Đang tải... (xem toàn văn)
xây dựng phương phương pháp xác định hàm lượng axit amin trong một số loài nấm lớn ( Linh Chi, Thượng Hoàng, Pl1, Pl2, Pl3, Pl4, ....ở rừng phía tây trung bộ. phương pháp phân tích bằng máy sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC), sắc kí lỏng cao áp GCMS.
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập -Tự -Hạnh phúc NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Khóa Ngành : : Nguyễn Duy Trọng Hoàng Thị Nga 51 Công nghệ thực phẩm Mssv: 1052043902 Mssv: 1052040676 Tên đề tài: Xác định hàm lượng axit amin thủy phân số loài nấm phương pháp sắc kí lỏng hiệu cao Nội dung nghiên cứu, thiết kế tốt nghiệp: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cán hướng dẫn : Ngày giao nhiệm vụ đồ án : Ngày hoàn thành đồ án : ThS Hoàng Văn Trung Ngày tháng năm 2014 Ngày tháng năm 2014 Ngày Chủ nhiệm môn (Ký ghi rõ họ tên) Sinh viên hoàn thành nộp đồ án vào ngày tháng năm 2014 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ tên) tháng năm 2014 Người duyệt (Ký, ghi rõ họ tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập –Tự –Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Duy Trọng Hoàng Thị Nga Khóa: 51 Cán hướng dẫn: ThS Hoàng Văn Trung Cán duyệt: Msv: 105204 Msv: 1052040676 Ngành: Công nghệ thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… Nhận xét của cán hướng dẫn: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………… … Ngày tháng năm 2014 Cán hướng dẫn (Ký, ghi rõ họ, tên) BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập –Tự –Hạnh phúc BẢN NHẬN XÉT ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên: Nguyễn Duy Trọng Hoàng Thị nga Khóa: 51 Cán hướng dẫn: ThS Hoàng Văn Trung Cán duyệt: Msv: 105204 Msv: 1052040676 Ngành: Công nghệ thực phẩm Nội dung nghiên cứu, thiết kế: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………… Nhận xét của cán duyệt: ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………… ………………………………………… … Ngày tháng năm 2014 Cán duyệt (Ký, ghi rõ họ, tên) LỜI CẢM ƠN Khóa luận thực phòng thí nghiệm Trung tâm Kiểm định An toàn Thực phẩm Môi trường - Trường Đại học Vinh Chúng xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Vinh, môn Công Nghệ Thực Phẩm, quý thầy cô truyền đạt kiến thức cho chúng thời gian học tập trường Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, chúng xin chân thành gửi lời cảm ơn đến thầy giáo Th.S Hoàng Văn Trung - Khoa Hóa học - Trường Đại học Vinh giao đề tài, tận tình hướng dẫn, tạo điều kiện thuận lợi suốt trình nghiên cứu hoàn thành đề tài Chúng xin chân thành cảm ơn ThS Chu Thị Thanh Lâm – Trung tâm kiểm định An toàn thực phẩm Môi trường – T.T Thực hành thí nghiệm - Trường Đại học Vinh tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ chúng trình làm thí nghiệm Đề tài hoàn thành nhờ hỗ trợ kinh phí từ đề tài Nghị định thư hợp tác Việt Nam – Đài Loan PGS.TS Trần Đình Thắng – Khoa Hóa học, trường Đại Học Vinh Chúng xin gửi lời cảm ơn đến thầy cô, cán Trung tâm Thí nghiệm giúp đỡ chúng trình thực đề tài Và lòng biết ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè động viên, giúp đỡ chúng hoàn thành đề tài Vinh, ngày Sinh tháng viên năm 2015 thực Nguyễn Duy Trọng Hoàng Thị Nga Tóm Tắt Nguyễn Duy Trọng, Hoàng Thị Nga lớp 51K Công Nghệ Thực Phẩm, Khoa Hóa Học, Trường Đại học Vinh Phân tích axit amin thủy phân số loài nấm tự nhiên bằng sắc ký lỏng cao áp (HPLC) Giảng viên hướng dẫn: Th.s Hoàng Văn Trung Khóa luận thực đối tượng nấm tự nhiên, loài nấm lớn, có tác dụng to lớn người Vì vậy, thành phần dinh dưỡng, đặc biệt thành phần amino axit rất quan tâm Để thực phân tích chúng