật Ngành công nghệ kỷ 21, công nghệ sinh học ngành công nghệ cao ưu tiên hàng đầu kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật nhờ khả ứng dụng hiệu nhiều lĩnh vực đặc biệt nhân nhanh, tạo bệnh, virut… Chúng ta cần có sách để ngăn chặn hạn chế tối đa tác động có tính lâu dài môi trường đến môi trường sống hệ sinh thái Tăng cường nghiên cứu,chọn lọc kết hợp với thành tựu khoa học kỹ thuật để tìm giống ưu việt đáp ứng yêu cầu đề ra, khôi phục lại diện tích rừng Trong hàng nghìn giống cây, qua tìm hiểu nghiên cứu, bật lên Hông (Paulownia fortunei) mang đầy đủ tính cần có mà giống khác so sánh, trông thử nghiệm có kết đáp ứng mong muốn Tuy nhiên để nghiên cứu đầy đủ chi tiết ứng dụng việc nhân giống lợi ích đem lại Hông trồng rừng lựa chọn đề tài: “ Nghiên cứu nhân nhanh giốn Hông( Paulownia fortunei) phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để phục vụ trồng” 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích Nhân nhanh giống Hông phục vụ trồng rừng 1.2.2 Yêu cầu Xác định ảnh hưởng yếu tố môi trường nuôi cấy BAP, hàm lượng agar tới hệ số nhân chồi Nghiên cứu ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin ( NAA) tới hình thành rễ in vitro chồi hông nuôi cấy Xây dựng qui trình nhân Hông ống nghiệm nuôi trồng điều kiện nhà lưới 1.3 Tình hình nghiên cứu Hông( paulonia fortunei) giới Việt Nam 1.3.1 Tổng quan nghiên cứu giới Radojevic L ( 1979) từ mô hữu tính tạo mô sẹo nuôi cấy mô sẹo sau tạo phôi trực tiếp từ mô sẹo cho phôi phát triển môi trường MS Saito A( 1976) isolation of protoplasts from mesophyll cells of pawlonia fortunei Hemsl Burger D.W (1985) nuôi cấy chồi nách tạo môi trường MS/2 1.3.2 Tổng quan nghiên cứu nước Cây Hông Việt Nam du nhập từ úc từ năm 2000, có số công trình nghiêm cứu nuôi trồng ống nghiệm trồng nhiều miền nam tây nguyên TS.Trần Kim Tính(Trường Đại học Cần Thơ): trồng Hông ( Paulownia fortunei) hột cấy mô Hậu Giang, cung cấp nguyên liệu cho nhà máy sản xuất giấy Viện Sinh học nhiệt đới (Trung tâm Khoa học tự nhiên công nghệ quốc gia) nhập giống gốc, nhân phương pháp nhân cụm chồi môi trường MS ( 1962) Công ty Giống lâm nghiệp TP HCM nhân giống phương pháp vi giâm cành ( microcutting) môi trường có bổ sung BA nồng độ thấp Bùi Duy Ngọc, Nguyễn Đình Hợi, Nguyễn Thị Minh Xuân( 2007): Bước đầu nghiên cứu nâng cao khối lượng thể tích gỗ Hông (Paulownia fortunei) Tạp chí Khoa học Lâm nghiệp số 1/2007, trang 291-296 Thái Xuân Du: Ảnh hưởng nồng độ chất dinh dưỡng ventilation condition of the culture vessel on the groth of Hông(Paulownia fortunei) nuôi trồng ống nghiệm (Effects of nutrient concentration and ventilation condition of the culture vessel on the groth of Paulownia(Paulownia fortunei) cultured in vitro.) tạp chí tiến khoa học ( 2002) Đoàn Thị Ái Thuyền, Vũ Ngọc Phượng, Thái Xuân Du & Nguyễn Văn Uyển: Nhân giống vô tính hông –Paulownia fortunei ( Seem Hemsl) Bằng phương pháp nuôi cấy mô Tạp chí Sinh học 23 (3), 46-50( 2001) Vũ Ngọc Phượng , Đoàn Thị Ái Thuyền, Lưu Việt Dũng, Thái Xuân Du & Nguyễn Văn Uyển( 2001): Quy trình ươm hông ( Paulownia fortunei) giai đoạn sau ống nghiệm Trong cuốn: Công nghệ Sinh học Nông nghiệp Sinh thái Bền vững Viện Sinh học Nhiệt đới NXB Nông nghiệp 69-75 Lưu Việt Dũng: Nhân giống vô tính Paulownia fortunei ( Seem Hemsl) phương pháp nuôi cấy mô Tạp chí sinh học, Tập 24 số 2( 2002) Lưu Việt Dũng: Quy trình ươm Hông( Paulownia fortunei) nuôi cấy mô Tạp chí sinh học, Nhà xuất nông nghiêp( 2001) Thái Xuân Du: Quy trình ươm Hông ( Paulownia fortunei) giai đoạn sau ống nghiệm Tạp chí Công nghệ sinh học Nông nghiệp Sinh thái Bền vững, NXB Nông nghiệp( 2001) Lê Tấn Đức: Tạo hông (Paulownia fortune) chuyển gen kháng sâu thông qua vi khuẩn Agrobacterium Tumefaciens Hội nghị Công nghệ Sinh học toàn quốc( 2003) Lê Tấn Đức: Nghiên cứu hệ thống tái sinh in vitro Hông( Paulownia fortunei) ảnh hưởng tác nhân chọn lọc để tạo chuyển gen Hội nghị Công Nghệ Sinh Học toàn quốc( 2003) Phần 2: Tổng quan tài liệu 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng : Hông( Paullownia fortunei) Cây Hông ( Paulownia fortunei) chín loài gỗ thuộc chi Pawllonia họ hoa mõm chó Ssrophula riaceae, thân thẳng, có lớp vỏ trơn láng, vỏ màu xám bám chặt vào thân, lõi rộng, có kêt cấu đẹp