BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ MEN BIA VÀ RỈ ĐƯỜNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN PHẠM HỒNG QUANG SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN MINH PHÁT MSSV: 3113747 LỚP: VI SINH VẬT HỌC K37 Cần Thơ, tháng 12/2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN NẤM MEN CHỊU NHIỆT TỪ MEN BIA VÀ RỈ ĐƯỜNG CÁN BỘ HƯỚNG DẪN CN PHẠM HỒNG QUANG SINH VIÊN THỰC HIỆN NGUYỄN MINH PHÁT MSSV: 3113747 LỚP: VI SINH VẬT HỌC K37 Cần Thơ, tháng 12/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN CN PHẠM HỒNG QUANG NGUYỄN MINH PHÁT DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG LỜI CẢM TẠ Em xin chân thành cám ơn Ban giám hiệu trường Đại Học Cần Thơ, Ban lảnh đạo Viện Nghiên Cứu và Phát Triển Công Nghệ Sinh Học cùng các thầy cô bộ môn đả nhiệt tình giúp đở và giảng dạy em những năm học vừa qua Em xin chân thành cám ơn Cô Ngô Thị Phương Dung, anh Huỳnh Xuân Phong, anh Phạm Ngọc Thành và anh Bùi Hoàng Đăng Long cùng các bạn làm luận văn tại phòng công nghệ sinh học thực phẩm đả giúp đở và tạo điều kiện cho em hoàn thành tốt luận văn này Em xin chân thành cám ơn thầy Phạm Hồng Quang cùng tập thể lớp Vi Sinh Vật khóa 37 đả ủng hộ và động viên tinh thần giúp em cố gắng quá trình thực hiện luận văn Em xin chân thành cám ơn Thầy Trần Nguyên Tuấn giúp đở em rất nhiều quá trình em học tập và nghiên cứu tại trường Xin kính chúc Thầy, Cô dồi dào sức khỏe và thành công đường giảng dạy và nghiên cứu của mình Xin chân thành cám ơn Cần Thơ, ngày tháng năm 2014 Sinh viên thực Nguyễn Minh Phát Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT TÓM LƯỢC Đề tài thực với mục đích phân lập tuyển chọn nguồn nấm men tự nhiên từ men bia, rỉ đường, đất nước thu ở nhà máy đường có khả chịu nhiệt lên men phụ phẩm nông nghiệp Tổng cộng 27 chủng nấm men phân lập với đặc tính sinh lý sinh hóa đa dạng: chủng có khả lên men đường saccharose, 18 chủng có khả lên men đường maltose, 17 chủng có khả lên men đường glucose, chủng có hoạt tính urease, chủng có hoạt tính gelatinase Khả chịu nhiệt chịu cồn chủng nấm men khảo sát, kết quả cho thấy chủng (PHHO BIA41) 27 chủng nấm men có khả phát triển ở nhiệt độ 43°C 14 tổng số 27 chủng có khả chịu ethanol ở nồng độ 9% Kết quả khảo sát khả lên men dịch rỉ đường ở điều kiện nhiệt độ khác chủng nấm men PHHP BIA41 cho thấy chủng PHHO lên men tốt nhất ở 37°C đạt 2,43% ethanol chủng BIA41 lên men tốt nhất ở nhiệt độ 30°C đạt 1,83% ethanol Từ khóa: chịu cồn, chịu nhiệt, nấm men, lên men ethanol Chuyên ngành Vi sinh vật học i Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT MỤC LỤC TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TỪ VIẾT TẮT vi CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu men bia 2.2 Rỉ đường 2.3 Giới thiệu chung nấm men 2.3.1 Đặc điểm nấm men 2.3.2 Hình dạng và kích thước 2.3.3 Cấu tạo tế bào nấm men 2.3.4 Các quá trình sinh lí của tế bào nấm men 2.3.5 Các yếu tố ảnh hưởng đến sự sinh trưởng của nấm men điều kiện nuôi cấy thu sinh khối tế bào 11 2.3.6 Vai trò và ứng dụng của nấm men 14 2.3.7 Nấm men chịu nhiệt 15 2.3.8 Một số chủng nấm men chịu nhiệt quan trọng .17 2.4 Sự lên men ethanol 20 2.4.1 Khái quát về quá trình lên men ethanol 20 2.4.2 Cơ chế của quá trình lên men .20 2.4.