tiến hành xử lí mẫu sử dụng máy sắc kí lỏng cao áp (HPLC) Trung tâm Kiểm định An toàn Thực phẩm Môi trường - Trường Đại học Vinh Những kết quả đạt được: Chúng xác định điều kiện tách định lượng axit amin bằng HPLC Xây dựng đường chuẩn axit amin Khảo sát giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp Từ phân tích định lượng loại axit amin mẫu nấm tự nhiên BẢNG KÍ HIỆU CÁC TỪ VIẾT TẮT Viết tắt AOAC Tên đầy đủ Hiệp hội nhà hoá học phân tích thống AQC Aminoquinolil- Nhydroxysuccinimidyl cacbamat Dm Chất khô EAA Axit amin thiết yếu FMOC 9-florenylmetyl cloroformat GC Sắc ký khí Sắc ký khí detector ion hóa lửa GC/FID Tên tiếng anh Association of Official Analytical Chemists Aminoquinolil- Nhydroxysuccinimidyl carbamate dry matter Essential amino acid 9-florenylmethyl cloroformate Gas chromatography Gas chromatography/ flame ionization detector Gas chromatography/ mass spectrometry High performance liquid chromatography GC/MS Sắc ký khí khối phổ HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao KPH Không phát MeOH Metanol Methanol NEAA Axit amin không thiết yếu ortho-phthalaldehyd/ orthophthaldialdehyd Phenylisothioxyanat RP-HPLC Sắc ký lỏng hiệu cao pha ngược TAA Tổng axit amin Nonessential amino acid ortho-phthalaldehyd/ orthophthaldialdehyd Phenylisothiocyanate Reverse phase - High performance liquid chromatography Total amino acid TEA Trietylamin Triethylamine THF Tetrahydrofuran Tetrahydrofuran OPA PITC MỞ ĐẦU Lí chọn đề tài Việt Nam những quốc gia có đa dạng sinh học cao thế giới với khoảng 12000 loài thực vật bậc cao 3000 loài động vật có xương sống mô tả, có những loài đặc hữu Cấu trúc địa chất độc đáo, địa lý thủy văn đa dạng, khí hậu nhiệt đới gió mùa góp phần tạo nên đa dạng hệ nấm Việt Nam, nguồn có giá trị tài nguyên rất to lớn Nấm có ý nghĩa rất quan trọng đời sống người, chúng nguồn thực phẩm giàu chất dinh dưỡng (Termitomyces albuminosus, Macrocybe gegantea), nguồn thức ăn quý nhân dân ưa chuộng, chứa nhiều protein, chất khoáng vitamin (A, B, C, D, E ) Nhiều loài nấm ứng dụng công nghiệp dược phẩm, nguồn nguyên liệu để điều chế hoạt chất điều trị bệnh như: Laricifomes officinalis nguyên liệu để chiết aragicin dùng chữa bệnh lao hoặc dùng làm thuốc nhuận tràng hay chất thay thế cho quinine Các chế phẩm từ nấm linh chi (Ganoderma) dùng để hỗ trợ điều trị nhiều bệnh bệnh gan, tiết niệu, tim mạch, ung thư, AIDS Trong quả thể Ganoderma lucidum có hoạt chất khác có hoạt tính kháng virus Chúng có tác dụng kìm hãm sinh trưởng phát triển virus HIV Các hoạt chất từ Ganoderma applanatum có hiệu lực chống khối u cao, chúng sử dụng điều trị ung thư: ung thư phổi, ung thư vú, ung thư dày Các dẫn xuất adenosine có Ganoderma capense G amboinense có tác dụng giảm đau, giãn cơ, ức chế kết dính tiền tiểu cầu Nhiều hoạt chất từ linh chi có khả đào thải phóng xạ, hạn chế loại trừ những tổn thương phóng xạ mô tế bào Protein nấm có giá trị dinh dưỡng cao so với hầu hết protein thực vật (Belitz & Grosch, 1999) [15] Axit amin cung cấp cho thể từ thực phẩm giàu protein Protein vào thể chuyển hóa thành 20 axit amin, có axit amin thiết yếu (bắt buộc phải cung cấp từ thức ăn, thức uống) Axit amin thành phần quan trọng thực chức đa dạng thể sống, tiền thân nhiều sinh chất quan trọng thể sống Axit amin tạo nên tế bào, phục hồi mô, tạo nên kháng thể chống lại vi khuẩn virut, phần enzym hệ thống hormone Nó tạo nên ARN, AND vận chuyển oxi khắp thể tham gia vào hoạt động Sự thiếu hụt axit amin dẫn đến thể mệt mỏi, hạ đường huyết, dị ứn[64] Hiện với phát triển kỹ thuật phân tích, phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) phương