Khóa luận tốt nghiệp TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ………………… NGUYỄN THỊ THÚY ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT ĐỂ NHÂN NHANH CÂY HOA NHÀI NHẬT (BRUNFELDSIA HOPEANA BENTH) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Di truyền học Hà Nội - 2012 Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ………………… NGUYỄN THỊ THÚY ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT ĐỂ NHÂN NHANH CÂY HOA NHÀI NHẬT (BRUNFELDSIA HOPEANA BENTH) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Chuyên ngành: Di truyền học Ngƣời hƣớng dẫn: TS LÊ XUÂN ĐẮC Hà Nội - 2012 Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này, xin chân thành cảm ơn TS Lê Xuân Đắc, Viện Công nghệ sinh học, Viện Khoa học Công nghệ Việt Nam tận tình giúp đỡ, hướng dẫn trình thực đề tài Tôi xin chân thành cảm ơn toàn thể cán Trại Thực nghiệm sinh học - Viện Công nghệ sinh học giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho hoàn thành khóa luận Tôi xin cảm ơn TS Nguyễn Như Toản có đóng góp quý báu trình thực đề tài Tôi xin cảm ơn thầy cô giáo trường Đại học sư phạm Hà Nội truyền đạt khiến thức kinh nghiệm nghiên cứu khoa học cho suốt thời gian thực tập Cuối cùng, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình bạn bè - người động viên, khích lệ giúp đỡ suốt trình học tập thực đề tài Hà Nội, tháng năm 2012 Sinh viên Nguyễn Thị Thúy Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan kết luận văn tốt nghiệp thực, thu thập số liệu từ thực nghiệm qua xử lý thống kê, hoàn toàn chép hay bịa đặt Hà Nội, tháng năm 2012 Sinh viên Nguyễn Thị Thúy Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp MỤC LỤC MỞ ĐẦU 1 Lý chọn đề tài Mục tiêu đề tài Nội dung nghiên cứu Ý nghĩa khoa học ý nghĩa thực tiễn đề tài 4.1 Ý nghĩa khoa học 4.2 Ý nghĩa thực tiễn Địa điểm thời gian nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Các đặc điểm tự nhiên Nhài nhật 1.2 Tình hình sản xuất hoa cảnh giới Việt Nam 1.3 Kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật ứng dụng 1.3.1 Lược sử phát triển 1.3.2 Cơ sở khoa học kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 1.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi cấy in vitro 1.3.4 Các phương pháp nhân giống in vitro 12 1.3.5 Phương pháp nhân đa chồi 16 1.3.6 Thành tựu nuôi cấy mô tế bào thực vật 17 Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp CHƢƠNG: VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1 Vật liệu, địa điểm thời gian nghiên cứu 22 2.1.1 Vật liệu thực vật 22 2.2.1 Dụng cụ, hóa chất 22 2.2 Phương pháp nghiên cứu 22 2.2.1 Khử trùng mẫu 22 2.2.2 Nhân nhanh phương pháp nhân đa chồi 23 2.2.3 Tạo Nhài Nhật in vitro hoàn chỉnh 24 2.2.4 Trồng bầu 26 2.2.5 Thu thập xử lý số liệu 27 CHƢƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28 3.1 Tạo nguyên liệu vô trùng Nhài Nhật 28 3.2 Tạo đa chồi 29 3.