BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN  LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH SINH HỌC KHẢO SÁT KHẢ NĂNG CHỐNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT LÁ CÂY LÁ DỨA (Pandanus amaryllifolius Roxb) CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS ĐÁI THỊ XUÂN TRANG NGUYỄN TƯỜNG QUYÊN BỘ MÔN SINH – KHOA KHTN MSSV: 3092367 SINH HỌC K.35 Cần Thơ, 2012 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Cô Ts Đái Thị Xuân Trang tận tình hướng dẫn, truyền đạt kiến thức quý báu, chỉnh sửa luận văn, góp ý cách xử lý số liệu, quan tâm động viên suốt trình thực luân văn Hai bạn Hồ Ngọc Phụng Nguyễn Phạm Phương Thảo sinh viên lớp cử nhân Sinh học K35 – trường Đại Học Cần Thơ nhiệt tình giúp đỡ trình thực đề tài Quý Thầy, Cô Bộ môn Sinh, Bộ môn Hóa – Khoa Khoa Học Tự Nhiên, Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học – Trường Đại Học Cần Thơ tạo điều kiện tốt để hoàn thành luân văn Tập thể bạn lớp cử nhân Sinh học K35 (2009- 2013) chia sẻ, giúp đỡ trình học tập thực luận văn Quý Thầy, Cô Khoa Khoa Học Tự Nhiên, Khoa Nông Nghiệp Sinh Học Ứng Dụng, Viện Nghiên Cứu Phát Triển ông Nghệ Sinh Học, Ban giám hiệu trường Đai Học Cần Thơ giảng dạy, truyền thụ kiến thức quý báu tạo điều kiện thuận lợi cho trình học tập Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc, chân thành đến gia đình, người thân người bạn động viên tạo điều kiện cho suốt trình học tập Cần Thơ, ngày 12 tháng 12 năm 2012 Nguyễn Tường Quyên i LỜI BẢN QUYỀN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng hướng dẫn giáo viên hướng dẫn Các số liệu, kết trình bày luận văn trung thực chưa cá nhân hay tổ chức công bố công trình trước Nếu cá nhân hay tổ chức muốn sử dụng tài liệu luận văn phải đồng ý tác giả giáo viên hướng dẫn Người hướng dẫn khoa học Tác giả luận văn Ts Đái Thị Xuân Trang Nguyễn Tường Quyên ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN .i LỜI BẢN QUYỀN ii MỤC LỤC HÌNH v MỤC LỤC BẢNG vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii TÓM TẮT viii PHẦN GIỚI THIỆU PHẦN LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược chất chống oxy hóa 2.1.1 Stress oxy hóa .3 2.1.2 Khái niệm chất chống oxy hóa 2.2 Đại cương Lá Dứa 2.2.1 Khóa phân loại 2.2.2 Mô tả .7 2.2.3 Đặc điểm phân bố sinh thái .8 2.3 Các nghiên cứu Lá Dứa 2.4 Đại cương bệnh liên quan đến stress oxy hóa 10 2.4.1 Bệnh tiểu đường 10 2.4.1.1 Phân loại bệnh tiểu đường 10 2.4.1.2 Biến chứng bệnh tiểu đường .10 2.4.1.3 Mối liên hệ stress oxy hóa bệnh tiểu đường .11 2.3.2 Bệnh tăng huyết áp .11 2.3.2.1 Bệnh cao huyết áp .11 2.3.2.2 Biến chứng bệnh tăng huyết áp 12 2.3.2.3 Mối liên hệ giứa stress oxy hóa bệnh tăng huyết áp 12 PHẦN PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Phương tiện nghiên cứu 14 3.1.1 Địa điểm thời gian thực .14 iii 3.1.2 Dụng cụ thiết bị 14 3.1.3 Hóa chất vật liệu 14 3.2 Phương pháp nghiên cứu 15 3.2.1 Phương pháp khảo sát khả chống oxy hóa cao chiết Lá Dứa in vitro 15 3.2.1.1 Phương pháp trích cao Lá Dứa dung môi ethanol .15 3.2.1.2 Khảo sát chống oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Status (TAS) assay) in vitro cao chiết Lá Dứa 16 3.2.2 