ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT NGUYỄN THỊ QUY NGHIÊN CỨU KỸ THUẬT TÁCH CHIẾT SILUMARIN TỪ HẠT KẾ SỮA VÀ AXIT AMIN TỪ ĐẬU TƯƠNG LÀM NGUYÊN LIỆU CHO THỰC PHẨM CHỨC NĂNG TĂNG CƯỜNG CHỨC NĂNG GAN Ngành: Sinh học 2015 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn thạc sĩ cách hoàn chỉnh, bên cạnh nỗ lực cố gắng thân có hƣớng dẫn nhiệt tình quý Thầy Cô, nhƣ động viên ủng hộ gia đình bạn bè suốt thời gian học tập nghiên cứu thực luận văn thạc sĩ Xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Phạm Việt Cƣờng- Phòng Công nghệ sinh học - Viện Hóa sinh Biển, ngƣời hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện tốt cho hoàn thành luận văn Đồng thời, xin đƣợc gửi lời cảm ơn tớ anh chị em phòng Công nghệ sinh học - Viện Hóa sinh Biển tận tình giúp đỡ trình nghiên cứu để hoàn thành đề tài luận văn Xin chân thành biết ơn đến toàn thể quý Thầy Cô môn Vi sinh vật học tận tình truyền đạt kiến thức quý báu nhƣ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu thực đề tài luận văn Cuối xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, bạn bè, ngƣời không ngừng động viên, hỗ trợ tạo điều kiện tốt cho suốt thời gian học tập thực luận văn Hà Nội, Ngày 21 tháng11năm 2014 Học viên Nguyễn Thị Quy MỤC LỤC 1.1.3 Đặc điể flavonoid 10 1.1.4 Tác dụng sinh học 14 1.1.4.1 Sơ lƣợc lịch sử sử dụng làm thuốc 14 1.1.4 silymarin ứng dụng 15 1.1.5 .18 1.1.6 Những thành tựu nghiên cứu chế phẩm silymarin 18 20 1.2.1 Cây đậu tƣơng 20 20 21 1.2.3.1 Thành phần Protein đậu tƣơng 21 1.2.3.2 Tính chất Protein đậu tƣơng 21 ậu tƣơng 23 26 2.1 Vật liệu 26 2.1.1 Nguyên liệu 26 2.1.2 Hoá chấ 26 2.2 Phƣơng pháp 27 silymarin 27 2.2.2 Phƣơng pháp Sắc ký HPLC 28 2.2.3 29 2.2.4 Phƣơng pháp xác định hàm lƣợng axit amin tự 29 2.2.5 29 2.2.5 29 2.2.5 30 2.2.5 30 2.2.5 31 2.2.6 32 CHƢƠNG : KẾT QUẢ 33 33 ết xuất silymarin 33 3.1.2 Kết sắc kí HPLC 37 ả 39 ận axit amin tự tƣơng 42 3.4 Một số đặc tính sinh học chế phẩm chứa sylimarin 47 48 49 3.4.3 52 3.4.3.1 Tác dụng lƣu lƣợng mật 53 3.4.3.2 Tác dụng hàm lƣợng cắn khô bilirubin dịch mật 54 56 4.1 Kết luận 56 56 TÀI LIỆU THAM KHẢO 57 ADN Acid Deoxyribo Nucleic ARN Acid Ribonucleic ALT Alanine Aminotransaminase AST Aspartate Aminotransaminase CCI4 Cacbon Tetrachlorid EtOH Ethanol MeOH Methanol NaCl cAMP C - TFN-α - LD50 u cao HPLC SKLM Cs CN Công nguyên TPCN WHO UV - Bảng 3.1 Kết khảo sát dung môi để chiết xuất silymarin 34 Bảng 3.2 Kết chiết xuất silymarin phƣơng pháp khác 35 axit amin 39 3.4: ảnh hƣởng thời gian thủy phân bột đậu tƣơng protease lên 44 44 3.6: Hàm lƣợng axit amin tự 3.7: Hàm lƣợng axit amin tự ch thủ 45 ủ 46 Bảng 3.8: Liều uống chế phẩm silymarin lô chuột thực nghiệm thử độc tính cấp 48 Bảng 3.9: Tác dụng chế phẩm silymarin hoạt độ enzym ALT huyết chuột thực nghiệm 51 Bảng 3.10: Tác dụng chế phẩm silymarin bilirubin huyết chuột thực nghiệm 52 Bảng 3.11: Lƣu lƣợng mật lô chuột thí nghiệm 53 Bảng 3.12: Hàm lƣợng