BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Đặng Đào Ý Đoan NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH HOẠT CHẤT KHÁNG NẤM FUSARIUM GÂY HẠI TRÊN CÂY CÀ CHUA (LYCOPERSICON ESCULENTUM MILL.) LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh - 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM TP HỒ CHÍ MINH Đặng Đào Ý Đoan NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH HOẠT CHẤT KHÁNG NẤM FUSARIUM GÂY HẠI TRÊN CÂY CÀ CHUA (LYCOPERSICON ESCULENTUM MILL.) Chuyên ngành : Vi sinh vật học Mã số : 60 42 01 07 LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS TRẦN THANH THỦY Thành phố Hồ Chí Minh - 2014 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nghiên cứu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tác giả luận văn Đặng Đào Ý Đoan LỜI CẢM ƠN Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến TS Trần Thanh Thủy, người trực tiếp hướng dẫn, tận tình dẫn suốt trình xây dựng đề cương hoàn thành luận văn Cô giúp đỡ tạo điều kiện tốt để hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn Ths Trần Thị Minh Định toàn thể thầy cô khoa Sinh cán phòng Vi sinh – Sinh hóa, Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh tạo nhiều điều kiện để hoàn thành luận văn Cuối cùng, xin gởi lời cảm ơn đến thầy cô, bạn bè người thân gia đình bên cạnh tạo điều thuận lợi để hoàn thành luận văn MỤC LỤC Trang phụ bìa Lời cam đoan Lời cảm ơn Mục lục Danh mục chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình MỞ ĐẦU Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Fusarium gây bệnh cà chua 1.1.1 Nấm Fusarium 1.1.2 Cây cà chua 1.2 Xạ khuẩn 13 1.2.1 Đặc điểm sinh học xạ khuẩn 13 1.2.3 Các đặc điểm phân loại xạ khuẩn 15 1.2.4 Các chất có hoạt tính sinh học từ xạ khuẩn 16 1.3 Chất kháng sinh 18 1.3.1 Lược sử nghiên cứu chất kháng sinh 18 1.3.2 Cơ chế tác động chất kháng sinh 20 1.3.4 Các chất kháng sinh có khả kháng nấm từ xạ khuẩn 22 1.3.5 Tình hình nghiên cứu sử dụng kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn giới Việt Nam 24 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Vật liệu 27 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu Error! Bookmark not defined 2.1.2 Hóa chất 27 2.1.3 Thiết bị dụng cụ 27 2.1.4 Các môi trường sử dụng nghiên cứu 27 2.2 Phương pháp nghiên cứu 28 2.2.1 Phân lập xạ khuẩn 28 2.2.3 Quan sát hình thái xạ khuẩn 30 2.2.4 Xác định khả kháng nấm XK 30 2.2.5 Tuyển chọn chủng XK sinh chất kháng nấm 31 2.2.6 Phương pháp định loại xạ khuẩn kĩ thuật di truyền phân tử 31 2.2.7 Khảo sát môi trường điều kiện nuôi cấy thích hợp 34 2.2.8 Phương pháp tách chiết chất kháng nấm 36 2.2.9 Xác định ảnh hưởng dịch lên men đến khả nảy mầm hạt sinh trưởng cà chua 37 2.2.10 Thử nghiệm khả kháng Fusarium dịch lên men XK cà chua 37 Chương KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 40 3.1 Phân lập tuyển chọn chủng xạ khuẩn có khả sinh hoạt chất kháng nấm Fusarium 40 3.2 Đặc điểm hình thái chủng D7 42 3.3 Định danh đến loài chủng xạ khuẩn D7 44 3.4 Khảo sát môi trường điều kiện nuôi cấy thích hợp cho chủng S pseudogriseolus sinh hoạt tính kháng Fusarium 45 3.4.1 Lựa chọn MT thời gian lên men thích hợp 45 3.4.2 Ảnh hưởng nguồn cacbon 48 3.4.3 Ảnh hưởng hàm lượng cacbon 49 3.4.4 Ảnh hưởng nguồn nitơ 51 3.4.5 Ảnh hưởng hàm lượng nitơ 53 3.4.6 Ảnh hưởng pH ban đầu MT nuôi cấy 54 3.4.7 Ảnh hưởng nhiệt độ môi trường nuôi cấy 55 3.4.8 Động học trình lên men sinh tổng hợp chất kháng nấm chủng S pseudogriseolus 57 3.5 Tách chiết chất kháng nấm 59 3.6 Bước đầu tìm hiểu ảnh hưởng dịch lên men đến khả nảy mầm hạt phát triển cà chua phòng thí nghiệm 62 3.7 Kết thử nghiệm khả kháng Fusarium dich lên men chủng XK cà chua chậu thí nghiệm 67 