Thống kê phân tích số liệu 17 PHẦN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 4.1 Xác định độ ẩm mẫu 18 4.2 Phân lập tinh chế hợp chất từ cao ethanol 18 4.3 Khảo sát khả chống oxy hóa cao chiết Lá Dứa in vitro .19 4.3.1 Khảo sát khả chống oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Status (TAS) assay) in vitro 19 4.3.2 Khả chống oxy hóa tổng số cao chiết petroleum ether .21 4.3.3 Khả chống oxy hóa tổng số cao chiết ethyl acetate 22 4.3.4 Khả chống oxy hóa tổng số cao chiết n-butanol 22 4.3.5 Đánh giá hàm lượng chất chống oxy hóa có cao petroleum ether, ethyl acetate n-butanol 23 PHẦN KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 27 5.1 Kết luận 27 5.2 Đề nghị .27 iv MỤC LỤC HÌNH Hình 2.1 Cây Lá Dứa Hình 3.1 Quy trình chiết cao thô 17 Hình 4.1 Đường chuẩn khảo sát khả chống oxy hóa tổng số in vitro Trolox 20 Hình 4.2 Phần trăm lượng ROS lại sau phản ứng với chất chống oxy hóa có cao chiết Lá Dứa 25 v MỤC LỤC BẢNG Bảng 4.1 Độ ẩm mẫu 19 Bảng 4.2 Khả chống oxy hóa tổng số cao chiết petroleum ether, etyl acetat n-butanol từ Lá Dứa 21 Bảng 4.3 So sánh khả chống oxy hóa tổng số cao chiết petroleum ether, etyl acetat n-butanol từ Lá Dứa .24 vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT NADPH: Nicotinamide adenine dinucleotic phosphate oxidase NOx: Nitơ oxidase SOD: Superoxide dismutase XO: Xanthine oxidase CAT: Catalase GPX: Glutathione peroxidase AVEs: Advanced Glycation End product PKC: Protein kinase C AR: Aldose reductase EDTA: Disodium dihydrogen ethylenediaminetetraacetate HA: Huyết áp OD: Mật độ quang phổ ROS: Reactive Oxygen Species TAS: Total Antioxidant Status TBA: Acid thiobarbituric TBA-RS: Thiobarbituric acid reactive substances Trolox: 6-hydroxy-2,5,7,8-tetramethylchroman-2-carboxylic acid vii TÓM TẮT Stress oxy hóa nguyên nhân tham gia vào phát triển nhiều bệnh nguy hiểm tiểu đường, tăng huyết áp, ung thư, lão hóa Các dược liệu dân gian nghiên cứu khả chống oxy hóa để tìm phương pháp chữa bệnh an toàn, hiệu chi phí thấp Đề tài “ Khảo sát khả chống oxy hóa cao chiết Lá Dứa (Pandanus amaryllifolius Roxb)” thực nhằn đánh giá khả chống oxy hóa Lá Dứa Khảo sát khả chống oxy hóa thực phương pháp TAS (Total Antioxidant Status) Cao petroleum ether , cao etyl acetate cao n-butanol tách từ cao ethanol Sự làm sach gốc tự cao chiết khảo sát nồng độ mg/ml; mg/ml; 0,5 mg/ml; 0,25 mg/ml; 0,125 mg/ml; mg/ml kết thu sau đo bước sóng 532 nm Kết nghiên cứu cho thấy cao petroleum ether, cao etyl acetate cao n-butanol có khả chống oxy hóa cao cao ethanol Khả chống oxy hóa ba loại cao giảm dần theo thứ tự cao n-butanol – cao petroleum ether – cao etyl acetate Từ khóa: Tiểu đường, tăng huyết áp, ung thư, lão hóa, Lá Dứa, cao chiết, chống oxy hóa, TAS, cao petroleum ether, cao etyl acetate, n-butanol viii ix human disease" International Journal of Biochemistry & Cell Biology 39 (1): 44–84 doi:10.1016/j.biocel.2006.07.001 PMID 16978905 Weenen, H., J Kerler and M Van Der Ven (1997) The Maillard reaction in flavour formation, pp 159-169 In Flavours and Fragrance The Royal Society of Chemistry Cambridge, UK WHO (2002) The World Health Report 2002- Reducing Risks to Health, Promoting