y BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN TẠO SINH KHỐI CAO TRÊN RỈ ĐƢỜNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS BÙI THỊ MINH DIỆU TÔ HẢI BÌNH MSSV: 3113702 LỚP: VSV K37 Cần Thơ, Tháng 6/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN TẠO SINH KHỐI CAO TRÊN RỈ ĐƢỜNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS BÙI THỊ MINH DIỆU TÔ HẢI BÌNH MSSV: 3113702 LỚP: VSV K37 Cần Thơ, Tháng 6/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) Bùi Thị Minh Diệu Tô Hải Bình DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… … ………………………………………………………………………………… …… ……………………………………………………………………………… ……… …………………………………………………………………………… ………… Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM ƠN -* Hoàn thành luận văn phần quan đánh giá trình học tập nghiên cứu Viện Nghiên Cứu & Phát Triển Công Nghê Sinh Học Trong trình thực luận văn, nhận nhiều hỗ trợ, động viên từ gia đình, thầy cô, anh chị hướng dẫn bạn bè Tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến: - Cô Bùi Thị Minh Diệu anh Nguyễn Trung Duẩn (lớp VSV K36) tận tình hướng dẫn kiến thức, kỹ động viên tinh thần giúp hoàn thành luận văn - Các thầy cô, anh chị hướng dẫn bạn phòng thí nghiệm sinh học phân tử thực vật Viện NC & PT CNSH tận tình hỗ trợ hướng dẫn trang thiết bị suốt trình thực luận văn - Các thầy cô truyền đạt kiến thức cho suốt năm học - Anh Nguyễn Quang Vinh bạn: Phan Hoàng Việt Khoa, Nguyễn Thanh Nhật Phương, Trần Âu Khánh Ngân Lâm Phước Thịnh giúp hoàn thành tiêu luận văn - Các thầy cô, anh chị cao học, bạn sinh viên học tập Viện NC & PT CNSH thăm hỏi động viên trình hoàn thành luận văn - Thầy Trần Nguyên Tuấn gia đình chỗ dựa tinh thần vững nguồn động viên lớn nhất, tạo điều kiện thuận lợi hoạt động học tập giúp hoàn thành luận văn nhiệm vụ khác Tôi xin chân thành cảm ơn Chúc người sức khỏe, công tác học tập tốt Cần Thơ, ngày 15 tháng 11 năm 2014 Tô Hải Bình Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ TÓM LƢỢC Nấm men thuộc nhóm vi sinh vật đơn bào, chúng phân bố rộng rãi thiên nhiên, đặc biệt chúng có nhiều nho hoa khác Từ lâu, người ta biết sử dụng nấm men để sản xuất rượu bia, dạng đồ uống khác Ngày nay, sinh khối nấm men sử dụng sản xuất thực phẩm, chế phẩm sinh học ứng dụng công nghiệp Do đó, nhu cầu dòng nấm men cho sinh khối cao ngày tăng Nấm men loại vi sinh vật có khả phát triển nguyên liệu, phế phẩm rẻ tiền rỉ đường Rỉ đường phụ phẩm có khối lượng lớn từ ngành công nghiệp mía đường Đề tài tiến hành nhằm phân lập tuyển chọn nấm men từ dòng nguồn khác phát triển môi trường rỉ đường Kết phận lập 13 dòng nấm men Trong số đó, dòng KH2 có khả tạo sinh khối tốt (0,59 gram/100mL) khác biệt có ý nghĩa so với dòng lại Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến khả tạo sinh khối dòng nấm men tuyển chọn xác định điều kiện thích hợp cho trình sản xuất sinh khối dòng nấm men là: nồng độ môi trường rỉ đường 20%, độ pH môi trường = với mật số ban đầu 105 tế bào/mL thời gian nuôi cấy 48 Từ khóa: nấm men, rỉ đường, sinh khối Chuyên ngành Vi sinh vật học i Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM ƠN TÓM LƢỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài 1.3 Nội dung đề tài CHƢƠNG LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Nấm men 2.1.1 Đặc điểm nấm men 2.1.2 Hình dạng kích thước a) Hình dạng tế bào nấm men b) Kích thước tế bào nấm men 2.1.3 Cấu tạo tế bào nấm men 2.1.4 Sự sinh trưởng, phát triển sinh sản nấm men a) Sinh trưởng b) Phát triển .6 c) Sinh sản Sinh sản vô tính Sinh sản hữu tính 2.1.5 Các trình sinh lý tế bào nấm men a) Sinh dưỡng nấm men .7 b) Quá trình trao đổi chất nấm men .9 2.1.6 Phân loại nấm men 2.1.7 Vai trò ứng dụng nấm men 10 2.2 Rỉ đƣờng 12 Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ 2.2.1 Khái niệm rỉ đường 12 2.2.2 Các loại rỉ đường 12 a) Rỉ đường mía 12 b) Rỉ đường củ cải 13 c) Một số loại rỉ đường khác 14 2.2.3 Thành phần hóa học rỉ đường 14 2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 15 2.2.5 Thông tin dinh dưỡng 16 2.2.6 Ứng dụng 17 2.