pháp phân tích đơn giản, nhanh, có độ tin cậy cao Trong những năm gần đây, HPLC ứng dụng rộng rãi phân tích, đánh giá chất lượng thực phẩm axit amin, vitamin, kháng sinh, phụ gia thực phẩm Xuất phát từ thực tế đó, chúng lựa chọn đề tài : “Nghiên cứu xác định hàm lượng axit amin thủy phân số loài nấm lớn vùng Bắc Trung Bộ phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC” Mục đích nghiên cứu Xây dựng phương pháp tách định lượng đồng thời axit amin loại nấm khác nhau, cung cấp số liệu về thành phần dinh dưỡng (axit amin) số loại nấm nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu Nghiên cứu xác định axit amin loại nấm tự nhiên thu thập từ rừng Quốc gia Pù Mát, Phong Nha Kẻ Bàng thuộc vùng Bắc Trung Bộ gồm: - Mẫu nấm PL1 10 Hình 3.35: Sắc đồ tách axit amin dịch thủy phân mẫu nấm PL3 Hình 3.36: Sắc đồ tách axit amin dịch thủy phân mẫu nấm PL4 79 Hình 3.37: Sắc đồ tách axit amin dịch thủy phân mẫu nấm Linh Chi Hình 3.38: Sắc đồ tách axit amin dịch thủy phân nấm Linh Chi Đen Bảng 3.9: Hàm lượng axit amin mẫu nấm TT Axit Nấm Nấm Nấm Nấm amin PL1 PL2 PL4 PL3 Nấm Linh Linh Chi Chi Đen 80 Thr KPH 7.32 7.62 KPH 27,96 69.56 Val 2039.50 KPH 1195.31 1197.4 1498,76 2717.84 Met 149.43 51.90 15.11 9.36 321,18 148.73 Ile 729.08 108.66 219.41 251.45 396,45 1294.49 Leu 1785.60 537.61 1052.79 1062.11 952,02 2271.51 Phe 3175.21 747.98 1624.62 1737.25 2258.77 888.37 Lys 493.46 207.77 690.36 483.99 672.97 453.82 His 4348.93 1037.40 2488.49 2510,92 2421.66 4863.67 12721.1 2698,64 7365.71 7252.48 8549.77 12707.9 Tổng axit amin thiết yếu Asp 3876.80 882.97 1812.52 1797.90 1558.60 4190.67 10 Glu KPH KPH KPH KPH KPH KPH 11 Ser 1286.11 771.86 762.50 277.79 1008.87 12 Gly 1052.69 KPH 560.67 609.05 313.02 1033.28 3082.47 1980.87 1410.38 1955.63 1018.8 3804.60 Cys – 13 ss – Cys 14 Ala 1192.51 270.37 723.62 685.38 935.96 491.86 15 Arg _ _ _ _ _ _ 16 Tyr 266.17 83.64 102.65 108.27 130.41 459.84 17 Pro 1511.82 556.47 825.85 973.07 1251.27 2638.57 Tổng axit 12268.7 3774.32 6207.55 6891.8 5485.85 13627.9 amin 81 không thiết yếu Tổng 24989.8 6472.96 13573.26 14144.8 14035.62 26335.8 EAA/TAA 50.91% 41.69% 54.27 % 51.28% 60.91% 48.25% Bảng 3.8 bảng 3.9 cho thấy loại nấm nấm Linh Chi Đen có tổng hàm lượng axit amin cao nhất (26335.8 μg/g), nấm PL2 thấp nhất (6472.96 μg/g) Nếu so sánh với số loài nấm thế giới nghiên cứu về hàm lượng nấm sò tím 6,86 g/100g = 68600 μg/g nấm kim châm Hàn Quốc 5,62 g/100g = 56200 μg/g (Lee, K, J et at., 2011), hay loài Dictyophora indusiata (nấm lưới trắng) loài có hàm lượng axit amin (8000mgkg -1) thấp nhất 41 loài nấm Vân Nam (mục 1.2.5) nhận xét mẫu nấm hàm lượng trung bình thấp Như vậy, tùy thuộc loài nấm, môi trường sống…mà nấm có hàm lượng protein khác Trong thành phần cả loại nấm đều chứa đầy đủ axit amin thiết yếu cho thể Tỉ lệ EAA/TAA từ 41.69% (nấm Pl2) đến 60,91% (nấm Thượng Hoàng) suy tỉ lệ EAA/NEAA từ 0,78 – 1.56 Như tỉ lệ EAA/NEAA loại đáp ứng tốt với giá trị tham khảo 0,6 đề nghị PAO/WHO (1973), nhiên axit amin Arg không định lượng mẫu ảnh hưởng khách quan đến kết quả Cả loại nấm nguồn thực phẩm giàu dinh dưỡng có chứa đầy đủ axit amin thiết yếu Hàm lượng Glu số acid amin khác nhỏ vài loại nấm nên định lượng 82 Chúng tiến hành xác định axit amin thủy phân loại nấm PL1, Pl2, Pl3, Pl4, Thượng Hoàng xử lí mẫu nguyên liệu theo phương pháp khác Kết quả bảng 3.10 Bảng 3.10.Hàm lượng axit amin mẫu nấm theo phương pháp xử lí mẫu khác Nấm Nấm TT Axit Nấm PL1 Nấm PL1 amin HL- ĐK HL- CK Nấm PL1 HL- T PL2 Thượng Nấm PL2 HL- T Hoàng HL- T PL3 HL- T Nấm PL4 HL-CK HL-CK Thr 114,34 KPH 24,04 KPH 0 0 Val 1647,34 2019,58 2582,3 1997,9 