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả tạo chồi Nhài Nhật 30 3.2.2 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả tạo đa 31 chồi Nhài Nhật 3.3 Tạo hoàn chỉnh 32 3.3.1 Ảnh hưởng NAA đến khả hình thành rễ Nhài 33 Nhật 3.3.2 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Nhài Nhật Nguyễn Thị Thúy 34 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp 3.3.3 Ảnh hưởng nồng độ MS đến phát triển chồi 35 3.3.4 Ảnh hưởng IBA môi trường NNE2 đến khả tạo rễ 36 3.3.5 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống trồng bầu 37 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 38 Kết luận 38 Kiến nghị 38 PHỤ LỤC 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO 40 Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 3.1: Tỷ lệ mẫu vô trùng mẫu sống 24 Bảng 3.2: Ảnh hưởng BAP đến khả tạo chồi 30 Bảng 3.3: Ảnh hưởng BAP NAA đến khả tạo chồi 31 Bảng 3.4: Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ 32 Nhài Nhật Bảng 3.5: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Nhài 33 Nhật Bảng 3.6: Ảnh hưởng MS đến khả kéo dài chồi 34 Nhài Nhật Bảng 3.7: Ảnh hưởng IBA môi trường NNE2 đến khả 35 tạo rễ Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1: Cây Nhài Nhật Trại thực nghiệm sinh học Hình 3.1: Mẫu vô trùng chồi non 29 Hình 3.2: Tạo đa chồi môi trường NNA3 31 Hình 3.3: Tạo đa chồi môi trường NNB4 32 Hình 3.4: Chồi bị mô sẹo hóa môi trường NNC3 34 Hình 3.5: Chồi bị mô sẹo hóa môi trường NND2 35 Hình 3.6: Sự phát triển chồi môi trường NNE2 36 Hình 3.7: Sự tạo rễ môi trường NNF1 37 Nguyễn Thị Thúy K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 2,4 D 2,4 - Dichlorophenoxy Axetic Axit BAP - Benzyl Amino Purin CTMT Công thức môi trường ĐC Đối chứng IAA Indol - 3- Axetic Axit IBA - Indol Butyric Axit K Kinetin KTST Kích thích sinh trưởng MS Môi trường Murashige Skoog NAA α- Napthalen Axetic Axit TB Trung bình CS Cộng Nguyễn Thị Thúy 10 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp so với với dung dịch javen (13,0%) tỷ lệ mẫu sống có khả tạo chồi tương đối cao (86,9%) (hình 3.1) Như vậy, sử dụng HgCl2 làm dung dịch khử trùng mẫu Nhài Nhật Tuy nhiên, phòng thí nghiệm người ta sử dụng HgCl2 độc, ảnh hưởng tới sức khỏe người môi trường sống Hình 3.1: Mẫu vô trùng chồi non 3.2 Tạo đa chồi Trong môi trường nuôi cấy in vitro, bên cạnh chất đa lượng, vi lượng, vitamin bổ sung nhiều loại kích thích sinh trưởng thuộc nhóm auxin, cytokinin, gibberellin cần thiết để kích thích sinh trưởng, phát triển phân hóa quan cung cấp dinh dưỡng cho mẫu phát triển Tuy nhiên yêu cầu với chất thay đổi tùy theo loài cây, loại mô, mục đích nghiên cứu Đặc biệt, việc sử dụng tổ hợp chất kích thích sinh trưởng môi trường nuôi cấy tỏ hiệu so với sử dụng chất riêng biệt Mặt khác hệ thống nuôi cấy, tỷ lệ auxin/cytokinin có ý nghĩa quan trọng phát sinh hình thái mô nuôi cấy Nguyễn Thị Thúy 39 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Việc tìm công thức môi trường với nồng độ tỷ lệ chất kích thích sinh trưởng phù hợp cho loại cây, giai đoạn nuôi cấy sở cho nghiên cứu định thành bại trình nhân giống trồng in vitro 3.2.1 Ảnh hưởng BAP đến khả tạo chồi Nhài Nhật Để đánh giá khả tạo đa chồi Nhài Nhật, sử dụng BAP nồng độ khác nhau, kết thu bảng 3.2 cho thấy tất môi trường cho tỷ lệ mẫu tạo chồi 100% Bảng 3.2: Ảnh hưởng BAP đến khả tạo chồi BAP Tỷ lệ mẫu tạo Số chồi / (mg/l) chồi (%) mẫu ĐC 100 2,00 NNA1 0,1 100 3,25 + NNA2 0,3 100 3,67 + NNA3 0,5 100 4,58 + NNA4 0,7 100 4,31 ++ NNA5 0,9 100 4,16 +++ CTMT Mô sẹo Ghi chú: +: Mô sẹo nhỏ; + +: Mô sẹo trung bình; + + +: Mô sẹo nhiều Ở môi trường NNA4, NNA5 cho hệ số tạo đa chồi đạt là: 4,31 4,16 hai loại môi trường có tượng mô sẹo hóa phía gốc chồi nhiều Còn môi trường NNA1, NNA2 cho hệ số tạo chồi