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 22 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 3.1 Phương tiện nghiên cứu 26 3.1.1 Thời gian và địa điểm 26 3.1.2 Nguyên liệu 26 3.1.3 Thiết bị - dụng cụ và hóa chất 26 3.2 Phương pháp nghiên cứu 27 Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT 3.2.1 Phân lập nấm men 27 3.2.2 Đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của nấm men 29 3.2.3 Sơ tuyển nấm men có hoạt tính lên men 31 3.2.4 Tuyển chọn nấm men chịu nhiệt 31 3.2.5 Thử nghiệm khả chịu ethanol của các chủng nấm men 32 3.2.6 Khảo sát khả lên men ethanol của các chủng nấm men 32 3.2.7 Phương pháp phân tích 32 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 33 4.1 Phân lập nấm men 33 4.2 Đặc điểm sinh lý, sinh hóa nấm men 39 4.2.1 Khả lên men đường saccharose và maltose 39 4.2.2 Khả phân giải urea và gelatin 41 4.3 Sơ tuyển nấm men có hoạt tính lên men cao 44 4.4 Khả chịu nhiệt chủng nấm men 45 4.5 Thử nghiệm khả chịu ethanol chủng nấm men 47 4.6 Khảo sát khả lên men ethanol chủng nấm men 49 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 51 5.1 Kết luận 51 5.2 Đề nghị 51 TÀI LIỆU THAM KHẢO 52 PHỤ LỤC Phụ luc 1: Các hình ảnh thiết bị sử dụng phòng thí nghiệm Phụ lục Phương pháp phân tích vi sinh vật 2.1 Phương pháp quan sát đặc điểm khuẩn lạc và đặc điểm tế bào nấm men 2.2 Phương pháp pha loãng 2.3 Phương pháp xác định mật số vi sinh vật 2.4 Xác định độ cồn và suất cồn phương pháp chưng cất Phụ lục Số liệu kết thí nghiệm Phụ lục Kết phân tích thống kê Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH BẢNG Bảng Đặc tính lên men của hai loại nấm men Bảng Thành phần dinh dưỡng của rỉ mật mía Bảng Thành phần chất hữu của rỉ mật Bảng Thành phần hóa học của nấm men .9 Bảng Sự hiện diện ứng dụng của nấm men một số thực phẩm, thức uống có cồn sản phẩm lên men 15 Bảng Những chủng nấm men khả phát triển và sản sinh ethanol ở nhiệt độ 37oC đến 45oC .17 Bảng Nguồn nguyên liệu, địa điểm thu mẫu, tên các chủng nấm men phân lập 33 Bảng Đặc điểm hình thái của các chủng nấm men 34 Bảng Chiều cao cột khí ống Durham lên men dung dịch đường saccharose 2% 39 Bảng 10 Khả lên men đường maltose của các chủng nấm men 40 Bảng 11 Kết quả thử hoạt tính urease và gelatinase của các chủng nấm men .42 Bảng 12 Khả lên men đường glucose của các chủng nấm men 44 Bảng 13 Khảo sát khả chịu nhiệt của 27 chủng nấm men sau 48 giờ 45 Bảng 14 Khảo sát khả chịu ethanol của 27 chủng nấm men 47 Bảng 15 Độ cồn của các chủng nấm men lên men rỉ đường .49 Bảng 16 Kết quả thí nghiệm lên men đường saccharose Phụ lục Bảng 17 Kết qủa thí nghiệm lên men đường maltose Phụ lục Bảng 18 Kết quả thí nghiệm lên men đường glucose Phụ lục Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT DANH SÁCH HÌNH Hình Saccharomyces cerevisiae Hình Saccharomyces carlsbergensis Hình Rỉ đường .5 Hình Tế bào nấm men quan sát dưới kính hiển vi điện tử Hình Kluyveromuces sp 18 Hình Saccharomyces spp 18 Hình Candida spp 19 Hình Cơ chế phân hủy đường tế bào nấm men (Teusink, 2000) 22 Hình Hoạt tính urease của chủng LMĐA1 43 Hình 10 Hoạt tính urease của chủng HO1 43 Hình 11 Hoạt tính gelatinse của các chủng nấm men 43 Hình 12 Hoạt tính gelatinse của các chủng nấm men 43 Hình 13 Khuẩn lạc chủng nấm men BIA41 ở nhiệt độ 43°C .47 Hình 14 Khuẩn lạc chủng nấm men PHHO ở nhiệt độ 43°C .47 Hình 15 Khuẩn lạc nấm men ở nồng độ ethanol 9% 49 Hình 16 Khuẩn lạc nấm men ở nồng độ ethanol 9% 49 Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT TỪ VIẾT TẮT Chuyên ngành Vi sinh vật học g/L gram per liter kg kilogam mL milliliter v/v volume/volume-thể tích/thể tích w/v weight/volume-khối lượng/thể tích vi Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT Phụ lục Kết phân tích thống kê Kết thống kê lên