2401,8 Met 300,80 217,27 107,05 369,65 418,02 128,03 106,10 234,19 Ile 160,42 198,67 232,34 286,23 KPH Leu 1219,18 1433,88 464,26 2318,08 3120,5 462,75 2544,2 1251,18 Phe 135,11 1555,73 481,56 2389,19 2987,1 498,79 2543,5 1233,3 Lys 667,68 627,64 201,09 861,04 1091,0 319,69 751,48 1011,4 His 1817,90 1688,69 783,28 2587,22 3407,9 1246,9 2770,8 2055,3 4415,43 7369,22 2061,28 10777,1 13893,1 2656,16 10713,9 8187,2 Tổng axit amin thiết yếu Asp 1386,88 1203,08 296,17 2285,56 2818,5 749,18 2860,2 1202,9 10 Glu KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 11 Ser KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 12 Gly KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH KPH 83 Cys 13 – ss – 4951,88 3601,55 2701,1 4531,36 5943,4 3059,7 1439,6 5905,8 Cys 14 Ala KPH KPH 0 0 15 Arg _ _ _ _ _ _ _ _ 16 Tyr 614,84 608,27 294,29 364,36 921,29 279,65 272,96 1033,8 17 Pro 4988,89 3460,9 1536,1 5020,9 4633,5 3519,9 3852,8 5634,6 11942,49 8873,8 4827,66 12202,18 14316,7 7608,43 8425,56 13777,1 Tổng 16357,92 8947,50 6888,94 22979,28 28209,8 10264,6 19139,5 21964,3 EAA/TAA 27,00% 82,36% 29,92% 46,90% 49,25% 25,88% 55,98% 37,28% Tổng axit amin không thiết yếu Từ bảng 3.10 ta thấy điều kiện xử lí mẫu khác làm ảnh hưởng đến hàm lượng acid amin mức độ khác Thr bị mất sử dụng phương pháp chiết hồi lưu, sấy đông khô để xử lí mẫu 84 KẾT LUẬN Trên sở nhiệm vụ đặt kết quả đạt chúng rút số kết luận sau: Khảo sát tối ưu hóa số điều kiện quy trình thủy phân xử lý mẫu xác định hàm lượng axit amin nấm : + Thời gian thủy phân mẫu tối ưu 24h + Nồng độ HCl thủy phân tối ưu 6M Đã xây dựng phương trình đường chuẩn axit amin xác định khoảng nồng độ nghiên cứu nằm khoảng tuyến tính Xác định giới hạn phát LOD giới hạn định lượng LOQ phương pháp rất nhỏ: LOD từ 0,0006 – 0,0060 pmol, LOQ từ 0,0020 – 0,0153 pmol Quy trình phân tích đưa đánh giá bằng đường chuẩn, độ 85 thu hồi Độ thu hồi với loại axit amin nằm khoảng 85,6 – 133,8% vùng đường chuẩn tuyến tính Xác định hàm lượng axit amin thủy phân mẫu nấm tự nhiên, cụ thể: TT Mẫ Hàm lượng axit u amin thủy nấm phân(μg/g) Nấm PL1 24989.8 Nấm PL2 6472.96 Nấm PL3 13573.26 Nấm PL4 14144.8 Nấm Thượng hoàng 6522.06 Nấm Linh chi 14035.62 Nấm Linh chi đen 26335.8 Từ kết quả thu chúng thấy phương pháp phân tích hàm lượng axit amin mẫu nấm với độ tin cậy cao đề nghị áp dụng phương pháp phân tích axit amin cho nhiều đối tượng thực phẩm khác 86 Chúng mong muốn tiếp tục nghiên cứu để hoàn chỉnh mở rộng những đề tài khác, tiếp tục đánh giá kết quả để so sánh hàm lượng axit amin những loài nấm khác từ đánh giá giá trị loài nấm bổ sung số liệu vào bảng thành phần thực phẩm Việt Nam TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Nguyễn Trung thuần, Phạm Thị Thu, (2002), Bách khoa dinh dưỡng, Nhà xuất bản Phụ Nữ- Hà Nội, trang 28-52 Phạm Luận (1987), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu cao, Khoa Hóa học - Trường Đại học Tổng Hợp Hà Nội Phạm Luận (1999), Cơ sở lý thuyết sắc ký điện di mao quản hiệu suất cao, Khoa Hóa học - Trường ĐHKHTN Hà Nội Phạm Văn Sổ, Bùi Thị Như Thuận (1978), Kiểm nghiệm lương thực thực phẩm, Nhà xuất bản Khoa học Kĩ thuật – Hà Nội, trang 128-183 Trịnh Tam Kiệt (2011), Nấm lớn Việt Nam tập I, Nhà xuất bản khoa học tự nhiên công nghệ 87 Trịnh Tam Kiệt, Trịnh Tam Bảo (2008), Thành phần loài nấm dược liệu Việt Nam, Tạp chí di truyền học ứng dụng – chuyên san công nghệ sinh học, 4, 39-42 Tiếng Anh AOAC Official Method (2000), Monosodium Glutamate in food, Potentiometric Titration Method, C 970.37 Bailey, J.L (1962), Estimation of amino acids by ninhydrin, Techniques in Protein