BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Hà Tú Trâm NGHIÊN CỨU SỰ THỦY PHÂN TINH BỘT BỞI γ-AMYLASE VI SINH VẬT DẠNG HÒA TAN VÀ DẠNG CỐ ĐỊNH LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh – 2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Hà Tú Trâm NGHIÊN CỨU SỰ THỦY PHÂN TINH BỘT BỞI γ-AMYLASE VI SINH VẬT DẠNG HÒA TAN VÀ DẠNG CỐ ĐỊNH Chuyên ngành: Vi sinh vật học Mã số: 60 42 40 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PSG.TS ĐỒNG THỊ THANH THU Thành phố Hồ Chí Minh - 2012 LỜI CẢM ƠN Tôi xin trân trọng bày tỏ lời cám ơn chân thành lòng biết ơn sâu sắc đến PGS TS Đồng Thị Thanh Thu, người khơi gợi đề tài tận tình hướng dẫn khoa học, quan tâm tạo điều kiện tốt cho trình thực luận văn Xin ghi nhớ công ơn Thầy Cô Khoa Sinh học, Thầy Cô Phòng Sau Đại học Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh nhiệt tình truyền đạt kiến thức quý báu cho học viên suốt thời gian học tập nghiên cứu trường Xin trân trọng gửi lời cảm ơn đến Thầy Cô thuộc môn Sinh hóa Trường Đại học Khoa học Tự nhiên tận tình giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn Ban Giám Hiệu đồng nghiệp Trường THPT Chuyên Lê Hồng Phong, quận 5, Thành Phố Hồ Chí Minh tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian học tập vừa qua Đặc biệt trân trọng bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Thầy Trần Ngọc Danh Thầy Lê Văn Thanh quan tâm, động viên trợ giúp cho thời gian theo học lên thạc sĩ Xin gửi lời cảm ơn đến bạn Lê Hồng Phú, Phan Thị Phương Dung, Trần Quốc Tuấn, em Trương Thị Quỳnh Trâm, Trần Thị Ngọc Diệp chia sẻ kiến thức, kinh nghiệm giúp đỡ trình thực đề tài Tôi xin trân trọng bày tỏ lòng kính trọng biết ơn đến ba mẹ, người sinh thành, nuôi dưỡng, dạy dỗ chỗ dựa tinh thần vững cho sống Xin gửi lời tri ân đến người thân yêu gia đình hỗ trợ, động viên học tập nghiên cứu Thành phố Hồ Chí Minh, tháng năm 2012 Hà Tú Trâm i MỤC LỤC PHẦN MỞ ĐẦU PHẦN 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đặc điểm giống mốc Aspergillus Asp niger 1.1.1 Vị trí phân loại Asp niger [7] 1.1.2 Đặc tính sinh học dinh dưỡng Asp niger [12] 1.1.2.1 Đặc tính sinh học Asp niger [12] 1.1.2.1 Đặc tính dinh dưỡng Asp niger [12] 1.1.3 Ứng dụng nấm mốc Asp niger [18] 1.2 Đặc điểm nấm men Sac cerevisiae [14] 1.2.1 Đặc điểm nấm men 1.2.1.1 Vị trí phân loại Sac cerevisiae [14] 1.2.1.2 Đặc tính sinh học dinh dưỡng Sac cerevisiae [14] [20] 1.2.2 Các ứng dụng nấm men Sac cerevisiae [14] 1.3 Sơ lược enzyme γ-amylase 1.3.1 Giới thiệu enzyme 1.3.1.1.Khái niệm chung E[11][2] 1.3.1.2 Nguồn nguyên liệu thu nhận E 1.3.1.3 Phương pháp thu nhận E [17] 1.3.