men đường glucose 12 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 135.512 5.212 35.69 0.000 Error 54 7.887 0.146 Total 80 143.399 S = 0.3822 R-Sq = 94.50% R-Sq(adj) = 91.85% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ - LMHO 0.0000 0.0000 HO1 2.2667 1.1015 LMM1 2.9667 0.0577 HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( -* -) ĐA 3.0000 0.0000 ( -* -) PHHO 3.0000 0.0000 ( -* -) Bia 23 0.1000 0.0000 PHĐA3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( -* -) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 1.2000 1.4177 TR1 0.1333 0.0577 M2 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ21 0.0000 0.0000 ( -* -) LMM2 0.0000 0.0000 ( -* -) Bia 3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) LMĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ22 0.0000 0.0000 ( -* -) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 1.0000 0.8000 Bia 42 0.2667 0.2082 TR3 2.9000 0.1732 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( -* -) ( -* -) ( * -) ( * -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT 0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.3822 Grouping Information Using Fisher Method N Mean Grouping Men bia 3.0000 A M1 3.0000 A PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 2.9667 A TR3 2.9000 A HO1 2.2667 TR2 1.2000 C Bia 41 1.0000 C Bia 42 0.2667 D TR1 0.1333 D Bia 23 0.1000 D RĐ1N 0.0000 D RĐ1l 0.0000 D RĐ22 0.0000 D LMĐA1 0.0000 D PHĐA1 0.0000 D Bia 3 0.0000 D LMM2 0.0000 D RĐ21 0.0000 D M2 0.0000 D Bia 21 0.0000 D PHĐA2 0.0000 D PHĐA3 0.0000 D HO3 0.0000 D LMHO 0.0000 D B 18 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 138.869 5.341 28.15 0.000 Error 54 10.247 0.190 Total 80 149.116 S = 0.4356 R-Sq = 93.13% Chuyên ngành Công nghệ Sinh học R-Sq(adj) = 89.82% Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev LMHO 0.0000 0.0000 + -+ -+ -+ ( -* -) HO1 2.6667 0.5774 LMM1 3.0000 0.0000 ( -* -) HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( -* -) ĐA 3.0000 0.0000 ( -* -) PHHO 3.0000 0.0000 Bia 23 0.2000 0.0000 PHĐA3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( -* -) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 1.8333 1.0408 TR1 1.0000 0.8660 M2 0.1000 0.0000 RĐ21 0.0000 0.0000 ( -* -) LMM2 0.0000 0.0000 ( -* -) Bia 3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA1 0.3333 0.1528 LMĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ22 0.0000 0.0000 ( -* -) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 2.1333 1.4154 Bia 42 0.9000 0.9644 TR3 3.0000 0.0000 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 1.2 2.4 3.6 Pooled StDev = 0.4356 Grouping Information Using Fisher Method N Mean TR3 3.0000 Grouping A Men bia 3.0000 A M1 3.0000 A Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 3.0000 A HO1 2.6667 A B Bia 41 2.1333 B C TR2 1.8333 C TR1 1.0000 D Bia 42 0.9000 D E PHĐA1 0.3333 D E F Bia 23 0.2000 E F M2 0.1000 F RĐ1N 0.0000 F RĐ1l 0.0000 F RĐ22 0.0000 F LMĐA1 0.0000 F Bia 3 0.0000 F LMM2 0.0000 F RĐ21 0.0000 F Bia 21 0.0000 F PHĐA2 0.0000 F PHĐA3 0.0000 F HO3 0.0000 F LMHO 0.0000 F Trường ĐHCT 24 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 141.062 5.425 36.78 0.000 Error 54 7.967 0.148 Total 80 149.029 S = 0.3841 R-Sq = 94.65% R-Sq(adj) = 92.08% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev LMHO 0.0000 0.0000 HO1 2.8333 0.2887 LMM1 3.0000 0.0000 HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( -* -) ĐA 3.0000 0.0000 ( -* -) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT PHHO 3.0000 0.0000 Bia 23 1.0667 0.6028 ( -* -) PHĐA3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( -* -) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 2.6667 0.2887 TR1 1.5667 1.2503 M2 0.4000 0.1732 RĐ21 0.0000 0.0000 ( -* -) LMM2 0.0000 0.0000 ( -* -) Bia 3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA1 1.7667 0.2517 LMĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ22 0.0000 0.0000 ( -* -) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 2.3333 1.1547 Bia 42 1.5667 0.6807 TR3 3.0000 0.0000 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( * -) ( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* ) ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.3841 Grouping Information Using Fisher Method N Mean Grouping TR3 3.0000 A Men bia 3.0000 A M1 3.0000 A PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 3.0000 A HO1 2.8333 A B TR2 2.6667 A B Bia 41 2.3333 PHĐA1 1.7667 Bia 42 1.5667 D E TR1 1.5667 D E Bia 23 1.0667 E B C Chuyên ngành Công nghệ Sinh học C D Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 M2 0.4000 F RĐ1N 0.0000 F RĐ1l 0.0000 F RĐ22 0.0000 F LMĐA1 0.0000 F Bia 3 0.0000 F LMM2 0.0000 F RĐ21 0.0000 F Bia 21 0.0000 F PHĐA2 0.0000 F PHĐA3 0.0000 F HO3 0.0000 F LMHO 0.0000 F Trường ĐHCT 30 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 147.355 5.668 38.26 0.000 Error 54 8.000 0.148 Total 80 155.355 S = 0.3849 R-Sq = 94.85% R-Sq(adj) = 92.37% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev LMHO 0.0000 0.0000 HO1 3.0000 0.0000 ( -* -) LMM1 3.0000 0.0000 ( -* -) HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( -* -) ĐA 3.0000 0.0000 ( -* -) PHHO 3.0000 0.0000 ( -* -) Bia 23 1.8333 1.0408 PHĐA3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( -* -) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 3.0000 0.0000 TR1 1.7333 1.1015 M2 0.6000 0.3606 RĐ21 0.0000 0.0000 ( -* -) LMM2 0.0000 0.0000 ( -* -) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Bia 3 0.0000 0.0000 PHĐA1 2.1000 0.1732 LMĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ22 0.0000 0.0000 ( -* -) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 2.4000 1.0392 Bia 42 1.7667 0.6807 TR3 3.0000 0.0000 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( -* -) Trường ĐHCT ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.3849 Grouping Information Using Fisher Method N Mean Grouping TR3 3.0000 A Men bia 3.0000 A TR2 3.0000 A M1 3.0000 A PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 3.0000 A HO1 3.0000 A Bia 41 2.4000 A B PHĐA1 2.1000 B C Bia 23 1.8333 B C Bia 42 1.7667 C TR1 1.7333 C M2 0.6000 D RĐ1N 0.0000 D RĐ1l 0.0000 D RĐ22 0.0000 D LMĐA1 0.0000 D Bia 3 0.0000 D LMM2 0.0000 D RĐ21 0.0000 D Bia 21 0.0000 D PHĐA2 0.0000 D PHĐA3 0.0000 D Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 HO3 0.0000 D LMHO 0.0000 D Trường ĐHCT 36 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 150.577 5.791 41.55 0.000 Error 54 7.527 0.139 Total 80 158.103 S = 0.3733 R-Sq = 95.24% R-Sq(adj) = 92.95% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ - LMHO 0.0000 0.0000 HO1 3.0000 0.0000 ( -* -) LMM1 3.0000 0.0000 ( -* -) HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( -* -) ĐA 3.0000 0.0000 ( -* -) PHHO 3.0000 0.0000 ( -* -) Bia 23 2.0000 1.0000 PHĐA3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( -* -) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 3.0000 0.0000 TR1 2.0667 0.8145 M2 0.7667 0.6429 RĐ21 0.0000 0.0000 ( -* -) LMM2 