Chemistry, Elsevier, Amsterdam, pp 73-81 Bano Z., Rajarathnam, S (1988), Pleurotus mushroom, CRC Crit Rev Food Sci Nutr, 27, 87–158 10 Bano, Z., Rajathnam, S (1982), Tropical Mushroom Biological Nature and Cultivation Methods, Chinese University Press, Hong Kong, 363380, 1982 11 Barros L, Cruz T, Baptista P, Estevinho LM, Ferreira ICFR (2008), Food Chem Toxicol, 46:2742–7 12 Barros, L., Baptista, P., Correira, D M., Casa, S., Oliveira, B., & Ferreira, I C F R (2007a), Fatty acid and sugar compositions, and nutritional value of five wild edible mushrooms from Northeast Portugal, Food Chemistry, 105, 140–145 13 Barros, L., Venturini, B A., Baptista, P., Estevinho, L M., & Ferreira, I C F R (2008), Chemical composition and biological properties of Portuguese wild mushrooms: A comprehensive study, Journal of Agricultural and Food Chemistry doi:10.1021/jf8003114 14 Bauer-Petrovska, B (2001) Protein fractions in edible Macedonian mushrooms European Food Research and Technology, 212, 469–472 15 Belitz, H.-D., & Grosch, W (1999), Food chemistry, Berlin: Springer 16 Cavalieri, C., Bolzoni, L., & Bandini,M (2010), Nicotine determination in mushrooms by LC-MS/MS with preliminary studies on the impact of drying on nicotine formation Learning, Media and Technology, 27, 473 17 Chang, S, T (1980), Mushroom as human food, Bioscience, 30, 399-401 88 18 Chen, S.-Y., Ho, K.-J., Hsieh, Y.-J., Wang, L.-T., & Mau, J.-L (2012), Contents of lovastatin, c-aminobutyric acid and ergothioneine in mushroom fruiting bodies and mycelia, LWT-Food Science and Technology, 47, 274–278 19 Colak, A., Faiz, Z., & Sesli, E (2009), Nutritional composition of some wild edible mushrooms, Turkish Journal of Biochemistry, 34, 25–31 20 Colak, A., Kolcuoglu, Y., Sesli, E., & Dalman, O (2007), Biochemical composition of some Turkish fungi, Asian Journal of Chemistry, 19, 2193–2199 21 Constantinos K Zacharis, Georgios A Theodoridis, Anastasios N Voulgaropoulos (2005), Coupling of sequential injection with liquid chromatography for the automated derivatization and on-line determination of amino acids, Talanta, 68, p.448-458 22 Dany Heems, Genevieve Luck, Christophe Fraudeau, Eric Verette (1988), Full automated precolumn derivatization, on-line dialysis and highperformance liquid chromatographic analysis of amino acids in food, beverages and feedstuff, Journal of chromatography A, 798, p.9-17 23 Díez, A A., & Alvarez, A (2001), Compositional and nutritional studies on two wild edible mushrooms from northwest Spain, Food Chemistry, 75, 417–422 24 Diplock AT, Aggett PJ, AshwellM, Bornet F, Fern EB, RoberfroidMB (1999), Br J Nutr, 81:S1–S27 25 Eva Guillamón, Ana García-Lafuente, Miguel Lozano, Matilde D´Arrigo, Mauricio A Rostagno, Ana Villares, José Alfredo Martínez (2010), Edible mushrooms: Role in the prevention of cardiovascular diseases, Fitoterapia, Volume 81 , Pages 715-723 26 Falandysz J (2008) J Environ Sci Health C Environ Carcinog Ecotoxicol Rev; 26:256–99 27 FAO (Food and Agriculture Organization) (1991), Protein Quality Evaluation, Rome:Food and Agricultural Organization of the United Nations 89 28 Gross, B., & Asther, M (1989) Flavour of Basidiomycetes: Characteristics, analysis and production, Sciences des Aliments, 9, 427– 454 29 Guo, Y J., Deng, G F., Xu, X R., Wu, S., Li, S., Xia, E Q., et al (2012), Antioxidant capacities, phenolic compounds and polysaccharide contents of 49 edible macro-fungi, Food & Function, 3, 1195–1205 30 Hawksworth, D.L., (1991), The fungal dimension of biodiversity Magnitude, significance and conservasion, Mycol, Res 95, 640-655 31 Hawksworth, D.L., (2001), The