cắn khô dịch mật chuột thực nghiệm 54 Bảng 3.13: Hàm lƣợng bilirubin dịch mật chuột thực nghiệm 54 .10 .37 3.2: Sắc ký đồ mẫu silymarinthu đƣợc sau tách chiế 38 3.3: Sắc ký đồ mẫu silybin chuẩn 38 3.4: 40 3.5 44 V dùng thuốc có nguồn gốc từ thảo dƣợc phối hợp sử dụng thuốc đông dƣợc tân dƣợc cộng đồng Do loại thuốc thảo dƣợc kết hợp đông –tây y chữa đƣợc bệnh mà có tác dụng phụ Vì vậy, thuốc có nguồn gố , đặc biệt thuốc đƣợc dùng rộng rãi theo kinh nghiệm cổ truyền để chữa bệnh đƣợc nhà khoa học giới Việt Nam quan tâm nghiên cứu ọ thể ngƣờ làm cho gan bị xơ, g t viêm gan siêu vi bệnh truyền nhiễm phổ biến giới, ảnh hƣởng đến sức khỏe cộng đồng thập niên Hiện có loại virus gây viêm gan : A, B, C, D, E G, phổ biến nguy hiểm siêu vi B C Khoảng tỷ ngƣời giới nhiễm virus viêm gan B Có khoảng 3% dân số giới nhiễm virus viêm gan C 170 triệu ngƣời n [62], [63] Đã có chứng cho thấy silymarin có tác dụng chữa bệnh xơ gan rƣợu Một hoạt tính triển vọng silymarin chống ung thƣ, sử dụng silymarin kết hợp với phƣơng pháp hóa trị liệu Silymarin hoạt động nhƣ chất chống oxy hóa, bảo vệ mô loại bỏ chất gây độc cho gan [5], [10] Protein đậu tƣơng đƣợc sử dụng rộng rãi nhƣ thành phần chức nhiều loại thực phẩm chế biến khả tạo gel tính chất hóa lý, cảm quan dinh dƣỡng cao Việc thủy phân protein hạt họ đậu cải thiện đặc tính dinh dƣỡng chúng nhƣ làm chậm trình hƣ hỏng, cải thiện cấu trúc, tăng giảm độ hòa tan, ngăn cản tƣơng tác không mong muốn, loại mùi khó chịu thành phần độc [27], [57] , để sản xuất số loại sản phẩm tăng cƣờng chức gan nhƣ hỗ trợ điều trị bệnh liên quan đến gan Việt Nam, thay sản phẩm nhập ngoại, sở để thực đề tài: “ axit amin ” Nghiên cứu quy trình tách chiết Sylimarin từ hạt kế sữa Nghiên cứu quy trình thuỷ phân thu nhậ     CHƢƠNG 1.1 1.1.1 (Sylibum marianum (L.) Gaernt) ,l hai năm, cao 30-150cm Thân thảo thẳng phân nhánh Lá xanh, kèm, bóng láng, thƣờng có nhiều đốm trắng dọc theo gân, mép có dạng gai, gai màu vàng nhọn; phía ôm lấy thân; dƣới to, có phiến chia thuỳ có cuống Cụm hoa đầu đơn độc, rộng 3-10cm Lá bắc có phần phụ hình tam giác màu lục thu lại thành gai to, gốc có 4-6 gai nhỏ, ngắn hơn, bên Hoa màu tím, gặp màu trắng, giống nhau, có cánh hoa, nhị bầu ô với noãn vòi nhuỵ phình gốc bế hình bầu dục thuôn, dài 7-8mm, màu đen bóng có vân vàng nhiều ít, tùy thuộc vào giống S.marianum [15], [24], [26] Ra hoa vào tháng đến tháng năm thứ hai Cây có nguồn gốc Địa Trung Hải mọc hoang dại nhiều nơi giới nhƣ miền Nam Trung Âu, Bắc Phi, Trung Đông, Ấn Độ, Trung Quốc, Bắc Nam Mỹ [26] 1.1.2 Thành phần ho ính Sily Dịch chiết hạt chứa khoảng 70-80% silymarin flavonolignans khoảng 20-30% thành phần không xác định, chủ yếu hợp chất polyphenol oxy hóa trùng hợp Thành phần tổ hợp silymarin silybin, đồng nghĩa với silybinin Ngoài silybin hỗn hợp diastereomers A B với tỉ lệ khoảng 1:1, lƣợng lớn flavonolygnants 51 CCl4 4 [8] Cs nghiên c [10] (1992) [15 nồng độ 0,01 – 0,5 mmol/l silybin