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 71 TÀI LIỆU THAM KHẢO 73 PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT BT Bào tử KL Khuẩn lạc MT Môi trường NXB Nhà xuất XK Xạ khuẩn VK Vi khuẩn VSV Vi sinh vật DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Thành phần phản ứng PCR 32 Bảng 3.1 Các chủng xạ khuẩn có hoạt tính kháng Fusarium 41 Bảng 3.2 Ảnh hưởng loại MT đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus theo thời gian 46 Bảng 3.3 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến hoạt tính kháng 48 Bảng 3.4 Ảnh hưởng hàm lượng cacbon đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 50 Bảng 3.5 Ảnh hưởng nguồn nitơ đến hoạt chất kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 51 Bảng 3.6 Ảnh hưởng hàm lượng nitơ đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 72 h 53 Bảng 3.7 Ảnh hưởng pH ban đầu MT lên hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus sau 72h 54 Bảng 3.8 Ảnh hưởng nhiệt độ MT lên hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus sau 72 h 56 Bảng 3.9 Động học trình lên men sinh tổng hợp chất kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 57 Bảng 3.10 Hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus chiết dung môi hữu từ sinh khối 60 Bảng 3.11 Hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus chiết dung môi hữu từ dịch lên men 61 Bảng 3.12 Tỉ lệ nảy mầm hạt ngâm dịch lên men nồng độ khác 63 Bảng 3.13 Ảnh hưởng dịch lên men lên khả sinh trưởng cà chua 65 Bảng 3.14 Ảnh hưởng dịch lên men đến khả ức chế Fusarium cà chua 67 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Bào tử Fusarium Hình 1.2 Penicillium notatum ức chế phát triển Staphylococus aureus 18 Hình 1.3 Vị trí tác động kháng sinh 20 Hình 1.4 Cấu trúc kasugamyxin 22 Hình 1.5 Cấu trúc polioxin 23 Hình 1.6 Cấu trúc blastixidin S 23 Hình 1.7 Cấu trúc validamyxin A 24 Hình 3.1 Hình thái khuẩn lạc số chủng xạ khuẩn phân lập 40 Hình 3.2 Hoạt tính kháng Fusarium chủng XK tuyển chọn 42 Hình 3.3 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc chủng xạ khuẩn D7 43 Hình 3.4 Hệ sợi chủng D7 43 Hình 3.5 Cuống sinh bào tử bào tử chủng D7 43 Hình 3.6 Kết giải trình tự ARNr 16S chủng D7 44 Hình 3.7 Biểu đồ ảnh hưởng thành phần MT đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus theo thời gian 47 Hình 3.8 Hoạt tính kháng Fusarium chủng D7 loại MT sau 72 h nuôi cấy 48 Hình 3.9 Ảnh hưởng nguồn cacbon đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 49 Hình 3.10 Đồ thị ảnh hưởng hàm lượng cacbon đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus sau 72 h 51 Hình 3.11 Biểu đồ ảnh hưởng nguồn nitơ đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus sau 72h 52 Hình 3.12 Đồ thị ảnh hưởng hàm lượng nitơ đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 53 Hình 3.13 Ảnh hưởng pH ban đầu MT lên hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus 55 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Bảng so sánh trình tự ARN 16S chủng D7 với ngân hàng gen NCBI Streptomyces pseudogriseolus strain NBRC 12902 16S ribosomal RNA gene, partial sequence Sequence ID: ref|NR_112329.1|Length: 1477Number of Matches: Related Information Range 1: 32 to 1391GenBankGraphicsNext MatchPrevious Match Alig nment stati sti cs fo r matc h #1 Score Expect Identities Gaps 2512 bits(1360) 0.0 1360/1360(100%) 0/1360(0%) Plus/Plus Query Strand AGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGC 63 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 32 AGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGC 91 Query 64 AATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACTGATCA |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| 123 Sbjct 