0.0000 0.0000 ( -* -) Bia 3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA1 2.1667 0.2887 LMĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ22 0.0000 0.0000 ( -* -) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 2.4000 1.0392 ( -* -) Bia 42 2.3333 0.7234 ( -* ) TR3 3.0000 0.0000 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( * -) ( * -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT 0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.3733 Grouping Information Using Fisher Method N Mean Grouping TR3 3.0000 A Men bia 3.0000 A TR2 3.0000 A M1 3.0000 A PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 3.0000 A HO1 3.0000 A Bia 41 2.4000 A B Bia 42 2.3333 B PHĐA1 2.1667 B TR1 2.0667 B Bia 23 2.0000 B M2 0.7667 C RĐ1N 0.0000 D RĐ1l 0.0000 D RĐ22 0.0000 D LMĐA1 0.0000 D Bia 3 0.0000 D LMM2 0.0000 D RĐ21 0.0000 D Bia 21 0.0000 D PHĐA2 0.0000 D PHĐA3 0.0000 D HO3 0.0000 D LMHO 0.0000 D 42 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 153.622 5.909 57.45 0.000 Error 54 5.553 0.103 Total 80 159.175 S = 0.3207 R-Sq = 96.51% Chuyên ngành Công nghệ Sinh học R-Sq(adj) = 94.83% Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev + -+ -+ -+ - LMHO 0.0000 0.0000 HO1 3.0000 0.0000 ( -* -) LMM1 3.0000 0.0000 ( -* -) HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( -* -) ĐA 3.0000 0.0000 ( -* -) PHHO 3.0000 0.0000 Bia 23 2.3333 0.9074 PHĐA3 0.0000 0.0000 ( -* -) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( -* -) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 3.0000 0.0000 TR1 2.6000 0.3606 M2 1.4000 0.9644 RĐ21 0.0000 0.0000 LMM2 0.1333 0.0577 ( * -) Bia 3 0.1000 0.0000 ( -* -) PHĐA1 2.1667 0.2887 LMĐA1 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ22 0.0000 0.0000 ( -* -) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 2.5667 0.7506 ( -* ) Bia 42 2.5667 0.4933 ( -* ) TR3 3.0000 0.0000 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( -* -) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( * -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* ) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.3207 Grouping Information Using Fisher Method N Mean TR3 3.0000 Grouping A Men bia 3.0000 A TR2 3.0000 A Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 M1 3.0000 A PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 3.0000 A HO1 3.0000 A TR1 2.6000 A B Bia 41 2.5667 A B Bia 42 2.5667 A B Bia 23 2.3333 B PHĐA1 2.1667 B M2 1.4000 LMM2 0.1333 D Bia 3 0.1000 D RĐ1N 0.0000 D RĐ1l 0.0000 D RĐ22 0.0000 D LMĐA1 0.0000 D RĐ21 0.0000 D Bia 21 0.0000 D PHĐA2 0.0000 D PHĐA3 0.0000 D HO3 0.0000 D LMHO 0.0000 D Trường ĐHCT C 48 giờ: Source DF SS MS F P Factor 26 159.5600 6.1369 85.85 0.000 Error 54 3.8600 0.0715 Total 80 163.4200 S = 0.2674 R-Sq = 97.64% R-Sq(adj) = 96.50% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev LMHO 0.0000 0.0000 HO1 3.0000 0.0000 LMM1 3.0000 0.0000 HO3 0.0000 0.0000 LMĐA2 3.0000 0.0000 ( * ) ĐA 3.0000 0.0000 ( * ) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học -+ -+ -+ -+ -( * ) ( * ) ( * ) ( * ) Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT PHHO 3.0000 0.0000 Bia 23 2.6667 0.5774 ( * ) PHĐA3 0.0000 0.0000 ( * ) PHĐA2 0.0000 0.0000 ( * ) M1 3.0000 0.0000 Bia 21 0.0000 0.0000 TR2 3.0000 0.0000 ( * ) TR1 3.0000 0.0000 ( * ) M2 1.8333 1.0408 RĐ21 0.0000 0.0000 LMM2 0.2000 0.1000 ( * ) Bia 3 0.2333 0.0577 ( * ) PHĐA1 2.1667 0.2887 LMĐA1 0.0000 0.0000 ( * ) RĐ22 0.0000 0.0000 ( * ) Men bia 3.0000 0.0000 Bia 41 2.6667 