Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội LỜI CẢM ƠN Bằng tất cả lòng kính trọng, em xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Đinh Thị Kim Nhung đã tận tình hướng dẫn, quan tâm, giúp đỡ em suốt quá trình hoàn thành luận văn này Em xin được gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy Nguyễn Khắc Thanh, thầy Phương Phú Công đã truyền đạt những kiến thức quý báu cũng tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em suốt quá trình học tập và thực hiện đề tài bộ môn Em cảm ơn chân thành tới các bạn cùng nhóm đề tài bộ môn vi sinh, trường Đại học sư phạm Hà Nội đã giúp đỡ nhiệt tình và tạo mọi điều kiện thuận lợi quá trình hoàn thành đề tài nghiên cứu Cuối cùng em xin được cảm ơn gia đình, những người thân, bạn bè đã quan tâm, động viên, giúp đỡ em suốt thời gian qua Em xin chân thành cảm ơn Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên thực hiện Nguyễn Ngọc Mai Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan những gì viết luận văn này đều là sự thật Đây là kết quả nghiên cứu riêng Tất cả các số liệu đều được thu thập từ thực nghiệm, qua xử lý thống kê, không có số liệu chép hay bịa đặt, không trùng với kết quả đã công bố Trong tài liệu này có sử dụng một số tài liệu một số tác giả, xin phép tác giả để bổ sung cho luận văn mình Nếu sai hoàn toàn chịu trách nhiệm Hà Nội, ngày tháng năm 2013 Sinh viên Nguyễn Ngọc Mai Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BC : Bacterial cellulose PMG : Phosphoglucomutase UGP : Glucose-1-phosphate uridylytransferase 1PFK : Fructose-1-phosphate kinase Pru-6-P : Fructose-6-phosphate Glc-1-P : Glucose-1-phosphate UDPGlc : Uridine diphospho glucose GK : Glucokinase FBP : Fructose-1,6-biphosphate phosphatase G6PDH : Glucose-6-phosphate dehydrrogenase PGI : Phosphoglucoisomerase PTS : Hệ thống Phosphotransferase Fru-bi-P : Fructose-1,6-bi-phosphate Glc-6-P : Glucose-6-phosphate PGA : Phosphogluconic acid FK : Fructokinase CS : Cellulose synthate CFU : Clony Forming Unit UV : Ultra Violet VSV : Vi sinh vật Cs : Cộng sự Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Ngày công nghệ sinh học dần trở thành một ngành kĩ thuật chủ đạo nhiều quốc gia thế giới Gắn liền với nó là công nghệ vi sinh với những thành tựu lớn có ý nghĩa đời sống, các ngành công nghiệp, y học Vi khuẩn Gluconacetobacter thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm hiếu khí bắt buộc, hoá dưỡng thuộc chi Acetobacter, họ Acetobacteraceae Khi nuôi cấy vi khuẩn này môi trường dịch lỏng, chúng hình thành bề mặt một lớp màng BC, đó là tập hợp các tế bào vi khuẩn liên kết với phân tử cellulose Màng BC cấu tạo những chuỗi polimer--1,4 glucopyranose không phân nhánh được tổng hợp từ một số loài vi khuẩn nuôi cấy chúng môi trường dịch lỏng Màng BC Gluconacetobacter tạo có cấu trúc hóa học và đặc tính học giống với cellulose thực vật có thêm một số tính chất hóa lý đặc biệt như: độ bền học, đường kính sợi nhỏ, độ tinh khiết cao, tính đàn hồi lớn, khả thấm hút nước nhanh, khả polymer hóa rất lớn Vì vậy BC được ứng dụng rộng rãi thế giới rất nhiều lĩnh vực công nghệ Trên thế giới màng BC đã được ứng dụng rất nhiều các lĩnh vực công nghệ khác nhau: dùng làm màng phân tách cho quá trình xử lí nước, chất