92 AATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACTGATCA 151 Query 124 TCTTGGGCATCCTTGGTGATCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCA 183 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 152 TCTTGGGCATCCTTGGTGATCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCA 211 Query 184 GCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGA 243 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 212 GCTTGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGA 271 Query 244 CCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATA 303 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 272 CCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATA 331 Query 304 TTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGT 363 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 332 TTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGT 391 Query 364 TGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGG 423 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 392 TGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGG 451 Query 424 CTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTG 483 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 452 CTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTG 511 Query 484 GGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCGCGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCC 543 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 512 GGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCGCGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCC 571 Query 544 GGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGT 603 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 572 GGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGT 631 Query 604 AGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCG 663 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 632 AGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCG 691 Query 664 ATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCC 723 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 692 ATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCC 751 Query 724 ACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCGACATTCCACGTCGTCCGTGCCGCAGCTA 783 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 752 ACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCGACATTCCACGTCGTCCGTGCCGCAGCTA 811 Query 784 ACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGAC 843 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 812 ACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGAC 871 Query 844 GGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTAC 903 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 872 GGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTAC 931 Query 904 CAAGGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCCCTTGTGGTCGGTGTACA 963 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 932 CAAGGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCCCTTGTGGTCGGTGTACA 991 Query 964 GGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG 1023 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 992 GGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAG 1051 Query 1024 CGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACC 1083 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1052 CGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACC 1111 Query 1084 GCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTT 1143 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1112 GCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTT 1171 Query 1144 GGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGA 1203 