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình tổng hợp E vi sinh vật [20] 10 1.3.2 Giới thiệu γ-amylase [37][13] 11 1.3.2.1 Cấu trúc γ-amylase [37] 11 1.3.2.2 Đặc tính [30] 12 1.3.2.3 Nguồn nguyên liệu thu nhận [35][39] 13 1.4 Enzyme cố định (immobilized enzyme) 13 1.4.1 Khái quát cố định E [19] 13 1.4.2 Vật liệu cố định enzyme [19] 13 1.4.2.1 Vật liệu vô [16][5] 13 ii 1.4.2.2 Vật liệu hữu [19][21] 13 1.4.3 Một số phương pháp chủ yếu tạo E cđ [19][22][25] 14 1.4.3.1 Phương pháp vật lí [19][4] 15 1.4.3.2 Phương pháp hóa học [19][24] 15 1.4.3.3 Phương pháp nhốt enzyme khuôn gel [19] 15 1.4.3.4 Phương pháp microcapsule (phương pháp tạo vi túi) [19] 16 1.4.3.5 Phương pháp siêu lọc [19] 16 1.4.4 Lựa chọn phương pháp cố định 17 1.4.5 Một số yếu tố ảnh hưởng đến cố định E [19] 17 1.4.5.1 Ảnh hưởng chất mang [19] 17 1.4.5.2 Ảnh hưởng pH [19] 18 1.4.6 Ứng dụng E cđ thành tựu nghiên cứu E cđ [23][27][28][29] 18 1.4.6.1 Ứng dụng y học [19] 18 1.4.6.2 Ứng dụng kỹ thuật sinh hóa [19][36] 19 1.4.6.3 Ứng dụng công nghiệp [19] 19 1.4.6.4 Ứng dụng bảo vệ môi trường [19] 20 trước đưa môi trường bên 20 1.5 Sự thủy phân tinh bột ứng dụng sản phẩm sau thủy phân 20 1.5.1 Đại cương tinh bột [31] 20 1.5.2 Đặc tính tinh bột sắn tinh bột bắp [1][10] 22 1.5.2.1 Đặc tính tinh bột sắn [1][10] 22 1.5.2.2 Đặc tính tinh bột bắp [14][31] 22 1.5.3 Các phương pháp thủy phân tinh bột [1][10] 23 1.5.3.1 Thủy phân tinh bột acid [10][32] 23 1.5.3.2 Thủy phân tinh bột enzyme [11][33] 23 1.5.4 Các sản phẩm thủy phân tinh bột ứng dụng [14] 24 PHẦN 2: NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Nguyên vật liệu 26 2.1.1 Nguyên liệu 26 iii 2.1.2 Hóa chất dụng cụ thí nghiệm 26 2.2 Phương pháp nghiên cứu 26 2.2.1 Phương pháp giữ giống Asp niger [20] 26 2.2.2 Quan sát đặc điểm hình thái chủng giống Asp niger [12][20] 27 2.2.2.1 Quan sát đại thể [12][20] 27 2.2.2.2 Quan sát vi thể kĩ thuật làm phòng ẩm[20] 27 2.2.3 Phương pháp định lượng mật độ tế bào trực tiếp buồng đếm hồng cầu [9][12][20] 28 2.2.4 Phương pháp khảo sát thời gian nuôi cấy thành phần môi trường nuôi cấy Asp niger thu γ – amylase [8] 29 2.2.5 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng sinh tổng hợp γ – amylase từ Asp niger [3][7][9] 30 2.2.5.1 Thời gian nuôi cấy 30 2.2.5.2 Thành phần môi trường thay đổi 30 2.2.6 Phương pháp thu nhận γ – amylase từ Asp niger [9][14][25] 30 2.2.7 Xác định hoạt độ γ – amylase theo phương pháp so màu với DNS [9] 31 2.2.7.1 Nguyên tắc 31 2.2.7.2 Cách tính 31 2.2.8 Định lượng protein hòa tan CPE theo phương pháp Lowry [12][26] 31 2.2.8.1 Nguyên tắc 31 2.2.8.2 Hóa chất 32 2.2.8.3 Cách tiến hành 32 2.2.8.4 Cách tính 32 2.2.9 Xác định hoạt độ riêng chế phẩm enzyme [9] 33 2.2.10 Lựa chọn phương pháp cố định γ-amylase [9][19] 33 2.2.10.1 Cố định γ-amylase lên màng chitosan phương pháp cộng hóa trị 33 2.2.10.2 Cố định γ-amylase lên chất mang Celite (Diatomite) phương pháp hấp phụ [14] 34 iv 2.2.11 Phương pháp sử dụng γ-amylase cđ từ Asp niger thương mại để thủy phân loại tinh bột [12][15] 35 2.2.12 Phương pháp khảo sát khả tái sử dụng CPE γ-amylase cđ 35 2.2.13 Ứng dụng sản phẩm sau thủy phân tinh bột để lên men thu sinh khối nấm men [6], [9], [12] 36 2.2.13.1 Thu nhận định lượng glucose tạo thành dung dịch sau thủy phân tinh bột 36 2.2.13.2 Lên men thu sinh khối giàu protein 36 2.2.14 Phương pháp xử lý số liệu thực nghiệm [12] 37 2.2.14.1 Xác định giá trị