mang đặc biệt cho các pin và lượng cho tế bào,dùng làm chất biến đổi độ nhớt sản xuất các sợi truyền quang, làm môi trường chất sinh học, thực phẩm hay thay thế thực phẩm Đặc biệt lĩnh vực y học, màng BC đã được ứng dụng làm da tạm thời thay thế da quá trình điều trị bỏng, loét da, làm mạch máu nhân tạo điếu trị các bệnh tim mạch; làm mặt nạ dưỡng da cho người Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội Ở Việt Nam, việc nghiên cứu và ứng dụng màng BC còn mức độ khiêm tốn, các nghiên cứu ứng dụng mới dừng lại bước đầu nghiên cứu Các kết quả ứng dụng màng BC hầu mới dừng lại điều kiện thí nghiệm Trong những năm gần phòng thí nghiệm Vi sinh Trường Đại học Sư phạm Hà Nội phân lập tuyển chọn được chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC và những nghiên cứu bước đầu cho thấy màng BC từ chủng Gluconacetobacter có khả ứng dụng cho trị bỏng cho thỏ là sở để tạo màng trị bỏng cho người Màng BC hoàn toàn có thể sản xuất nước bằng phương pháp lên men tĩnh vi khuẩn Gluconacetobacter môi trường lỏng Tuy nhiên một vấn đề gặp phải là chủng Gluconacetobacter dễ bị thoái hóa Vì vậy việc không ngừng nâng cao hoạt tính sinh tổng hợp cellulose là rất cần thiết Chính vì lý đó, với mong muốn tuyển chọn được chủng có khả tạo màng BC thời gian nhanh hơn, dai chủng Gluconacetobacter tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu khả tạo màng BC từ chủng Gluconacetobacter tác dụng tác nhân gây đột biến tia UV ” Mục tiêu đề tài Tuyển chọn được chủng đột biến từ chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn Nội dung đề tài 3.1 Xác định thời gian đột biến dưới tác nhân đột biến tia UV 3.2 Gây đột biến và tuyển chọn chủng đột biến 3.3 Xác định sự thay đổi hình dạng tế bào, hình thái khuẩn lạc chủng trước và sau đột biến Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội Ý nghĩa khoa học Chọn chủng sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn Ý nghĩa thực tiễn Tạo màng BC thời gian ngắn nhất và tốt nhất có triển vọng ứng dụng vào một số lĩnh vực cuộc sống, đặc biệt là lĩnh vực y học Điểm Chọn được chủng sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter có khả tạo màng BC thời gian ngắn, dai chủng gớc Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội NỘI DUNG CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Vị trí đặc điểm phân loại Gluconacetobacter sinh giới 1.1.1 Vị trí phân loại Gluconacetobacter sinh giới Theo hệ thống phân loại nhà khoa học Bergey thì Gluconacetobacter thuộc giống Acetobacter, họ Pseudomonadaceae, bộ Pseudomonadales, lớp Schizommycetes Việc phân loại vi khuẩn này còn nhiều tranh cãi, có một số tác giả coi Gluconacetobacter một loài phụ A aceti [17] 1.1.2 Đặc điểm phân loại 1.1.2.1.Đặc điểm hình thái, tế bào học Gluconacetobacter có dạng hình que, thẳng hay cong, kích thước khoảng 2μm, tế bào đứng riêng lẻ xếp thành chuỗi, không có khả di động, không sinh bào tử Các tế bào được bao bọc chất nhày tạo váng nhăn và dày Váng có chứa hemicellulose nên gặp H2SO4 và thuốc nhuộm iôt bắt màu xanh (do phản ứng hemicellulose), chúng có thể tích luỹ 4,5% acid acetic môi trường Khi nồng độ acid acetic quá cao vượt quá giới hạn cho phép, nó ức chế hoạt động vi khuẩn [13] Vi khuẩn Gluconacetobacter thuộc