nồng độ cao ức chế có hiệu tác dụng gây peroxy hoá lipid tiêu giảm glutathion allyl alcol Một điều đáng ý nồng độ tƣơng đối cao không thấy có biểu rõ rệt tƣơng tác silybin với cytochrom P450, cho thấy tác dụng chống độc chất nhờ vào hoạt tính chống oxy hoá quét gốc tự chúng thông qua mx Bảng 3.9: Tác dụng chế phẩm silymarin hoạt độ enzym ALT huyết chuột thực nghiệm Stt Lô chuột Số ALT chuột (U/ l) ăng hoạt độ enzym ALT so Độ giảm hoạt độ enzym ALT so 52 Chứng sinh lý Chứng bệnh lý Silymarin 9 42,3 với chứng sinh với chứng bệnh lý (%) lý (%) 2,57 138,02 226,29 15,54 P < 0,01 87,33 106,45 12,33 36,73 P < 0,05 Bảng 3.10: Tác dụng chế phẩm silymarin bilirubin huyết chuột thực nghiệm Stt Lô chuột Chứng sinh lý Chứng bệnh lý Silymarin Độ tăng hàm Độ giảm hàm Số Bilirubin lƣợng bilirubin lƣợng bilirubin so chuột ( mol/ l) so với chứng với chứng bệnh lý sinh lý (%) (%) 2,35 0,19 3,56 0,35 2,58 0,31 51,49 P < 0,01 9,79 27,53 P < 0,05 Nhƣ vậy, chế phẩm silymarin có tác dụng bảo vệ gan có ý nghĩa 3.4.3 Thí nghiệm đƣợc tiến hành chuột lang theo phƣơng pháp ghi mục 2.2.6.4 Chỉ tiêu theo dõi lƣu lƣợng mật tiết Tác dụng lợi mật 53 chế phẩm silymarin đƣợc biểu thị độ tăng lƣu lƣợng mật sau bơm chế phẩm nghiên cứu so với trƣớc bơm so với lô chuột đối chứng 3.4.3.1 Tác dụng lƣu lƣợng mật Kết thí nghiệm ảnh hƣởng chế phẩm silymarin chiết lƣu lƣợng mật đƣợc trình bày bảng 3.11 Các kết thu đƣợc cho thấy chế phẩm silymarin với liều 0,4g silymarin/kg thể trọng chuột lang, sau 30 phút làm tăng lƣu lƣợng mật lên 32,26% so với chƣa xử lý 36,67% so với lô chuột đối chứng dùng nƣớc muối sinh lý thời điểm Sự khác biệt có ý nghĩa thống kê với P < 0,05 Theo dõi lƣợng mật chảy sau dùng chế phẩm nghiên cứu 60, 90 120 phút thấy khác biệt ý nghĩa thống kê so với trƣớc xử lý Bảng 3.11: Lưu lượng mật lô chuột thí nghiệm Lƣu lƣợng mật (ml/100 g chuột/30 phút) Trƣớc Stt Lô chuột Số NaCl chuột 0,9% Sau NaCl 0,9% silymarin 30 phút 60 90 120 phút phút phút 0,25 0,26 0,24 silymarin 0,30 Chứng 0,31 0,04 0,02 3,23%* 0,02 0,02 0,03 (P > 0,05) 0,41 Silymarin 0,31 0,02 0,04 32,25%* 36,67%** 0,31 0,28 0,25 0,03 0,03 0,02 > 0,05 > 0,05 > 0,05 (P < 0,05) P > 0,05 < 0,05 54 *: So với trƣớc dùng silymarin NaCl 0,9% *: Sau 30 phút, lô thử silymarin có khác biệt có ý nghĩa so với trước chứng thời điểm xử lý so vớ 3.4.3.2 Tác dụng hàm lƣợng cắn khô bilirubin dịch mật Kết xác định hàm lƣợng cắn khô bilirubin dịch mật chuột trƣớc sau dùng nƣớc *muối sinh lý dùng chế phẩm silymarin đƣợc trình bày bảng 3.12 bảng 3.13 Bảng 3.12: Hàm lượng cắn khô dịch mật chuột thực nghiệm Lô chuột STT thí nghiệm Hàm lƣợng cắn khô dịch mật (mg/ml) Số chuột Trƣớc silymarin Sau silymarin NaCl 0,9% NaCl 0,9% P sau so với trƣớc hứng 11,2 0,4 11,1 0,5 P > 0,05 Silymarin 14,4 0,3 12,4 0,4 P > 0,05 P P > 0,05 P > 0,05 Bảng 3.13: Hàm lượng bilirubin dịch mật chuột thực nghiệm Hàm lƣợng bilirubin Lô chuột STT thí nghiệm Số chuột P dịch mật (mmol/l) Trƣớc