Chúng có rễ đâm sâu ăn ngang nên hấp thu nhanh nguồn dinh dưỡng nước để phát triển Hông loài gỗ lớn, có tốc độ sinh trưởng nhanh không kén đất, cần đất xốp, dễ thoát nước Trong điều kiện bình thường, năm tăng trưởng – cm đường kính Trong điều kiện tối ưu, có khả tăng trưởng – cm đường kính/năm Chỉ sau 18 tháng, đường kính đạt 16 – 22cm, chiều cao 10 – 12m Sau năm, trung bình có chiều cao 20m, tích từ – 1,5m3 Nếu điều kiện tối ưu nhất, đạt thể tích từ đến 3m3 gỗ Từ lâu, nhiều quốc gia giới có điều kiện tự nhiên phù hợp với Hông chọn Hông làm lâm nghiệp ý phát triển Ở Việt Nam Hông phân bố rừng tự nhiên số tỉnh phía Bắc giáp với biên giới Trung Quốc Hông sinh trưởng phát triển nhanh, có tiềm phát triển rộng diện tích theo mục đích trồng rừng nguyên liệu tạo cảnh quan môi trường Chúng loại sống lâu năm sử dụng mục đích trồng rừng phòng hộ đầu nguồn, bảo vệ môi trường Hông ưa sáng tuyệt đối, nhiệt độ phát triển tối ưu trồng vùng đất cao 100m( so với mực nước biển), đất cát, thoát nước tốt Hông ưa sáng, nhiết độ trung bình 270C Ở Việt Nam Hông thích hợp vùng đất Tây Nguyên, Lâm Đồng số tỉnh miền tây nam có nhiều tiềm trồng loại An Giang, Hậu Giang, Trà Vinh, Sóc Trăng… Không Hông đánh giá cao có đa giá trị: - Giá trị kinh tế: Hông tăng trưởng nhanh năm tăng từ -4cm đường kính tăng 0,04 -0,05m3 Hông có thời gian khai thác nhanh, giá trị kinh tế cao, trồng năm khai thác gỗ làm loại giấy cao cấp giấy in tiền, làm than hoạt tính, làm ván ép… Hông trồng năm cho gỗ quý gỗ pơmu Gỗ Hông cứng, nhẹ, không cong vênh, có tính đàn hồi, không nứt nẻ nhiệt độ thay đổi, vân mịn đẹp, chịu ẩm tốt, chống mối mọt, lại chịu nhiệt cao, khó cháy Gỗ Hông có màu vàng nhạt chuyển dần sang màu hổ phách với sắc độ thay đổi từ từ … Gỗ Hông dùng sản xuất đồ trang trí nội thất cao cấp, đồ gia dụng, xây dựng, đóng vỏ du thuyền, nội thất máy bay… Hông chứa hàm lượng cenllulose cao (46 – 49%) hemicellulose( 22 – 25%) hàm lượng lignin(21 -23%) thích hợp cho công nghệ sản xuất cồn công nghiệp, cung cấp lượng chất đốt làm bột giấy in tiền Gỗ Paulownia sấy khô lại có đặc tính cách điện nhiệt tốt nên thích hợp cho việc trang trí nội thất dùng làm vật chèn lót bên kiện hàng thay cho vật liệu xốp để ổn định nhiệt độ bên Việc chế biến gỗ Paulownia thuận lợi dễ cưa xẻ, bào, đục đẽo, không sợ nguy hiểm Hoa Hông Hoa hông có màu sắc đẹp hương thơm dịu nhẹ, chứa nhiều mật phát triển nghề nuôi ong Hông trồng xen với loại ngắn ngày số công nghiệp cao su, cà phê, ca cao, khóm… trồng bóng Hông tăng suất lên 20% Lá hông chứa hàm lượng protein vitamin cao làm thức ăn cho gia súc, làm phân bón Hông có khả tái sinh chồi tự nhiên tốt, tái sinh sau chu kỳ khai thác Tái sinh nhiều lần, cho phép khai thác nhiều đợt gốc nên giảm chi phí đầu tư cho mùa sau - Giá trị cho trồng rừng: Hông gỗ lớn, sinh trưởng nhanh (sau 6-7 năm trồng, cao 10m, đường kính 35-40cm) Rễ Hông rễ cọc phát triển mạnh, ăn sâu xuống mặt đất, tán rộng , nhiều cành to thưa thích hợp cho phủ xanh đất trống đồi trọc Hông coi lâu năm nên trồng làm rừng phòng hộ Hông có khả tái sinh nhanh cao, gốc có khả tái sinh nhiều lần Gỗ Hông cháy nhiệt độ 4000C nên người ta thường trồng Hông làm đường băng xanh phòng chống cháy rừng Gỗ Hông cháy chậm gỗ Hông có nhiều lỗ nhỏ li ti trông giống tổ ong Vách tế bào chứa lignin gỗ dễ dàng chuyển thành carbon gặp nhiệt độ cao Lớp carbon trở nên dẫn nhiệt làm cho gỗ cháy chậm giảm nguy bùng phát cháy rừng vào mùa khô - Giá trị cho môi trường: Hông có nhiều cành, tán rộng, to, khả bao phủ lớn ,hạn chế khả gây thiệt hại mưa bão Lá Hông có nhiều lông, tiết chất dính, hút bụi, làm không khí, chống chịu mạnh khí độc SO 2, Clo, HF, sương axít nitric… có tác dụng giảm thiểu ô nhiễm môi trường Khi rụng xuống mau phân hủy, thời tiết vào mùa mưa, 45 ngày hòa nhập vào tầng đất màu mặt tạo xốp đất tăng độ phì nhiêu cho đất Hông có có loại rễ, rễ cọc ăn sâu xuống mặt đất Rễ chùm ăn ngang giúp cải tạo đất có khả tự tạo chất dinh dưỡng nuôi làm cân hệ dinh dưỡng đất Hông hấp thụ lượng lớn CO2, làm giảm đáng kể lượng khí thải, giảm nguy gây hiệu ứng nhà kính ô nhiễm môi trường Cả hoa Hông có hàm lượng đạm cao, dễ phân giải giúp cải thiện đất Hoa Hông có màu tím trắng đẹp, hương thơm dịu nhẹ làm tăng cảnh quan sinh thái Hông có