nhóm vi khuẩn Gram âm, hiếu khí bắt buộc, hoá dị dưỡng Tế bào chúng thường tìm thấy giấm, dịch rượu, nước ép hoa quả, đất Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội Hình 1.1 Vi khuẩn Gluconacetobacter 1.2.2.2 Đặc điểm ni cấy Trên mơi trường thạch đĩa, vi khuẩn Gluconacetobacter hình thành khuẩn lạc nhẵn xù xì, rìa mép khuẩn lạc bằng phẳng hay gợn sóng, màu trắng suốt, khuẩn lạc bằng phẳng lồi lên dễ tách khỏi môi trường Vi khuẩn Gluconacetobacter nuôi cấy môi trường lỏng điều kiện tĩnh, chúng hình thành bề mặt môi trường một lớp màng BC Ngược lại điều kiện nuôi lắc, cellulose hình thành dạng hạt nhỏ với kích thước không đều và phân tán môi trường dinh dưỡng tạo những đặc tính hình thái khác hẳn cellulose điều kiện ni cấy tĩnh 1.1.2.3 Đặc điểm sinh lý, sinh hố Đặc điểm sinh lý: Vi khuẩn Gluconacetobacter phát triển nhiệt độ 25 - 350C, pH: - Nhiệt độ và pH tối ưu tuỳ thuộc vào giống Ở 370C, tế bào suy thối hồn toàn cả môi trường tối ưu Tuy nhiên vẫn còn những ý kiến khác Nguyễn Ngọc Mai K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội và nhiều tranh cãi về điều kiện nhiệt độ, pH tối thích cho chủng vi khuẩn Gluconacetobacter sinh trưởng và tạo màng Gluconacetobacter có khả chịu được pH thấp, vì thế thường bổ sung thêm acid acetic vào môi trường nuôi cấy để hạn chế sự nhiễm khuẩn lạ Đặc điểm sinh hoá: Năm 1950, Frateur [20] đã chính thức đưa một khóa phân loại mới vào các tiêu chuẩn: Khả oxy hóa acid acetic thành CO2 H2O; hoạt tính catalase; khả sinh trưởng môi trường Hoyer [20]…Theo quan điểm này Gluconacetobacter là chủng thuộc chi họ Acetobacter, Pseudomonadaceae, bộ Pseudomonadales, lớp Schizomycetes Đặc điểm phân biệt với các chủng khác cùng một chi được trình bày bảng 1.1 dưới [20] : Bảng 1.1 Đặc điểm sinh hoá chủng vi khuẩn Gluconacetobacter theo Frateur (1950) STT Đặc điểm Hiện tượng Oxy hoá ethanol thành acid acetic Hoạt tính catalase Sinh trưởng môi trường Hoyer Chuyển hoá glycerol thành dihydroxyaceton Chuyển hoá glucose thành acid Kiểm tra khả sinh sắc tố nâu Kiểm tra khả tổng hợp cellulose Chuyển hoá môi trường chứa Bromphenol Blue 0,04% từ màu xanh sang màu vàng Hiện tượng sủi bọt khí Nguyễn Ngọc Mai Kết quả + + Sinh khối không phát triển _ Tạo kết tủa đỏ gạch dịch sau lên men + Vòng sáng xuất hiện xung quanh khuẩn lạc môi trường chứa CaCO3 + Không hình thành sắc tố nâu _ Váng vi khuẩn xuất hiện màu lam + 10 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội 2.2.4 Phương pháp tốn học Xử lý thớng kê các kết quả thí nghiệm theo một số phương pháp cuốn “Ứng dụng tin học sinh học” [11], và “Thống kê và ứng dụng” [15] như: * Số trung bình cộng: Dùng để tính giá trị trung bình các lần lặp lại X= thí nghiệm: n åX n i =1 i n * Trung bình bình phương các sai lệch:  (X i 1  X )2 n 1 d ±m = n * Sai số đại diện trung bình cộng: * Hệ số biến thiên trung bình cộng: i Cv  x100 X * Tính giá trị trung bình cộng tổng thể: Theo công thức: n M= Trong đó: Xi å i =1 n M: Giá trị trung bình tổng thể Xi: Giá trị kết quả thí nghiệm n: Số lần thí nghiệm Nguyễn Ngọc Mai 24 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội CHƢƠNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Xác định thời gian gây đột biến phù hợp Chúng tiến hành đột biến bằng