BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC KHẢO SÁT HISTAMINE TRONG SẢN PHẨM THỦY SẢN BẰNG PHƢƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ThS ĐỖ TẤN KHANG Cần Thơ, Tháng 01/2013 SINH VIÊN THỰC HIỆN LÊ ANH VŨ MSSV: 3082568 LỚP: CNSH TT34 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƢỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) (ký tên) Đỗ Tấn Khang Lê Anh Vũ DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ LỜI CẢM TẠ Để hoàn thành luận văn cố gắng nỗ lực thân, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến quý thầy cô, bạn bè gia đình tận tình hướng dẫn, động viên, giúp đỡ suốt trình làm luận văn Đặc biệt xin hết lòng cảm ơn: Th.S Đỗ Tấn Khang tận tình hướng dẫn, bảo, giúp đỡ, cung cấp tài liệu cần thiết tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành đề tài luận văn thời gian quy định Cám ơn anh chị phụ trách phòng thí nghiệm Enzyme Viện Nghiên Cứu Phát Triển Công nghệ Sinh học: Anh Nguyễn Ngọc Phú bạn Nguyễn Văn Tính truyền đạt kinh nghiệm quý báu, tận tình giúp đỡ, động viên suốt thời gian thực luận văn Tôi vô biết ơn công lao to lớn cha mẹ tạo điều kiện thuận lợi vật chất lẫn tinh thần cho hoàn thành khóa học, thực tốt luận văn Cuối lời, xin chúc Quý thầy, cô, cha mẹ anh chị nhiều sức khỏe thành đạt lĩnh vực mà yêu thích Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 Lê Anh Vũ Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ TÓM TẮT Nghiên cứu thực để đánh giá hiệu dung môi khác phân tích hàm lượng histamine hải sản Kết cho thấy histamine mẫu hải sản ly trích hiệu với perchloric acid 0.6M trichloroacetic acid 6% Ngoài ra, nghiên cứu so sánh hiệu quy trình dansyl quy trình bezoyl phân tích hàm lượng amine hải sản phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Kết thu cho thấy có khác biệt rõ rệt hiệu phân tích hai quy trình định lượng histamine mẫu cá ngừ Ảnh hưởng thời gian nhiệt độ bảo quản (0 oC, 4oC) đến gia tăng hàm lượng histamine mật số vi khuẩn cá ngừ nghiên cứu Cá ngừ bảo quản 4oC cho thấy hàm lượng histamine sinh cao so với quản 0oC Các mẫu bảo quản 0oC có hàm lượng histamine thấp (49.1 mg/kg sau 11 ngày bảo quản), khi bảo quản 4oC, mẫu có chứa hàm lượng cao histamine (161.29 mg/kg sau ngày bảo quản) Sự tăng mật số vi khuẩn theo thời gian bảo quản ghi nhận mẫu thí nghiệm Mật số vi khuẩn tăng từ 4.54 log10 cfu/g đến 5.88 log10 cfu/g mẫu bảo quản 0oC, mẫu bảo quản 4oC, mức tăng đáng kể với mật số vi khuẩn tăng từ 4.54 log10 cfu/g đến 8.88 log10 cfu/g Bên cạnh đó, hàm lượng histamine số sản phẩm hải sản báo cáo nghiên cứu Từ khóa : HPLC, histamine, hải sản, trichloroacetic acid, perchloric acid, nhiệt độ bảo quản Chuyên ngành Công nghệ Sinh học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC MỤC LỤC .i DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH .vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .vi CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu đề tài CHƢƠNG 2: LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lƣợc biogenic amine histamine 2.1.1 Biogenic amine 2.1.2 Histamine ngộ độc histamine 2.1.3 Sự hình thành biogenic amine 2.1.4 Sự tích lũy histamine trình chế biến bảo quản 2.1.5 Các vi khuẩn sinh histamine 2.1.6 Ảnh hưởng đến sức khỏe histamine vai trò biogenic amine khác 2.1.7 Vai trò biogenic amine đánh giá chất lượng thủy sản 10 2.1.8 Giới hạn cho phép histamine thủy sản 11 2.1.9 Phương pháp xác định histamine thủy sản sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 12 2.2 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 14 2.2.1 Giới thiệu 14 2.2.2 Các phận hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao 15 CHƢƠNG 3: PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP 16 3.1 Phƣơng tiện nghiên cứu 16 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ 3.1.1 Đối tượng nghiên cứu 16 3.1.2 Hóa chất 16 3.1.3 Thiết bị, dụng cụ 16 3.1.4 Thời gian địa điểm nghiên cứu 16 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 16 3.2.1 Tối ưu hóa dung môi ly trích histamine hải sản 16 3.2.2 So sánh quy trình benzoyl quy trình dansyl phân tích histamine hải sản 19 3.2.3 Sự phát triển hàm lượng histamine vi khuẩn tổng số cá ngừ theo thời gian nhiệt độ bảo quản 20 3.2.4 Xác định hàm lượng histamine có số sản phẩm thủy sản 21 3.2.5 Phương pháp xử lý thống kê 21 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 22 4.1 Tối ƣu hóa dung môi ly trích histamine hải sản 22 4.2 So sánh quy trình benzoyl quy trình dansyl phân tích histamine hải sản 23 4.3 Sự phát triển