dày, rộng, ưa sáng nên khả thoát nước lớn làm giảm nhiệt độ toàn cầu, tạo điều kiện cho nhiều hệ sinh thái khác phát triển tránh tuyệt diệt, góp phần bảo toàn tính đa dạng sinh học - Giá trị cho y tế: Rễ Hông dùng để làm thuốc chữa phong thấp, đau nhức xương Vỏ rễ chữa gân cốt ứ đau Quả dùng trị viêm phế quản mãn tính Vỏ Hông chữa đòn ngã tổn thương Hoa Hông dùng chữa mụn nhọt, độc, bỏng, xưng tấy Hoa dùng chữa viêm tuyến nước bọt, viêm kết mạc mắt mãn tính 2.2 Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật: Nuôi cấy mô - tế bào thực vật công nghệ quan trọng Công Nghệ Sinh Học, tảng để nghiên cứu áp dụng công nghệ khác lĩnh vực công nghệ sinh học thực vật Nuôi cấy mô tế bào thực vật kỹ thuật cho phép nuôi cấy dễ dàng tế bào thực vật hay mô phân sinh bệnh môi trường nhân tạo thích hợp tạo khối tế bào hay hoàn ống nghiệm Nuôi cấy mô tế bào thực vật trình điều khiển phát sinh hình thái tế bào thực vật ( nuôi cấy tách rời điều kiện nhân tạo vô trùng) cách có định hướng dựa vào tính toàn tế bào thực vật( từ dạng tế bào thể thực vật có khả phát triển thành thể hoàn chỉnh điều kiện thích hợp) 2.2.1 Lịch sử phát triển nuôi cấy mô tế bào thực vật Có thể tạm thời phân chia trình phát triển qua bốn giai đoạn - Giai đoạn khởi xướng ( 1898- 1930) Đầu tiên từ thí nghiệm Haberlandt( 1898) ông đề xướng tính toàn thể tế bào tìm cách nuôi cấy tế bào phân lập không thành công Tiếp sau có nhiều phòng thí nghiệm Winknler ( 1902) Thielmanm ( 1924) … Nhưng phải đến năm 30 kỉ 20 người ta đạt tiến thực lĩnh vực : công trình nhà khoa học Schmucker( 1929) , Scheitteres( 1931) Pfeiffer ( 1931 ,1933 ) Larue ( 1933) thông báo nuôi cấy thành công đoạn đầu rễ riêng rẽ Trong môi trường nuôi cấy nhân tạo 10 Các cấu trúc nhỏ tế bào, cụm tế bào mô phân sinh khó cảm ứng để tăng trưởng cấu trúc lớn thân, lá, củ Các phận có chứa nhiều chất dinh dưỡng củ, thân hành thường dễ tái sinh môi trường in vitro quan chất dự trữ - Kiểu di truyền Những hai mầm thông thường có khả tái sinh mạnh mầm hạt trần khó tái sinh Nếu loài dễ tái sinh quan môi trường tự nhiên chúng dễ tái sinh in vitro - Tuổi, sinh lý Các mô phôi thường có khả tái sinh cao Các phận non dễ tái sinh hơn, già khả tái sinh chúng giảm Đôi sau nhiều lần cấy chuyển mẫu cấy già trẻ hóa tăng khả tái sinh phân chia tế bào - Tuổi mô, quan Những mô non mềm dễ nuôi cấy mô cứng có nhiều trường hợp ngoại lê Các mẫu cấy từ cuống non tái sinh tốt mẫu cấy lấy từ cuống già quan chúng già nên khả tái sinh không cao phân chia tế bào giảm - Tình trạng sinh lý Thông thường phận giai đoạn sinh dưỡng dễ tái sinh giai đoạn sinh sản Các chồi giai đoạn ngủ đông khó nuôi cấy in vitro chồi vượt qua giai đoạn - Vết thương Sự tồn bề mặt mẫu cấy đóng vai trò quan trọng tái sinh Bề mặt tổn thương tăng lên làm gia tăng hấp thu dinh dưỡng chất điều hòa đồng thời ethylene tạo nhiều - Phương pháp cấy 14 Các mẫu cấy đặt môi trường theo nhiều cách khác có cực cực Chồi rễ thường tái sinh dễ nhanh mẫu cấy không cực Ảnh hưởng môi trường - Khoáng đa lượng Nhu cầu khoáng mô, tế bào thực vật tách rời không khác nhiều so với trồng điều kiện tự nhiên Các nguyên tố đa lượng cần phải cung cấp N, P, K, Ca, Mg… - Khoáng vi lượng Trước nuôi cấy mô đời người ta không nghĩ đến việc bổ sung khoáng vi lượng vào môi trường Các nguyên tố vi lượng cần cung cấp cho tế bào: Fe, Mn, Zn, Cu, B, Co, I, Mo… - Cacbon nguồn lượng Hai dạng đường thường gặp Glucose Sacrose Các nguồn Cacbonhydrate khác tiến hành thử nghiệm Lactose, Galactose, Maltose tinh bột Cacbonhydrate có hiệu so với Glucose Sacrose - vitamin Thông thường thực vật tổng hợp vitamin cần thiết cho tăng trưởng phát triển chúng Các vitamin thường sử dụng nhiều nuôi cấy mô Thiamine( B1), Acid Nicotinic, Pyridoxin ( B6) Myo- Inositol - Chất điều hòa sinh trưởng thực vật Có năm chất điều hòa sinh trưởng quan trọng nuôi cấy mô thực vật: Auxin, Cytokinin, Gibberillin, Acid Abscisic Ethylen Tỉ lệ Auxin/ Cytokinin xác định dạng phân hóa quan tế bào thực vật nuôi cấy.A/C cao giúp tạo rễ, A/C thấp giúp tạo chồi - Auxin Auxin phối hợp với cytokinin giúp tăng trưởng chồi non khởi phát tạo mô phân sinh chồi từ nhu mô 15 Auxin nồng độ cao kích thích tạo sơ khởi rễ, cản trở tăng trưởng sơ khởi - Cytokinin Kích thích tế bào phân chia( với