cách đặt mẫu cần đột biến cách đèn UV có bước sóng 253,7nm là 15cm các thời gian khác Kết quả thể hiện qua bảng 3.1 Bảng 3.1 Ảnh hưởng thời gian tác động tia UV đến khả sinh trưởng vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 Thời gian đột biến (phút) Khả mọc vi khuẩn ++++ ++ + - Chú thích: ++++: Mọc tốt (mật độ khuẩn lạc >30CFU/đĩa) ++ : Mọc (mật độ khuẩn lạc từ - 10 CFU/đĩa petri) + : Mọc yếu (mật độ khuẩn từ 1-3 CFU/đĩa petri) - : Không mọc 50% số đĩa petri Nhận xét 1: Tại thời điểm phút số lượng khuẩn lạc mọc tốt, tại thời điểm phút, khả sống sót vi khuẩn khá, tại thời điểm phút số lượng khuẩn lạc mọc yếu nhất Ở thời gian phút, không một tế bào nào vi khuẩn sống sót, nhiên tác động tia UV dưới phút thì chúng vẫn mọc Qua bảng số liệu ta thấy , thời gian tác động tia UV càng dài thì càng ảnh hưởng càng mạnh tới khả sống sót vi khuẩn.Vậy chứng tỏ tại thời điểm phút chính là ranh giới sự đột biến và không đột biến nên quyết định chọn chủng đột biến với thời gian đột biến là phút với khoảng Nguyễn Ngọc Mai 25 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội cách đèn tử ngoại 15 cm là thích hợp cho quá trình tác động tia UV đối với vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 nhằm thu được dòng đột biến Có thể giải thích điều này sức sống các tế bào vi khuẩn là khác nên chúng chống chịu khác đối với tia tử ngoại 3.2 Tuyển chọn chủng sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter BHN2 có khả tạo màng BC Bảng 3.2 Khả tạo màng BC chủng sau đột biến tia UV từ chủng Gluconacetobacter BHN2 STT Kí hiệu chủng Thời gian tạo màng Khả tạo màng (giờ) ĐB1 75 + ĐB2 - - ĐB3 50 + ĐB4 - - ĐB5 - - ĐB6 48 + ĐB7 51 + ĐB8 - - ĐB9 78 + 10 ĐB10 - - Chú thích: + : Tạo màng - : Không tạo màng Nhận xét 1: Như vậy, qua đột biến chúng thu được 10 chủng là: ĐB1, ĐB2, ĐB3, ĐB4, ĐB5, ĐB6, ĐB7, ĐB8, ĐB9, ĐB10 Kiểm tra khả tạo màng 10 chủng thì thu được chủng ĐB1, ĐB3, ĐB6, ĐB7, ĐB9 có Nguyễn Ngọc Mai 26 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội khả tạo màng còn các chủng còn lại mất hoạt tính không còn khả tạo màng Giải thích nguyên nhân các chủng sau đột biến mất khả tạo màng: Tia UV đã tác động vào bộ máy di truyền vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 làm thay đổi đoạn gen mã hóa khả tạo màng các chủng BHN2 Do vậy gen mã hóa tạo màng bị thay đổi dẫn tới mất khả tạo màng các chủng đột biến Tôi tiến hành thử khả tạo màng lần hai đồng thời kiểm tra sự ổn định khả tạo màng và tính chất màng các chủng đột biến này Kết quả thu được được thể hiện bảng 3.3 và 3.4 Bảng 3.3 Khả tạo màng BC chủng tuyển chọn lần thứ sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter BHN2 STT Kí hiệu chủng Thời gian tạo màng Tính chất màng (giờ) ĐB1 ĐB3 ĐB6 ĐB7 51 ĐB9 78 2,5 giờ 75 1,5 Dai, nhẵn giờ Mỏng, Dễ rách 50 48 Dai, nhẵn Dai, nhẵn Mỏng, không đồng đều Nhận xét 2: Qua tuyển chọn lần thứ nhất chọn được chủng đột biến là ĐB1, ĐB3, ĐB6, ĐB7, ĐB9 có khả tạo màng thời gian khác và tính chất màng khác đó có chủng tạo màng có tính chất mỏng, dễ rách và không đồng đều nên chọn chủng đột biến còn lại Nguyễn Ngọc Mai 27 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội là ĐB1, ĐB6, ĐB7 tạo màng có tính chất dai và nhẵn để tuyển chọn và thử khả