hàm lƣợng histamine vi khuẩn tổng số cá ngừ theo thời gian nhiệt độ bảo quản 26 4.4 Xác định hàm lƣợng histamine số sản phẩm thủy sản 31 CHƢƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 33 5.1 Kết luận 33 5.2 Kiến nghị 33 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Tên bảng Bảng Trang Bảng Danh mục biogenic amine đánh giá chất lượng thủy sản 11 Bảng Thời gian lấy mẫu mẫu cá ngừ theo nhiệt độ bảo quản 20 Bảng Chú thích mẫu hải sản 21 Bảng Giá trị trung bình hàm lượng histamine mẫu hải sản 31 Bảng Giá trị diện tích peak dung dịch histamine chuẩn (đo quy Phụ lục trình dansyl) Bảng Giá trị diện tích peak dung dịch histamine chuẩn (đo quy Phụ lục trình benzoyl) Bảng Hiệu dung môi tách chiết đến hàm lượng histamine định Phụ lục lượng quy trình dansyl Bảng Hiệu dung môi tách chiết đến hàm lượng histamine định Phụ lục lượng quy trình benzoyl Bảng So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl Phụ lục phân tích hàm lượng histamine (mẫu 1) Bảng 10 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl Phụ lục phân tích hàm lượng histamine (mẫu 2) Bảng 11 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl Phụ lục phân tích hàm lượng histamine (mẫu 3) Bảng 12 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl Phụ lục phân tích hàm lượng histamine (mẫu 4) Bảng 13 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl Phụ lục phân tích hàm lượng histamine (mẫu 5) Bảng 14 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl Phụ lục phân tích hàm lượng histamine (mẫu 6) Bảng 15 Sự gia tăng hàm lượng histamine cá ngừ trữ 4oC theo thời Phụ lục Chuyên ngành Công nghệ Sinh học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ gian bảo quản Bảng 16 Sự gia tăng hàm lượng histamine cá ngừ trữ 0oC theo thời Phụ lục gian bảo quản Bảng 17 Sự gia tăng mật số vi khuẩn cá ngừ trữ 4oC theo thời gian Phụ lục bảo quản Bảng 18 Sự gia tăng mật số vi khuẩn cá ngừ trữ 0oC theo thời gian Phụ lục bảo quản Bảng 19 Hàm lượng histamine theo dung môi ly trích (định lượng quy Phụ lục trình dansyl) Bảng 20 Hàm lượng histamine theo dung môi ly trích (định lượng quy Phụ lục trình benzoyl) Bảng 21 Hàm lượng histamine mẫu cá ngừ trữ 4oC theo thời gian lưu Phụ lục trữ Bảng 22 Hàm lượng histamine mẫu cá ngừ trữ 0oC theo thời gian lưu Phụ lục trữ Bảng 23 Mật số vi khuẩn có mẫu cá ngừ trữ 4oC theo thời gian Phụ lục lưu trữ Bảng 24 Mật số vi khuẩn có mẫu cá ngừ trữ 0oC theo thời gian Phụ lục lưu trữ Bảng 25 Hàm lượng histamine có số mẫu thủy sản mua Phụ lục siêu thị thành phố Cần Thơ Chuyên ngành Công nghệ Sinh học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình Tên hình Trang Hình Các amino acid tiền chất enzyme amino acid decarboxylase hình thành biogenic amine thủy sản Hình Cấu trúc hóa học histamine Hình Các đường chuyển hóa hình thành biogenic amine Hình Giá trị trung bình hàm lượng histamine thu ly trích 22 dung môi khác Hình Sắc ký đồ dung dịch histamine chuẩn dung dịch mẫu ly trích 24 Hình Giá trị trung bình hàm lượng histamine định lượng quy trình 25 dansyl quy trình benzoyl Hình Giá trị trung bình hàm lượng histamine mẫu cá ngừ trữ 27 4oC theo thời gian bảo quản Hình Giá trị trung bình hàm lượng histamine mẫu cá ngừ trữ 27 0oC theo thời gian bảo quản Hình Giá trị trung bình mật số vi khuẩn mẫu cá ngừ trữ oC 29 theo thời gian bảo quản Hình 10 Giá trị trung bình mật số vi khuẩn mẫu cá ngừ trữ oC 29 theo thời gian bảo quản Hình 11 Biểu đồ đường chuẩn histamine (đo quy trình dansyl) Phụ lục Hình 12 Biểu đồ đường chuẩn histamine (đo quy trình benzoyl) Phụ lục Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT AOAC Association of Official Analytical Chemists BA Biogenic Amine DAO Diamine Oxidase FAA Free Amino Acid FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations FDA Food and Drug Administration HACCP Hazard Analysis and Critical Control Points HMT Histamine-N-methyltransferase HPLC High Performance Liquid Chromatography IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry MAO Monoamine Oxidase OPA o-Phthalaldehyde ppb parts per billion ppm parts per million PCA Perchloric Acid TCA Trichloroacetic Acid WHO World Health Organization Chuyên ngành Công nghệ Sinh học vii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Flick, G.J., M.P Oria and L Douglas 2001 Potential hazards in cold-smoked fish: biogenic amines Journal of Food Science, 66: 1088-1099 Food and Drug Administration 2005 Scombrotoxin (histamine) formation: A chemical hazard Fish and fisheries products hazards and controls guidance, 