trung bình 37 2.2.14.2 Tính toán độ lệch mẫu độ lệch chuẩn 37 2.2.15 Phương pháp xây dựng đường chuẩn hệ số góc a dựa phần mềm excel [4] 38 PHẦN 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 39 3.1 Bảo quản giống định danh nấm mốc Asp niger 39 3.2 Kết quan sát đại thể vi thể chủng giống Asp niger 39 3.3 Định lượng mật độ bào tử trực tiếp buồng đếm hồng cầu 40 3.4 Xác định hoạt độ γ-amylase từ canh trường Asp niger theo phương pháp so màu DNS 40 3.4.1 Hoạt độ γ-amylase từ canh trường Asp niger theo thay đổi thành phần môi trường 40 3.4.1.1 Ảnh hưởng thành phần môi trường chất cảm ứng bột bắp 41 3.4.1.2 Ảnh hưởng thành phần môi trường chất cảm ứng bột 42 3.4.2 Hoạt độ γ-amylase từ canh trường Asp niger theo thời gian nuôi cấy 43 3.5 Nuôi cấy nấm mốc theo điều kiện tối ưu tuyển chọn thời gian thành phần môi trường chất cảm ứng 44 3.6 Thu nhận CPE γ-amylase từ môi trường Asp niger môi trường bán rắn (trong điều kiện tối ưu trên) 45 3.7 Hoạt độ riêng CPE γ-amylase thu từ canh trường Asp niger 45 v 3.7.1 Hàm lượng protein CPE γ-amylase thu từ canh trường Asp niger 46 3.7.2 Hoạt độ riêng CPE γ-amylase thu từ canh trường Asp niger 46 3.8 Sử dụng CPE γ-amylase hòa tan từ canh trường Asp niger để thủy phân loại tinh bột khác 46 3.9 Xác định hoạt độ riêng γ-amylase thương mại Dextrozyme theo phương pháp so màu DNS 49 3.9.1 Xác định hoạt độ chung CPE - TM theo phương pháp so màu DNS 49 3.9.2 Xác định hàm lượng protein CPE - TM theo phương pháp Lowry 50 3.9.3 Xác định hoạt độ riêng CPE γ-amylase thương mại 50 3.10 Sử dụng CPE γ-amylase thương mại Dextrozyme GA để thủy phân loại tinh bột khác 51 3.10.1 Sử dụng CPE γ-amylase – TM để thủy phân tinh bột tan 51 3.10.2 Sử dụng CPE γ-amylase – TM để thủy phân bột 52 3.11 Cố định CPE γ-amylase từ Asp niger lên chất mang diatomite phương pháp hấp phụ lên chất mang chitosan phương pháp cộng hóa trị 53 3.11.1 Hiệu suất gắn protein lên chất mang 53 3.11.2 Hiệu suất cố định hoạt độ CPE γ-amylase 54 3.12 Cố định CPE γ-amylase thương mại lên chất mang diatomite phương pháp hấp thụ lên chitosan phương pháp cộng hóa trị 55 3.12.1 Hiệu suất gắn protein lên chất mang 55 3.12.2 Hiệu suất cố định hoạt độ CPE γ-amylase thương mại 56 3.13 Sử dụng CPE γ-amylase cố định để thủy phân loại tinh bột khác 56 3.13.1 Sử dụng CPE γ-amylase từ Asp niger cố định để thủy phân loại tinh bột khác 56 3.13.2 Sử dụng CPE γ-amylase thương mại cố định để thủy phân loại tinh bột khác 60 vi 3.14 Khảo sát khả tái sử dụng CPE γ-amylase cố định 63 3.14.1 Khảo sát khả tái sử dụng CPE γ-amylase từ Asp niger cố định 63 3.14.2 Khảo sát khả tái sử dụng CPE γ-amylase cố định thương mại 66 3.15 Kết ứng dụng sản phẩm sau thủy phân tinh bột để lên men thu sinh khối giàu protein 68 3.15.1 Kết sử dụng CPE cđ từ Asp niger thương mại thủy phân bột tạo dung dịch đường 68 3.15.2 Kết thu nhận sinh khối nấm men giàu protein từ dung dịch thủy phân tinh bột 70 PHẦN 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 71 4.1 Kết luận 71 4.1.1 Xác định điều kiện