điều kiện có auxin) Cytokinin tác động bước phân chia tế bào: phân nhân phân bào Ảnh hưởng môi trường - Các chất hữu không xác định Bổ xung nhiều chất trích hữu khác vào môi trường nuôi cấy thường mang lại kết thuận lợi cho tăng trưởng mô Các chất bổ xung là: protein hydrolysate, nước dừa, dịch chiết nấm men, dịch chiết lúa mạch, chuối, nước cam, nước cà chua… - Nguồn cung cấp Nitrogen Mặc dù tế bào có khả tổng hợp tất amino acid cần thiết bổ xung amino acid vào môi trường nuôi cấy để kích thích tăng trưởng tế bào Các nguồn Nito hữu thường sử dụng hỗn hợp amino acid casein hydrolysate, L- glutamine, L- asparine adenine - Than hoạt tính Việc bổ xung than hoạt tính vào môi trường nuôi cấy có tác dụng khử độc Ảnh hưởng than hoạt tính: kích thích tăng trưởng mô thực vật than hoạt tính kết hợp với hợp chất phenol độc mô tiết suốt thời gian nuôi cấy - Yếu tố làm đặc môi trường Agar chất thường sử dụng để tạo môi trường đặc hay môi trường bán rắn nuôi cấy mô thực vật Agar không phản ứng với chất môi trường Độ cứng agar định nồng độ agar sử dụng pH môi trường 2.2.3 Các bước nhân giống in vitro Theo Georger ( 1993) trình nhân giống vô tính in vitro bao gồm bước: 16 Bước 1: Chọn lọc chuẩn bị mẹ( cho mẫu nuôi cấy): Các cần có số đặc điểm sau - Sạch bệnh đặc biệt bệnh virus giai đoạn sinh trưởng mạnh - Các mẹ trồng điều kiện môi trường thích hợp với chế độ chăm sóc phòng trừ sâu bệnh hiệu trước lấy mẫu để cấy Bước 2: Nuôi cấy khởi động - Là giai đoạn khử trùng đưa mẫu vào nuôi cấy in vitro Giai đoạn cần đảm bảo tỷ lệ nhiễm thấp, tỷ lệ sống cao, mô tồn sinh trưởng tốt - ý lấy mẫu cần chọn loại mô, giai đoạn phát triển đạt hiệu cao Bước 3: Nhân nhanh - Là giai đoạn kích thích mô nuôi cấy phát sinh hình thái tăng nhanh số lượng thông qua đường: hoạt hóa chồi nách, tạo chồi bất định tạo phôi vô tính - Trong bước cần ý đến môi trường điều kiện ngoại cảnh để có hiệu cao Bước 4: Tạo in vitro hoàn chỉnh - Để tạo rễ cho chồi người ta chuyển chồi từ môi trường nhân nhanh sang môi trường tạo rễ Bước 5: Thích ứng in vitro điều kiện tự nhiên Để đưa từ ống nghiệm vườn ươm với tỷ lệ sống cao, sinh trưởng mạnh cần đảm bảo yêu cầu sau - Cây ống nghiệm đạt tiêu chuẩn hình thái định - Có giá thể tiếp nhận in vitro thích hợp: giá thể sạch, tơi xốp, thoát nước… - Phải chủ động điều chỉnh độ ẩm, chiếu sáng vườn ươm có chế độ dinh dưỡng thích hợp 2.2.4 Ứng dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Tính ưu việt phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật việc sử dụng mô cấy có kích thước nhỏ, tương tác mô đơn giản, phân hóa dễ dàng tái sinh nhanh so với phương pháp truyền thống 17 Ứng dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để sản xuất giống quy mô công nghiêp, có hệ số nhân cao tạo cá thể có kiêu gen đồng Duy trì nhân nhanh kiểu gen quý làm vật liệu cho công tác chọn giống Nhân nhanh loài cảnh, loài hoa khó trồng hạt Nhân nhanh kết hợp với làm virus Bảo quản tập đoàn gen Nuôi cấy mô tế bào thực vật mở hướng cho nhà Di Truyền Học, Sinh Hóa Học, Sinh Lý Học, Vi Sinh Vật Học… 2.2.5 Phương pháp nhân đa chồi Trong phương pháp nhân đa chồi, chồi ngon tách nuôi cấy môi trường dinh dưỡng chồi bên từ nách phát triển ảnh hưởng cytokinin với nồng độ cao Vai trò cytokinin lúc ức chế ưu để chồi bên phát triển Các chồi tiếp tục chuyển sang môi trường có bổ xung cytokinin chồi tiếp tục tạo Sau đó, chồi chuyển sang môi trường rễ đưa vườn ươm có rễ hoàn chỉnh Những yếu tố quan trọng ảnh hưởng đến hình thành đa chồi: - Nhu cầu loại nồng độ cytokinin khác Nồng độ cytokinin thay đổi tùy theo giai đoạn nuôi cấy, thông thường trình tạo chồi người ta sử dụng auxin với nồng độ thấp, phối hợp với cytokinin nồng độ cao Không nên cảm ứng tạo mô sẹo với nồng độ cytokinin cao tạo chồi bất định mang đột biến - Trong trường hợp chồi bên không tăng trưởng cần phải cắ bỏ chồi làm chết chồi chồi bên hoạt động Khi cấy chuyển nhiều lần tốc độ sinh khối bị thay đổi - Hiện nhân nhanh phương pháp nhân chồi bên áp dụng rộng rãi nhiều loài thực vât, trình nhân chồi thường thực theo bước: 18 Cây tự nhiên Khử trùng mẫu Nhân đa chồi Cây trồng tự nhiên Cây trồng bầu Tạo in vitro hoàn chỉnh Sơ đồ tổng quát nhân nhanh in vitro 2.2.6.Vai trò chất sinh trưởng tái sinh in vitro Các chất kích