Sau silymarin sau so với silymarin hoặc NaCl trƣớc NaCl 0,9% 0,9% hứng 11,40 1,03 10,81 1,40 P > 0,05 Silymarin 12,36 1,31 12,76 1,11 P > 0,05 P P > 0,05 P > 0,05 55 Kết cho thấy: Mặc dù sau dùng chế phẩm silymarin lƣu lƣợng mật tăng có ý nghĩa nhƣng hàm lƣợng cắn khô hàm lƣợng bilirubin dịch mật lô chuột chứng lô dùng chế phẩm nghiên cứu, trƣớc sau xử lý tƣơng tự nhau, sai khác ý nghĩa thống kê (P > 0,05) Chế phẩm silymarin chiết xuất từ có tác dụng lợi mật rõ rệt mà chất lƣợng mật biểu hàm lƣợng cắn khô hàm lƣợng bilirubin không thay đổi 56 CHƢƠNG 4: 4.1 Kết luận  ết xuất silymarin quy mô phòng Xây dựng thí nghiệm, dùng ether dầu để loại dầu béo, sau chiết hồi lƣu cồn 85%  Mẫu silymarin thu đƣợc chiết theo quy trình phòng thí nghiệm có hàm lƣợng silymarin chiếm 56%, đáng ý hàm lƣợng silybin chiếm cao 28,9%  Xây dự đậu tƣơng  quy trình thủy phân thu nhận axit amin từ protein eptidase hỗn hợp axit amin năng: - : - n - axit amin 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Bộ y tế (1996), quy chế đánh giá tính an toàn hiệu lực thuốc cổ truyền, phụ lục 3: Hƣớng dẫn khảo sát độc tính củ c truyền, (ban hành kèm theo định 371 BYT/QĐ ngày 12/3/1996 trƣởng y tế), Hà Nội Đàm Trung Bảo (1985) Các chất chống oxy hóa sinh học, y dược học 1:23-25 Đỗ Trung Đàm (2003), Sử dụng Microsoft Excel,trong thống kê sinh học, Nxb Y học, Hà Nội Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu (1985) Phương pháp nghiên cứu hoá học thuốc Nxb Y học, Hà Nội Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Quốc Khang, Lê Thị Lan Oanh, Nguyễn Thị Tố Nga, Nguyễn Thị Ngọc Dao (2003), “nghiên cứu quy trình công nghệ thu nhận silymarin tạo sinh khối từ (Silybum Marianum) trồng Việt Nam”, Di truyền học ứng dụng 4:25:31 (2012) , , 34(3se): 313-318 ) (2010) Cô 58 Silybum marianum 28(3): 88-92 Hoàng Thị Bích Ngọc (1991) Hoá sinh gan Nxb Y học, Hà Nội, 303310 10 Lê Thị Lan Oanh, Lê Thị Việt Hồng, Hoa Thị Hằng (2003), Nguyễn Thị Ngọc Dao, Nguyễn Quốc Khang, Nguyễn Thi Hồng Gấm “ Thu nhận khảo sát số dặc điểm sinh dƣợc học flavonoid từ Silybum marianum di thực vào Việt Nam” Hội nghị công nghệ sinh học toàn quốc, Hà Nội, 1029-33 11 Vũ Thị Phƣơng (2001) Hoá sinh hệ thống gan mật Nxb Y học, Hà Nội, 665-685 12 13 (2002) 14 Vũ Ngọc Thuý, Tào Duy Cần (1996) Sử dụng thuốc biệt dược Nhà xuất Y học, Hà Nội TÀI LIỆU TIẾNG ANH 15 Altoray I., Dalmi L., Sari B., Imre S., Balla G (1992), “The effect of silibinin (Legalon) on the free radical scavenger mechanisms of human erythrocytes in vitro”, Acta physiol Hung., 80, pp 375-380 16 Boigk G., Stroedter L., Herbst H., Waldfdschmidt J., Riecken E.O (1997), “Silymarin retards collagene accumlation in early and advanced biliary fibrosis secondary to complete bile duct oblitteration in rats”, Hepatology, 26, pp 643-649 17 Lin Chen, Jianshe Chen, Jiaoyan Ren, and Mouming Zhao (2011) “Effects of Ultrasound Pretreatment on the Enzymatic hydrolysis of soy 59 protein