nuôi cấy tối ưu cho nấm mốc Asp.niger sinh tổng hợp enzyme γ- amylase có hoạt tính cao là: 71 4.1.2 Thu nhận CPE γ-amylase từ môi trường nuôi cấy Aspergillus niger 71 4.1.3 Hoạt độ CPE γ-amylase – TM 71 4.1.4 Xác định nồng độ glucose tạo thành thủy phân số loại tinh bột CPE γ- amylase TM từ Asp niger hòa tan 72 4.1.4.1 CPE từ Asp niger 72 4.1.4.2 CPE thương mại 72 4.1.5 Hiệu suất cố định CPE γ- amylase từ Asp niger TM số chất mang 72 4.1.5.1 CPE từ Asp niger 72 4.1.5.2 CPE thương mại 72 4.1.6 Xác định nồng độ glucose tạo thành dung dịch sau thủy phân tinh bột CPE γ- amylase từ Asp niger TM cố định số chất mang 73 4.1.6.1 Thủy phân loại tinh bột CPE cđ từ Asp niger 73 4.1.6.2 Thủy phân loại tinh bột CPE cđ TM 73 4.1.7 Xác định khả tái sử dụng chế phẩm enzyme γ- amylase từ Asp niger TM để thủy phân bột 73 vii 4.1.7.1 CPE từ Asp niger 73 4.1.7.2 CPE thương mại 74 4.1.8 Kết sử dụng CPE cđ từ Asp niger thủy phân bột tạo glucose 74 4.1.8.1 CPE cđ từ Asp niger 74 4.1.8.2 CPE cđ TM 74 4.1.9 Kết thu nhận sinh khối nấm men giàu protein từ dịch thủy phân bột CPE γ- amylase thương mại từ Asp niger 74 4.2 Đề nghị 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 72 PHẦN 5: PHỤ LỤC 77 Phương pháp xây dựng đường chuẩn hệ số góc a dựa vào phần mềm excel trình bày mục 2.2.17 Kết thể bảng 3.8 Bảng 5.2: Sự tương quan giá trị ∆OD nồng độ albumin Ống nghiệm Nồng độ albumin (μg/ml) 50 100 150 200 250 Thí nghiệm 0,022 0,053 0,084 0,126 0,146 0,184 Thí nghiệm 0,017 0,053 0,085 0,122 0,144 0,184 Thí nghiệm 0,020 0,057 0,087 0,126 0,146 0,186 Trung bình 0,020 0,054 0,085 0,125 0,145 0,183 0,034 0,065 0,105 0,125 0,163 OD λ = 750nm ∆OD a = 0,0007x ∆OD(750nm) Hệ số góc Nồng độ albumin (μg/ml) Đồ thị 5.2: Sự tương quan giá trị ∆OD nồng độ albumin (Đường chuẩn albumin) 5.3 Một số hình ảnh minh họa Hình 5.1 Dextrozyme GA (γ-amylase – Công ty Novo Đan Mạch) Hình 5.2 Enzyme γ-amylase từ Asp niger Hình 5.3 Ống thạch nghiêng với nấm mốc Asp niger Hình 5.4 Chất mang hữu - Chitosan Hình 5.5 Màng chitosan Hình 5.6 Chất mang vô - Diatomite Thử không (1) 10 Thử thật (2-10) Hình 5.7 Hiện màu thuốc thử DNS ống thử không ống thử thật dung dịch thủy phân tinh bột tan với γ-amylase từ Asp niger Thử không (1) Thử thật (2-10) 10 Hình 5.8 Hiện màu thuốc thử DNS ống thử không ống thử thật dung dịch thủy phân tinh bột tan với γamylase thương mại Hình 5.9 Sản phẩm lên men thu sinh khối nấm men giàu protein Hình 5.10 Sinh khối nấm men Sac cerevisiae 450ml dịch nuôi cấy Hình 5.11 Thiết bị khảo sát khả Hình 5.12 Thiết bị khảo sát khả tái sử dụng CPEcđ_chitosan tái sử dụng CPEcđ_diatomite 5.4 pha dung dịch đệm acetate (pH = 5.0) [3]và CPEcđ - TM từ Asp niger từPhương Asp nigerpháp CPE cđ - TM a Dung dịch natriacetate 0,2M: 16,4g CH COONa hay 27,2g CH COONa.3H O hòa tan dẫn nước đến 1000ml nước cất b Dung dịch axit acetic 0,2M: 11,55 ml CH COOH đặc, dẫn nước đến 1000ml Giá trị pH dung dịch đệm phụ thuộc vào số ml dung dịch a số ml dung dịch b dẫn đến 100ml a (ml) b (ml) pH a (ml) b (ml) pH 44 3,8 