thích sinh trưởng thực vật có vai trò quan trọng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vât Bằng cách cung cấp chất kích thích sinh trưởng mức độ thích hợp, điều khiển chiều hướng phát sinh hình thái mẫu nuôi cấy Auxin cytokinin hai chất kích thích sinh trưởng sử dụng phổ biến nuôi cấy mô Đặc tính Auxin Auxin chất kích thích sinh trưởng thực vật sử dụng thường xuyên nuôi cấy mô tế bào thực vật Auxin kết hợp chặt chẽ với thành phần khác môi trường dinh dưỡng để kích thích tăng trưởng mô sẹo, huyền phù tế bào, điều hòa phát sinh hình thái đặc biệt sử dụng với Cytokinin Sự áp dụng loại nồng độ Auxin môi trường nuôi cấy phụ thuộc vào: kiểu tăng trưởng phát triển cần nghiên cứu, hàm lượng Auxin nội sinh mẫu nuôi cấy, tác động qua lại Auxin ngoại sinh Auxin nội sinh Auxin có vai trò kích thích tăng trưởng, kéo dài tế bào Cùng với Cytokinin nhóm Auxin kích thích phân chia tế bào Các hormone nhóm có hoạt tính: tăng trưởng chiều dài thân, lóng, tính hướng( sáng, đất), tính ưu ngọn, kích thích rễ phân hóa mạch dẫn Tác động Auxin liện quan tối độ dài thân, đốt, chồi chính, rễ… Đối với nuôi cấy mô tế bào thực vật, Auxin thường sử dụng để kích thích phân chia tế bào, phân hóa rễ Những Auxin thường dùng : IBA( Indoly Butyric Acid), IAA( Indoly Acetic Acid), NAA( α- Naptalen Acetic Acid), 2,4D( Dichlorphenoxy Acetic Acid) 19 Đặc tính Cytokinin Cytokinin dẫn xuất Adenine, hormone liên quan chủ yếu đến phân chia tế bào, thay đổi ưu phân hóa chồi nuôi cấy mô tế bào thực vật Các Cytokinin thường xuyên sử dụng BAP( 6- Benzyl Amino Purin), Kinetin( N- ( 2- Furfurylamin)- 1- H- 6- amin), zeatin( 6- ( 4- Hydroxy- Metyl- Trans- Butanylamin) Purin) Hàm lượng sử dụng loại Cytokinin dao động từ 0,1- 0,2 mg/l Ở nồng độ cao hơn, Cytokinin có tác dụng kích thích rõ rệt đến hình thành chồi bất định, đồng thời ức chế mạnh tạo rễ chồi nuôi cấy Ngoài hai nhóm Auxin Cytokinin, nuôi cấy mô tế bào thực vật người ta sử dụng thêm Gibberellin để kích thích kéo dài tế bào, qua làm tăng kích thước chồi nuôi cấy… GA loại Gibberellin sử dụng nhiều 2.2.7 Thành tựu bảo tồn nguồn gen trồng sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật trở thành phương thức quan trọng để nhân nhanh, đặc biệt trồng khó nhân nhanh phương pháp truyền thốn Dưới số thành tựu đạt Trong nước Ở Việt Nam việc áp dụng kỹ thuật để bảo tồn loài thực vật nhiệt đới quý hiếm, có giá trị kinh tế nhà nghiên cứu quan tâm, Thông ( Taxus sps.) loài có chứa hoạt chất chữa ung thư hiệu Taxoid hợp chất số loài thực vật có giá trị làm thuốc ( Lê Thị Xuân, 1996) Cây Màng tang ( Litsea verticillata) loại thân gỗ có chứa số hợp chất có khả kháng HIV (+) – demethoxyapiercelsin verticillatol ( Hoang VD, Zhang HJ) Tác giả Lê Xuân Đắc cộng thành công việc nhân nhanh bảo tồn Màng tang ( Litsea verticillata) tìm thấy vườn Quốc gia Cúc Phương kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật ( Lê Xuân Đắc) Tác giả Nguyễn Thanh Tùng nhân giống in vitro thành công Sưa ( Dalbergia tonkinensis Prain), thân gỗ quý có giá trị kinh tế cao vào năm 2008 Năm 2009 tác giả thành công với đề tài “Nghiên cứu bảo 20 tồn in vitro số loài lan rừng Việt Nam quý hiếm”, nhân nhiều giống lan như: Thanh đạm hoa, Thủy tiên hường, Ngọc vạn sáp, Mỹ dung lan (http://www.baomoi.com/8X-bao-ton-gien-nhieu-giong-cayquy/79/3777758.epi) Cây Ba kích dược liệu quý, có tác dụng bổ thận âm, bổ thận dương, tăng cường gân cốt, khử phong thấp( Ning-Zhen Huang) Dịch chiết cồn từ củ Ba kích có tác dụng giảm huyết áp, tác dụng nhanh tuyến năng, bổ trí não, giúp ăn ngủ ngon.( Wei L) Ngày nhu cầu sử dụng loài làm dươc liệu gia tăng nên bị khai thác kiệt quệ Năm 2010, tác giả Võ Châu Tuấn, Huỳnh Minh Tư nghiên cứu nhân giống thành công giống quý phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật ( Tạp chí Khoa học Công nghệ Đà Nẵng – Số 5(40).2010, 191-196) Thế giới Các nhà khoa học Ấn Độ xây dựng thành công quy trình tái sinh số giống tre quý Dendrocalamus asper ( tre mạnh tông), Bambusa multiplex ( Hóp) thông qua nuôi cấy hạt chồi bên (Nandi) Các tác giả Balaraju cộng ( 2008) nhân giống tái sinh in vitro thành công thuốc Vitex agnus-castus ( Verbenaceae) kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật từ mô phân sinh đỉnh môi trường 1/2 MS