Healthy Life Rev Ed Ed., World Health Organization Press Yan, S.W., and Asmah, R (2010) Comparison of total phenolic contents and antioxidant activities of turmeric leaf, pandan leaf and torch ginger flower International Food Research Journal 17: 417-423 (2010) Ziyatdinova, G.K., Budnikov, H.C., Pogorelt’zev, V.I (2006) Determination of Total Antioxidant Capacity of Human Plasma from Patients with Lung Diseases Using Constant Current Coulometry Eurasian Journal of Analytical Chemistry, Vol 1, No Zin Z.M, A Abdul-Hamid and A Osman (2002) Antioxidative activity of extracts from Mengkudu (Morinda citrifolia L.) root Fruit and leaf Food Chemistry 78: 227-231 * Trang web Gốc tự chất chống oxy hóa, http://www.ykhoa.net 43 PHỤ LỤC Bảng 1: Đường chuẩn TAS tính theo mM Trolox Nồng độ Trolox (mM) Giá trị OD 1,0728 ± 0,0009 0,15 0,8847 ± 0,0020 0,3 0,8025 ± 0,0004 0,6 0,5010 ± 0,0059 1,2 0,1638 ± 0.0157 Bảng Phần trăm lương ROS lại sau phản ứng với chất chống oxy hóa có cao chiết Lá Dứa Nồng độ cao chiết (mg/ml) ĐC 0.125 0.25 0.5 % lượng OD cao % lượng % lượng OD cao gốc tự Etyl gốc tự OD cao gốc tự Petrolium lại Acetate lại n-Butanol lại 1.0728a 100 1.0728a 100 1.0728 a 100 b b b 0.7065 65.86 0.9255 82.27 0.7239 67.48 0.5697c 53.10 0.8137c 75.85 0.3916 c 36.50 d d d 0.3298 30.74 0.5540 51.64 0.2117 19.73 e e e 0.2320 21.63 0.3631 33.85 0.1057 9.85 0.1324f 12.34 0.1855f 17.29 0.0706f 6.58 Các chữ theo sau khác có khác biệt ý nghĩa 5% tính theo cột 44 PHỤ LỤC CÁC BẢNG THỐNG KÊ ANOVA Khảo sát khả chống oxy hóa tổng số (TAS assay) in vitro 1.1 Đường chuẩn TAS Anova đường chuẩn TAS theo mM Trolox Source nồng độ Error Total DF 10 14 S = 0.007549 Level 0.15mM 0.3mM 0.6mM 0mM 1.2mM N 3 3 SS 1.528732 0.000570 1.529302 MS 0.382183 0.000057 R-Sq = 99.96% Mean 0.88467 0.80250 0.50099 1.07278 0.16378 StDev 0.00199 0.00042 0.00589 0.00092 0.01566 F 6707.03 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.95% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ *) * * * (* + -+ -+ -+ 0.25 0.50 0.75 1.00 Pooled StDev = 0.00755 Grouping Information Using Fisher Method nồng độ 0mM 0.15mM 0.3mM 0.6mM 1.2mM N 3 3 Mean 1.07278 0.88467 0.80250 0.50099 0.16378 Grouping A B C D E Anova OD cao Petrolium Source Nồng độ Error Total DF 12 17 S = 0.009767 Level 0.125mM 0.25mM 0.5mM 0mM N 3 3 SS 1.833611 0.001145 1.834755 MS 0.366722 0.000095 R-Sq = 99.94% Mean 0.70651 0.56965 0.32982 1.07278 StDev 0.00567 0.01829 0.00163 0.00092 F 3844.27 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.91% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -*) (* *) (* 45 1mM 2mM 3 0.23202 0.13235 0.01133 0.00860 *) *) -+ -+ -+ -+ -0.25 0.50 0.75 1.00 Pooled StDev = 0.00977 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 0mM 0.125mM 0.25mM 0.5mM 1mM 2mM N 3 3 3 Mean 1.07278 0.70651 0.56965 0.32982 0.23202 0.13235 Grouping A B C D E F Anova OD cao Etyl Acetate Source Nồng độ Error Total DF 12 17 S = 0.009609 Level 0.125mM 0.25mM 0.5mM 0mM 1mM 2mM N 3 3 3 SS 1.766006 0.001108 1.767114 MS 0.353201 0.000092 R-Sq = 99.94% Mean 0.92546 0.81373 0.55397 1.07278 0.36313 0.18550 StDev 0.00113 0.01700 0.01229 0.00092 0.00581 0.00885 F 