20 30 4,8 25,5 24,5 4,6 14,8 35,2 5,0 5.5 Kết giải trình tự 28S rRNA Asp niger (đính kèm) 5.6 Thông tin sản phẩm Dextrozyme GA hãng Novo cung cấp (đính kèm) Bảng 5.3 : Hoạt độ GA từ Asp niger / bột bắp Anova: Single Factor SUMMARY Groups 74/1 73/2 72/3 71/4 70/5 ANOVA Source of Variation Count 3 3 Sum 6354 11340 12615 18256 12108 Average 2118 3780 4205 6085 4036 Variance 18333 69264 61275 3397 110784 SS df MS F Between Groups Within Groups 2.4E+07 526107 10 Total 2.4E+07 14 5979146 52610.7 P-value F crit 2.72E113.6489 08 3.47805 Bảng 5.4 : Hoạt độ GA từ Asp niger / bột Anova: Single Factor SUMMARY Groups 74/1 73/2 72/3 71/4 70/5 Count 3 3 Sum 5944 7748 9972 14253 9240 Average 1981 2582 3324 4751 3080 Variance 1571 98076 47952 232592 525 ANOVA Source of Variation SS df MS F Between Groups Within Groups 1.3E+07 761435 10 Total 1.4E+07 14 3214256 76143.5 P-value F crit 3.13E42.21311 06 3.47805 Bảng 5.5 : Hoạt độ GA từ Asp niger / thời gian nuôi cấy Anova: Single Factor SUMMARY Groups 74/1 73/2 72/3 71/4 70/5 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Count 3 3 Sum 14,689 21,138 11,220 10,812 7,830 Average 4,896 7,046 3,740 3,604 2,610 Variance 61,301 40,053 124,176 15,078 61,425 SS df MS F 3.5E+07 604066 P-value F crit 8.85E4 8639079 143.0154 09 3.47805 10 60406.6 Total 3.5E+07 14 Bảng 5.6 : Nồng độ glucose dịch thủy phân tinh bột tan GA từ Asp niger dạng hòa tan Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 240 270 Count 3 3 3 3 ANOVA Source of Variation SS Sum Average 278.19 92.7302 592.077 197.359 830.864 276.955 1138.5 379.501 1425.6 475.2 1776.33 592.109 1811.53 603.843 1817.45 605.818 1822.28 607.427 Variance 77.17082 238.2669 1055.61 1794.999 367.84 59.13191 5.229639 55.87588 31.73368 df F MS Between Groups Within Groups 943838 7371.72 18 Total 951209 26 P-value F crit 2.17E117980 288.0787 17 2.51016 409.54 Bảng 5.7 : Nồng độ glucose dịch thủy phân bột GA từ Asp niger dạng hòa tan Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 30 288.975 96.3251 1.609714 60 502.804 167.601 161.9015 90 783.236 261.079 205.7716 120 926.2 308.733 350.0933 150 1236.81 412.271 135.5313 180 1378.79 459.598 304.0841 210 1466.77 488.922 294.5433 240 1464.91 488.304 188.8052 270 1479.68 493.227 248.6142 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit 7.45EBetween Groups 545956 68244.5 324.8097 18 2.51016 Within Groups 3781.91 18 210.106 Total 549738 26 Bảng 5.8 : Nồng độ glucose dịch thủy phân tinh bột tan GA - TM dạng hòa tan Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 30 563.838 187.946 4.832075 60 808.708 269.569 0.401354 90 1229.08 409.694 17.32313 120 1270.92 423.64 1.608824 150 1265.08 421.693 25.32504 180 1270.92 423.64 1.608824 210 1270.92 423.64 2.815441 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit 1.61EBetween Groups 167938 27989.7 3634.042 21 2.84773 Within Groups 107.829 14 Total 168046 20 7.7021 Bảng 5.9: Nồng độ glucose dịch thủy phân bột GA - TM dạng hòa tan Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 