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến sinh trƣởng nấm men 17 2.3.1 Hàm lượng đường 17 2.3.2 Mật số tế bào ban đầu 17 2.3.3 pH môi trường 17 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 Phƣơng tiện nghiên cứu 18 3.1.1 Thời gian địa điểm 18 3.1.2 Nguyên liệu 18 3.1.3 Thiết bị - dụng cụ hóa chất 18 a) Thiết bị - dụng cụ 18 b) Hóa chất 19 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 3.2.1 Chuẩn bị nguyên liệu 19 a) Khóm, nho, chuối, bưởi 19 b) Bã bia 19 c) Rỉ đường 19 3.2.2 Thí nghiêm 1: Phân lập nấm men từ nguồn khác 19 3.2.3 Thí nghiệm 2: Khảo sát khả tăng sinh khối dòng nấm men dịch rỉ đường 21 3.2.4 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến trình tạo sinh khối dòng nấm men tuyển chọn 22 Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ 3.2.4.1 Khảo sát nồng độ rỉ đường mật số nấm men ban đầu đến trình tạo sinh khối dòng nấm men tuyển chọn 22 3.2.4.2 Khảo sát ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy đến trình tạo sinh khối dòng nấm men tuyển chọn 22 3.2.4.3 Khảo sát ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến trình tạo sinh khối dòng nấm men tuyển chọn 23 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Phân lập nấm men từ nguồn khác 24 4.2 Khả tăng sinh khối dòng nấm men dịch rỉ đường 31 4.3 Ảnh hưởng điều kiện nuôi cấy đến trình tăng sinh khối dòng nấm men tuyển chọn 32 4.3.1 Ảnh hưởng nồng độ rỉ đường mật số nấm men ban đầu đến trình tăng sinh khối nấm men 33 4.3.2 Ảnh hưởng pH môi trường nuôi cấy đến trình tăng sinh khối nấm men 35 4.3.3 Ảnh hưởng thời gian nuôi cấy đến trình tăng sinh khối nấm men 37 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục 1: Các hình ảnh Phụ lục Kết Phụ lục Kết thống kê Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng Thành phần hóa học nấm men Bảng Sự diện ứng dụng nấm men số thực phẩm 11 Bảng Thành phần dinh dưỡng rỉ đường mía(%) 13 Bảng Thành phần chất hữu rỉ đường 14 Bảng Khối lượng trung bình sinh khối khô nấm men thu tăng sinh môi trường dịch rỉ đường 31 Bảng Khối lượng trung bình sinh khối khô nấm men thu với điều kiện nồng độ rỉ đường mật số ban đầu khác 33 Bảng Khối lượng trung bình sinh khối khô nấm men thu với điều kiện pH khác 35 Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Trang Hình Nấm men Saccharomyces Cerevisiea Hình Rỉ đường 12 Hình Quy trình phân lập nấm men 20 Hình Khả tạo sinh khối khô dòng nấm men tren môi trường rỉ đường sau 48 32 Hình Khối lượng sinh khối khô thu điều kiện khác nồng độ rỉ đường mật số ban đầu sau 48 33 Hình Khối lượng trung bình sinh khối khô nấm men thu với điều kiện pH khác 36 Bảng Khối lượng trung bình sinh khối khô nấm men thu điều kiện thời gian khác 37 Chuyên ngành Vi sinh vật học vi Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ 1.2 Một số hình ảnh thí nghiệm Sinh khối nấm men sau Sinh khối nấm men ly tâm PHỤ LỤC CÁC PHƢƠNG PHÁP PHÂN TÍCH: 2.1 pH Xác định pH pH kế 2.2 Đếm mật số tế bào nấm men buồng đếm hồng cầu (Nguyễn Xuân Thành, 2005) Lắc ống nghiệm chứa mẫu pha loãng, dùng ống hút cho giọt nước vào mặt kính, đậy kính lên lưới đếm Chú ý không để tạo thành bọt khí lưới đếm tràn dịch mẫu xuống rãnh Đặt buồng đềm lên kính hiển vị Sau tiến hành đếm tế bào ô lớn gốc Trong ô lớn đếm từ ô thứ đến ô thứ 16 Chỉ đếm tế bào nằm bên ô tế bào nằm cạnh liên tiếp chiều Ghi số lượng tế bào đếm ô lớn Đếm buồng đếm sau lấy giá trị trung bình Dùng xong buồng đếm kính phải rửa lau khô Số lượng tế bào 1mL mẫu dịch tính công thức: a 4000 103 c Số tế bào = b Trong đó: a – Số tế bào ô lớn b – Số ô ô lớn 103 – Chuyển mm3 ml (1000mm3 = 1ml) c - Độ pha loãng (100 lần) Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ PHỤ LỤC SỐ LIỆU THÍ NGHIỆM 3.