tạo màng lần thứ Bảng 3.4 Khả tạo màng BC chủng tuyển chọn lần thứ hai sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter BHN2 STT Kí hiệu chủng Thời gian tạo màng ĐB1 ĐB6 48 ĐB7 61 74 Tính chất màng 1,5 giờ Dai, nhẵn Dai, nhẵn Dai, nhẵn giờ Bảng 3.5 Biểu đồ đánh giá khả tạo màng chủng sau đột biến qua lần tuyển chọn h 80 70 Dai 60 50 Mỏn 40 30 20 Loại ĐB 10 ĐB Nguyễn Ngọc Mai ĐB ĐB 28 ĐB ĐB K35C Khoa Sinh-KTNN Mỏn đồn Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội Nhận xét 3: Kiểm tra khả tạo màng 10 chủng qua lần tuyển chọn thì thu được chủng ĐB1, ĐB6, ĐB7 đó chủng ĐB1, ĐB7 tạo màng có tính chất dai và nhẵn thời gian tạo màng dài và không ổn định, còn chủng ĐB6 tạo màng thời gian ngắn chủng gốc và ổn định, màng tạo thành cũng có tính chất dai và nhẵn nên quyết định chọn chủng ĐB6 làm đới tượng nghiên cứu tiếp tục ĐB6 Hình 3.1 Khả tạo màng chủng ĐB6 Hình 3.2 Màng BC tạo từ chủng ÐB6 Nguyễn Ngọc Mai 29 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội 3.3 Xác định biến đổi hình dạng tế bào, hình thái khuẩn lạc chủng trƣớc sau đột biến 3.3.1 Hình thái khuẩn lạc Khi sinh trưởng bề mặt môi trường đặc chủng vi khuẩn ĐB6 có các tính chất không khác nhiều so với khuẩn lạc ban đầu lúc chưa đợt biến Hình A Hình B Hình 3.3 Khuẩn lạc Gluconacetobacter BHN2 trước (hình A) sau đột biến (hình B) tia UV thời gian phút 3.3.2 Hình thái tế bào Để xác định sự thay đổi hình dạng tế bào và hình thái khuẩn lạc Nguyễn Ngọc Mai 30 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội chủng vi khuẩn Gluconacetobacter sau đột biến chúng tiến hành nhuộm tế bào quan sát Hình A Hình B Hình 3.4 Hình thái tế bào vi khuẩn Gluconacetobacter BHN2 trước đột biến (A) sau đột biến (B) Bảng 3.6 Điểm sai khác chủng ban đầu chủng sau đột biến Gluconacetobacter BHN2 Nguyễn Ngọc Mai 31 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Điểm sai khác Hình thái Thời gian quan khuẩn lạc sát rõ khuẩn Ðại học Sư phạm Hà Nội Trước đột biến Sau đột biến (BHN2) (ĐB6) - ngày - ngày lạc Hình dạng Hình tròn, nhẵn Hình tròn, nhẵn xù xì Mép bằng phẳng xù xì Mép bằng phẳng gợn sóng Hình thái gợn sóng Màu sắc Trắng trắng sữa Trắng trắng sữa Hình dạng Hình que riêng lẻ Hình que riêng lẻ xếp thành chuỗi xếp thành chuỗi tế bào Kích thước 1,5 – 2μm 1,5 – 2μm Nhuộm Gram Bắt màu G - Bắt màu G - Khả sinh Không Không Không Không bào tử Khả di động Nhận xét 1: Từ kết quả ta thấy: Hình thái tế bào và khuẩn lạc chủng trước và sau đột biến có sự khác biệt không đáng kể Chứng tỏ rằng: đột biến bằng tia UV không làm thay đổi hình dạng tế bào và hình thái khuẩn lạc Quá trình đột biến không làm biến đổi chủng mà còn đưa lại kết quả: Chủng đột biến kiểm tra khả tạo màng cho màng BC dai và độ đồng đều cao chủng BHN2 trước đột biến Tuy nhiên quan sát về hình dạng tế bào và hình thái khuẩn lạc chưa đủ để khẳng định chủng Gluconacetobacter BHN2 đã bị đột biến dưới tác động tia UV Cần nghiên cứu và so sánh đặc điểm sinh lý, sinh hóa và đặc điểm sinh học phân tử chủng đột biến và chủng gốc để có được những tiêu cụ thể về sự biến đổi Nguyễn Ngọc Mai 32 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Nguyễn Ngọc Mai 33 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội Kết luận 1.1 Đã xác định được thời gian