3824.95 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.91% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -*) (* *) (* (* *) -+ -+ -+ -+ -0.25 0.50 0.75 1.00 Pooled StDev = 0.00961 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 0mM 0.125mM 0.25mM 0.5mM 1mM 2mM N 3 3 3 Mean 1.07278 0.92546 0.81373 0.55397 0.36313 0.18550 Grouping A B C D E F Anova OD cao n-Butanol Source Nồng độ Error Total DF 12 17 S = 0.007413 SS 2.348961 0.000659 2.349620 MS 0.469792 0.000055 R-Sq = 99.97% F 8548.19 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.96% 46 Level 0.125mM 0.25mM 0.5mM 0mM 1mM 2mM N 3 3 3 Mean 0.72388 0.39161 0.21170 1.07278 0.10569 0.07061 StDev 0.00834 0.01027 0.00614 0.00092 0.00524 0.00942 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+* * * (* (* *) + -+ -+ -+0.30 0.60 0.90 1.20 Pooled StDev = 0.00741 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 0mM 0.125mM 0.25mM 0.5mM 1mM 2mM N 3 3 3 Mean 1.07278 0.72388 0.39161 0.21170 0.10569 0.07061 Grouping A B C D E F Anova tương đương mM Trolox với nồng độ cao Petroleum ether Source Nồng độ Error Total DF 10 14 SS 1.185435 0.001988 1.187423 S = 0.01410 Level 0.125mg/ml 0.25mg/ml 0.5mg/ml 1mg/ml 2mg/ml Level 0.125mg/ml 0.25mg/ml 0.5mg/ml 1mg/ml 2mg/ml MS 0.296359 0.000199 R-Sq = 99.83% N 3 3 Mean 0.4177 0.5981 0.9143 1.0432 1.1746 F 1490.94 R-Sq(adj) = 99.77% StDev 0.0075 0.0241 0.0022 0.0149 0.0113 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*) (*) (*) (*) (*) + -+ -+ -+ 0.40 0.60 0.80 1.00 Pooled StDev = 0.0141 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 2mg/ml 1mg/ml 0.5mg/ml P 0.000 N 3 Mean 1.17463 1.04321 0.91427 Grouping A B C 47 0.25mg/ml 0.125mg/ml 3 0.59808 0.41766 D E Anova tương đương mM Trolox với nồng độ cao etyl acetat Source Nồng độ Error Total DF 10 14 SS 1.963986 0.001924 1.965910 S = 0.01387 Level 0.125mg/ml 0.25mg/ml 0.5mg/ml 1mg/ml 2mg/ml MS 0.490997 0.000192 R-Sq = 99.90% N 3 3 Mean 0.1290 0.2763 0.6188 0.8704 1.1046 StDev 0.0015 0.0224 0.0162 0.0076 0.0117 F 2552.28 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.86% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ *) *) (* (*) (* + -+ -+ -+ 0.30 0.60 0.90 1.20 Pooled StDev = 0.0139 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 2mg/ml 1mg/ml 0.5mg/ml 0.25mg/ml 0.125mg/ml N 3 3 Mean 1.1046 0.8704 0.6188 0.2763 0.1290 Grouping A B C D E Anova tương đương mM Trolox với nồng độ cao n-butanol Source Nồng độ Error Total DF 10 14 SS 1.492567 0.001144 1.493711 S = 0.01070 Level 0.125mg/ml 0.25mg/ml 0.5mg/ml 1mg/ml 2mg/ml MS 0.373142 0.000114 R-Sq = 99.92% N 3 3 Mean 0.3947 0.8328 1.0700 1.2098 1.2560 StDev 0.0110 0.0136 0.0081 0.0069 0.0124 F 3261.98 R-Sq(adj) = 99.89% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(* *) (* *) *) -+ -+ -+ -+ -0.50 0.75 1.00 1.25 Pooled StDev = 0.0107 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ N Mean P 0.000 Grouping 48 2mg/ml 1mg/ml 0.5mg/ml 0.25mg/ml 0.125mg/ml 3 3 1.25601 1.20977 1.07000 0.83281 0.39475 A B C D E Anova tương đương µM Trolox nồng độ 0,125 mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.007725 SS 0.1544715 0.0003580 0.1548296 MS 0.0772358 