3rd ed Available at http://www.cfsan.fda.gov/~comm/haccp4g.html (ngày 20/11/2012) Fran, N.K and H.H., Yoshinaga 1987 Rapid method for detection of histamineproducing bacteria Int J Food Microbiol., 5, 137 Gabowiak, L.H et al 1991 Quality changes in sardines (Sardina pilchardus) stored in ice and at ambient temperatures Food Microbiol., 13, 123 Gosetti, F et al 2007 High performance liquid chromatography/tandem mass spectrometry determination of biogenic amines in typical Piedmont cheeses J Chromatogr A., 1149, 151 Gram, L 1985 Fish spoilage bacteria–problems and solutions Curr Opin Biotechnol., 13, 262 Gram, L., and H.H Huss 1996 Microbiological spoilage of fish and fish products International Journal of Food Microbiology, 33(1): 121-137 Guin, G.J., M.P Oria and L Douglas 1997 Potential hazards in cold-smoked fish: biogenic amines Journal of Food Science, 66: 1088-1099 Hafiz Ahmed (2005) Principles and reactions of protein extraction, purification, and characterization CRC Press, Washington DC Halász, A et al 1994 Biogenic amines and their production by microorganisms in food Trends Food Science Techonoly: 5, 42 Hwang, R.R., J.H Orr and W.W Wallis 1997 Histamine formation in fish: microbiological and biochemical conditions In: Chemistry and Biochemistry of Marine Food Products (Martin, R.E., Flick, G.J., Hebard, C.E., and Ward, D.R., eds.), Avi Publishing Company, Connecticut pp 39-50 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 38 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Kim, L.V., H.H., Huss, and P., Dalgaard 2000 The effect of biogenic amine production by single bacterial cultures and metabiosis in cold-smoked salmon J Appl Microbiol., 89, 920 Kim, S., J Noda, and K Takama 1990 Growth and polyamine production of Alteromonas ssp in fish meat extracts under modifed atmosphere Bull Fac Fish Hokkaido Univ., 41, 213 Kim, S.H., K.G Field, M.T Morrissey, R.J Price, C.I Wei and H An 2001 Source and identification of histamine-producing bacteria from fresh and temperatureabused albacore Journal of Food Protection, 64(7): 1035-1044 Kim, S.H., R.J Price, M.T Morrissey, K.G Field, C.I Wei and H An 2002 Occurrence of histamine-forming bacteria in albacore and histamine accumulation in muscle at ambient temperature Journal of Food Science, 67(4): 1515-1521 Klarwasser, G.Z., U Braam, P.M Zürbes and W Schmutzler 1994 Macrophages and lymphocytes: alternative sources of histamine Inflammation Research, 41(1): C99-C100 Klausen, N.K and H.H Huss 1987 Growth and histamine production by Morganella morganii under various temperature conditions International Journal of Food Microbiology, 5: 147-156 Krause, C.I., M Chen, J.A Koburger, W.S Otwell and M.R Marshall 1995 Bacterial growth and histamine production on vacuum packaged tuna Journal of Food Science, 55(1): 59-63 Lehane, L and J Olley 2000 Histamine fish poisoning revisited Int Food Microbiol: 58, Lerke, P.A., S.B Werner, S.L Taylor and L.S Guthertz 1978 Scombroid poisoning: report of an outbreak The Western Journal of Medicine, 129(5): 381-386 Lin, S., C Imark and M Kneubuhl 1976 Biogenic amines in foods: histamine and food processing Inflammation Research, 48(6): 296-300 Lopez-Sabater, O., F.P, Nnenna, and N Christopher 1996 Mobiological assessment of stored Tilapia guineesis Afric J Food Sci., 5(4):242-247 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 39 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Medina, M.A., J.L Urdiales, C Rodriguez-Caso, F.J Ramírez and F SanchezJimenez 2003 Biogenic amines and polyamines: similar biochemistry for different physiological missions and biomedical applications Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology, 38(1): 23-59 Middlebrooks, B.L., P.M Toom, W.L Douglas, R.E Harrison and S McDowell 1988 Effects of storage time and temperature on the microflora and amine development in Spanish mackerel (Scomberomorus maculatus) Journal of Food Science, 53: 1024-1029 Mietz, J.L and E Karmas 1977 Chemical quality index of canned tuna as determined by high performance liquid chromatography Journal of Food Science, 42: 155158 Mietz, J.L and E Karmas 1977 Polyamine and histamine content of rockfish, salmon, lobster and shrimp as an indicator of decomposition J Assoc Ofc Anal Chem: 61, 139 Moret, S and L.S Conte 1996 High-performance liquid chromatographic evaluation of biogenic amines in foods—An analysis of diferent methods of sample preparation in relation to food characteristics J Chrom A., 729, 363 