có bổ sung 0,1 mg/l IBA Cây thuốc Vitex agnus-castus bị đe dọa nghiêm trọng ( Balaraju) Năm 2008, tác giả Nishritha, Sanjay nhân giống in vitro thành công loài Asparagus racemosus Willd, đem lại nhiều giá trị kinh tế lớn Cùng năm đó, Mukherjee RoyChowdhury nhân giống in vitro loài Aloe Vera sp ( Mukherjee), ( Nishritha B ) Bên cạnh đó, tác giả Park cộng ( 2009) tái sinh thành công loài Rehmannia glutinosan L.Journal quý hiếm, bị khai thác mức (Park SU) Ngoài nhiều loài quý khác nhân giống bảo tồn nguồn gen ống nghiệm như: Lawsonia inermis Linn( Lythraceae), Sausurea lappa C.B.Clarke… ( Arora), ( Rout R) 2.2.8 Bảo tồn thực vật phương pháp nuôi cấy mô Ngày nhiều nguồn gen thực vật bị đe dọa có nguy tuyệt chủng, nhiều giống trồng bị thoái hóa không giữ đặc điểm nguyên sơ ban đầu 21 chất lượng hay khả chống chịu với điều kiện bất lợi, sử dụng kỹ thuật nhân giống in vitro để nhân nhanh bảo tồn nguồn gen cần thiết Bảo quản điều kiện in vitro coi giải pháp công nghệ có triển vọng trồng nhằm nhân giống vô tính có hạt dễ khả nảy mầm nhiệt độ độ ẩm thấp Bảo tồn in situ Đây biện pháp bảo tồn hiệu bao hàm quần thể tái sinh nhân tạo nguồn hạt giống thu hái chỗ, thu hái từ mẹ mà không áp dụng có định hướng Điều có ý nghĩa to lớn việc xây dựng rừng giống cho loài có phân bố rải rác, quần tụ bảo tồn dùng làm nguồn cung cấp vật liệu giống cho tái sinh nhân tạo Bảo tồn ex situ Được thực cách tách rời vật liệu nhân giống khỏi vùng phân bố tự nhiên để đưa vào sưu tập sống ( Vườn thực vật), rừng trồng với mục đích bảo tồn ( quần tụ bảo tồn ex situ, ngân hàng hạt giống, phấn hoa hay nuôi cấy mô) ( Nguyễn Hoàng Nghĩa, 2006) Ba nhiệm vụ bảo tồn ex situ: - Thu thập mẫu gen tiêu biểu - Duy trì chúng điều kiện tốt thời gian dài - Làm tăng số lượng mẫu thu thập ( Havens K) Bảo tồn ex situ áp dụng cho loại trồng chủ yếu, loài biết rõ giá trị chúng quần thể tự nhiên không bảo vệ an toàn tác động sâu bệnh, lửa rừng phá hoại rừng súc vật người bị tạp giao với quần thể ngoại lai khác 22 Phần 3: Vật liệu phương pháp nghiên cứu 3.1 Vật liệu nghiên cứu: Nguyên liệu thực vật: Cây Hông có nguồn gốc từ Autralia Viện Công nghệ sinh học cung cấp Dụng cụ nghiên cứu: Nồi khử trùng, box cấy vô trùng, bình tam giác, pipet, máy chuẩn pH, panh, dao, kéo, dao cắt, đèn UV, cân kỹ thuật, cân phân tích, tủ sấy, hệ thống giàn đèn, máy khuấy từ… Hóa chất: Các loại hóa chất sử dụng việc nhân cây, môi trường MS sử dụng nghiên cứu gồm muối đa lượng vi lượng theo Mura shige Skoog Đường Saccharose, Agar, chất kích thích sinh trưởng BAP, NAA, Kinetine, IBA… Nuôi cấy điều kiện nhiệt đô 25- 27oC chế độ chiếu sáng 12h/12h với cường độ chiếu sáng 2000lux 3.2 Địa điểm thời gian nghiên cứu Địa điểm nghiên cứu: Trại Thực nghiệm sinh học thuộc Viện Công nghệ sinh học ( Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam) Thời gian nghiên cứu: 6/2011 đến 6/2012 3.3 Nội dung nghiên cứu Các tiêu nghiên cứu chia thành công thức thí nghiệm khác có công thức đối chứng Số mẫu công thức thí nghiệm lớn 30 Thí nghiệm lặp lại lần 23 Sơ đồ nhân giống Hông( pawlonia fortunei) phương pháp nuôi cấy mô tế bao thực vật Đốt thân tự nhiên khử trùng vào mẫu môi trường MS/2 tuần Chồi in vitro tách chồi in vitro môi trường MS/2 có bổ xung BAP( 5- mg/l) Cụm chồi tách chồi in vitro môi trường MS/2 có bổ xung NAA( 0,1- 0,2mg/l) Cây hoàn chỉnh giá thể Đất/ cám dừa: 4/1 Trồng đất 3.3.1 Khử trùng mẫu Khử trùng mẫu bao gồm bước sau: - Cắt cành Hông thành đoạn 6- 8cm - Rửa mẫu nước xà phòng pha loãng - Rửa nước xà phòng pha loãng vòi nước - Rửa lần nước cất vô trùng - Rửa cồn 700C( 15 giây) - Rửa nước cất khử trùng lần 24 - Khử trùng dung dịch 1% NaClO, lắc 10 phút - Rửa lần nước cất vô trùng - Thấm khô giấy thấm khử trùng Thu mẫu: Mẫu sau khử trùng cấy vào môi trường MS Sau khoảng 30 ngày chồi non phát sinh in vitro, chồi non sử dụng làm nguyên liệu cho thí nghiệm 3.3.2 Nhân nhanh phương pháp nhân đa chồi Môi trường sử dụng thí nghiệm môi trường MS + 30mg/l đường saccharose + 8g/l agar bổ sung chất kích thích sinh trưởng với nồng độ khác tùy theo mục đích thí nghiệm với pH = 5,8 3.3.3 Tạo Hông( pawlonia fortunei) hoàn chỉnh Giai đoạn hoàn chỉnh có đầy đủ thân, lá, rễ để chuyển trồng tự nhiên Cây phải khỏe mạnh, sức đề kháng tốt nhằm nâng