magnitude of fungal diversity: the 1.5 million species estimate revisited, Mycol, Res 105, 1422-1432 32 Hayes, W, A., Haddad, N (1976) The foof value of the cultivated mushroom and its importance to the mushroom industry, Mushroom J., 40, 104-110 33 Ibrahim Kıvrak, Seyda Kıvrak, Mansur Harmandar (2014), Free amino acid profiling in the giant puffball mushroom (Calvatia gigantea) using UPLC–MS/MS, Food Chemistry, 158, 88–92 34 Kim, M Y., Chung, L M., Lee, S J., Ahn, J K., Kim, E H., Kim, M J., et al (2009), Comparison of free amino acid, carbohydrates concentrations in Korean edible and medicinal mushrooms, Food Chemistry, 113, 386– 393 35 Kwang Jae Lee, In Jue Yun, Kyung Hee Kim, Sang Hyun Lim, Hun Ju Ham, Won Sik Eum, Jin Ho Joo (2011), Amino acid and fatty acid compositions of Agrocybe chaxingu, an edible mushroom, Journal of Food Composition and Analysis, 24, 175–178 36 Li, G S F., Chang, S.T (1982), Tropical Mushroom Biological Nature and Cultivation Methods, Chinese University Press, Hong Kong, 199219 37 Liu, P., Li, H M., & Tang, Y J (2012), Comparison of free amino acids and 5’ -nucleotides between Tuber fermentation mycelia and natural fruiting bodies, Food Chemistry, 132, 1413–1419 38 Liu, Y T., Sun, J., Luo, Z Y., Rao, S Q., Su, Y J., Xu, R., et al (2012), Chemical composition of five wild edible mushrooms collected 90 fromsouthwest China and their antihyperglycemic and antioxidant activity, Food and Chemical Toxicology, 50, 1238–1244 39 Lourdes Bosch, Amparo Alegria, Rosaura Farre (2006), Application of the 6-aminoquinolyl-N-hydroxysuccinimidyl carbamate (AQC) reagent to the RP-HPLC determination of amino acids in infant foods, Journal of chromatography B, 831, P 176-183 40 M Ummadi, B C.Weiner (2002), Use of capillary electrophoresis and laser-induced fluorescence for attomole detection of amino acids, Journal of chromatography A, 964, p.243-253 41 Mantovani MS, Bellini MF, Angeli JPF, Oliveira RJ, Silva AF, Ribeiro LR.(2008), Mutat Res;658:154–61 42 Manzi P, Grambelli L, Marconi S, Vivanti V, Pizzoferrato L (1999), Food Chem, 65, 477–82 43 Manzi, P., Marconi, P., Aguzzi, A., & Pizzoferrato, L (2004), Commercial mushrooms: Nutritional quality and effect of cooking, Food Chemistry, 84, 201–206 44 Marekov, L., Momchilova, S., Grung, B., Nikolova-Damyanova, B (2012), Fatty acid composition of wild mushroom species of order Agaricales—Examination by gas chromatography–mass, Journal of Chromatography B, Volume 910, 54-60 45 Mattilda P, Könkö K, Eurola M, Pihlava JM, Astola J, Vahteristo L, et al ( 2001), J Agric Food Chem , 49, 2343–8 46 Moore, S., Stein, W.H., (1948), Photometric ninhydrin method for use in the chromatography of amino acids, Journal of Biological Chemistry, 176, p.367-388 47 Moore, S., Stein, W.H., (1951), Determination amino acid by postcolumm derivatization, J.Biol Chem 192,663 48 Moore, S., Stein, W.H., (1954), A modified ninhydrin reagent for the photometric determination of amino acids and related compounds, Journal of Biological Chemistry, 211, p.907-913 91 49 Nathalie Le Floc'h, Bernard Seve (2007), Biological roles of tryptophan and its metabolism: Potential implications for pig feeding, Livestock Science, Volume 112, Issues 1-2 23–32 50 Nedelcheva, D., Antonova, D., Tsvetkova, S., Marekov, I., Momchilova, S., Nikolova-Damyanova, B., et al (2007) TLC and GC–MS probes into the fatty acid composition of some Lycoperdaceae mushrooms Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 30, 2717–2727 51 Pavel Kalač (2009), Chemical composition and nutritional value of European species of wild growing