30 141.818 47.2727 17.05785 60 385.103 128.368 2.841062 90 527.201 175.734 1.615179 120 844.098 281.366 1.606466 150 180 210 ANOVA Source of Variation 3 853.101 842.196 842.196 284.367 5.250726 280.732 7.636037 280.732 2.813277 SS df MS Between Groups Within Groups 164812 77.6412 14 Total 164889 20 F P-value F crit 1.85E27468.6 4953.048 22 2.84773 5.5458 Bảng 5.10: Nồng độ glucose dịch thủy phân bột GA từ Asp niger dạng cố định chitosan Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 Count 3 3 3 Sum Average Variance 203.334 67.7781 1.23458 435.166 145.055 3.622762 652.746 217.582 4.830312 761.128 253.709 5.257531 762.637 254.212 2.817692 763.567 254.522 5.291277 766.185 255.395 3.667093 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups Within Groups 97029.1 53.4425 14 Total 97082.5 20 MS F P-value F crit 5.51E16171.5 4236.351 22 2.84773 3.81732 Bảng 5.11: Nồng độ glucose dịch thủy phân tinh bột tan GA từ Asp niger dạng cố định chitosan Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 ANOVA Source of Variation Count 3 3 3 Sum Average Variance 337.364 112.455 0.402532 497.803 165.934 1.207586 739.561 246.52 2.817702 926.373 308.791 1.207581 909.892 303.297 1.207587 912.089 304.03 2.817704 901.099 300.366 1.610112 SS df Between Groups Within Groups 113221 22.5416 MS 14 F P-value F crit 4.46E18870.1 11719.72 25 2.84773 1.61011 Total 113243 20 Bảng 5.12: Nồng độ glucose dịch thủy phân bột GA từ Asp niger dạng cố định diatomite Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 ANOVA Source of Variation Count 3 3 3 Sum Average Variance 413.185 137.728 2.817667 595.604 198.535 6.440443 825.275 275.092 12.47836 960.458 320.153 2.817804 987.926 329.309 2.817775 998.901 332.967 1005.5 335.165 SS df Between Groups Within Groups 109969 54.7441 14 Total 110024 20 MS F P-value F crit 2.72E18328.2 4687.178 22 2.84773 3.91029 Bảng 5.13: Nồng độ glucose dịch thủy phân tinh bột tan GA từ Asp niger dạng cố định diatomite Anova: Single Factor SUMMARY Groups Count Sum Average Variance 30 337.364 112.455 0.402532 60 497.803 165.934 1.207586 90 739.561 246.52 2.817702 120 926.373 308.791 1.207581 150 909.892 303.297 1.207587 180 912.089 304.03 2.817704 210 901.099 300.366 1.610112 ANOVA Source of Variation SS df MS F P-value F crit Between Groups 113221 18870.1 11719.72 4.46E-25 2.84773 Within Groups 22.5416 14 1.61011 Total Between Groups Within Groups 113243 319590 25.171 20 14 Total 319615 20 53265 29625.81 1.79793 6.76E-28 2.84773 Bảng 5.14 : Nồng độ glucose dịch thủy phân tinh bột tan GA - TM dạng cố định chitosan Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Total Count 3 3 3 Sum Average Variance 1058.24 352.747 4.830328 1328.57 442.857 8.453082 1752.75 584.249 11.27077 1773.63 591.209 4.83034 1778.02 592.675 5.232872 1740.66 580.22 660.5494 1794.51 598.168 10.06319 SS df 169955 1410.46 MS F P-value F crit 28325.8 281.1576 9.08E-14 2.84773 14 100.747 171365 20 Bảng 5.15 : Nồng độ glucose dịch thủy phân bột GA - TM dạng cố định