là: 3,25 3,67, có mô sẹo hình thành gốc chồi Trong môi trường NNA3 cho hệ số tạo chồi cao 4,58; qua quan sát nhận thấy mô sẹo xuất gốc chồi số chồi dài mm nhiều (hình 3.2) Vì thí nghiệm chọn môi trường thích hợp tạo đa chồi NNA3 Nguyễn Thị Thúy 40 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.2: Tạo đa chồi môi trường NNA3 3.2.2 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả tạo đa chồi Khi sử dụng tổ hợp chất KTST BAP NAA kết thu bảng 3.3 cho thấy, công thức môi trường mẫu tạo đa chồi (hình 3.3) Bảng 3.3: Ảnh hưởng BAP NAA đến khả tạo chồi Số chồi / mẫu Mô sẹo (mg/l) Tỷ lệ mẫu tạo chồi (%) 0 100 2,0 + NNB1 0,1 0,1 100 3,15 ++ NNB2 0,3 0,1 100 3,69 +++ NNB3 0,5 0,1 100 4,55 +++ NNB4 0,7 0,1 100 4,86 +++ NNB5 0,9 0,1 100 4,29 +++ CTMT BAP NAA (mg/l) ĐC Ghi chú: +: Mô sẹo nhỏ; + +: Mô sẹo trung bình; + + +: Mô sẹo nhiều Nguyễn Thị Thúy 41 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Hệ số nhân chồi thấp môi trường NNB1 3,15, chồi phát triển bình thường, mô sẹo quanh gốc nhỏ Ở môi trường lại NNB2, NNB3, NNB4 NNB5 có số chồi 3,69; 4,55; 4,86 4,29 Hình 3.3: Tạo đa chồi môi trường NNB4 Qua theo dõi đánh giá thấy nhân đa chồi môi trường có NAA BAP hệ số tạo đa chồi tương đối cao so với môi trường có BAP trên, hầu hết công thức môi trường mẫu bị mô sẹo hóa mạnh, chồi nhỏ li ti nhiều, chồi nhanh bị vàng phát triển Tổng hợp kết hai thí nghiệm trên, bước đầu thấy môi trường NNA3 môi trường thích hợp để tạo đa chồi Nhài Nhật 3.3 Tạo hoàn chỉnh Ra rễ khâu cuối giai đoạn nghiên cứu in vitro Chất kích thích sinh trưởng dùng chủ yếu giai đoạn thuộc nhóm auxin IBA NAA chất kích thích chủ yếu tác động lên trình phân chia tế bào hình thành rễ Nguyễn Thị Thúy 42 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp 3.3.1 Ảnh hưởng NAA đến khả hình thành rễ Nhài Nhật Các chồi Nhài Nhật nuôi cấy môi trường có chứa NAA nồng độ khác để nghiên cứu ảnh hưởng đến hình thành rễ Bảng 3.4: Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Nhài Nhật Tổng số rễ/mẫu Mô sẹo ( mg/l ) Tỷ lệ chồi rễ ( % ) ĐC 100 0 NNC1 0,1 100 ++ NNC2 0,2 100 ++ NNC3 0,3 100 +++ NNC4 0,4 100 +++ NNC5 0,5 100 +++ CTMT NAA Ghi chú: + +: Mô sẹo trung bình; + + +: Mô sẹo nhiều Kết thu bảng 3.4 cho thấy bổ sung NAA để kích thích tạo rễ Nhài Nhật không thu kết quả, 100% mẫu không tạo rễ, tất mẫu bị mô sẹo hóa mạnh (hình 3.4) Như vậy, NAA chất kích thích tạo rễ lại mẫn cảm Nhài Nhật, cần tiếp tục nghiên cứu kỹ ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ phát triển Nhài Nhật nuôi cấy ống nghiệm Nguyễn Thị Thúy 43 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.4: Chồi bị mô sẹo hóa môi trường NNC3 3.3.2 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Nhài Nhật Cũng thí nghiệm tiến hành thí nghiệm ảnh hưởng IBA với nồng độ khác đến khả hình thành rễ Nhài Nhật, kết thu bảng 3.5 Bảng 3.5: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Nhài Nhật CTMT IBA ( mg/l) Tỷ lệ chồi rễ( % ) Tổng số rễ / mẫu Mô sẹo ĐC 100 0 NND1 0,5 100 ++ NND2 0,6 100 ++ + NND3 0,7 100 +++ NND4 0,8 100 +++ NND5 0,9 100 +++ Ghi chú: + +: Mô sẹo trung bình; + + +: Mô sẹo nhiều ; Nguyễn Thị Thúy 44 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Hình 3.5: Chồi bị mô sẹo hóa môi trường NND2 3.3.3 Ảnh hưởng nồng độ MS đến phát triển chồi Theo nghiên cứu trước đây, nồng độ muối