0.5774 Bia 42 2.8333 0.2887 TR3 3.0000 0.0000 RĐ1l 0.0000 0.0000 ( * ) RĐ1N 0.0000 0.0000 ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) ( * ) -+ -+ -+ -+ -0.0 1.0 2.0 3.0 Pooled StDev = 0.2674 Grouping Information Using Fisher Method N Mean Grouping TR3 3.0000 A Men bia 3.0000 A TR1 3.0000 A TR2 3.0000 A M1 3.0000 A PHHO 3.0000 A ĐA 3.0000 A LMĐA2 3.0000 A LMM1 3.0000 A HO1 3.0000 A Bia 42 2.8333 A Bia 41 2.6667 A Bia 23 2.6667 A PHĐA1 2.1667 B Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 M2 1.8333 Bia 3 0.2333 C LMM2 0.2000 C RĐ1N 0.0000 C RĐ1l 0.0000 C RĐ22 0.0000 C LMĐA1 0.0000 C RĐ21 0.0000 C Bia 21 0.0000 C PHĐA2 0.0000 C PHĐA3 0.0000 C Trường ĐHCT B HO3 0.0000 C LMHO 0.0000 C Kết thống kê thí nghiệm lên men rỉ đường Chủng PHHO One-way ANOVA: 30, 35, 37, 39 Source Factor Error Total DF 11 SS 5.063 0.958 6.022 S = 0.3461 Level 30 35 37 39 N 3 3 MS 1.688 0.120 F 14.09 R-Sq = 84.09% Mean 1.6100 0.6233 2.4300 1.2933 StDev 0.5456 0.4153 0.0000 0.0950 P 0.001 R-Sq(adj) = 78.12% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+( * ) ( * -) ( * -) ( -* ) + -+ -+ -+0.70 1.40 2.10 2.80 Pooled StDev = 0.3461 Grouping Information Using Fisher Method 37 30 39 35 N 3 3 Mean 2.4300 1.6100 1.2933 0.6233 Grouping A B B C Means that not share a letter are significantly different Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Simultaneous confidence level = 82.43% Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT 30 subtracted from: 35 37 39 Lower -1.6383 0.1683 -0.9683 Center -0.9867 0.8200 -0.3167 Upper -0.3350 1.4717 0.3350 + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+ -1.5 0.0 1.5 3.0 35 subtracted from: 37 39 Lower 1.1550 0.0183 Center 1.8067 0.6700 Upper 2.4583 1.3217 + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ -1.5 0.0 1.5 3.0 37 subtracted from: 39 Lower -1.7883 Center -1.1367 Upper -0.4850 + -+ -+ -+ ( -* ) + -+ -+ -+ -1.5 0.0 1.5 3.0 Chủng BIA41 One-way ANOVA: 30, 35, 37, 39 Source Factor Error Total DF 11 SS 2.319 2.940 5.259 S = 0.6062 Level 30 35 37 39 N 3 3 MS 0.773 0.367 R-Sq = 44.10% Mean 1.8300 1.3900 0.6100 1.3900 StDev 1.2124 0.0000 0.0000 0.0000 F 2.10 P 0.178 R-Sq(adj) = 23.14% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* -) ( -* -) + -+ -+ -+ 0.00 0.80 1.60 2.40 Pooled StDev = 0.6062 Grouping Information Using Fisher Method 30 39 35 37 N 3 3 Mean 1.8300 1.3900 1.3900 0.6100 Grouping A A B A B B Means that not share a letter are significantly different Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT Fisher 95% Individual Confidence Intervals All Pairwise Comparisons Simultaneous confidence level = 82.43% 30 subtracted from: 35 37 39 Lower -1.5814 -2.3614 -1.5814 Center -0.4400 -1.2200 -0.4400 Upper 0.7014 -0.0786 0.7014 + -+ -+ -+ ( * -) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ -2.4 -1.2 0.0 1.2 35 subtracted from: 37 39 Lower -1.9214 -1.1414 Center -0.7800 0.0000 Upper 0.3614 1.1414 + -+ -+ -+ ( -* ) ( -* -) + -+ -+ -+ -2.4 -1.2 0.0 1.2 37 subtracted from: 39 Lower -0.3614 Center 0.7800 Upper 1.9214 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học + -+ -+ -+ ( -* ) + -+ -+ -+ -2.4 -1.2 0.0 1.2 Viện NC &PT Công nghệ Sinh học [...]