đột biến thích hợp là phút với khoảng cách là 15cm và cũng đã lựa chọn được phương pháp đột biến phù hợp là đột biến qua thạch đĩa petri với bước sóng 253,7nm 1.2 Qua đột biến đã tạo được 10 chủng đó có chủng có khả tạo màng Trong chủng đó, chủng ĐB6 có khả tạo màng ổn định và thời gian ngắn chủng gốc BHN2 1.3 Hình dạng tế bào và hình thái khuẩn lạc chủng BHN2 và chủng đột biến ĐB6 có sự khác biệt không đáng kể Kiến nghị Do thời gian có hạn nên chúng nghiên cứu được ảnh hưởng tia UV tới khả sống sót chủng Gluconacetobacter BHN2 và gây đột biến lần đầu Để có kết quả chính xác cần gây đột biến một số lần nữa - Nên nghiên cứu điều kiện ảnh hưởng môi trường tới khả tạo màng các chủng đột biến - Nên xác định rõ về bản chất việc đột biến bằng phương pháp phân tử - Nên nghiên cứu và so sánh các đặc điểm sinh lý, sinh hóa các chủng đột biến và chủng gốc để có được tiêu cụ thể về sự biến đổi này TÀI LIỆU THAM KHẢO A TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty (1998) Vi sinh vật Nguyễn Ngọc Mai 34 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội học Nxb Giáo dục, tr.149-150 Nguyễn Thành Đạt (1999) Cơ sở vi sinh vật học Tập 1, Nxb Đại học Sư phạm Hà Nội, tr 52-55, 62-102, 185-309 Nguyễn Thành Đạt (2005) Cơ sở vi sinh vật học, tập 2, Nxb Đại học Sư phạm, tr 7-9, 37-61, 169-171 Nguyễn Thành Đạt, Nguyễn Duy Thảo, Vương Trọng Hào (1990) Thực hành vi sinh vật Nxb Giáo dục, tr 17-34, 63-74, 89-92 Vũ Thị Minh Đức (2001) Thực tập vi sinh vật Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội, tr 1-50 Nguyễn Thúy Hương (2006) Chọn lọc dùng Acetobacter xylinum thích hợp cho loại môi trường dùng sản xuất cellulose vi khuẩn với quy mô lớn Luận án tiến sỹ khoa học sinh học, trường Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh Trương Thị Ngọc Hoa, Trương Nguyễn Quỳnh Hương (2005) Đa dạng hóa các môi trường sản xuất Natadecoco từ vi khuẩn Acetobacter xylinum Sớ 2, Tạp chí khoa học kỹ thuật Nông Lâm nghiệp Phạm Thành Hổ (2006) Di truyền học, Nxb Giáo dục, tr 238-258 Huỳnh Thị Ngọc Lan, Nguyễn Văn Thanh (2006) Nghiên cứu các đặc tính màng cellulose vi khuẩn từ Acetobacter xylinum sử dụng làm màng trị bỏng, Tạp chí dược học, số 361 10 Nguyễn Thị Mỹ Lan, Huỳnh Thị Phương Linh, Lê Thị Mỹ Phước, Nguyễn Quốc Hiển (2009) Bước đầu nghiên cứu hiệu ứng làm lành vết thương hỗn hợp Chitosan tan nước, Bacterial cellulose, Nano bạc Tạp chí Phát triển KH & CN, tập 12, số 09 11 Chu Văn Mẫn (2003) Ứng dụng tin học sinh học Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 12 Phan Cự Nhân, Nguyễn Minh Công, Đặng Hữu Lanh (2006) Di truyền học, tập 1, Nhà xuất bản Đại học Sư phạm, tr 99-137 Nguyễn Ngọc Mai 35 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội 13 Đinh Thị Kim Nhung (1996) Nghiên cứu số đặc điểm vi khuẩn Acetobacter ứng dụng lên men acetic theo phương pháp chìm Luận án PTS khoa học Sinh học Đại học Sư phạm Hà Nội 14 Đinh Thị Kim Nhung, Trần Như Quỳnh, Nguyễn Thị Thuỳ Vân (2009) Nghiên cứu vi khuẩn Acetobacter xylinum tạo màng bacterial celulose ứng dụng điều trị bỏng Báo cáo khoa học 15 Đặng Hùng Thắng (1999) Thống kê ứng dụng Nxb Giáo dục, tr 214267 16 Nguyễn Thị Thùy Vân (2009) Nghiên cứu đặc tính sinh học khả tạo màng Bacterial cellulose vi khuẩn