khoáng đa lượng ảnh hưởng lớn đến khả phát triển Vì vậy, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng nồng độ dung dịch MS với nồng độ khác đến khả kéo dài chồi, kết thu bảng 3.6: Bảng 3.6: Ảnh hưởng MS đến khả kéo dài chồi Nhài Nhật CTMT MS Chất lượng chồi ĐC 1,0 + NNE1 0,7 ++ NNE2 0,5 +++ NNE3 0,3 ++ NNE4 0,1 + Ghi chú: +: chồi ngắn; + +: chồi dài trung bình; + + +: chồi dài Nguyễn Thị Thúy 45 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Kết trình bày bảng 3.6 cho thấy, tất công thức môi trường chồi phát triển Tuy nhiên môi trường NNE2 có nồng độ 0,5 MS chất lượng chồi tốt nhất, qua quan sát thấy chồi kéo dài (khoảng 1- 2cm), có màu xanh đậm (hình 3.6) Hình 3.6: Sự phát triển chồi môi trường NNE2 3.3.4 Ảnh hưởng IBA môi trường NNE2 đến khả tạo rễ Chúng sử dụng môi trường NNE2 để tiếp tục nghiên cứu khả tạo rễ chồi kết hợp với IBA nồng độ khác Kết thu bảng 3.7 Bảng 3.7: Ảnh hưởng IBA môi trường NNE2 đến khả tạo rễ CTMT IBA ( mg/l) số mẫu tạo rễ Mô sẹo ĐC 0 NNF1 0,5 ++ NNF2 0,6 ++ + NNF3 0,7 +++ NNF4 0,8 +++ NNF5 0,9 +++ Nguyễn Thị Thúy 46 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ghi chú: + +: Mô sẹo trung bình; + + +: Mô sẹo nhiều Khi sử dụng môi trường NNE2 kết hợp với IBA nồng độ khác kết thu có chồi tạo rễ, chồi có rễ công thức môi trường NNF1, qua quan sát chồi tạo rễ bị mô sẹo hóa cao (hình 3.7) chưa thích hợp để tạo hoàn chỉnh Các công thức lại khả tạo rễ chồi bị mô sẹo hóa nhiều Như vậy, sử dụng môi trường NNE2 để tiếp tục nghiên cứu khả tạo rễ Nhài Nhật kết hợp bổ sung chất KTST nồng độ thích hợp Hình 3.7: Sự tạo rễ môi trường NNF1 3.3.5 Ảnh hưởng giá thể đến tỷ lệ sống trồng bầu Do thời gian thực đề tài có hạn nên chưa tạo hoàn chỉnh, chưa có để thực thí nghiệm Nguyễn Thị Thúy 47 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận - Đã tạo mẫu Nhài Nhật vô trùng ống nghiệm sử dụng chất khử trùng HgCl2 0,1% 10 phút - Đã xác định môi trường tạo đa chồi NNA3 với nồng độ 0,5mg/l BAP - Bước đầu xác định môi trường NNE2 có nồng độ 0,5 MS để nuôi cấy kéo dài chồi Nhài Nhật Kiến nghị Cần tiếp tục nghiên cứu hoàn thiện điều kiện nuôi cấy Nhài Nhật in vitro để nhân nhanh phục vụ sản xuất Nguyễn Thị Thúy 48 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp PHỤ LỤC Thành phần môi trƣờng MS (Murahige Skoog, 1962) STT Thành phần Nồng độ Muối khoáng NH4NO3 1650 mg/l KNO3 1900 mg/l CaCl2.2H2O 440 mg/l MgSO4 370 mg/l KH2PO4 170 mg/l H3BO3 6,2 mg/l MnSO4.4H2O 22,3 mg/l ZnSO4.7H2O 8,6 mg/l KI 0,83 mg/l 10 Na2MoO4.2H2O 0,25 mg/l 11 CuSO4.5H2O 0,025 mg/l 12 CoCl2.6H2O 0,025 mg/l 13 Na2EDTA 37,3 mg/l 14 FeSO4.7H2O 27.8 mg/l Các chất hữu vitamin 15 Myo – Inositol 100 mg/l 16 Nicotinic acid 0,5 mg/l 17 Vitamin B1 0,5 mg/l 18 Vitamin B6 0,1 mg/l 19 Glycine 2,0 mg/l 20 Sucrose 30 g/l 21 Agar g/l Nguyễn Thị Thúy 49 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội, (1997), “Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng”, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Thanh Danh, Lê Xuân Đắc, Lê Thị Xuân (2005), Kết bước đầu nhân giống in vitro Vù hương kỹ thuật nuôi cấy phôi hạt xanh góp phần bảo tồn đa dạng sinh học Những vấn đề sống khoa học sống, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc 2005, Hà Nội 03/11/2005, NXB Khoa học Kỹ thuật, 450-453 Trịnh Đình Đạt (2008), Công nghệ sinh