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát khả sản xuất sinh khối dòng nấm men môi trƣờng dịch rỉ đƣờng Bảng Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc môi trƣờng rỉ đƣờng lần lặp lại Dòng nấm men Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc (gram) Lần Lần Lần BB1 0.48 0.44 0.43 BB2 0.50 0.39 0.42 BB3 0.41 0.43 0.42 BB4 0.44 0.36 0.43 RĐ1 0.45 0.58 0.48 RĐ2 0.40 0.40 0.45 NH1 0.32 0.44 0.37 NH2 0.31 0.42 0.37 NH3 0.20 0.21 0.13 KH1 0.40 0.52 0.57 KH2 0.54 0.62 0.62 KH3 0.51 0.5 0.45 CH1 0.39 0.43 0.42 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ 3.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng nồng độ rỉ đƣờng mật số nấm men ban đầu đến sinh khối dòng nấm men đƣợc tuyển chọn Bảng Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc môi trƣờng rỉ đƣờng với điều kiện nồng độ rỉ đƣờng mật số khác nuôi ủ 48 Nồng độ - Mật số Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc (gram) Lần Lần Lần 15 - 103 0.44 0.39 0.40 15 – 104 0.50 0.55 0.53 15 – 105 0.39 0.45 0.33 20 - 103 0.52 0.40 0.43 20 – 104 0.76 0.53 0.44 20 – 105 0.87 0.7 0.77 25 - 103 0.52 0.43 0.80 25 – 104 0.69 0.56 0.50 – 105 0.32 0.29 0.31 3.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng pH đến sinh khối dòng nấm men đƣợc tuyển chọn Bảng 10 Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc môi trƣờng rỉ đƣờng với điều kiện pH khác nuôi ủ 48 pH Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc (gram) Lần Lần Lần 0.67 0.69 0.65 0.85 0.79 0.80 0.73 0.74 0.69 0.68 0.66 0.61 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ 3.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hƣởng thời gian đến sinh khối dòng nấm men đƣợc tuyển chọn Bảng Khối lƣợng trung bình sinh khối khô nấm men thu đƣợc điều kiện thời gian khác Khối lƣợng sinh khối thu đƣợc (gram) Thời gian Lần Lần Lần 24 0.35 0.51 0.63 36 0.52 0.55 0.57 48 0.69 0.85 0.67 72 0.78 0.75 0.82 PHỤ LỤC KẾT QUẢ THỐNG KÊ 4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát khả sản xuất sinh khối dòng nấm men môi trƣờng dịch rỉ đƣờng One-way ANOVA: sinh khối versus nấm men Source nấm men Error Total DF 12 26 38 SS 0.0000331 0.0000062 0.0000393 S = 0.0004899 Level BB1 BB2 BB3 BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 N 3 3 3 3 3 3 MS 0.0000028 0.0000002 R-Sq = 84.14% Mean 0.0045000 0.0043667 0.0042000 0.0041000 0.0041333 0.0049667 0.0059333 0.0048667 0.0037667 0.0036667 0.0018000 0.0050333 0.0041667 StDev 0.0002646 0.0005686 0.0001000 0.0004359 0.0002082 0.0008737 0.0004619 0.0003215 0.0006028 0.0005508 0.0004359 0.0006807 0.0002887 F 11.49 P 0.000 R-Sq(adj) = 76.82% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* ) ( * -) ( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0015 0.0030 0.0045 0.0060 Pooled StDev = 0.0004899 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ Grouping Information Using Fisher Method nấm men K2.1 RĐ1 K1.2 K2.2 BB1 BB2 BB3 RĐ2 CHUỐI BB4 NHO NHO 2A NHO 2B N 3 3 3 3 3 3 Mean 0.0059333 0.0050333 0.0049667 0.0048667 0.0045000 0.0043667 0.0042000 0.0041667 0.0041333 0.0041000 0.0037667 0.0036667 0.0018000 Grouping A B B C B C D B C D E B C D E C D E C D E D E D E E F F F F F F F G Means that not share a letter are significantly different Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of nấm men Simultaneous