Acetobacter xylinum phân lập từ số nguồn nguyên liệu Việt Nam Luận văn Thạc sỹ khoa học Sinh học, trường Đại học Sư phạm Hà Nội B TÀI LIỆU TIẾNG ANH 17 Bergey H, John G Holt Bergey’s manual of dererminativa bacteriology Wolters Kluwer health, 1992, p.71-84 18 Brown R.M., K.Zaar (1999) Cellulose structure and biosynthesis Pure Appl Chem Vol, 71, pp 765-775 19 Canon, R.E., and Anderson, S.M (1991) Biogenesis of Bacterial cellulose Critical Reviews in Microbiology Vol, 17, pp 435-447 20 Frateur J (1950) Essaisur la systesmatique des Acetobacter La cellule Vol 53, pp 278-398 21 Forng E.r., Anderson S.M., Canon R.E (1989) Synthetic medium for Acetobacter xylinum that can be used for isolation of auxotrophic mutants and study cellulose Biosynthesis Applied and Enviromene microbiology, pp 1317-1319 22 Hong Joo Son, Moon Su Heo, Young Gyun Kim, Sang Joon Lee (2001) Optimization of fermentation conditions for the production of bacterial Nguyễn Ngọc Mai 36 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Ðại học Sư phạm Hà Nội cellulose by a newly isolated Acetobacter sp A9 in shaking cultures Biotechnol Appl Bichem Vol 33, pp 1-5 23 Hong Joo Son, Hee Goo Kim, Keun Ki Kim, Han soo Kim, young Gyun Kim, Sang Joo Lee (2002) Inceased production of bacterial cellulose by Acetobacter sp V6 in synthetic media under shaking culture conditions Bioresorse technology Vol 86, pp 215-219 24 Jonas, R & Frarad, L.F (1998) Production and application of microbial cellulose Polymer Degradation and Stability Vol 59, pp 101 – 106 25 Kumiko Nanda, Kadere T.T, Kutima P.M, Njoroge M.S (2008) “Isolation and identification of the genera Acetobacter and gluconobacter in coconut toddy (mnazi)” African Journal of biotechnology Vol 7, No 16, pp 2963-2971 26 Trygve Brautaset, Rune Sandal, Espen Fjarvik, Svein Valla (1994) Nucleotide sequence and epression analysis of Acetobacter xylinum phosphoglucomutase gene Microbilogy Vol 140, pp 1183-1188 27 Tomonori N., Naoto I., Teruko K., Yukiko K., Takayasu T., Fumihiro Y., Fukumi S., Takahis H (1999) Enhancement of cellulose production by expression of sucrose synthase in Acetobacter xylinum Applied Biological sciences Vol 96, pp 14-18 28 Wan, WK & Millon E (2005) Poly – bacterial cellulose nanocomposite V S Pat Appl Publ US 2005037082 Al, 16 29 http://www.cesti.gov.vn/kh-cn-trong-n-c/m-t-s-ng-d-ng-c-a-cellulose-vi khu-n-bacterial-cellulose-bc-trong-l-nh-v-c-th-c-ph-m.html 30 http://www.dostbinhdinh.org.vn/MagazineNewsPage.asp?TinTS_ID=568 &TS_ID=51 Nguyễn Ngọc Mai 37 K35C Khoa Sinh-KTNN Khóa luận tốt nghiệp Nguyễn Ngọc Mai Ðại học Sư phạm Hà Nội 38 K35C Khoa Sinh-KTNN ... khác đối với tia tử ngoại 3.2 Tuyển chọn chủng sau đột biến từ chủng Gluconacetobacter BHN2 có khả tạo màng BC Bảng 3.2 Khả tạo màng BC chủng sau đột biến tia UV từ chủng Gluconacetobacter. .. được chủng có khả tạo màng BC thời gian nhanh hơn, dai chủng Gluconacetobacter tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu khả tạo màng BC từ chủng Gluconacetobacter tác dụng tác nhân gây đột. .. metylnitronitrozoguanidin,… Gây đột biến tác nhân vật lý: Là sử dụng các tia phóng xạ tia α, β, γ, và tia tử ngoại có tác dụng gây nhiều loại đột biến, thường dùng phòng thí nghiệm Tia tử ngoại