mushrooms, Food Chemistry, Volume 113, Pages 9-16 52 Rai, M., Tidke, G., & Wasser, S P (2005), Therapeutic potential of mushrooms, Natural Products Radiance, 246–257 53 Satoshi Mitsuhashi (2014), Current topics in the biotechnological production of essential amino acids, functional amino acids, and dipeptides, Current Opinion in Biotechnology, 26:38–44 54 Shih-Wen Sun, Yi-Cheng Lin, Yih-Ming Weng, Min-Jane Chen (2006), Effciency improvement on ninhydrin method for amino acids quantification, Journal of food and analysis, 19, p.112-117 55 Shu-ting Chang and Philip G.Miles, (1930), Mushroom culvation, nutritional value, medicinal effect, and environmental impact, 2nd ed 56 Sun, C., Lin, J.,Wan, Y P., Liu, Y., & Xu, H K (2012), Amino acids contents of common wild edible mushrooms in Yunnan province, Plant Diversity and Resources, 34,89–92 57 U.S Department of Agriculture, Agricultural Research Service, USDA Nutrient Data Laboratory (2009), USDA National Nutrient Database for Standard Reference, Release 22 www.ars.usda.gov/nutrientdata 58 University of Maryland Medical Center (2009) "Lysine", Retrieved 59 Vaz, J A., Barros, L., Martins, A., Santos-Buelga, C., Vasconcelos, M H., & Vasconcelos I C F R (2011), Chemical composition of wild edible mushrooms and antioxidant properties of their water soluble polysaccharidic and ethanolic fractions, Food Chemistry, 126, 610–616 92 60 Vetter, J (2000), Trypsin inhibitor activity of basidiomycetous mushrooms, European Food Research and Technology, 211, 346–348 61 Wang, X, M., Zhang, Z., Wu, L, H., Zhao, Y, L., Li, T., Li, Z, Q., Wang, Y, Z., Liu, H, G (2014), A mini-review of chemical composition and nutritional value of edible wild-grown mushroom from China, Food Chemistry, 151, 279–285 62 Whittaker, R H (1969), “New concepts of kingdoms of organisms”, Science, 163, 150–160 63 Wu G (2009), Amino acids: metabolism, functions, and nutrition, Amino Acids, 37, 1-17 64 Yaru Song, Ming Shenwu, Shulin Zhao, Dongyan Hou, Yi-Ming Liu (2005), Enantiomeric separation of amino acids derivatized with 7-fluoro4-nitrobenzoxadiazole by capillary liquid chromatographyltandem mass spectrometry, Journal of chromatography A, 1091, 102-109 65 Yiannis C Fiamegos, Constantine D Stalikas (2006), Gas chromatographic determination of amino acids via one-step phase-transfer catalytic pentafluorobenzylation-preconcentration, Journal of chromatography A 66 Yin, J Z., & Zhou, L X (2008) Analysis of nutritional components of kinds of wild edible fungi in Yunnan Food Research and Development, 29, 133–136 93 [...]...H1: Mẫu nấmPL1 H2: Mẫu nấm PL2 H4: Mẫu nấm TH H5: Mẫu nấm Linh Chi H3:Mẫu nấm PL3 H6: Nấm Linh Chi Đen 4 Nhiệm vụ nghiên cứu 11 - Tổng quan về nấm, các axit amin và phương pháp định lượng axit amin - Xác định các điều kiện tách và định lượng axit amin bằng HPLC - Xây dựng đường chuẩn của các axit amin - Khảo sát giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của phương pháp - Đánh giá... 18 dựa trên hàm lượng cao của riboflavin (vitamin B2), niacin và của vitamin C, vitamin B1, vitamin D, β-caroten (tiền vitamin A), vitamin E và vitamin B 12 Nấm giống như là nguồn thức ăn không động vật chứa vitamin D, và vì thế chúng là nguồn vitamin D tự nhiên cho người ăn chay Hàm lượng vitamin D 2 là đáng kể trong một số loài nấm hoang dã, nhưng nó gần như vắng mặt trong các loài nấm trồng... 