confidence level = 30.96% nấm men = BB1 subtracted from: nấm men BB2 BB3 BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Lower -0.0009555 -0.0011222 -0.0012222 -0.0011889 -0.0003555 0.0006111 -0.0004555 -0.0015555 -0.0016555 -0.0035222 -0.0002889 -0.0011555 Center -0.0001333 -0.0003000 -0.0004000 -0.0003667 0.0004667 0.0014333 0.0003667 -0.0007333 -0.0008333 -0.0027000 0.0005333 -0.0003333 Upper 0.0006889 0.0005222 0.0004222 0.0004555 0.0012889 0.0022555 0.0011889 0.0000889 -0.0000111 -0.0018778 0.0013555 0.0004889 nấm men BB2 BB3 BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( * -) ( -* ) ( * ) ( -* ) ( * -) ( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = BB2 subtracted from: nấm men BB3 BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO Lower -0.0009889 -0.0010889 -0.0010555 -0.0002222 0.0007445 -0.0003222 -0.0014222 Chuyên ngành Vi sinh vật học Center -0.0001667 -0.0002667 -0.0002333 0.0006000 0.0015667 0.0005000 -0.0006000 Upper 0.0006555 0.0005555 0.0005889 0.0014222 0.0023889 0.0013222 0.0002222 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 -0.0007000 -0.0025667 0.0006667 -0.0002000 Trường ĐH Cần Thơ NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 -0.0015222 -0.0033889 -0.0001555 -0.0010222 0.0001222 -0.0017445 0.0014889 0.0006222 nấm men BB3 BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( * ) ( * -) ( * -) ( * ) ( -* ) ( * ) ( -* ) ( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = BB3 subtracted from: nấm men BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Lower -0.0009222 -0.0008889 -0.0000555 0.0009111 -0.0001555 -0.0012555 -0.0013555 -0.0032222 0.0000111 -0.0008555 Center -0.0001000 -0.0000667 0.0007667 0.0017333 0.0006667 -0.0004333 -0.0005333 -0.0024000 0.0008333 -0.0000333 Upper 0.0007222 0.0007555 0.0015889 0.0025555 0.0014889 0.0003889 0.0002889 -0.0015778 0.0016555 0.0007889 nấm men BB4 CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( -* ) ( * -) ( * ) ( * -) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = BB4 subtracted from: nấm men CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 nấm men CHUỐI K1.2 K2.1 K2.2 NHO Lower -0.0007889 0.0000445 0.0010111 -0.0000555 -0.0011555 -0.0012555 -0.0031222 0.0001111 -0.0007555 Center 0.0000333 0.0008667 0.0018333 0.0007667 -0.0003333 -0.0004333 -0.0023000 0.0009333 0.0000667 Upper 0.0008555 0.0016889 0.0026555 0.0015889 0.0004889 0.0003889 -0.0014778 0.0017555 0.0008889 + -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * -) ( * ) ( -* ) Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Trường ĐH Cần Thơ ( * -) ( * ) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = CHUỐI subtracted from: nấm men K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Lower 0.0000111 0.0009778 -0.0000889 -0.0011889 -0.0012889 -0.0031555 0.0000778 -0.0007889 Center 0.0008333 0.0018000 0.0007333 -0.0003667 -0.0004667 -0.0023333 0.0009000 0.0000333 Upper 0.0016555 0.0026222 0.0015555 0.0004555 0.0003555 -0.0015111 0.0017222 0.0008555 nấm men K1.2 K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( * ) ( -* ) ( * ) ( -* ) ( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = K1.2 subtracted from: nấm men K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Lower 0.0001445 -0.0009222 -0.0020222 -0.0021222 -0.0039889 -0.0007555 -0.0016222 Center 0.0009667 -0.0001000 -0.0012000 -0.0013000 -0.0031667 0.0000667 -0.0008000 Upper 0.0017889 0.0007222 -0.0003778 -0.0004778 -0.0023445 0.0008889 0.0000222 nấm men K2.1 K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( * -) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = K2.1 subtracted from: nấm men K2.2 NHO NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 nấm men K2.2 NHO Lower -0.0018889 -0.0029889 -0.0030889 -0.0049555 -0.0017222 -0.0025889 Center -0.0010667 -0.0021667 -0.0022667 -0.0041333 -0.0009000 -0.0017667 Upper -0.0002445 -0.0013445 -0.0014445 -0.0033111 -0.0000778 -0.0009445 + -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Trường ĐH Cần Thơ ( * ) ( * -) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = K2.2 subtracted from: nấm NHO NHO NHO RĐ1 RĐ2 men 2A 2B Lower -0.0019222 -0.0020222 -0.0038889 -0.0006555 -0.0015222 Center -0.0011000 -0.0012000 -0.0030667 0.0001667 -0.0007000 Upper -0.0002778 -0.0003778 -0.0022445 0.0009889 0.0001222 nấm NHO NHO NHO RĐ1 RĐ2 men 2A 2B + -+ -+ -+ ( -* ) ( * ) ( -* ) ( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = NHO subtracted from: nấm men NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 Lower -0.0009222 -0.0027889 0.0004445 -0.0004222 Center -0.0001000 -0.0019667 0.0012667 0.0004000 Upper 0.0007222 -0.0011445 0.0020889 0.0012222 nấm men NHO 2A NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( -* ) ( * ) ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = NHO 2A subtracted from: nấm men NHO 2B RĐ1 RĐ2 Lower -0.0026889 0.0005445 -0.0003222 Center -0.0018667 0.0013667 0.0005000 Upper -0.0010445 0.0021889 0.0013222 nấm men NHO 2B RĐ1 RĐ2 + -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 nấm men = NHO 2B subtracted from: nấm men RĐ1 RĐ2 nấm men RĐ1 RĐ2 Lower 0.0024111 0.0015445 Center 0.0032333 0.0023667 Upper 0.0040555 0.0031889 + -+ -+ -+ ( * ) ( * -) + -+ -+ -+ - Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 -0.0050 -0.0025 Trường ĐH Cần Thơ 0.0000 0.0025 nấm men = RĐ1 subtracted from: nấm men RĐ2 Lower -0.0016889 Center -0.0008667 Upper -0.0000445 nấm men RĐ2 + -+ -+ -+ ( -* ) + -+ -+ -+ -0.0050 -0.0025 0.0000 0.0025 4.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng nồng độ rỉ đƣờng mật số nấm men ban đầu đến sinh khối dòng nấm men đƣợc tuyển chọn * Sự tƣơng tác điều kiện Two-way ANOVA: sinh khối versus nồng độ_1, mật số_1 Source nồng độ_1 mật số_1 Interaction Error Total S = 0.001001 nồng độ_1 15 20 25 DF 2 18 26 MS 0.0000061 0.0000017 0.0000079 0.0000010 R-Sq = 72.38% Mean 0.0044222 0.0060222 0.0049111 mật số_1 10e3 10e4 10e5 SS 0.0000121 0.0000035 0.0000317 0.0000181 0.0000654 F 6.03 1.74 7.91 P 0.010 0.205 0.001 R-Sq(adj) = 60.10% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.00400 0.00480 0.00560 0.00640 Mean 0.0048111 0.0056222 0.0049222 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.00420 0.00480 0.00540 0.00600 .33333333333333333 Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ * Sự khác biệt ý nghĩa nghiệm thức One-way ANOVA: sinh khối versus tiêu Source tiêu Error Total S = 0.1037 Level 15 - 10E3 15 - 10E4 15 - 10E5 20 - 10E3 20 - 10E4 20 - 10E5 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 DF 18 26 SS 0.4393 0.1936 0.6329 MS 0.0549 0.0108 R-Sq = 69.41% N 3 3 3 3 Mean 0.4100 0.4833 0.4567 0.4500 0.5767 0.7800 0.5833 0.5833 0.3067 F 5.11 P 0.002 R-Sq(adj) = 55.81% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.20 0.40 0.60 0.80 StDev 0.0265 0.0764 0.0702 0.0624 0.1650 0.0854 0.1930 0.0971 0.0153 Pooled StDev = 0.1037 Grouping Information Using Fisher Method tiêu 20 - 10E5 25 - 10E4 25 - 10E3 20 - 10E4 15 - 10E4 15 - 10E5 20 - 10E3 15 - 10E3 25 - 10E5 N 3 3 3 3 Mean 0.7800 0.5833 0.5833 0.5767 0.4833 0.4567 0.4500 0.4100 0.3067 Grouping A B B B B C B C B C B C C Means that not share a letter are significantly different Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of tiêu Simultaneous confidence level = 49.83% tiêu = 15 - 10E3 subtracted from: tiêu 15 - 10E4 15 - 10E5 20 - 10E3 20 - 10E4 20 - 10E5 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower -0.1046 -0.1312 -0.1379 -0.0112 0.1921 -0.0046 -0.0046 -0.2812 Center 0.0733 0.0467 0.0400 0.1667 0.3700 0.1733 0.1733 -0.1033 Upper 0.2512 0.2246 0.2179 0.3446 0.5479 0.3512 0.3512 0.0746 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( -* ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 tiêu = 15 - 10E4 subtracted from: Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 tiêu 15 - 10E5 20 - 10E3 20 - 10E4 20 - 10E5 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower -0.2046 -0.2112 -0.0846 0.1188 -0.0779 -0.0779 -0.3546 Center -0.0267 -0.0333 0.0933 0.2967 0.1000 0.1000 -0.1767 Trường ĐH Cần Thơ Upper 0.1512 0.1446 0.2712 0.4746 0.2779 0.2779 0.0012 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * ) ( * -) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 tiêu = 15 - 10E5 subtracted from: tiêu 20 - 10E3 20 - 10E4 20 - 10E5 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower -0.1846 -0.0579 0.1454 -0.0512 -0.0512 -0.3279 Center -0.0067 0.1200 0.3233 0.1267 0.1267 -0.1500 Upper 0.1712 0.2979 0.5012 0.3046 0.3046 0.0279 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 tiêu = 20 - 10E3 subtracted from: tiêu 20 - 10E4 20 - 10E5 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower -0.0512 0.1521 -0.0446 -0.0446 -0.3212 Center 0.1267 0.3300 0.1333 0.1333 -0.1433 tiêu = 20 - 10E4 tiêu 20 - 10E5 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower 0.0254 -0.1712 -0.1712 -0.4479 Upper 0.3046 0.5079 0.3112 0.3112 0.0346 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 subtracted from: Center 0.2033 0.0067 0.0067 -0.2700 Upper 0.3812 0.1846 0.1846 -0.0921 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 tiêu = 20 - 10E5 subtracted from: tiêu 25 - 10E3 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower -0.3746 -0.3746 -0.6512 Center -0.1967 -0.1967 -0.4733 Upper -0.0188 -0.0188 -0.2954 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 tiêu = 25 - 10E3 subtracted from: tiêu 25 - 10E4 25 - 10E5 Lower -0.1779 -0.4546 Center 0.0000 -0.2767 Upper 0.1779 -0.0988 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 tiêu = 25 - 10E4 subtracted from: Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 tiêu 25 - 10E5 Lower -0.4546 Center -0.2767 Trường ĐH Cần Thơ Upper -0.0988 -+ -+ -+ -+ ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.35 0.00 0.35 0.70 General Linear Model: sinh khối versus lặp lại, mật số, nồng độ Factor lặp lại mật số nồng độ Type random fixed fixed Levels 3 Values 1, 2, 10000, 100000, 1000000 15, 20, 25 Analysis of Variance for sinh khối, using Adjusted SS for Tests Source lặp lại mật số nồng độ mật số*nồng độ Error Total DF 2 16 26 S = 0.000971373 Seq SS 0.0000030 0.0000035 0.0000121 0.0000317 0.0000151 0.0000654 Adj SS 0.0000030 0.0000035 0.0000121 0.0000317 0.0000151 R-Sq = 76.90% Adj MS 0.0000015 0.0000017 0.0000061 0.0000079 0.0000009 F 1.57 1.84 6.41 8.41 P 0.239 0.190 0.009 0.001 R-Sq(adj) = 62.47% Unusual Observations for sinh khối Obs 25 sinh khối 0.008000 Fit 0.005726 SE Fit 0.000620 Residual 0.002274 St Resid 3.04 R R denotes an observation with a large standardized residual * WARNING * No multiple comparisons were calculated for the following terms which contain or interact with random factors lặp lại Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence mật số 100000 1000000 10000 N 9 Mean 0.0 0.0 0.0 Grouping A A A Means that not share a letter are significantly different Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence nồng độ 20 25 15 N 9 Mean 0.0 0.0 0.0 Grouping A A B B Means that not