0.0000597 R-Sq = 99.77% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.12900 0.39475 0.41766 F 1294.28 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.69% StDev 0.00148 0.01098 0.00749 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(*) (*-) (*-) -+ -+ -+ -+ -0.160 0.240 0.320 0.400 Pooled StDev = 0.00772 Grouping Information Using Fisher Method Cao petroleum ether n-butanol etyl acetat N 3 Mean 0.41766 0.39475 0.12900 Grouping A B C Anova tương đương µM Trolox nồng độ 0,25 mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.02056 SS 0.468382 0.002536 0.470917 MS 0.234191 0.000423 R-Sq = 99.46% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.27628 0.83281 0.59808 F 554.18 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.28% StDev 0.02242 0.01355 0.02412 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -(-*-) (-*-) (*-) -+ -+ -+ -+ -0.32 0.48 0.64 0.80 Pooled StDev = 0.02056 Grouping Information Using Fisher Method Cao n-butanol N Mean 0.83281 Grouping A 49 petroleum ether etyl acetat 3 0.59808 0.27628 B C Anova tương đương µM Trolox nồng độ 0,5 mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.01053 SS 0.315191 0.000666 0.315857 MS 0.157596 0.000111 R-Sq = 99.79% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.6188 1.0700 0.9143 F 1420.31 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.72% StDev 0.0162 0.0081 0.0022 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*) (*) (*) + -+ -+ -+ 0.60 0.75 0.90 1.05 Pooled StDev = 0.0105 Grouping Information Using Fisher Method Cao n-butanol petroleum ether etyl acetat N 3 Mean 1.07000 0.91427 0.61876 Grouping A B C Anova tương đương µM Trolox nồng độ mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.01047 SS 0.172806 0.000658 0.173465 MS 0.086403 0.000110 R-Sq = 99.62% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.8704 1.2098 1.0432 F 787.51 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.49% StDev 0.0076 0.0069 0.0149 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*-) (-*) (*-) + -+ -+ -+ 0.90 1.00 1.10 1.20 Pooled StDev = 0.0105 Grouping Information Using Fisher Method 50 Cao n-butanol petroleum ether etyl acetat N 3 Mean 1.20977 1.04321 0.87037 Grouping A B C Anova tương đương µM Trolox nồng độ mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.01182 SS 0.034471 0.000838 0.035309 MS 0.017236 0.000140 R-Sq = 97.63% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 1.1046 1.2560 1.1746 F 123.44 P 0.000 R-Sq(adj) = 96.84% StDev 0.0117 0.0124 0.0113 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ 1.100 1.150 1.200 1.250 Pooled StDev = 0.0118 Grouping Information Using Fisher Method Cao n-butanol petroleum ether etyl acetat N 3 Mean 1.25601 1.17463 1.10455 Grouping A B C Anova OD cao petroleum ether, etyl acetate n-butanol nồng độ 0,125 mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.005859 SS 0.0888709 0.0002060 0.0890769 MS 0.0444354 0.0000343 R-Sq = 99.77% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.92546 0.72389 0.70651 F 1294.28 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.69% StDev 0.00112 0.00833 0.00568 