học, tập 4, Nxb Giáo Dục Lê Hồng Điệp, Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng (2005), Công nghệ sinh học, tập 2, Nxb Giáo Dục, Hà Nội Đỗ Xuân Đồng, Chu Hoàng Hà, Lê Trần Bình (2007), Nghiên cứu quy trình tái sinh hệ thống chuyển gen cho số giống cà chua (Lycopersicon esculentum L.) Việt Nam Tạp chí Công nghệ Sinh học, 5(2): 217-223 Lê Văn Hoàng (2007), Công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật, NXB Khoa học Kỹ thuật Huỳnh Văn Kéo, Ngô Viết Nhơn (2006), Nghiên cứu bảo tồn nguồn gen thực vật vườn quốc gia Bạch Mã Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 1(2): 127-129 Nguyễn Đức Lượng, Lê Thị Thủy Tiên (2006), Công nghệ tế bào, NXB ĐH Quốc Gia TPHCM Trần Văn Minh, Bùi Thị Tường Thu (2003), Ứng dụng công nghệ tế bào thực vật phục hồi loài gỗ quý Giá tỵ Những vấn đề sống khoa học sống, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc lần thứ 2, 25-26/7/2003, NXB Khoa học Kỹ thuật, 352-357 Nguyễn Thị Thúy 50 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp 10 Trần Văn Minh, Bùi Thị Tường Thu (2003), Ứng dụng công nghệ tế bào thực vật phục hồi loài đặc sản Trầm hương Những vấn đề sống khoa học sống, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc lần thứ 2, 25-26/7/2003, NXB Khoa học Kỹ thuật, 358-361 11 Hoàng Thị Nga (2011), Ứng dụng Công nghệ tế bào thực vật vào quy trình nhân nhanh hoa Đồng tiền, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 12 Nguyễn Hoàng Nghĩa (1997), Bảo tồn nguồn gen trồng, NXB Nông Nghiệp Hà Nội 13 Nguyễn Thị Quỳnh, Phan Vũ Tiên, Trịnh Việt Nga (2003), Nuôi cấy mô quang tự dưỡng Lõi thọ (Gmelina arbrea Roxb) Những vấn đề sống khoa học sống, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc lần thứ 2, 25-26/7/2003, NXB Khoa học Kỹ thuật, 394-397 14 Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005), Giáo trình Công nghệ sinh học nông nghiệp, NXb Nông Nghiệp Hà Nội 15 Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật - Nghiên cứu ứng dụng, Nxb Nông nghiệp Hà Nội 16 Lưu Trường Sinh, Hoàng Văn Lương (2005), Nghiên cứu hoàn thiện quy trình nhân nhanh Trinh nữ hoàng cung phương pháp in vitro Những vấn đề sống khoa học sống, Báo cáo khoa học Hội nghị toàn quốc 2005, Hà Nội 3/11/2005, NXB Khoa học Kỹ thuật, 722-724 17 Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông nghiệp Hà Nội 18 Vũ Văn Vụ (1998), Sinh lý thực vật ứng dụng, Nxb Giáo Dục Hà Nội 19 Vũ Văn Vụ, Vũ Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học (tập 2), NXB Giáo dục Hà Nội Tài liệu tiếng Anh Nguyễn Thị Thúy 51 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp 20 Balaraju K, Agastian P, Preetamraj JP, Arokiyaraj S, Ignaciumthu S (2008), Micropropagation of Vitex agnuscatus (Verbenaceae) - Avaluable medicinal plant In vitro Cellular & Developmental Biology - Plant, 44(5): 436-411 21 Bedir E, Lata H, Schaneberg B, Khan IA, Morase RM (2003), Micropropagation of Hydrastis canadensis: Goldenseal a North American endangered species, Planta Med, 86-88 22 Catherine AO, Joanne LT (1998), Tissue culture of Grevillea species at mount Annan Botanic Gardens The Grevillea Book (1), Kangaroo Press, Sydney, Australia 23 George EF (1993), Plant propagation by tissueculture, Exegetics Ltd, Edin 24 Havens K, Guerrant E, Maunder M (1999), Strategies for survival: Ex situ Plant