share a letter are significantly different Grouping Information Using Tukey Method and 95.0% Confidence mật số 1000000 10000 100000 100000 nồng độ 20 25 25 20 N 3 3 Mean 0.0 0.0 0.0 0.0 Chuyên ngành Vi sinh vật học Grouping A A B A B A B Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 100000 10000 10000 1000000 1000000 15 20 15 15 25 3 3 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 Trường ĐH Cần Thơ A B B B B B 4.3 Thí nghiệm 3: Ảnh hƣởng pH đến sinh khối dòng nấm men đƣợc tuyển chọn One-way ANOVA: sinh khối versus pH Source pH Error Total DF 11 SS 0.047800 0.006867 0.054667 S = 0.02930 Level N 3 3 MS 0.015933 0.000858 R-Sq = 87.44% Mean 0.67000 0.81333 0.72000 0.65000 StDev 0.02000 0.03215 0.02646 0.03606 F 18.56 P 0.001 R-Sq(adj) = 82.73% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * -) ( -* ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -0.630 0.700 0.770 0.840 Pooled StDev = 0.02930 Grouping Information Using Fisher Method pH N 3 3 Mean 0.81333 0.72000 0.67000 0.65000 Grouping A B B C C Means that not share a letter are significantly different Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of pH Simultaneous confidence level = 82.43% pH = subtracted from: pH Lower 0.08817 -0.00516 -0.07516 Center 0.14333 0.05000 -0.02000 Upper 0.19850 0.10516 0.03516 + -+ -+ -+( * ) ( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+-0.12 0.00 0.12 0.24 pH = subtracted from: pH Lower -0.14850 -0.21850 Center -0.09333 -0.16333 Chuyên ngành Vi sinh vật học Upper -0.03817 -0.10817 + -+ -+ -+( -* ) ( -* ) + -+ -+ -+-0.12 0.00 0.12 0.24 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ pH = subtracted from: pH Lower -0.12516 Center -0.07000 Upper -0.01484 + -+ -+ -+( -* ) + -+ -+ -+-0.12 0.00 0.12 0.24 4.4 Thí nghiệm 4: Ảnh hƣởng thời gian đến sinh khối dòng nấm men đƣợc tuyển chọn One-way ANOVA: sinh khối versus thời gian Source thời gian Error Total DF 11 S = 0.08851 Level 24h 36h 48h 72h N 3 3 SS 0.17743 0.06267 0.24009 MS 0.05914 0.00783 R-Sq = 73.90% Mean 0.49667 0.54667 0.73667 0.78333 StDev 0.14048 0.02517 0.09866 0.03512 F 7.55 P 0.010 R-Sq(adj) = 64.11% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -0.45 0.60 0.75 0.90 Pooled StDev = 0.08851 Grouping Information Using Fisher Method thời gian 72h 48h 36h 24h N 3 3 Mean 0.78333 0.73667 0.54667 0.49667 Grouping A A B B Means that not share a letter are significantly different Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons among Levels of thời gian Simultaneous confidence level = 82.43% thời gian = 24h subtracted from: thời gian 36h 48h 72h Lower -0.11664 0.07336 0.12002 Center 0.05000 0.24000 0.28667 Upper 0.21664 0.40664 0.45331 + -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ -0.25 0.00 0.25 0.50 thời gian = 36h subtracted from: thời Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 gian 48h 72h Lower 0.02336 0.07002 Center 0.19000 0.23667 Upper 0.35664 0.40331 Trường ĐH Cần Thơ + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+ -0.25 0.00 0.25 0.50 thời gian = 48h subtracted from: thời gian 72h Lower -0.11998 Center 0.04667 Chuyên ngành Vi sinh vật học Upper 0.21331 + -+ -+ -+ ( * ) + -+ -+ -+ -0.25 0.00 0.25 0.50 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học [...]