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*-) (-*) (-*) + -+ -+ -+ 0.720 0.780 0.840 0.900 Pooled StDev = 0.00586 Grouping Information Using Fisher Method 51 Cao etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.92546 0.72389 0.70651 Grouping A B C Anova OD cao petroleum ether, etyl acetate n-butanol nồng độ 0,25 mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.01559 SS 0.269470 0.001459 0.270929 MS 0.134735 0.000243 R-Sq = 99.46% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.81374 0.39161 0.56966 F 554.18 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.28% StDev 0.01700 0.01028 0.01829 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ (-*-) (-*) (*-) -+ -+ -+ -+ 0.48 0.60 0.72 0.84 Pooled StDev = 0.01559 Grouping Information Using Fisher Method Cao etyl acetat petroleum ether n-butanol N 3 Mean 0.81374 0.56966 0.39161 Grouping A B C Anova OD cao petroleum ether, etyl acetate n-butanol nồng độ 0,5 mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.007990 SS 0.1813367 0.0003830 0.1817197 MS 0.0906683 0.0000638 R-Sq = 99.79% Mean 0.55397 0.21171 0.32983 F 1420.31 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.72% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 StDev 0.01229 0.00614 0.00164 Level Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ - 52 etyl acetat n-butanol petroleum ether (*-) (*) (*) + -+ -+ -+ 0.20 0.30 0.40 0.50 Pooled StDev = 0.00799 Grouping Information Using Fisher Method Cao etyl acetat petroleum ether n-butanol N 3 Mean 0.55397 0.32983 0.21171 Grouping A B C Anova OD cao petroleum ether, etyl acetate n-butanol nồng độ mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF S = 0.007990 SS 0.1813367 0.0003830 0.1817197 MS 0.0906683 0.0000638 R-Sq = 99.79% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.55397 0.21171 0.32983 F 1420.31 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.72% StDev 0.01229 0.00614 0.00164 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*-) (*) (*) + -+ -+ -+ 0.20 0.30 0.40 0.50 Pooled StDev = 0.00799 Grouping Information Using Fisher Method Cao etyl acetat petroleum ether n-butanol N 3 Mean 0.55397 0.32983 0.21171 Grouping A B C Anova OD cao petroleum ether, etyl acetate n-butanol nồng độ mg/ml cao chiết Source Cao Error Total DF SS 0.0414127 0.0005911 0.0420038 MS 0.0207064 0.0000985 F 210.19 53 P 0.000 S = 0.009925 R-Sq = 98.59% Level etyl acetat n-butanol petroleum ether Level etyl acetat n-butanol petroleum ether N 3 Mean 0.18550 0.07062 0.23202 R-Sq(adj) = 98.12% StDev 0.00885 0.00942 0.01133 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) (-* ) -+ -+ -+ -+ 0.100 0.150 0.200 0.250 Pooled StDev = 0.00993 Grouping Information Using Fisher Method Cao petroleum ether etyl acetat n-butanol N 3 Mean 0.23202 0.18550 0.07062 Grouping A B C 54 PHỤ LỤC 3: SỐ LIỆU Khảo sát khả chống oxy hóa tổng số 1.1 Đường chuẩn TAS tính theo mM Trolox Nồng độ Trolox (mM) 0,15 0,3 0,6 1,2 Giá trị OD 1,053 1,0577 1,1097 1,053 1,0570 1,1094 1,0715 1,0707 1,0730 0.8938 0.881 0.8745 0.8940 0.871 0.8957 0.8939 0.8712 0.8869 0.7945 0.7957 0.7969 0.5048 0.5352 0.8310 0.8310 0.8312 0.4936 0.4969 0.7808 0.7807 0.7807 0.4845 0.4842 