chitosan Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 Count 3 3 3 ANOVA Source of Variation Between Groups Within Groups Sum Average Variance 785.716 261.905 2.817707 1260.44 420.146 0.402527 1775.83 591.942 1.610113 1781.32 593.773 0.402528 1779.12 593.041 1.610114 1778.02 592.674 2.817698 1841.73 613.91 2.924802 SS df 319590 25.171 MS 14 F 53265 29625.81 1.79793 P-value F crit 6.76E28 2.84773 Total 319615 20 Bảng 5.16 : Nồng độ glucose dịch thủy phân bột GA - TM dạng cố định diatomite Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 ANOVA Source of Variation Count 3 3 3 Sum Average Variance 947.463 315.821 3.6076 1326.61 442.205 4.85E-27 1747.47 582.489 15.70245 1838.23 612.744 5.23781 1834.65 611.552 0.402786 1833.24 611.081 8.455631 1840.14 613.38 11.26441 SS df MS Between Groups Within Groups 247385 89.3414 14 Total 247474 20 F P-value F crit 2.88E41230.8 6460.957 23 2.84773 6.38153 Bảng 5.17 : Nồng độ glucose dịch thủy phân tinh bột tan GA - TM dạng cố định diatomite Anova: Single Factor SUMMARY Groups 30 60 90 120 150 180 210 Count 3 3 3 Sum Average Variance 1095.61 365.204 0.402533 1382.1 460.701 276.8513 2009.41 669.803 12.48603 1997.47 665.824 2.819868 2000.19 666.729 8.473284 1998.17 666.056 10.07795 1995.87 665.289 0.402634 ANOVA Source of Variation SS df Between Groups Within Groups 289753 623.027 14 Total 290376 20 MS F P-value F crit 7.51E48292.1 1085.169 18 2.84773 44.5019 [...]... amylase hòa tan thương mại  γ – amylase cố định từ Asp niger và thương mại - Nghiên cứu sự thủy phân một số loại tinh bột của các loại enzyme hòa tan và cố định 3 - So sánh hiệu quả sự thủy phân tinh bột bởi ba loại enzyme trên - Chứng minh hiệu quả sử dụng Ecđ qua sự tái sử dụng trong thủy phân tinh bột - Bước đầu tạo sinh khối nấm men trên dung dịch đường sau thủy phân Phần 1 Tổng quan tài liệu... CPE γ- amylase từ Asp niger dạng hòa tan 47 Đồ thị 3.3: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân bột năng bằng CPE γ- amylase từ Asp niger dạng hòa tan 48 Đồ thị 3.4: So sánh nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân tinh bột tan và bột năng bằng CPE γ- amylase từ Asp niger dạng hòa tan 49 Đồ thị 3.5: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân tinh bột tan. .. bằng CPE γ- amylase – TM dạng hòa tan 51 Đồ thị 3.6: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân bột năng bằng CPE γ- amylase – TM dạng hòa tan 52 Đồ thị 3.7: So sánh nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân tinh bột tan và bột năng bằng CPE γ- amylase – TM dạng hòa tan 53 Đồ thị 3.8: Hiệu suất sử dụng CPE γ- amylase từ Asp niger cố định trên chitosan và trên diatomite... định và hiệu suất gắn γ- amylase lên diatomite và chitosan 54 Bảng 3.15: Tổng đơn vị hoạt độ γ- amylase cố định và hiệu suất hoạt độ γ- amylase cố định 54 Bảng 3.16: Lượng protein CPE γ- amylase – TM cố định và hiệu suất gắn cố định protein γ- amylase lên diatomite và chitosan 55 Bảng 3.17: Tổng đơn vị hoạt độ γ- amylase - TM cố định và hiệu suất cố