Onal, A 2007 A review: Current analytical methods for the determination of biogenic amines in foods Food Chem., 103, 1475 Ozogul, F 2004 Production of biogenic amines by Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae and Hafnia alvei using rapid HPLC method European Seafood Research and Technology, 219(5): 465-469 Pubchem 2012 Histamine compound summary Pubchem – NCBi/NLM database online Available from http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=774&tree=t#MeSH; (ngày 20/11/2012) Purohit, A., M Melac, G Pauli and N Frossard 2002 Comparative activity of cetirizine and mizolastine on histamine-induced skin wheal and flare response at 24 h British Journal of Clinical Pharmacology, 53(3): 250-254 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 40 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Rodrigues-Caso, C., D Rodriguez-Agudo, A.A Moya-García, I Fajardo, M.A Medina, V Subramaniam and F Sanchez-Jimenez 2003 Local changes in the catalytic site of mammalian histidine decarboxylase can affect its global conformation and stability European Journal of Biochemistry, 270: 4376-4387 Romero, A., M Melac, G Pauli and N Frossard 2002 Comparative activity of cetirizine and mizolastine on histamine-induced skin wheal and flare response at 24 h British Journal of Clinical Pharmacology, 53(3): 250-254 Ruiz-Capillas, C and A Moral 2001 Production of biogenic amines and their potential use as quality control indices for hake (Merluccius merluccius L.) stored in ice J Food Sci.: 66, 1030 Sabroe, R.A and A.K Black 1998 Scombrotoxic fish poisoning Clinical and Experimental Dermatology, 23(6): 258-259 Sattler, J and W Lorenz 1990 Intestinal diamine oxidases and enteral-induced histaminosis: studies of three prognostic variables in an epidemiological model Journal of Neural Transmission Supplementum, 32: 291-314 Sattler, J., D Häfner, H.J Klotter, W Lorenz and P.K Wagner 1988 Food-induced histaminosis as an epidemiological problem: plasma histamine elevation and haemodynamic alterations after oral histamine administration and blockade of diamine oxidase (DAO) Inflammation Research, 23(3-4): 361-365 Sattler, J., R Hesterberg, W Lorenz, U Schmidt, M Crombach and C.D Stahlknecht 1985 Inhibition of human and canine diamine oxidase by drugs used in an intensive care unit: relevance for clinical side effects? Inflammation Research, 16(3-4): 91-94 Scoging, A.C 1998 Marine biotoxins Journal of Applied Microbiology Symposium Supplement, 84(1): S41-S50 Shalaby, A.R 1996 Significance of biogenic amines to food safety and human health Food Research International, 29(7): 675 – 690 Shalaby, A.R 1996 Significance of biogenic amines to food safety and human health Food Research International, 29(7): 675 – 690 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 41 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Sims, G.G., G Farn, and R.Y York 1992 Quality index for tuna correlation of sensory attributes with chemical indices J Food Sci., 57, 1112 Smith, T.A 1980 Amines in food Food Chemistry: 6, 169 Staruszkiewicz, W.F andP.L., Rogers 2001 Performance of Histamine Test Kits for Applications to Seafood Presentation on October 26, 2001 4th World Fish Inspection & Quality Control Congress, Vancouver, BC Stratton, J.E., W.R Hutkins and S.L Taylor 1991 Biogenic amines in cheese and other fermented foods: a review Journal of Food Protection, 54: 460-470 Takahashi, H., B Kimura, M Yoshikawa and T Fujii 2003 Cloning and sequencing of the histidine decarboxylase genes of gram-negative, histamine-producing bacteria and their application in detection and identification of these organisms in fish Applied and Environmental Microbiology, 69(5): 2568-2579 Taylor, S.L 1986 Histamine food poisoning: toxicology and clinical aspects CRC Critical Reviews in Toxicology, 17(2): 91-128 Taylor, S.L 1986 Histamine food poisoning: toxicology and clinical aspects CRC Critical Reviews in Toxicology, 17(2): 91-128 Tracy, M.L., M.V Pickering and T Verhulst 1995 Cation exchange analysis of foods and beverages for biogenic amines Food Test Anal., 1, 48 USFDA 2001 Fish and fisheries products hazards and controls guidance 3rd edition U.S FDA Center for Food Safety and Applied Nutrition, Maryland Veciana-Nogues, M.T., A Marine Font and M.C Vidal Carou Biogenic amines as hygienic quality indicators of tuna Relationships with microbial counts, ATP related compounds, volatile and organo-leptic changes J Agric Food Chem., 45, 2036, 1997 Veien, M., F