... lên men tạo thành ethanol và CO2 theo phương trình: Đường + Nitơ amine tự do + Nấm men + Oxy → Ethanol + CO2 + Nấm men Đặc tính lên men của hai loại nấm men này có nhiều điểm khác nhau dung để lên men các loại bia khác nhau Bảng 1 Đặc tính lên men của hai loại nấm men Đặc tính Nấm men nổi Nấm men chìm Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces carlsbergensis Loại bia: Ale Loại bia: ... tố: nguồn nguyên liệu, nguồn nước, công nghệ lên men, … và quan trọng hơn hết là nguồn men bia tạo nên hương vị đặc trưng của các thương hiệu bia hiện nay Nấm men Saccharomyces cerevisiae và Saccharomyces carlsbergensis là hai loại nấm men thường được sử dụng để lên men bia (Nguyễn Hoài Thương, 2009) Các loài nấm men lên men bia thuộc loại kỵ khí không bắt buộc Khi có oxy... Bảng 5 Sự hiện diện và ứng dụng của nấm men trong một số thực phẩm, thức uống có cồn và sản phẩm lên men Sản phẩm, ứng dụng Nấm men Rượu, bia Saccharomyces cerevisiae Bánh mì và bột nhão bánh mì S cerevisiae, S exiguus, S rosei D-Arabitol (chất làm ngọt) Candida diddensiae Chất tạo nhũ tương C lipolytica Thức ăn gia cầm và cá Phaffia rhodozyma Lactose và sữa lên men C pseudotropicalis,... nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT Bảng 6 Những chủng nấm men khả năng phát triển và sản sinh ethanol ở nhiệt độ 37oC đến 45oC Số lượng chủng Nấm men Tổng số được khảo sát ở 37oC Có hiệu suất Có hiệu suất lên men lên men ethanol trên ethanol trên 50% ở 37oC 50% ở 40oC Phát triển và sản sinh ethanol ở 45oC Candida 15 5 4 1 Hansenula 7 1 0 0 Kluyveromuces 12 8 5 5 Pichia... chủng nấm men chịu nhiệt quan trọng a Nấm men Kluyveromuces spp Kurtzman và Fell (1997) đã mô tả đặc điểm hình thái của Kluyveromuces spp là tế bào có hình ovan, hình elip và hình trụ kéo dài Số liệu bảng 2 cho thấy, Kluyveromuces spp là chủng nấm men được khảo sát (Hacking et al., 1984) Banat et al (1992) đã phân lập được chủng K marxianus có khả năng phát triển và lên men. .. trình lên men mà người ta chia làm nhiều kiểu lên men khác nhau Tuy nhiên có hai hình thức lên men chính là Chuyên ngành Vi sinh vật học 20 Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT lên men yếm khí và lên men hiếu khí Lên men rượu là quá trình lên men yếm khí với sự có mặt của nấm men, chúng sẽ chuyển hóa đường lên men thành... Một số ít nấm men có thể lên men đạt nồng độ cồn 17-20% Với nồng độ cồn cao hơn sẽ ức chế nấm men và kìm hãm lên men rượu Việc chọn lọc chủng nấm men có khả năng chịu được nồng độ ethanol cao sẽ mang lại lợi ích đáng kể cho quá trình lên men vì các chủng nấm men này có thể nâng cao hiệu suất của quá trình lên men Ngô Thị Phương Dung (2009) đã phân lập được... khả năng lên men ethanol của các chủng nấm men, tuyển chọn các chủng có đặc tính tốt − Thử nghiệm khả năng lên men ethanol của các chủng nấm men trong môi trường rỉ đường ở các nhiệt độ khác nhau Chuyên ngành Vi sinh vật học 2 Viện NC &PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 37 – 2014 Trường ĐHCT CHƯƠNG 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu về men bia Bia là đồ... dụng khác như hạt ngũ cốc hàm lượng Ca trong rỉ mật mía cao (tới 1%), trong khi đó hàm lượng P lại thấp Rỉ mật mía giàu Na, K Mg và S Rỉ mật cũng chứa một lượng đáng kể các nguyên tố vi lượng như Cu (7 ppm), Zn (10 ppm), Fe (200 ppm), Mn (200 ppm) (Nguyễn Xuân Trạch, 2009) 2.3 Giới thiệu chung về nấm men 2.3.1 Đặc điểm nấm men Nấm men là vi sinh vật chân hạch, hiện tại có... – 2014 Trường ĐHCT thước của thiết bị nuôi cấy nấm men là tiền đề cần thiết, ảnh hưởng gián tiếp lên sự tăng trưởng của nấm men 2.3.6 Vai trò và ứng dụng của nấm men Nấm men có khả năng sinh sản nhanh chóng, sinh khối của chúng rất giàu protein, lipip và vitamin (đặc biệt là vitamin B) Chúng có khả năng lên men các loại đường để tạo thành rượu trong điều kiện