0.5285 0.4973 0.4848 0.1656 0.1755 0.1854 0.1698 0.1499 0.1897 0.1456 0.1666 0.1258 1.2 Giá trị OD cao petroleum ether Nồng độ Cao mg/ml 0,125 mg/ml 0,25 mg/ml 0,5 mg/ml 1.0530 1.0530 1.0715 0.6728 0.6804 0.6787 0.5889 0.5749 0.6003 0.3460 0.3247 55 Giá trị OD 1.0577 1.0570 1.0707 0.6762 0.7127 0.7063 0.5023 0.583 0.5901 0.3221 0.3171 1.1097 1.1094 1.0730 0.7660 0.7121 0.7534 0.5790 0.5271 0.5814 0.3270 0.3453 mg/ml mg/ml 0.3494 0.2799 0.2564 0.2842 0.1457 0.1395 0.1471 0.3159 0.1991 0.1966 0.2046 0.1278 0.1251 0.1263 0.3209 0.2289 0.2048 0.2337 0.1407 0.1028 0.1360 Giá trị OD 1.0577 1.0570 1.0707 0.9633 0.9585 0.9626 0.8628 0.8483 0.8029 0.5673 0.5688 0.5662 0.3817 0.3626 0.3665 0.1844 0.1766 0.2138 1.1097 1.1094 1.0730 0.8726 0.8728 0.8612 0.7540 0.7567 0.7243 0.4254 0.4910 0.4942 0.3081 0.3839 0.3892 0.1755 0.1418 0.1460 1.3 Giá trị OD cao etyl acetat Nồng độ Cao mg/ml 0,125 mg/ml 0,25 mg/ml 0,5 mg/ml mg/ml mg/ml 1.0530 1.0530 1.0715 0.9394 0.9488 0.9498 0.8610 0.8578 0.8558 0.6266 0.6236 0.6226 0.3804 0.3472 0.3485 0.2141 0.2075 0.2097 56 1.4 Giá trị OD cao n-butanol Nồng độ Cao mg/ml 0,125 mg/ml 0,25 mg/ml 0,5 mg/ml mg/ml mg/ml 1.0530 1.0530 1.0715 0.7371 0.7122 0.7332 0.3616 0.3837 0.3524 0.2173 0.2241 0.2100 0.1220 0.1217 0.1212 0.0877 0.0803 0.0736 57 Giá trị OD 1.0577 1.0570 1.0707 0.7889 0.7632 0.7766 0.4531 0.4321 0.4153 0.2273 0.1953 0.2012 0.1207 0.0921 0.1042 0.0825 0.0661 0.0450 1.1097 1.1094 1.0730 0.6645 0.6679 0.6713 0.3764 0.3784 0.3715 0.2114 0.2087 0.2100 0.0900 0.0876 0.0917 0.0621 0.0772 0.0610 [...]... cao nước, ký hiệu cao W 27 4.3 Khảo sát khả năng chống oxy hóa của các cao chiết cây Lá Dứa in vitro 4.3.1 Khảo sát khả năng chống oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Status (TAS) assay) in vitro Phương pháp đo lường khả năng chống oxy hóa tổng số TAS có thể xác định được lượng chất chống oxy hóa hiện diện trong một mẫu Tuy nhiên, TAS có thể thay đổi do stress oxy hóa (Erejuwa et al., 2011) Stress oxy. .. chữa bệnh của cây Lá Dứa Do đó, đề tài được thực hiện nhằm khai thác tiềm năng chữa bệnh của cây Lá Dứa và quan trọng hơn góp phần tìm ra cách thức ức chế nguyên nhân của một số bệnh như tiểu đường, tim mạch … những bệnh đang phát triển với tốc độ cao trong xã hội hiện đại Mục tiêu của đề tài là đánh giá khả năng chống oxy hóa của cao chiết cây Lá Dứa Khả năng chống oxy hóa của cao chiết Lá Dứa được... kg lá của cây Lá Dứa được thu hái ở tỉnh Vĩnh Long 3.2 Phương pháp nghiên cứu 3.2.1 Phương pháp khảo sát khả năng chống oxy hóa của cao chiết cây Lá Dứa in vitro 3.2.1.1 Phương pháp trích cao cây Lá Dứa bằng dung môi ethanol Nguyên liệu được sử dụng trong nghiên cứu bao gồm lá của cây Lá Dứa (Pandanus amaryllifolius Roxb) được thu hái ở tỉnh Vĩnh Long Mẫu sau khi thu dựa vào các đặc điểm hình thái của. .. cứu của Yan et al (2010) khảo sát hoạt động chống oxy hóa trên phản ứng DPPH của lá dứa tươi và bột lá dứa, cho thấy lá dứa có khả năng chống oxy hóa Ngoài ra, nhiều nghiên cứu hiện nay khảo sát được từ cây Lá Dứa tìm ra nhiều hợp chất mới, an toàn hơn để kháng khuẩn (Kaiser et al., 2011) Theo các tác giả Đào Hùng Cường và Nguyễn Thị Thanh Tú (2010) đã