... ĐH Cần Thơ 1.2 Mục tiêu đề tài: Phân lập và tuyển chọn dòng nấm men tự nhiên có khả năng tăng sinh khối cao trên môi trường rỉ đường, đồng thời xác định các điều kiện nuôi cấy thích hợp cho dòng nấm men này sản xuất sinh khối đạt hiệu quả cao 1.3 Nội dung đề tài: - Phân lập và tuyển chọn các dòng nấm men có khả năng sản xuất sinh khối cao từ các loại quả, bã bia và rỉ đường - Khảo sát ảnh hưởng của... trường rỉ đường và tiến hành khảo sát ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy đến sự phát triển của nấm men để lựa chọn dòng nấm men tự nhiên sản xuất sinh khối tốt nhất 3.2.4.1 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng nồng độ rỉ đƣờng và mật số nấm men ban đầu đến sinh khối của dòng nấm men đƣợc tuyển chọn Mục đích thí nghiệm: Xác định mật số nấm men và nồng độ rỉ đường thích hợp cho quá trình sản xuất sinh khối nấm men. .. ra từ các nhà máy sản xuất đường rất lớn nên thuận lợi cho việc sản xuất sinh khối nấm men Vì vậy, đề tài Phân lập và tuyển chọn nấm men tạo sinh khối cao trên rỉ đƣờng” được thực hiện nhằm góp phần tạo điều kiện thuận lợi cho việc sản xuất sinh khối nấm men đạt chất lượng cao, ít tốn thời gian, có lợi về mặt kinh tế Chuyên ngành Vi sinh vật học 1 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp... hƣởng đến quá trình lên men Rỉ đường thường có màu nâu sẫm, được tạo ra trong quá trình chế biến đường Màu này rất khó bị phá hủy trong quá trình lên men Sau khi lên men, chúng sẽ bám vào sinh khối nấm men và tạo cho nấm men có màu vàng sẫm Màu này không phải màu tự nhiên của nấm men và việc tách màu ra khỏi sinh khối rất tốn kém và khó khăn Các chất màu này bao gồm các hợp chất caramen, phức chất của phenol... được xếp vào lớp nấm mốc) và Rhodotorula Chuyên ngành Vi sinh vật học 9 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ - Khóa phân loại nấm men (Kurtzman và Fell, 1997) Phân loại các giống nấm men dựa vào một số đặc điểm về hình thái, sinh lý nấm men: sự nảy chồi của nấm men, hình dáng nấm men, sự hình thành bào tử, khả năng lên men các loại đường, khả... khối của các dòng nấm men trên môi trƣờng dịch rỉ đƣờng Mục đích thí nghiệm: Từ các dòng phân lập được, chọn được dòng nấm men có khả năng sản xuất sinh khối cao trên môi trường dịch rỉ đường để tiến hành các thí nghiệm tiếp theo Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 1 nhân tố là các dòng nấm men Cách tiến hành: Sau khi tiến hành tăng sinh khối các dòng nấm men thuần trong... định sinh khối khô của các dòng nấm men cần khảo sát Chỉ tiêu theo dõi: Trọng lượng sinh khối nấm men Chuyên ngành Vi sinh vật học 21 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ 3.2.4 Khảo sát ảnh hƣởng của các điều kiện nuôi cấy đến sinh khối của dòng nấm men đƣợc tuyển chọn Từ thí nghiệm 1 chọn ra 1 dòng có khả năng tăng sinh khối tốt nhất trên môi... Bã bia, rỉ đường: pha loãng 10 lần với nước cất - Sau đó bổ sung glucose 2%, yeast extract 0.5%, peptone 0.5%, lên men tự nhiên trong 48 giờ ở nhiệt độ phòng (28- 320C) 3.2.2 Phân lập nấm men từ các nguồn khác nhau Mục đích thí nghiệm: Phân lập những dòng nấm men tự nhiên từ các nguồn khác nhau để tuyển chọn các dòng nấm men cho thí nghiệm khảo sát khả năng tăng sinh khối trên môi trường rỉ đường Cách... chất này giữa tế bào và môi trường 2.1.6 Phân loại nấm men (Lƣơng Đức Phẩm, 2006) Chủ yếu có hai lớp: nấm men thật (Ascomyces) và nấm men giả (Fungi imporfecti) Lớp nấm men thật (lớp Ascomyces – lớp nấm túi): phần lớn nấm men dùng trong công nghiệp thuộc lớp Ascomyces, đa số thuộc giống Saccharomyces bao gồm Endomyces và Schizosaccharomyces Lớp nấm men giả (Fungi imporfecti – nấm men bất toàn): Crytococus... sát ảnh hưởng của các điều kiện nuôi cấy (nồng độ rỉ đường, pH, mật số nấm men ban đầu) đến quá trình tăng sinh khối của một dòng nấm men được chọn Chuyên ngành Vi sinh vật học 2 Viện NC&PT Công nghê ̣ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 37 – 2014 Trường ĐH Cần Thơ CHƢƠNG 2 LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Nấm men 2.1.1 Đặc điểm nấm men Nấm men là vi sinh vật chân hạch, hiện tại có khoảng hơn 1.500 loài