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1172 GGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGA 1231 Query 1204 ATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGA 1263 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1232 ATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGA 1291 Query 1264 GTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACA 1323 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1292 GTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACA Query 1324 CCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCG 1363 |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||| Sbjct 1352 CCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCG 1391 1351 Phụ lục 2: Ảnh hưởng MT Guaze – đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus theo thời gian Chủng S pseudogriseolus MT Guaze - Hoạt tính kháng Fusarium Trung Độ lệch Lần Lần Lần bình chuẩn 24 h 2,16 2,50 2,04 2,23 0,14 48 h 13,60 12,90 13,01 13,17 0,31 72 h 21,00 22,05 23,00 22,02 0,82 96 h 20,00 19,09 20,90 20,00 0,74 120 h 8,30 8,10 8,35 8,25 0,11 144 h 6,16 6,10 6,15 6,14 0,03 Phụ lục 3: Ảnh hưởng MT Guaze – đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus theo thời gian Chủng S Hoạt tính kháng Fusarium pseudogriseolus ( D – d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn MT Guaze - Lần Lần Lần 24 h 1,02 1,93 0,90 1,28 0,46 48 h 9,60 9,01 9,22 9,28 0,24 72 h 19,30 19,70 21,01 20,00 0,73 96 h 16,60 15,90 16,70 16,40 0,36 120 h 12,70 12,40 12,40 12,50 0,14 144 h 4,48 4,60 4,00 4,36 0,26 Phụ lục 4: Ảnh hưởng MT ISP – đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus theo thời gian Chủng S Hoạt tính kháng Fusarium pseudogriseolus (D – d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn MT ISP - Lần Lần Lần 24 h 0,59 0,98 1,00 0,86 0,19 48 h 4,69 5,02 3,59 4,43 0,61 72 h 20,40 21,30 18,60 20,10 1,12 96 h 12,80 11,90 10,80 11,83 0,82 120 h 6,90 5,70 6,50 6,37 0,50 144 h 3,10 2,80 1,90 2,60 0,51 Phụ lục 5: Ảnh hưởng MT ISP – đến hoạt tính kháng nấm Fusarium chủng S pseudogriseolus theo thời gian Chủng Hoạt tính kháng Fusarium S pseudogriseolus (D – d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn MT ISP - Lần Lần Lần 24 h 4,01 2,90 3,20 3,37 0,47 48 h 6,40 5,90 6,20 6,17 0,21 72 h 19,20 20,80 20,00 20,00 0,65 96 h 16,10 14,70 15,70 15,50 0,59 120 h 9,00 7,20 8,00 8,07 0,74 144 h 4,90 7,10 5,50 5,83 0,93 Phụ lục 6: Ảnh hưởng nguồn cacbon đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus Nguồn Cacbon Saccarozơ Glucozơ Lactozơ Tinh bột tan Hoạt tính kháng Fusarium (D – d, mm) Lần Lần Lần 18,02 20,00 19,02 18,00 16,01 15,50 16,80 19,00 18,20 23,01 22,90 23,09 Trung bình Độ lệch chuẩn 19,01 16,50 18,00 23,00 0,81 1,08 0,91 0,08 Phụ lục 7: Ảnh hưởng hàm lượng cacbon đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus Hàm lượng cacbon (g) 16 18 20 22 24 Hoạt tính kháng Fusarium (D –d, mm) Lần Lần Lần 10,01 9,40 9,30 16,00 15,80 18,90 23,01 22,90 23,09 21,00 19,60 19,40 17,00 19,01 18,70 Trung bình Độ lệch chuẩn 9,57 16,90 23,00 20,00 18,24 0,31 1,42 0,08 0,71 0,88 Phụ lục 8: Ảnh hưởng nguồn nitơ đến khả sinh hoạt tính khángFusarium chủng S pseudogriseolus Nguồn Nitơ Cao nấm men Pepton KNO3 (NH4)2SO4 NH4Cl Hoạt tính kháng Fusarium (D – d, mm) Lần Lần Lần 10,01 8,20 8,50 14,00 14,20 12,60 23,01 22,90 23,40 18,00 19,80 18,90 18,00 17,00 14,90 Trung bình Độ lệch chuẩn 8,90 13,60 23,10 18,90 16,63 0,79 0,71 0,21 0,73 1,29 Phụ lục 9: Ảnh hưởng hàm lượng nitơ đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus Hàm lượng nitơ (g) Hoạt tính kháng Fusarium (D – d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn Lần Lần Lần 0,03 8,90 8,20 8,50 8,53 0,29 0,04 17,80 16,20 