Isolates and on the Emulsifying properties of hydrolysates” J Agric Food Chem., 59(6), pp 2600-2609 18 A.Dehghan, AA Mahjoor, H Bazyar and K Zangili (2010) “Effects of silymarin and food restriction on hepatic and pancreatic function in Wistar rats” Asian J Ani Veteri Ad., 5(2):136-142 19 Favari 1., perez-Alvarez V (1997), “Comparative effects of colchicine and silymarin on CCL4 –chronic liver damage in rats”, Arch Med Res., 28,pp 11-17 20 Flora K., Hahn M., Rosen H., Benner K (1998), “Milk thistle ( Silybum marianum) for the therapy of liver disease”, The American Journal of Gastroenterology, 93(2), pp 139-143 21 Fuchs E.C., Weyhenmeyer R., Weiner O.H (1997), “Effects of silibinin and of a synthetic analogue on isolated rat hepatic atellate cells and myofibroblasts”, Azrneimittelforschung, 47, pp 1383-1387 22 Galvez AF (2003) Therapeutic peptides having a motif that binds specifically to nonacetylated H3 and H4 histones for cancer therapy Patent US 2003, 027765 A1 23 Hikino H., kiso Y., Wagner O., Fiebig M (1984), Antihepatoxic action of flavonolignans from Silybum marianum fruits, Planta Medica, 50, pp 248-250 24 Hobbs C (1992), Milk thistle: The liver herb Botanical Press, Capitola 25 Hooker J.D (1880), Flora of british india, Vol III., India 26 Joyeux M., Rolland A., Fleurentin J., Mortier F., Dorfman P (1990), Tert-Butyl hydroperoxide-induced injury in isolated rat hepatocytes: a model for studying anti-hepatotoxic crude drugs, Planta Med., 56(2), pp 171-174 60 27 Ashraf A Khalil, Samira S Mohamed, Fakhriya S Taha and Eva Nordberg Karlsson (2006),” Production of functional protein hydrolysates from Egyptian breeds of soybean and lupin seeds” African J Biotech (10): 907-916 (2005), “Silybin and silymarin- new 28 Vladimirs Kren aspects and applications” Biomed Papers 149(1): 29-41 29 Kaczmarek F (1977).,” Concentrate from Slybum marianum (L) Gaertn Seed with a high silymarin content”, Pol 89,368 (C1 A61K35/78), Theo CA 90: 69342p 30 A.Lavanya (2007), “C Selvamurugan and B Sivasankar Immobilized trypsin-mediated production of the protein hydrolysates from non- edible protein sources L Sci” Industrial Res., 66:651-654 31 Jing Liu (2009), “Research on Microwave Heating Three Enzymes Collaborative Hydrolysis Soy protein and preparation of small molecule peptides advanced studies in Biology”, 1(7): 345-354 32 Lovati MR, Manzoni C, Gianazza E, Arnoldi A, Kurowska E, Carroll KK, Sirtori CR (2000) “Soy protein peptides regulate cholesterol homeostasis in Hep G2 cells” J Nutr 130(10):2543-2549 33 Mesa Castillo (2008), del “Antioxidant properties of soy protein- fructooligosaccharide glycation systems and its hydrolyzates” Food Res International 41(6): 606-615 34 M Marinova1, N Thi Kim Cuc2, B Tchorbanov (2008) “Enzymatic hydrolysis of soy protein isolate by food grade proteinases and aminopeptidases of plant origin” Biotechnol & Biotechnol EQ 22/2008/3, 835-838 61 35 Madaus R (1980) Silymarin from plant, Ger Offen 2,914,330 (C1 C07D311/20), Theo CA 94: 90326d 36 Nakamori T (2002) “Antiobesity effects of soy proteins and soy peptides” Food Style 21; 6(5):86-88 37 Flavia M Netto and Maria Antonia M (1998) “Galeazzi Production and Characterization of Enzymatic Hydrolysate from Soy protein Isolate” Lebensmittel- Wissenschaft und-Technologie 31(7-8), , 624-631 38 Nishi T, Hara H, Tomita F (2003b),”Soybean beta-conglycinin pepton suppresses food intake and gastric emptying by increasing plasma cholecystokinin levels in rats” J Nutr, 133(2):352-357 39 Yong- ping Pei, Jian Chen, Wei- Lin Li (2009), Progress in research and application of silymarin Medicinal & aromatic plant Sci Biotech.,3(1): 1-8, Global Sci Books 40 Radek Gazak, Vladimirs Kren, Daniel (2007), “Silybin and silymarin- new aspects and applications” Current Medicinal chemistry 14, 315-318 41 Riaz, Mian N (2006) Soy Application in Food Boca Raton, FL: CRC Press ISBN 0-8493-2981-7 42 Simanek Vilim, Nina Skottova, Josef Bartek, Jitka Psotova, Pavel Kosina, Libuse Balejova and Jitka Ulrichova (1999), “Extract from Silybum marianum as a nutraceutical”: a double-blind placebocontrolled study in healthy young men Czech J Food Sci.,19(3): 106110 43 Soto , Garecia V, Uria E, Vadillo M (2010), “Raya L Effect of silymarin on kidneys of rats suffering from alloxan-induced diabetes mellitus” Phytomedicine; 17(14): 1090-1094(Abstract) 62 44 S Subsiripaiboon and Y Puechkamut (2007) “Antioxidant capacities of papain modified soy protein isolate” International Conference on Integration of Science & Technology for Sustainable Development, Bankok, Thailand 26-27 April 2007, 349-352 45 L.N Ten, W-T Im, M-K Kim and S-T Lee A plate assay for simultaneous screening of polysaccharide and protein-degrading microorganisms Lett Appl Microbiol Med 70,397-400 46 Tuner R.A (1965), “Screening method in pharmacology”, Academic Press, Newyork and London 229-230 47 US2002/0168704 A1 Method for producing a protein hydrolysate with low bitterness 48 US4324805 Method of producing soy protein hydrolysate from fatcontaining soy protein hydrolysate 49 US2002/0132028 A1 Process for preparation of protein- hydrolysate from soy flour 50 US2010/0184132 A1 Enzymatic process for debittering of protein hydrolysate using immobilized peptidases 51 US4368195 Method for the extraction of silymarin from plant 52 US7318940 Method for isolation of silymarin from Silybum marianum seeds 53 Usman Ali Ashfaq, Tariq Javed, Sidra Rehman, Zafar Nawaz, and Sheikh Riazuddin (2011), “Inhibition of HCV 3a core gene thought silymarin and its factions” Virology J., 8:153 http://www.virologyj.com/content/8/1/153 54 Vessal G, Akmali M, Najafi P, Moein MR (2010), “Sagheb MM Silymarin and milk thistle extract may prevent the progresstion of 63 diabetic nephropathy in streptozotocin-induced diabetic rats” Ren Fail.; 32(6):733-739(Abstract) 55 Wagner H (1980) “Plant