Szlam, J.T Holden, K Yamaguchi, D Denson and J.H Levy 2000 Mechanisms of non-immunological histamine and tryptase release from human cutaneous mast cells Anesthesiology, 92(4): 1074-1081 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 42 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Wei, C.I., M Chen, J.A Koburger, W.S Otwell and M.R Marshall 1990 Bacterial growth and histamine production on vacuum packaged tuna Journal of Food Science, 55(1): 59-63 Wendakoon, H., K Shiomi, and T Kikuchi 1990 Agmatine as a potential index for freshness of common squid J Food Sci., 52, 936 Yamanaka, H., K Shiomi and T Kikuchi 1989 Cadaverine as a potential index for decomposition of salmonoid fishes J Food Hyg Soc.: 30, 170 Yoshinaga, D.H and H.A Frank 1982 Histamine-producing bacteria in decomposing skipjack tuna (Katsuwonus pelamis) Applied and Environmental Microbiology, 44(2): 447-452 Yung-Hsiang, S.B., M.K Mukundan and K.A Kumar 2001 A simple and rapid method for colorimetric determination of histamine in fish flesh Food Control, 16(5): 465-472 Trang web: http://angi.com.vn/Desktop.aspx/Ngo-doc/35/Ngo_doc_histamine/ (ngày 20/11/2012) http://emedicine.medscape.com/article/1009464-overview (ngày 20/11/2012) http://vfa.gov.vn/content/article/ngo-doc-do-histamin-trong-ca-bien-118.vfa (ngày 20/11/2012) http://vi.wikipedia.org/wiki/Histamine (ngày 20/11/2012) http://www.allergyclinic.co.uk/histamine.htm (ngày 20/11/2012) http://www.foodsmart.govt.nz/food-safety/foodborne-illnesses/scombroid-poisoning/ (ngày 20/11/2012) Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 43 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC 1: SỐ LIỆU VÀ KẾT QUẢ PHÂN TÍCH THỐNG KÊ Số liệu xây dựng đƣờng chuẩn histamine Bảng Giá trị diện tích peak dung dịch histamine chuẩn (đo quy trình dansyl) Nồng độ Histamine (µg/ml) Diện tích peak đo lần (mAU) 18.16 52.16 104.97 Diện tích peak đo lần (mAU) 19.05 51,19 104,29 Diện tích peak đo lần (mAU) 18.88 52.84 101.92 TB 18.69 52.50 103.45 0.1 0.5 1.0 Hình 11 Biểu đồ đƣờng chuẩn histamine (đo quy trình dansyl) Bảng Giá trị diện tích peak dung dịch histamine chuẩn (đo quy trình benzoyl) Nồng độ Histamine (µg/ml) 10 Diện tích peak đo lần (mAU) 50.42 110.27 252.96 503.81 Diện tích peak đo lần (mAU) 51.28 108.84 249.78 508.12 Diện tích peak đo lần (mAU) 52.11 110.84 251.92 507.98 TB 51.27 107.98 251.55 506.63 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 44 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Hình 12 Biểu đồ đƣờng chuẩn histamine (đo quy trình benzoyl) Kết phân tích thống kê thí nghiệm Bảng Hiệu dung môi tách chiết đến hàm lƣợng histamine định lƣợng quy trình dansyl ANOVA Table for Ham luong Histamine by Dung moi tach chiet (quy trinh dansyl) Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1700.38 850.189 85.47 0.0000 Within groups 59.6813 9.94689 Total (Corr.) 1760.06 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine by Dung moi tach chiet (quy trinh dansyl) Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X Methanol 73.8082 X TCA 93.776 X PCA 107.269 Bảng Hiệu dung môi tách chiết đến hàm lƣợng histamine định lƣợng quy trình benzoyl ANOVA Table for Ham luong Histamine by Dung moi tach chiet (quy trinh benzoyl) Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4655.94 2327.97 885.13 0.0000 Within groups 15.7805 2.63008 Total (Corr.) 4671.72 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine by Dung moi tach chiet (quy trinh benzoyl) Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X PCA 109.063 X Methanol 118.385 X TCA 161.293 Bảng So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl phân tích hàm lƣợng histamine (mẫu 1) ANOVA Table for Ham luong Histamine (Mau 1) by Quy trinh dinh luong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 78.0005 78.0005 337.03 Within groups 0.925738 0.231435 Total (Corr.) 78.9262 P-Value 0.0001 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine (Mau 1) by Quy trinh dinh luong Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 45 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Dansyl 29.72 Benzoyl 36.9311 Trường Đại học Cần Thơ Homogeneous Groups X X Bảng 10 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl phân tích hàm lƣợng histamine (mẫu 2) ANOVA Table for Ham luong Histamine (Mau 2) by Quy trinh dinh luong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 144.646 144.646 179.35 0.0002 Within groups 3.22593 0.806481 Total (Corr.) 147.872 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine (Mau 2) by Quy trinh dinh luong Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X Dansyl 38.7751 X Benzoyl 48.5951 Bảng 11 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl phân tích hàm lƣợng histamine (mẫu 3) ANOVA Table for Ham luong Histamine (Mau 3) by Quy trinh dinh luong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0.294631 0.294631 2.45 0.1924 Within groups 0.480472 0.120118 Total (Corr.) 0.775103 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine (Mau 3) by Quy trinh dinh luong Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X Benzoyl 52.5184 X Dansyl 52.9616 Bảng 12 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl phân tích hàm lƣợng histamine (mẫu 4) ANOVA Table for Ham luong Histamine (Mau 4) by Quy trinh dinh luong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 780.361 780.361 1576.01 0.0000 Within groups 1.9806 0.49515 Total (Corr.) 782.341 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine (Mau 4) by Quy trinh dinh luong Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X Dansyl 65.2097 X Benzoyl 88.0184 Bảng 13 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl phân tích hàm lƣợng histamine (mẫu 5) ANOVA Table for Ham luong Histamine (Mau 5) by Quy trinh dinh luong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 654.603 654.603 324.20 0.0001 Within groups 8.07658 2.01915 Total (Corr.) 662.68 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine (Mau 5) by Quy trinh dinh luong Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X Dansyl 87.0184 X Benzoyl 107.909 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 46 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 14 So sánh hiệu quy trình dansyl quy trình benzoyl phân tích hàm lƣợng histamine (mẫu 6) ANOVA Table for Ham luong Histamine (Mau 6) by Quy trinh dinh luong Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4377.92 4377.92 280.60 0.0001 Within groups 62.4079 15.602 Total (Corr.) 4440.33 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine (Mau 6) by Quy trinh dinh luong Method: 95.0 percent LSD Level Count Mean Homogeneous Groups X Dansyl 107.269 X Benzoyl 161.293 Bảng 15 Sự gia tăng hàm lƣợng histamine cá ngừ trữ 4oC theo thời gian bảo quản ANOVA Table for Ham luong Histamine by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 39178.4 7835.68 Within groups 16.5584 12 1.37987 Total (Corr.) 39195.0 17 F-Ratio 5678.56 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups X 0h 29.9311 X Ngay 38.5951 X Ngay 42.1851 X Ngay 3 87.0184 X Ngay 107.909 X Ngay 161.293 Bảng 16 Sự gia tăng hàm lƣợng histamine cá ngừ trữ 0oC theo thời gian bảo quản ANOVA Table for Ham luong Histamine by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 1040.02 208.004 Within groups 19.1961 12 1.59967 Total (Corr.) 1059.21 17 F-Ratio 130.03 P-Value 0.0000 Multiple Range Tests for Ham luong Histamine by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups X 0h 26.9966 X Ngay 33.6893 X Ngay 38.0376 X Ngay 42.2447 X Ngay 46.8987 X Ngay 11 49.1 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 47 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 17 Sự gia tăng mật số vi khuẩn cá ngừ trữ 4oC theo thời gian bảo quản ANOVA Table for Mat so vi khuan by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 4.38291 0.876582 Within groups 0.0282989 12 0.00235824 Total (Corr.) 4.41121 17 Multiple Range Tests for Mat so vi khuan by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups X 0h 4.5394 X Ngay 4.79396 X Ngay 4.85922 X Ngay 5.3338 X Ngay 5.71836 X Ngay 11 5.87677 F-Ratio 371.71 P-Value 0.0000 Bảng 18 Sự gia tăng mật số vi khuẩn cá ngừ trữ 0oC theo thời gian bảo quản ANOVA Table for Mat so vi khuan by Thoi gian Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 4.38291 0.876582 Within groups 0.0282989 12 0.00235824 Total (Corr.) 4.41121 17 Multiple Range Tests for Mat so vi khuan by Thoi gian Method: 95.0 percent LSD Thoi gian Count Mean Homogeneous Groups X 0h 4.5394 X Ngay 4.79396 X Ngay 4.85922 X Ngay 5.3338 X Ngay 5.71836 X Ngay 11 5.87677 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 48 F-Ratio 371.71 P-Value 0.0000 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC SỐ LIỆU THÔ CỦA CÁC THÍ NGHIỆM Bảng 19 Hàm lƣợng histamine theo dung môi ly trích (định lƣợng quy trình dansyl) Dung môi ly trích Mẫu Perchloric acid Cá ngừ trữ 4oC/7 ngày Methanol Trichloroacetic acid Diện tích peak (mAU) Nồng độ histamine (µg/ml) 2261.30 2061.25 2094.80 1479.28 1452.20 