18,00 17,33 0,81 0,05 23,01 22,90 23,40 23,10 0,21 0,06 23,90 22,90 23,69 23,50 0,43 0,07 25,00 25,10 24,90 25,00 0,08 Phụ lục 10: Ảnh hưởng pH ban đầu đến hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus Hoạt tính kháng Fusarium pH ban đầu (D –d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn Lần Lần Lần 6,0 16,80 15,90 15,30 16,00 0,62 6,5 18,60 18,00 17,70 18,10 0,37 7,0 24,90 24,90 25,50 25,10 0,28 7,5 18,50 20,10 22,00 20,20 1,43 8,0 7,90 11,00 8,20 9,03 1,40 Phụ lục 11: Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt tính khángFusarium chủng S pseudogriseolus Nhiệt độ Hoạt tính kháng Fusarium (D – d,mm) Trung bình Độ lệch chuẩn Lần Lần Lần 25 18,50 17,90 17,60 18,00 0,37 28 19,00 21,00 17,30 19,10 1,51 30 19,70 22,00 21,30 21,00 0,96 35 25,60 24,90 25,39 25,30 0,29 37 17,00 19,00 19,50 18,50 1,08 Phụ lục 12: Khảo sát ảnh hưởng thời gian lên hoạt tính kháng Fusarium chủng XK theo thời gian Thời gian (h) Hoạt tính kháng Fusarium, (D – d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn Lần Lần Lần 12 3,00 2,50 1,50 2,33 0,62 24 4,50 4,80 4,85 4,72 0,15 36 10,80 9,80 9,10 9,90 0,70 48 17,50 16,50 17,00 17,00 0,41 60 18,4 17,0 18,6 18,00 0,71 72 25,8 24,2 25,6 25,20 0,71 84 23,0 25,0 24,8 24,27 0,90 96 23,0 24,0 23,5 23,50 0,41 108 13,3 11,7 11,6 12,20 0,78 120 7,5 6,8 8,3 7,53 0,61 132 6.8 6,9 7,0 6,90 0,08 144 4,0 5,0 2,0 3,67 1,25 Phụ lục 13: Hoạt tính kháng Fusarium chủng S pseudogriseolus chiết dung môi hữu Hoạt tính kháng Fusarium, Nguồn chiết (D –d, mm) Trung Độ lệch bình chuẩn Lần Lần Lần Metanol 20,60 21,30 18,10 20,00 1,37 Etyl axetat 18,40 19,00 17,50 18,30 0,62 Axeton 24,80 23,00 24,20 24,00 0,75 Etanol 25,50 24,60 25,80 25,30 0,51 n – butanol 21,3 20,8 22,3 21,47 0,62 Etyl axetat 23,0 23,2 22,8 23,00 0,39 n – propanol 19,5 18,4 19,1 19,00 0,45 Iso – butanol 18,5 17,8 17,8 18,03 0,33 Sinh khối Dịch lọc Phụ lục 14: Tỉ lệ nảy mầm hạt xử lý dịch lên men chủng S seudogriseolus nồng độ khác Số lần kiểm tra Nồng độ Trung Độ lệch Tỉ lệ % hạt nảy % Lần Lần Lần bình chuẩn Nước cất 145,00 140,00 135,00 140,00 4,08 93,30 140,00 130,00 120,00 130,00 8,16 86,70 10 50,00 56,00 47,00 51,00 3,74 34,00 20 120,00 115,00 125,00 120,00 4,08 80,00 50 20,00 24,00 19,00 21,00 2,16 14,00 100 0,00 0,00 0,00 0,00 4,08 0,00 mầm Phụ lục 15: Thực nghiệm khảo sát khả kháng nấm Fusarium xạ khuẩn cà chua Hình 15.1: Chuẩn bị bầu đất ươm Hình 15.2: Cây cà chua bắt đầu có thật Hình 15.3: Cây cà chua có thật Hình 15.4: Các lô thí nghiệm Phụ lục 16: Ảnh hưởng chất kháng đến khả ức chế Fusarium cà chua Lô TN ĐC ĐC TN TN Số lần lặp lại TN Lần 0,00 25,00 27,00 17,00 Lần 0,00 43,00 19,00 16,00 Lần 0,00 40,00 26,00 18,00 Trung bình Độ lệch chuẩn 0,00 36,00 24,00 17,00 0,00 7,87 3,56 0,82 [...]... loài có khả năng sinh chất kháng sinh cao, trong đó có nhiều chất kháng sinh có khả năng chống nấm mạnh Từ những lí do trên, với mong muốn tìm hiểu và khai thác nguồn tài nguyên VSV vô cùng phong phú của Việt Nam, chúng tôi quyết định thực hiện đề tài nghiên cứu: 2 Nghiên cứu một số chủng xạ khuẩn sinh hoạt chất kháng nấm Fusarium gây hại trên cây cà chua (Lycopersicon esculentum Mill. ) 2 Mục tiêu Thu... chất kháng Fusarium gây bệnh trên cây cà chua từ chủng xạ khuẩn tuyển chọn 3 Nội dung nghiên cứu - Phân lập và tuyển chọn chủng XK có khả năng sinh hoạt chất kháng nấm Fusarium cao từ đất trồng cà chua tại Ấp Long Giêng, xã Phước Hậu, huyện Cần Giuộc, tỉnh Long An - Nghiên cứu đặc điểm sinh học và phân loại đến loài của chủng XK tuyển chọn - Khảo sát điều kiện lên men thích hợp cho việc sinh chất kháng. .. trừ bệnh hại cây trồng trong nông nghiệp hiện nay Trong các loại rau màu thì cà chua là loại cây chủ mang những đặc điểm rất