cao sức sống môi trường bên Các chất kích thích sinh trưởng có tác dụng tạo đa chồi loại bỏ thay vào chất kích thích sinh trưởng tạo rễ IAA, NAA, 3.3.4 Trồng trồng bầu Đây giai đoạn quan trọng, giai đoạn non cần thích nghi dần với điều kiện bên ống nghiệm Thời gian tối thiểu cho thích nghi 2- tuần thời gian non phải bảo vệ chăm sóc tốt trước yếu tố bất lợi 3.3.5 Các tiêu nghiên cứu Để đánh giá tìm môi trường thích hợp nhất, tiêu sử dụng sau: Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) = x 100 Số chồi TB/mẫu = Tỷ lệ chồi rễ =x 100 Số rễ TB/chồi = Tỷ lệ sống (%) = x 100 3.3.6 Phương pháp xử lý số liệu thí nghiệm 25 Các số liệu xử lý thống kê sinh học Kết mô bảng hình Chúng sử dụng công thức thống kê sau: Trung bình số học: X = Độ lệch chuẩn: δ = ∑X n ∑ ( x − x) Độ lệch trung bình: m = −2 n δ n Tiêu chuẩn độ tin hiệu: td = d md X : Giá trị trung bình cộng X: Giá trị kết đo đếm đối tượng lần nhắc lại n: Số lần nhắc lại đợt thí nghiệm (n ≥ 30) m: Sai số trung bình số học δ : Độ lệch chuẩn d: Hiệu X đối chứng thí nghiệm md : Sai số hiệu trung bình số học Khi tiêu chuẩn độ tin cậy hiệu td so với tc - giá trị chuẩn tiêu chuẩn Studen với bậc số tự n1 + n2 – ( n1: số lần nhắc lại công thức thí nghiệm; n2 : số lần nhắc lại công thức đối chứng) Sai khác trị số trung bình có ý nghĩa td lớn giá trị tương ứng với mức xác suất 0,95 Phần Kết thảo luận 26 Phần 5: Tài liệu tham khảo Quỳnh N.T., N.T.K Linh, T.X.Du, Đ.T.A Thuyền 2002 Effects of nutrient concentration and ventilation condition of the culture vessel on the growth of Paulownia (Paulownia fortunei) cultured in vitro Advan Nat Sci., Vol.3 (3): 281-287 Đoàn Thị Ái Thuyền, V N Phượng, T.X.Du & N.V Uyển 2001 Nhân giống vô tính hông - Paulownia fortunei (Seem.) Hemsl phương pháp nuôi cấy mô Tạp chí Sinh học 23 (3), 46-50 Nguyen My Uyen, T.X.Du, B.V.Le 2005 Effects of plant growth regulators on callus induction and shoot regeneration of Paulownia fortunei Journal of Biotechnology, Vol (4), 479 – 485 Bergmann BA, Whetten R (1998), In vitro rooting and early greenhouse growth of micropropagated Paulownia elongata shoots, New Forests, 15(2): 127-138 Low RK, Prakash AP, Swarup S, Goh CJ, Kumar PP (2001), A differentially expressed bZIP gene is associated with adventitious shoot regeneration in leaf cultures of Paulownia kawakamii Plant Cell Reports, 20:696-700 Ipekci Z, Altinkut A, Kazan K, Bajrovic K, Gozukirmizi N (2001), High Frequency Plant Regeneration from Nodal Explants of Paulownia elongata, Plant Biology 3(2): 113-115 Wilson G (19920, Paulownia: designed for agroforestry Australian Farm Journal, 1(11): 59-61 Nguyễn Kha ( Đại Học Cần Thơ) số tìm hiểu câu Hông( pawlonia fortunei) tạp chí Nông Nghiệp Nông Thôn( 25/5/2010) Cây Hông( pawlonia fortunei) hướng trồng rừng nguyên liệu Báo Nông Nghiệp Việt Nam số 54( 17/3/2011) 10 Nguyễn Đức Thành Nuôi cấy mô tế bào thực vật- nghiên cứu ứng dụng Nhà xuất Nông Nghiệp( 15/5/2009) 11 Nguyễn Hữu Thuần Anh, Hoàng Văn Hạnh, Trương Thị Bích Phượng ( trường đại học Khoa Học, đại học Huế) Nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ chất kích thích sinh trưởng đến khả vi nhân giống Hông( Pawlonia fortunei) 12 http://nhipcaudautu.vn/article.aspx?id=3845 13 http://tailieu.vn/xem-tai-lieu/chuong-ii-cong-nghe-nuoi-cay-mo-te-baothuc.573762.html 27 14 http://baigiang.violet.vn/present/same/entry_id/374963 15 http://www.scribd.com/doc/73485861/Thuc-Hanh-Nuoi-Cay-Mo 16 http://www.dostbinhdinh.org.vn/KyYeu/GiaiDoan20012005/cnsh/Kyyeu_T66-T69.htm 17 http://tailieu.vn/xem-tai-lieu/bai-giang-nuoi-cay-mo-te-bao-thuc-vat-bangte-bao-tran-va-ki-thuat-chuyen-gen.492239.html ….Ngày….tháng….năm… Giáo viên hướng dẫn sinh viên (ký, ghi rõ họ tên) (ký, ghi rõ họ tên) 28 [...]... 