2,7 2,9 2,4 1,0 3,4 amin thiết yếu ở người lớn 2,9 4,0 3,4 3,7 4,0 2,0 1,0 2,9 1.2.5 Axit amin trong nấm Như đã trình bày ở mục 1.1.2.2 nấm là một nguồn tốt của axit amin Từ sự ước tính protein thô là một khảo nghiệm gián tiếp để tính hàm lượng axit amin tổng được thực hiện bởi mức khác nhau của phi protein thì việc xác định định lượng của tổng số axit amin có mặt sau khi thủy phân protein chắc... phẩm theo axit amin thiết yếu của chúng liên quan đến các yêu cầu chế độ ăn uống dành cho người lớn trong một chỉ số định lượng trên thang điểm từ 0 đến 100 Nấm (9 8) xếp hạng chỉ dưới thịt (1 00) và cao hơn rau bina (7 6) Đặc biệt có sự hiện diện hầu như đủ các loại axit amin, trong đó có 8 loại axit amin cần thiết cho con người Thành phần axit amin trong nấm gần bằng hoặc cao hơn so... tổng hàm lượng tro [36] K là phong phú và chiếm khoảng gần 45% tổng hàm lượng tro Hàm lượng tro trong nấm thường chiếm từ 5-12% trọng lượng khô Nhìn chung, hàm lượng tro của nấm có phần cao hơn hoặc tương đương với hầu hết các loại rau Nấm chứa hàm lượng cao của photpho, kali và tương đối cao của magiê Tuy nhiên, một số nguyên tố còn lại sẵn có trong nấm vẫn chưa được biết hàm lượng. .. kiềm (trong môi trường axit chỉ có trytophan bị phá hủy) - Tính chất đồng phân quang học (hoạt quang) - Tất cả các axit amin đều có đồng phân quang học (trừ glyxin) - Đa số các axit amin tự nhiên đều tồn tại ở dạng L - axit amin (chỉ ở dạng này thì các axit amin có giá trị dinh dưỡng cho con người và động vật) 31 1.2.4 Vai trò của các axit amin Các axit amin là cơ sở của sự sống bởi vì chúng đóng... thì hàm lượng chất xơ không hòa tan cao hơn so với chất xơ hòa tan β-glucan chiếm từ 4-13% tổng lượng chất xơ và sự dao động này phụ thuộc vào các loài nấm khác nhau 1.1.3.5 Vitamin Nấm chứa nhiều vitamin chính bao gồm thiamin (vitamin B 1), riboflavin (vitamin B2), niacin (vitamin B3), tocopherol and vitamin D (Cheung, 2010; Kalac, 2013) Một số tác giả đã xem nấm như một nguồn cung cấp vitamin... pháp - Đánh giá thống kê phương pháp phân tích: + Hiệu suất thu hồi - Định lượng axit amin bằng phương pháp HPLC 12 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 Nấm 1.1.1 Giới thiệu về nấm - giới nấm ( tên khoa học: Fungi) bao gồm những sinh vật nhân chuẩn có thành tế bào bằng kitin (chitin) Phần lớn phát triển dưới dạng các sợi đa bào được gọi là sợi nấm (hyphae) tạo nên hệ sợi (mycelium), một số nấm khác lại phát... này bao gồm các axit amino có một nhóm axit cacboxylic thứ hai như là một phần của mạch bên, gồm axit aspartic và axit glutamic Do tính axit của nhóm axit cacboxylic mạch bên, các axit amin không chỉ phân cực mà còn có thể trở nên tích điện âm bởi vì, trong dung dịch, các proton axit được chuyển cho một phân tử nước, để lại một ion carboxylat mang điện tích âm - Nhóm amit: hai axit amin rất giống... khả năng thay thế ở vị trí C-2 (C α) Nguyên tử Cα không có trung tâm đối xứng nên các axit amin có đồng phân quang học là L - và D - axit amin, chỉ có glycin là không có đồng phân quang học (R = H) Trong tự nhiên chủ yếu tìm thấy ở dạng L – axit amin, D – axit amin chỉ tìm thấy trong vi khuẩn, vách tế bào vi khuẩn Bảng 2.1: Cấu trúc của 20 axit amin tiêu chuẩn L-Alanin L-Arginin L-Asparagin Axit ... cứu xác định hàm lượng axit amin thủy phân số loài nấm lớn vùng Bắc Trung Bộ phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC” Mục đích nghiên cứu Xây dựng phương pháp tách định lượng đồng thời axit amin. .. việc phân tích vitamin axit amin Những nghiên cứu tách xác định axit amin có số lượng lớn báo công bố với quy trình tách xác định axit amin Đây phương pháp phổ biến nhất để xác định axit amin. .. mỏng nữa 1.3.1.2 Phương pháp sắc ký cột Phương pháp sắc ký cột phương pháp sắc ký bản đơn giản, nền tảng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) sau Phương pháp sắc ký cột với dẫn