thích hợp cho sự gây bệnh của Fusarium 1.1.2 Cây cà chua (Lycopersicon esculentum (L) Mill. ) 1.1.2.1 Đặc điểm sinh học Cây cà chua có tên khoa học là Lycopersicon esculentum (L) Mill. , thuộc họ Cà (Solanaceae), là loại rau ăn quả có nguồn gốc từ Nam Mỹ Cây cà chua là cây dài ngày,... sinh chất kháng Fusarium của chủng XK - Thu nhận chất kháng Fusarium từ chủng XK nghiên cứu - Bước đầu thử nghiệm ứng dụng dịch lên men chất kháng nấm để phòng trừ Fusarium gây bệnh trên cây cà chua 4 Đối tượng nghiên cứu - Các chủng XK phân lập từ đất trồng cà chua, tại Ấp Long Giêng, xã Phước Hậu, huyện Cần Giuộc, tỉnh Long An - Nấm Fusarium do Trường ĐH Nông Lâm cung cấp - Giống cà chua được cung... sợi nấm màu trắng đâm tia, các sợi nấm này nảy sinh sản nhiều hạch nhỏ Hạch nấm tồn tại trong đất và có thể xâm nhập trực tiếp với mô cây và gây bệnh cho cây Nấm này gây bệnh trên nhiều loại cây trồng Đặc biệt, chúng gây hại trên cây cà chua và cây lạc ở miền Bắc Việt Nam vào thời điểm trước khi thu hoạch, lúc đó đất trồng quá ẩm ướt Fusarium là một trong những vi nấm gây thiệt hại đến năng suất và chất. .. của dịch lên men đến sự phát triển của rễ cây cà chua 66 Hình 3.23 Cây cà chua sinh trưởng bình thường sau thời gian 68 Hình 3.24 Cây cà chua bị nhiễm Fusarium sau thời gian 68 Hình 3.25 Cây cà chua sau 4 tuần ở lô ĐC 1 69 Hình 3.26 Cây cà chua sau 4 tuần ở lô ĐC 2 69 Hình 3.27 Cây cà chua sau 4 tuần ở lô TN1 69 Hình 3.28 Cây cà chua sau 4 tuần ở lô TN2 69 1 MỞ... với sự xuất hiện ngày càng nhiều của những VK đa kháng thuốc và sự thiếu hụt của các nhóm kháng sinh mới đòi hỏi các ngành công nghiệp sản xuất kháng sinh phải cải biến những chất kháng sinh cũ và thúc đẩy công tác nghiên cứu để tìm ra những chất kháng sinh mới phù hợp 1.3.2 Cơ chế tác động của chất kháng sinh Cơ chế tác động của chất kháng sinh là những cách thức mà chất kháng sinh tác động lên các... này, năng suất cà chua trung bình hiện nay là 70 tấn/ha/vụ Tuy nhiên, các loại bệnh do vi nấm gây ra đã làm giảm năng suất thu hoạch từ 30-70% trên rau màu Đặc biệt, Fusarium là tác nhân gây bệnh trên rất nhiều loại cây trồng, trong đó có cây cà chua Chúng có thể gây hại trên mọi giai đoạn sinh trưởng của cây cà chua, làm lá biến vàng héo khô dần, cây sinh trưởng yếu và cuối cùng toàn cây bị héo chết... màng sinh chất khiến các ion như Mg2+, K+, Ca2+ thoát ra khỏi tế bào Tóm lại các chất kháng sinh từ XK có đặc điểm chung là có tác dụng ngay cả ở nồng độ rất thấp với hoạt tính mạnh và phổ kháng khuẩn khá rộng Đặc điểm nổi bật của kháng sinh có nguồn gốc từ xạ khuẩn là khả năng bền với nhiệt và tác dụng lên vi sinh vật mang tính chọn lọc 1.3.4 Các chất kháng sinh có khả năng kháng nấm từ xạ khuẩn  Một. .. sinh chất kháng sinh phòng chống bệnh thối rễ và đã áp dụng trên 6 triệu ha trồng 25 bông và đã thu được kết quả khả quan [29] Năm 2002, Ấn Độ đã phân lập chủng Streptomyces sp.201 có khả năng sinh kháng sinh mới là z – methylheptyl iso – nicotinate Chất kháng sinh này có khả năng kháng được nhiều loại nấm gây bệnh như Fusarium oxysporum, F solani gây hại trên rau màu Tại Nhật Bản năm 2003, kháng sinh ... Đặng Đào Ý Đoan NGHIÊN CỨU MỘT SỐ CHỦNG XẠ KHUẨN SINH HOẠT CHẤT KHÁNG NẤM FUSARIUM GÂY HẠI TRÊN CÂY CÀ CHUA (LYCOPERSICON ESCULENTUM MILL. ) Chuyên ngành : Vi sinh vật học Mã số : 60 42 01 07... nấm Fusarium gây hại cà chua (Lycopersicon esculentum Mill. ) Mục tiêu Thu nhận thử nghiệm tác dụng chất kháng Fusarium gây bệnh cà chua từ chủng xạ khuẩn tuyển chọn Nội dung nghiên cứu - Phân... việc sinh chất kháng Fusarium chủng XK - Thu nhận chất kháng Fusarium từ chủng XK nghiên cứu - Bước đầu thử nghiệm ứng dụng dịch lên men chất kháng nấm để phòng trừ Fusarium gây bệnh cà chua