1487.71 1869.57 1872.01 1870.02 22.68 20.67 21.00 14.82 14.55 14.90 18.74 18.77 18.75 L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 Hàm lượng histamine (mg/kg) 113.40 103.35 105.04 74.12 72.76 74.54 93.72 93.85 93.75 Trung bình 107.27 73.81 93.78 Khối lƣợng mẫu: 10g Thể tích dịch trích: 50ml Độ pha loãng: Bảng 20 Hàm lƣợng histamine theo dung môi ly trích (định lƣợng quy trình benzoyl) Dung môi ly trích Mẫu Perchloric acid Cá ngừ trữ 4oC/7 ngày Methanol Trichloroacetic acid Diện tích peak (mAU) Nồng độ histamine (µg/ml) 151.48 153.41 149.20 139.88 141.68 137.47 207.08 203.33 205.13 2.96 3.00 2.91 2.73 2.76 2.68 4.07 3.99 4.03 L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 Hàm lượng histamine (mg/kg) 118.47 120.01 116.65 109.22 110.65 107.30 162.84 159.81 161.24 Trung bình 118.38 109.06 161.29 Khối lƣợng mẫu: 5g Thể tích dịch trích: 20ml Độ pha loãng: 10 Bảng 21 Hàm lƣợng histamine mẫu cá ngừ trữ 4oC theo thời gian lƣu trữ Thời gian lưu trữ Zero Ngày Ngày L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học Diện tích peak (mAU) Nồng độ histamine (µg/ml) 48.93 48.50 49.60 61.96 64.99 64.16 68.04 0.92 0.91 0.93 1.18 1.24 1.22 1.30 49 Hàm lượng histamine (mg/kg) 36.87 36.53 37.40 47.21 49.62 48.96 52.03 Trung bình 36.93 48.60 52.52 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ L2 L3 Ngày L1 L2 L3 Ngày L1 L2 L3 Ngày L1 L2 L3 Khối lƣợng mẫu: 5g Thể tích dịch trích: 20ml Độ pha loãng: 10 69.13 68.77 114.06 113.03 113.01 139.38 135.65 140.24 207.58 203.82 205.62 1.32 1.32 2.21 2.19 2.19 2.72 3.64 2.73 4.07 4.00 4.03 52.90 52.62 88.57 87.75 87.73 108.67 105.71 109.35 162.81 159.82 161.25 88.02 107.91 161.29 Bảng 22 Hàm lƣợng histamine mẫu cá ngừ trữ 0oC theo thời gian lƣu trữ Thời gian lưu trữ Nồng độ histamine (µg/ml) Diện tích peak (mAU) Zero L1 L2 L3 Ngày L1 L2 L3 Ngày L1 L2 L3 Ngày L1 L2 L3 Ngày L1 L2 L3 11 Ngày L1 L2 L3 Khối lƣợng mẫu: 5g Thể tích dịch trích: 20ml Độ pha loãng: 10 39.59 33.88 36.02 45.05 45.37 44.36 48.51 52.49 50.21 57.33 55.37 54.41 61.11 62.01 61.58 64.91 63.95 64.16 0.74 0.62 0.67 0.84 0.85 0.83 0.91 0.99 0.95 1.09 1.05 1.03 1.16 1.18 1.17 1.24 1.22 1.22 Hàm lượng histamine (mg/kg) 29.45 24.92 26.62 33.79 34.04 33.24 36.54 39.70 37.88 43.54 41.98 41.22 46.54 47.25 46.91 49.55 48.79 48.96 Trung bình 26.99 33.68 38.03 42.24 46.89 49.10 Bảng 23 Mật số vi khuẩn có mẫu cá ngừ trữ 4oC theo thời gian lƣu trữ Thời gian lưu trữ Zero Độ pha loãng -2 Số L1 10 -3 10 10 225 150 - Chuyên ngành Công nghệ Sinh học -4 10 -5 50 10 - -6 10 - -7 10 - -8 Mật số vi khuẩn (log10 cfu/g) 4.53 Trung bình 4.54 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 khuẩn lạc Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Trường Đại học Cần Thơ L2 L3 283 271 127 99 18 12 - - - 4.57 4.52 L1 + 56 34 11 - - 4.91 L2 L3 + + 52 45 34 40 20 - - - 4.89 4.89 L1 + + 69 32 22 - 5.96 L2 L3 + + + + 52 47 40 30 19 - - 5.92 5.85 L1 + + + 148 39 15 - 7.23 L2 L3 + + + + + + 178 257 53 84 - - 7.32 7.49 L1 + + + 259 137 45 11 7.56 L2 L3 + + + + + + + 291 33 160 30 72 - 7.76 7.61 L1 + + + + + 58 32 8.91 L2 L3 + + + + + + + + + + 38 52 33 37 8.81 8.91 4.90 5.91 7.35 7.64 8.88 Bảng 24 Mật số vi khuẩn có mẫu cá ngừ trữ 0oC theo thời gian lƣu trữ Thời gian lưu trữ Zero Ngày Ngày Ngày Ngày 11 Ngày 10 10 10 L1 L2 L3 225 283 271 150 127 99 18 12 - - - Mật số vi khuẩn (log10 cfu/g) 4.53 4.57 4.52 L1 + 40 34 - - - - 4.83 L2 L3 + + 36 42 28 26 - - - 4.76 4.79 L1 + 48 32 - - - 4.86 L2 L3 + + 55 40 27 37 11 22 - - - 4.87 4.85 L1 + 145 64 42 13 - - 5.28 L2 L3 + + 156 135 86 129 32 62 28 - - 5.34 5.38 L1 + + 33 29 - - 5.75 L2 L3 + + + + 32 26 32 22 - - - 5.76 5.64 L1 + + 54 40 21 - - 5.93 L2 + + 37 31 - - 5.79 Độ pha loãng -2 Số khuẩn lạc Chuyên ngành Công nghệ Sinh học -3 -4 10 51 -5 10 -6 10 -7 10 -8 Trung bình 4.54 4.79 4.85 5.34 5.73 5.88 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 L3 + + Trường Đại học Cần Thơ 52 37 - - 5.91 Bảng 25 Hàm lƣợng histamine có số mẫu thủy sản mua siêu thị thành phố Cần Thơ Diện tích peak (mAU) Nồng độ histamine (µg/ml) L1 L2 L3 L1 L2 L3 L1 L2 L3 35.40 36.40 36.64 25.84 26.47 26.11 40.50 39.96 40.23 0.65 0.67 0.68 0.46 0.48 0.47 0.75 0.74 0.75 L1 3.85 0.03 L2 L3 4.17 4.01 0.03 0.03 L1 6.84 0.09 6.96 6.33 76.06 74.74 75.60 79.31 80.87 80.69 1.18 1.17 1.24 1.22 1.22 Mẫu thủy sản Cá ngừ tươi Cá cam tươi Cá thu tươi Cá thu đóng hộp Cá ngừ đóng hộp L2 L3 Cá nục khô L1 L2 L3 Tôm khô L1 L2 L3 Khối lƣợng mẫu: 5g Thể tích dịch trích: 20ml Độ pha loãng: 10 Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 52 Hàm lượng histamine (mg/kg) 36.13 36.92 37.11 38.54 39.04 38.75 40.18 39.75 39.96 1.08 1.34 1.21 3.46 3.55 3.05 58.41 57.36 58.04 60.98 62.22 62.08 Trung bình 36.1 38.9 39.2 58.2 61.7 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học [...]