Constituents with antihepatotoxic activity” Natural product as medicinal agents., Strasbourg 56 Wang Xin, Zheng Xianzhe, Liu Chenghai (2008) “Optimization of microwave-assisted extraction of silymarin from milk thistle seeds” Int J Agric & Biol Eng;1(1) : 75-81 57 Weny Rupasinghe, Mary A Schuler and Elvira Gonzalez de Mejia (2008) “Identification and characterization of metastases” - 2003, 108 trang 58 Wo 2009/043671A1 Use of Silybum marianum extract 59 Wu J, Ding X.(2001), “Hypotensive and physiological effect of angiotensin converting enzyme inhibitory peptides derived from soy protein on spontaneously hypertensive rats” J Agric Food Chem 49(1):501-506 60 Hsin-Yi Yang, Jiun-Rong Chen and Le-Shin Chang (2008), “Effects of Soy protein hydrolysate on Blood Presure and Angiotensin-Converting Enzyme Activiti in Rats with Chronic Renal Failure” Hypertension Res 31: 957-963; doi: 10.1291/hypres.31.957 61 Hsiao Po- Yang Yao Hsueh Tung Pao, 16 (4), 22, 1981 62 http://suckhoe.24h.com.vn/viem-gan-b/dieu-tri-va-cham-soct1f2w43c569pc558ht5.html#gsc.tab=0&gsc.q=Viem-gan-B&gsc.page=1 63 http://benhnhietdoi.vn/tin-tuc/Viem-gan/tim-hieu-sau-hon-ve-viem-ganc_8354.html 64 65 [...]... nƣớc nhất định và nƣớc này có thể hydrat hóa các thành phần ƣa nƣớc khác có trong nguyên liệu và làm cho các thành phần này tách ra khỏi nguyên liệu, do đó làm cho khả năng tách chiết silymarincao hơn Trên cơ sở đó ở nồng độ 96% lực giữ nƣớc của EtOH quá mạnh làm cho khả năng tách chiết silymarinthấp hơn 90% [35 81,5% flavonolignan [29] Trun 30% [61] 34 Bảng 3.1 Khảo sát dung môi để chiết xuất silymarin... và trao đổi năng lƣợng thuận tiện: Sử dụng silymarin làm giảm đáng kể chức năng dị thƣờng và quá trình xơ hóa - Đẩy mạnh hepatic cytothesis: Silymarin có thể kết hợp với estradiol receptor và hoạt hóa nó trong tế bào gan và kết là tăng hoạt tính của RNA polymerase nội bào - Cytokine và chức năng miễn dịch: Hiệu kháng viêm và kháng xơ hóa là do silymarin hoạt hóa tế bào hình sao (stellate) của gan và. .. thêm vào các chất có chứa xảy ra sự oxy hóa Sự ôxy hóa này có thể gây ra sản phẩm Nó cũng có thể sự phá hủy màu sắc và vì thế gây ra sự oxy hóa những nhóm sunfit tự do từ liên kết disunfua Cả 2 chức năng này đều quan trọng trong việc chuẩn bị bột nguyên liệu cho công nghiệp làm bánh 1.2.4 Protein hydrolysate đậu tƣơng Protein hydrolysate ( PHs: hỗn hợp của oligopeptides, polypeptides và axit amin tự... quá trình thủy phân các peptides có axit amin kỵ nƣớc ở đầu N hoặc C đƣợc tạo ra và chúng làm cho hydrolysate có vị đắng Để giảm vị đắng, sử dụng aminopeptidase để tách các 25 gốc axit amin kỵ nƣớc ở đầu N, nhƣng nhƣ vậy sẽ làm tăng hàm lƣợng axit amin tự do Các phƣơng pháp khác làm giảm vị đắng nhƣ hạn chế cơ chất protein, sử dụng các chất để giấu vị đắng, phân đoạn và loại các peptides đắng, polyme... thoát bọng chứa các amin hoạt mạch từ tế bào mastocyte, ức chế sụ nhân lên của virus Việc nghiên cứu và