định amylase ... CPE γ- amylase - TM 49 Bảng 3.11: Hàm lượng Protein trong CPE γ- amylase - TM 50 Bảng 3.12: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân tinh bột tan bằng CPE γ- amylase - TM dạng hòa tan 51 Bảng 3.13: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân bột năng bằng CPE γ- amylase – TM dạng hòa tan 52 Bảng 3.14: Lượng protein CPE γ- amylase cố định và hiệu suất gắn γ- amylase. .. trong và ngồi nước đó đã mở ra một câu hỏi, liệu rằng chế phẩm γ – amylase cố định có thể trở thành một trong những nguồn chế phẩm E đầy tiềm năng cho ngành cơng nghiệp sản xuất α – glucose từ ngun liệu tinh bột khơng? Do đó, để góp phần đánh giá thêm tiềm năng ứng dụng này của enzyme cố định, chúng tơi xin được tiến hành đề tài Nghiên cứu sự thủy phân tinh bột bởi γ- amylase vi sinh vật dạng hòa tan và. .. enzyme [19] Khơng có vật liệu cố định nào thích hợp cho tất cả các loại E và cũng khơng có E nào thích hợp với tất cả các loại vật liệu cố định Vì vậy, vi c nghiên cứu đặc điểm, tính chất của vật liệu cố định là cần thiết cho sự chọn lựa phương pháp cố định E Vật liệu cố định E và tế bào có thể được chia thành hai loại: vật liệu vơ cơ và vật liệu hữu cơ 1.4.2.1 Vật liệu vơ cơ [16][5] Vật liệu vơ cơ thường... tan và dạng cố định với các nhiệm vụ cụ thể như sau: - Nghiên cứu một số điều kiện ni cấy nấm mốc Asp niger để thu γ – amylase có hoạt tính cao - Sử dụng một phương pháp mới trong kỹ thuật sử dụng E đó là phương pháp cố định E - Cố định γ – amylase trên chất mang vơ cơ diatomite và chất mang hữu cơ chitosan - Xác định hoạt độ các loại enzyme:  γ - amylase hòa tan từ Asp niger  γ – amylase hòa tan thương... nhận CPE γ- amylase từ canh trường Asp niger 45 Bảng 3.7: Hàm lượng protein trong CPE γ- amylase thu được từ canh trường Asp niger 46 Bảng 3.8: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân tinh bột tan bằng CPE γ- amylase từ Asp niger dạng hòa tan 47 Bảng 3.9: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân bột năng bằng CPE γ- amylase từ Asp niger dạng hòa tan ... dung dịch sau thủy phân các loại tinh bột khác nhau bằng CPE γ- amylase từ Asp niger dạng cố định trên chất mang chitosan 57 Bảng 3.19: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân các loại tinh bột khác nhau bằng CPE γ- amylase từ Asp niger dạng cố định trên chất mang diatomite 58 Bảng 3.20: Nồng độ glucose tạo thành của dung dịch sau thủy phân các loại tinh bột khác nhau ...BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Hà Tú Trâm NGHIÊN CỨU SỰ THỦY PHÂN TINH BỘT BỞI γ- AMYLASE VI SINH VẬT DẠNG HỊA TAN VÀ DẠNG CỐ ĐỊNH Chun ngành: Vi sinh vật học Mã số:... dịch sau thủy phân tinh bột tan bột CPE γ- amylase từ Asp niger dạng hòa tan 49 Đồ thị 3.5: Nồng độ glucose tạo thành dung dịch sau thủy phân tinh bột tan CPE γ- amylase – TM dạng hòa tan ... hành đề tài Nghiên cứu thủy phân tinh bột γ- amylase vi sinh vật dạng hòa tan dạng cố định với nhiệm vụ cụ thể sau: - Nghiên cứu số điều kiện ni cấy nấm mốc Asp niger để thu γ – amylase có hoạt