conservation Report of a research symposium held at the Chicago Botanic Garden, BG Journal, 3(3) 25 Joshi M, Dhar U (2003), In vitro propagation of Saussurea obvallata Edgew - An endangered ethnoreligious medicinal herb of Himalaya Plant Cell Rep, 21(10): 933-939 26 Mukherjee A, Roy Chowdhury B (2008), The In vitro propagation of a high value medicinal plant: Asparagus racemosus wild In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant, 1(2): 116-119 27 Murashige T, Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiol Plant, 15: 473-497 28 Nandi SK, Kumar A, and Palni L M S (2002), Role of plant tisue culture in biodiversity conservation and economic development, Gyanodaya Prakashan 29 Nishritha B, Sanjay S (2008), In vitro propagation of a high value medicinal plant: Asparagus rasemosus Willd In Vitro Cellular & Developmental Biology-plant, 44(6): 525-532 Nguyễn Thị Thúy 52 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp 30 Park SU, Kim YK, Lee SY (2009), Improved in vitro plant regeneration and micropropagation of Rehmannia glutinosa L Journal of Medicial Plants Research, 3(1): 031-034 31 Pereira AM, Amui SF, Bertoni BW, Moraes RM, Franca SC (2003), Micropropagation of Anemopaegma arvense: Conservation of an endangered madicinal plant Plant Med, 69(6): 571-573 Website 32 http://www.kilobooks.com/threads/62887 33 http://vietbao.vn/Kinh te/Viet-Nam-se-xuat-khau-1-yt-canhhoa 34 http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=news&newsid=35: 35 http://www.rauhoaquavietnam.vn 36 http://www.dalat.gov.vn/rauhoadI/ Nguyễn Thị Thúy 53 K34E Sinh - KTNN [...]... trùng mẫu để đưa vào ống nghiệm -Xác định môi trường thích hợp để tạo đa chồi cây Nhài Nhật -Xác định môi trường thích hợp để tạo rễ cây Nhài Nhật 4 Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài 4.1 Ý nghĩa khoa học Góp phần nghiên cứu khả năng nhân nhanh cây hoa Nhài Nhật bằng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật 4.2 Ý nghĩa thực tiễn Ứng dụng để nhân nhanh hàng loạt cây con để phục vụ và đáp nhu... nhằm tạo ra một quần thể cây con có chất lượng đồng đều về mặt di truyền Xuất phát từ cơ sở trên, chúng tôi tiến hành đề tài: Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật để nhân nhanh cây hoa Nhài Nhật (Brunfeldsia hopeana Benth) ’’ Nguyễn Thị Thúy 11 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp 2 Mục tiêu đề tài Xác định các điều kiện môi trường thích hợp để nhân nhanh cây hoa Nhài Nhật trong ống nghiệm... nuôi cấy bao phấn… Đặc biệt, nhờ kĩ thuật nuôi cấy mô và chuyển gen thông qua giai đoạn mô sẹo và tái sinh tạo chồi mà nhiều giống cây trồng chuyển gen đã được tạo ra (cà chua, lúa, đậu tương, khoai tây, bông, đu đủ ) [12] 1.3.2 Cơ sở khoa học của kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật Cơ sở lý luận của phương pháp nuôi cấy mô và tế bào thực vật đó là tính toàn năng của tế bào do Haberlandt nêu ra vào... nay, nhân nhanh bằng phương pháp nhân chồi bên được áp dụng cho nhiều loài thực vật, quy trình nhân chồi thường được thực hiện theo các bước như sau [7]: Cây tự nhiên Khử trùng mẫu Nhân đa chồi Sơ đồ tổng quát nhân nhanh trong phòng thí nghiệm Trồng cây ngoài Trồng cây trong Tạo cây in vitro tự nhiên bầu hoàn chỉnh 1.3.6 Thành tựu của nuôi cấy mô tế bào thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật. .. phát