ứng dụng các chế phẩm flavonoid trên thế giới ngày càng phát triển Ở Việt Nam đã có những nghiên cứu mà kết dụng vào thực tiễn, tạ số thuốc chữa bệnh có hiệu đƣợc ứng 14 1.1.4 Tác dụng sinh học của 1.1.4.1 Sơ lƣợc về lịch sử sử dụng cây Cao chiết làm thuốc đã đƣợc sử dụng làm thuốc từ thời Hy Lạp cổ... bệnh rối loạn gan và túi mật nhƣ viêm gan, xơ gan, vàng da và bảo vệ gan khỏi tác động có hại của hóa chất và các chất độc ngoài môi trƣờng nhƣ nọc rắn, côn trùng, ngộ độc nấm hoặc rƣợu [43], [52]  Hiệu bảo vệ gan: s Đã có những bằng chứng cho thấy silymarin có tác dụng chữa bệnh xơ gan do rƣợu Cơ chế của quá trình này do silymarin phục hồi alanin transaminase, aspartate transaminase và bilirubin... bao gồm làm mất các chức năng quan trọng của peptides, sản lƣợng thấp, cần máy móc đặc hiệu và giá thành cao… Việc sử dụng các protease có tính đặc hiệu thấp để tách các gốc axit amin kỵ nƣớc ở đầu N đã đƣợc nhiều tác giả nghiên cứu và áp dụng [47], [49], 50] Một số tác giả sử dụng kết hợp với các phƣơng pháp khác để tăng hiệu enzymes [17] thủy phân protein đậu tƣơng bằng 26 CHƢƠNG 2: V 2.1 Vật liệu 2.1.1... sau khi chiết cặn kế sữa đã đƣợc loại chất béo bằng EtOH và MeOH nồng độ khác nhau, đã thu đƣợc flavonolignan toàn phần khác nhau (bảng 3.1) Kết nhận đƣợc cho thấy, chiết bằng EtOH 85% cho hiệu suất cao nhất EtOH ở các nồng độ 90% và 80% cũng cho kết chiết khá tốt, hàm lƣợng flavonolignan toàn phần thu đƣợc chỉ thấp hơn 3-4% so với khi chiết bằng EtOH 85% Nồng độ EtOH cao hơn (96%) lại chỉ chiết đƣợc... chống tăng huyết áp và ức chế enzyme angiotesin – converting (ACE) Enzyme này làm tăng huyết áp bằng cách biến đổi decapeptide angiotensin I thành octapeptide angiotensin II làm co mạch, dẫn đến huyết áp tăng Rất nhiều tài liệu chỉ ra rằng, protein đậu tƣơng có thể làm giảm nồng độ cholesterol máu ở ngƣời và động vật, nhƣng cơ chế này đƣợc các tác giả đƣa ra không thống nhất Một số nhà nghiên cứu cho. .. ức chế tế bào Kupffer của gan tạo NO và giảm tƣơng tác với O2 - Giảm hoạt tính của phospholipase và bảo vệ màng gan bằng cách chống lại thromboxane A, làm cho mạch máu chắc, ngăn phản ứng độc của tế bào T và tăng lƣợng cAMP nội bào - Bảo vệ màng tế bào: Thông qua phản ứng chống oxy hóa lipid Silymarin điều chỉnh tính lƣu động của microsome gan và màng mitochondria và giữ cho tính lƣu động của màng ... 8,970 32,20 axit amin 20 axit amin 21 axit amin k axit amin axit amin c axit amin axit 41 amin t Nhƣ , nghiên Khalil (2006) ột đậu Lupin Quá trình thủy phân đƣợc thực 80 độ C độ pH 7,4 làm giảm... khoa học cho việc sử dụng silymarinthu nhận từ kế sữa axit amin từ trình thủy phân bột đậu tƣơng cho nghiên cứu phát triển thực phẩm chức có bổ sung hợp chất này, hỗn hợp sylimarin, axit amin thu... điều trị bệnh liên quan đến gan Việt Nam, thay sản phẩm nhập ngoại, sở để thực đề tài: “ axit amin ” Nghiên cứu quy trình tách chiết Sylimarin từ hạt kế sữa Nghiên cứu quy trình thuỷ phân thu