... đánh giá chất lượng hải sản và các sản phẩm làm từ hải sản Ngoài ra, hàm lượng cao histamine trong hải sản cũng là một mối nguy đối với sức khỏe người tiêu dùng Vì tầm quan trọng của histamine, nhằm mục đích nghiên cứu quy trình định lượng histamine nhanh chóng, chính xác trong thực phẩm nên đề tài Khảo sát histamine trong sản phẩm thủy sản bằng phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được thực hiện 1.2... chiết tách sử dụng trong sắc ký lỏng hiệu năng cao mà người ta có thể phân chia nó ra làm các loại: sắc ký hấp phụ, sắc ký phân bố, sắc ký ion, sắc ký rây phân tử… trong đó sắc ký phân bố được ứng dụng rộng rãi và phổ biến Tùy theo độ phân cực pha tĩnh và dung môi pha động, người ta phân biệt: sắc ký lỏng pha thường và sắc ký lỏng pha đảo - Sắc ký lỏng pha thường: pha tĩnh có độ phân cực cao hơn độ phân... nhau, bao gồm cá và sản phẩm từ cá, được xác định theo nhiều cách như bằng kỹ thuật sắc ký như sắc ký lớp mỏng, sắc ký khí, điện di mao dẫn và sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) (Onal, 2007) Trong những phương pháp có sẵn để xác định histamine trong hải sản, phương pháp được dùng nhiều nhất là sắc ký, đặc biệt là HPLC với cột trao đổi ion hoặc cột pha đảo bằng cách dùng các cặp ion để tách histamine (Batange... dẫn xuất trước phân tách trong sắc ký pha đảo đi kèm với việc dò tìm bằng UV còn OPA thường được dùng để tạo dẫn xuất trước hoặc sau phân tách trong sắc ký pha đảo cặp ion kết hợp với việc phát hiện bằng huỳnh quang (Capillas và Moral, 2001, Veciana-Nogues, 1997) 2.2 Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 2.2.1 Giới Thiệu Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) là một phương pháp tách và phân tích các... lỏng hiệu năng cao được thực hiện 1.2 Mục tiêu đề tài Tối ưu hóa quy trình ly trích và định lượng histamine bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao Khảo sát sự gia tăng hàm lượng histamine trong sản phẩm thủy sản theo thời gian và nhiệt độ bảo quản Định lượng histamine trong một số sản phẩm thủy sản phổ biến trên thị trường, từ đó so sánh với tiêu chuẩn cho phép Chuyên ngành Công nghệ Sinh học... hàm lượng histamine và độc tính của một mẫu cá chưa rõ ràng và sự hiện diện của các chất làm tăng cường hoạt tính của histamine cũng cần được xem xét 2.1.9 Phƣơng pháp xác định histamine trong thủy sản bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) Vì tầm quan trọng của histamine trong đánh giá chất lượng thủy sản do đó cần thiết phải có những phương pháp phân tích phù hợp Histamine trong những thực phẩm khác... trong thực phẩm, bao gồm: sắc ký khí, sắc ký lớp mỏng, sắc ký lỏng, và sắc ký lỏng hiệu năng cao Chuyên ngành Công nghệ Sinh học 1 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 34 - 2013 Trường Đại học Cần Thơ Histamine có tầm quan trọng cao trong công nghiệp thực phẩm Những năm gần đây xuất hiện nhiều nghiên cứu tập trung vào histamine do tiềm năng ứng dụng to lớn của amine này trong đánh... Cần Thơ trong đó nước đóng vai trò quan trọng mà lại rẻ tiền, do đó sắc ký lỏng pha đảo được sử dụng nhiều nhất 2.2.2 Các bộ phận của hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao Thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao bao gồm các bộ phận chính: bơm, bộ phận tiêm mẫu, cột sắc ký phân tích, đầu dò, bộ phận điều khiển và xử lý số liệu Mẫu sau khi được tiêm vào cột sẽ được pha động lôi kéo qua cột Dựa vào khả năng tương... trích histamine và phân tích bằng quy trình dansyl, trong khi trichloroacetic acid 6% được sử dụng để ly trích và phân tích histamine bằng quy trình benzoyl 4.2 So sánh quy trình benzoyl và quy trình dansyl trong phân tích histamine trong hải sản Trong số các phương pháp phân tích hiện có, HPLC là phương pháp được sử dụng phổ biến nhất để phân tách và định lượng histamine Vì histamine có trong thực phẩm. .. mật số vi sinh vật trong mẫu thí nghiệm - Chỉ tiêu đánh giá: Mật số vi khuẩn (log10 cfu/g) 3.2.4 Xác định hàm lƣợng histamine có trong một số sản phẩm thủy sản Mục tiêu: Xác định hàm lượng histamine trong các sản phẩm thủy sản và so sánh với hàm lượng tối đa cho phép Các mẫu được chọn theo tiêu chí là những loại thủy hải sản được sử dụng phổ biến Phƣơng pháp: - Thu thập mẫu: 7 mẫu hải sản (Bảng 3) được