triển kĩ thuật nuôi cấy tế bào đơn lên một bước mới là tạo được khối mô sẹo từ một tế bào đơn bằng kĩ thuật gieo trải tế bào thực vật trên đĩa thạch như trải tế bào vi sinh vật Cũng năm 1960, Cooking đã dùng men cellulase để phân hủy cellulose của tế bào thực vật và thu được các tế bào trần (protoplast) Nguyễn Thị Thúy 17 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp - Guha và Maheswari (1 96 4) công bố tạo... nghệ sinh học hiện đại, thì kỹ thuật nuôi cấy mô thực vật đã và đang được ứng dụng rộng rãi trong các lĩnh vực nhân nhanh, phục tráng cây trồng, chọn tạo giống chống chịu các bất lợi của môi trường, sản xuất các chất thứ cấp có hoạt tính sinh học cao và nghiên cứu lý luận di truyền thực vật bậc cao Kĩ thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật cho phép nhân nhanh một lượng lớn cây giống trong ống nghiệm trong... Kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật đã trải qua hơn 100 năm phát triển Ngày càng có nhiều ứng dụng và làm sáng tỏ lý thuyết về tính toàn Nguyễn Thị Thúy 15 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp năng của tế bào Có thể thấy sự phát triển của kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật luôn song song với lịch sử các ngành khoa học sự sống khác Các giai đoạn chính của kĩ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật [1],... của tế bào làm cho kích thước tế bào tăng lên Các auxin thường liên quan đến độ dài của thân, đốt, chồi chính, rễ… Đối với nuôi cấy mô tế bào thực vật, auxin được sử dụng cho việc phân chia tế bào và phân hóa rễ Những Auxin được sử dụng rộng rãi trong nuôi cấy mô tế bào thực vật: + IBA (3 -indol Butyric Axit) Nguyễn Thị Thúy 21 K34E Sinh - KTNN Khóa luận tốt nghiệp + IAA (Indol-3-Axetic Axit) + NAA ( -Naptalen... thuật nuôi cấy mô và tế bào thực vật là kĩ thuật điều khiển sự phát sinh hình thái của tế bào thực vật (khi nuôi cấy tách rời trong điều kiện nhân tạo và vô trùng) một cách định hướng Đây là một điểm rất quan trọng bởi vì trên cơ sở đơn vị mô, tế bào, các nhà sinh vật học thực hiện những kĩ thuật tiên tiến cho việc lựa chọn, cải thiện và lai tạo giống cây trồng [1], [10] 1.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến nuôi. .. xây dựng thành công quy trình nhân nhanh cây hoa Đồng tiền bằng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật [11] Những nghiên cứu của Trần Văn Minh và cs cũng đã thành công trong việc nhân giống và bảo tồn nhiều loài cây quý hiếm như: Cây Trầm hương, cây Giá tỵ (Tectona grandis Linn F) và cây Lát hoa Côn Đảo (Chukrasia tabularis A Juss) Thành công trong việc nhân giống in vitro cây Trầm hương có ý nghĩa hết ... ĐẠI HỌC SƢ PHẠM HÀ NỘI KHOA SINH - KTNN ………………… NGUYỄN THỊ THÚY ỨNG DỤNG KỸ THUẬT NUÔI CẤY MÔ VÀ TẾ BÀO THỰC VẬT ĐỂ NHÂN NHANH CÂY HOA NHÀI NHẬT (BRUNFELDSIA HOPEANA BENTH) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP... tựu nuôi cấy mô tế bào thực vật Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật trở thành phương thức quan trọng để nhân nhanh, đặc biệt khó nhân nhanh phương pháp truyền thống Đã có nhiều nghiên cứu ứng dụng. .. truyền Xuất phát từ sở trên, tiến hành đề tài: Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật để nhân nhanh hoa Nhài Nhật (Brunfeldsia hopeana Benth) ’’ Nguyễn Thị Thúy 11 K34E Sinh - KTNN Khóa luận