2.2.4 Ứng dụng của phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Tính ưu việt của phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật là việc sử dụng các mô cấy có kích thước nhỏ, sự tương tác trong mô đơn giản, phân hóa dễ dàng hơn và tái sinh nhanh hơn so với các phương pháp truyền thống 17 Ứng dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để sản xuất cây giống trên quy mô công nghiêp, có hệ số nhân cao và tạo ra các... rễ của chồi nuôi cấy Ngoài hai nhóm chính là Auxin và Cytokinin, trong nuôi cấy mô tế bào thực vật người ta còn sử dụng thêm Gibberellin để kích thích sự kéo dài tế bào, qua đó làm tăng kích thước chồi nuôi cấy GA 3 là loại Gibberellin được sử dụng nhiều nhất 2.2.7 Thành tựu bảo tồn nguồn gen cây trồng sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật đã trở thành... gọi là sự phản phân hóa tế bào vì nó ngược lại với sự phân hóa tế bào Phân hóa tế bào Tế bào phôi sinh tế bào dãn tế bào phân hóa Phản phân hóa tế bào Mối quan hệ giữa quá trình phân hóa và phản phân hóa Quá trình phát sinh hình thái trong nuôi cấy mô tế bào thực vật thực chất là kết quả của quá trình phân hóa và phản phân hóa của tế bào Vậy kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật là kỹ thuật điều khiển... trọng trong chọn, tạo, nhân giống đóng góp cơ sở lý luận mới cho công nghệ sinh học hiện đại 2.2.2 Cở sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật - Tính toàn năng của tế bào thực vật Cơ sở lý luận của phương pháp nuôi cấy mô và tế bào thực vật là tính toàn năng của tế bào do Haberlandt nêu ra năm 1902 Mỗi tế bào bất kỳ của một cơ thể sinh vật đa bào đều có khả năng tiềm tàng để phát triển thành một... và nhân nhanh các kiểu gen quý làm vật liệu cho công tác chọn giống Nhân nhanh các loài cây cảnh, loài hoa khó trồng bằng hạt Nhân nhanh kết hợp với làm sạch virus Bảo quản tập đoàn gen Nuôi cấy mô tế bào thực vật đã mở ra một hướng đi mới cho các nhà Di Truyền Học, Sinh Hóa Học, Sinh Lý Học, Vi Sinh Vật Học… 2.2.5 Phương pháp nhân đa chồi Trong phương pháp nhân đa chồi, chồi ngon được tách và nuôi cấy. .. Huỳnh Minh Tư đã nghiên cứu và nhân giống thành công giống cây quý này bằng phương pháp nuôi cấy mô và tế bào thực vật ( Tạp chí Khoa học và Công nghệ Đà Nẵng – Số 5(4 0).2010, 191-196) Thế giới Các nhà khoa học Ấn Độ đã xây dựng thành công quy trình tái sinh một số giống tre quý như Dendrocalamus asper ( tre mạnh tông), Bambusa multiplex ( cây Hóp) thông qua nuôi cấy hạt hoặc chồi bên (Nandi) Các tác... công của Muir( 1953)khi nuôi cấy tế bào đơn Cho đến năm 1960 Bergmenn đã phát triển kĩ thuật tế bào đơn lên một bước mới tạo được khối mô sẹo từ tế bào đơn bằng kĩ thuật gieo trải tế bào thực vật trên đĩa thạch như trtải tế bào vi sinh vật - Giai đoạn triển khai nuôi cấy mô vào công nghệ sinh học thực vật Ở giai đoạn này nhiều nhà khoa học đã đưa ra công trình những công trình nghiên cứu thành công... được dùng làm nguồn cung cấp vật liệu giống cho tái sinh nhân tạo Bảo tồn ex situ Được thực hiện bằng cách tách rời cây hoặc vật liệu nhân giống ra khỏi vùng phân bố tự nhiên để đưa vào các bộ sưu tập cây sống ( Vườn thực vật) , rừng trồng với mục đích bảo tồn ( quần tụ bảo tồn ex situ, ngân hàng hạt giống, phấn hoa hay nuôi cấy mô) ( Nguyễn Hoàng Nghĩa, 2006) Ba nhiệm vụ chính của bảo tồn ex situ:... hoặc bằng 30 Thí nghiệm được lặp lại 2 lần 23 Sơ đồ nhân giống Hông( pawlonia fortunei) bằng phương pháp nuôi cấy mô tế bao thực vật Đốt thân ngoài tự nhiên khử trùng vào mẫu môi trường MS/2 4 tuần Chồi con in vitro tách chồi in vitro môi trường MS/2 có bổ xung BAP( 5- 7 mg/l) Cụm chồi tách chồi in vitro môi trường MS/2 có bổ xung NAA( 0,1- 0,2mg/l) Cây con hoàn chỉnh giá thể Đất/ cám dừa: 4/1 Trồng cây. .. inermis Linn( Lythraceae), Sausurea lappa C.B.Clarke… ( Arora), ( Rout R) 2.2.8 Bảo tồn thực vật bằng phương pháp nuôi cấy mô Ngày nay nhiều nguồn gen thực vật bị đe dọa có nguy cơ tuyệt chủng, nhiều giống cây trồng bị thoái hóa không giữ được đặc điểm nguyên sơ ban đầu như 21 chất lượng hay khả năng chống chịu với các điều kiện bất lợi, thì sử dụng kỹ thuật nhân giống in vitro để nhân nhanh và bảo ... ứng dụng việc nhân giống lợi ích đem lại Hông trồng rừng lựa chọn đề tài: “ Nghiên cứu nhân nhanh giốn Hông( Paulownia fortunei) phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật để phục vụ trồng 1.2 Mục... khoa học nuôi cấy mô tế bào thực vật - Tính toàn tế bào thực vật Cơ sở lý luận phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật tính toàn tế bào Haberlandt nêu năm 1902 Mỗi tế bào thể sinh vật đa bào có... nguồn gen trồng sử dụng phương pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật trở thành phương thức quan trọng để nhân nhanh, đặc biệt trồng khó nhân nhanh phương pháp truyền