khảo sát sơ bộ các nhóm hoạt chất chính của cây Lá. .. chất chống oxy hóa càng thấp thì lượng chất chống oxy hóa càng nhiều Khi so sánh hàm lượng chất chống oxy hóa của ba loại cao lá với cao ethanol lá cây Lá Dứa (Nguyễn Tường Quyên và Nguyễn Phạm Phương Thảo, 2012) cho thấy hàm lượng chất chống oxy hóa có trong cao petroleum ether, ethyl acetate và nbutanol đều cao hơn so với cao ethanol lá Cụ thể, hàm lượng chất chống oxy hóa có trong cao ethanol lá cây. .. ở nồng độ 2 mg/ml Qua đó cho thấy cao ethyl acetate lá có hàm lượng chất chống oxy hóa cao hơn cao ethanol lá ở cùng nồng độ 4.3.4 Khả năng chống oxy hóa tổng số cao chiết n-butanol lá cây Lá Dứa Từ kết quả thực nghiệm (Bảng 4.1) cho thấy cao n-butanol lá cây Lá Dứa có hàm lượng chất chống oxy hóa tương đương Trolox tăng dần từ 0,3947 ± 0,0110 mM Trolox ở nồng độ cao 0,125 mg/ml lên 1,2560 ± 0,0124... nghiên cứu của đề tài bao gồm - Trích các chất bằng dung môi ethanol 99% từ cây Lá Dứa - Tách cao petroleum ether, ethyl acetate và n-butanol từ cao ethanol - Sử dụng phương pháp TAS để xác định khả năng chống oxy hóa của cây Lá Dứa in vitro xi CHƯƠNG 2 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược về chất chống oxy hóa 2.1.1 Stress oxy hóa Stress oxy hóa được định nghĩa là sự phá vỡ cân bằng giữa quá trình oxy hóa và... diện của chất chống oxy hóa có trong cao lá của cây Lá Dứa Dung dịch benzoate natri kết hợp với Fe(NH4)2(SO4)2 tạo ra các O2(superoxide) Nếu trong lá của cây Lá Dứa có hiện diện các chất chống oxy hóa thì sẽ kết hợp với các superoxide Lượng superoxide còn lại sẽ kết hợp với TBA để thành lập TBA – RS (thiobarbituric acid reactive substances) được đo ở bước sóng 532 nm Khả năng chống oxy hóa trong cây Lá. .. : Hoạt chất chống oxy hóa tự nhiên có trong cao chiết tương đương mM Trolox Ở nồng độ 0,125 mg/ml cao petroleum ether lá có khả năng chống oxy hóa tổng số TAS mạnh nhất, tiếp theo là cao n-butanol lá và thấp nhất là cao ethyl acetate lá Nồng độ chất chống oxy hóa có trong các cao chiết tính tương đương mM Trolox cao nhất là cao petroleum ether (0,4177 ± 0,0075 mM Trolox), tiếp theo là cao n-butanol... nồng độ 2 mg/ml Trong khi đó ở cao petroleum ether ở nồng độ 1 mg/ml và 2 mg/ml hàm lượng chất chống oxy hóa tương đương theo Trolox lần lượt là 1,0432 ± 0,0149 mM và 1,1746 ± 0,1130 mM Qua đó cho thấy cao petroleum ether lá có hàm lượng chất chống oxy hóa cao hơn so với cao ethanol lá ở cùng nồng độ 30 4.3.3 Khả năng chống oxy hóa tổng số cao chiết ethyl acetate lá cây Lá Dứa Từ kết quả thực nghiệm (Bảng ... hiệu chi phí thấp Đề tài “ Khảo sát khả chống oxy hóa cao chiết Lá Dứa (Pandanus amaryllifolius Roxb) thực nhằn đánh giá khả chống oxy hóa Lá Dứa Khảo sát khả chống oxy hóa thực phương pháp TAS... cao W 27 4.3 Khảo sát khả chống oxy hóa cao chiết Lá Dứa in vitro 4.3.1 Khảo sát khả chống oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Status (TAS) assay) in vitro Phương pháp đo lường khả chống oxy hóa. .. 18 4.2 Phân lập tinh chế hợp chất từ cao ethanol 18 4.3 Khảo sát khả chống oxy hóa cao chiết Lá Dứa in vitro .19 4.3.1 Khảo sát khả chống oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Status (TAS)