NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY NOÃN CHƯA THỊ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM ĐỂ TẠO DÒNG NGÔ ĐƠN BỘI KÉP

26 1.4K 11
NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY NOÃN CHƯA THỊ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM ĐỂ TẠO DÒNG NGÔ ĐƠN BỘI KÉP

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY NOÃN CHƯA THỊ TINH TRONG ỐNG NGHIỆM ĐỂ TẠO DÒNG NGÔ ĐƠN BỘI KÉP

Bộ Giáo dục v Đo tạo Bộ Nông nghiệp v phát triển nông thôn Viện khoa học nông nghiệp việt nam ******** Nguyễn thị khánh vân Nghiên cứu phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh trong ống nghiệm để tạo dòng ngô đơn bội kép Chuyên ngnh: Chọn giống v nhân giống Mã số: 4. 01. 05 Tóm tắt luận án tiến sĩ nông nghiệp H Nội - 2007 Công trình đợc hon thnh tại: - Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Ngời hớng dẫn khoa học: PGS. TS. Lê Huy Hm PGS. TS. Đỗ Năng Vịnh Phản biện 1: GS. TS. Nguyễn Quang Thạch Phản biện 2: PGS. TS. Vũ Đức Quang Phản biện 3: GS. TS. Ngô Hữu Tình Luận án sẽ đợc bảo vệ trớc Hội đồng chấm luận án cấp Nh nớc tại Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam vo hồi giờ ngy. tháng . năm 2007 Có thể tìm hiểu luận án tại th viện: 1 - Th viện Quốc gia 2 - Th viện Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam Danh mục công trình đã công bố liên quan đến luận án 1. Nguyễn Thị Khánh Vân, Lê Huy Hm, Lu Mỹ Dung, Đỗ Năng Vịnh (2003). Nghiên cứu ảnh hởng của một số chất điều ho sinh trởng v thnh phần muối khoáng đến phản ứng của noãn ngô cha thụ tinh in vitro. Tạp chí Nông nghiệp v Phát triển nông thôn, tháng 7-2003, trang 832 835. 2. Nguyễn Thị Khánh Vân, Lê Huy Hm, Lu Mỹ Dung, Lê Thu Về, Đỗ Năng Vịnh (2003). Nghiên cứu sử dụng phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh để tạo dòng thuần ở ngô. Báo cáo khoa học Hội nghị Công nghệ sinh học ton quốc tháng 12-2003 Nh xuất bản khoa học v kỹ thuật, trang 840 845. 3. Nguyễn Thị Khánh Vân, Lê Huy Hm, Lê Thu Về, Đỗ Năng Vịnh (2004). ứng dụng kỹ thuật đơn bội trong chọn tạo giống ngô u thế lai. Tạp chí Nông nghiệp v Phát triển nông thôn, tháng 3-2004, trang 317 319. 4. Lê Huy Hm, Nguyễn Thị Khánh Vân, Lu Mỹ Dung, Lê Thu Về, Đỗ Năng Vịnh (2005). Phát triển v ứng dụng kỹ thuật đơn bội trong chọn tạo giống ngô u thế lai. Hội nghị khoa học công nghệ cây trồng, tháng 3 - 2005. 5. Le Huy Ham, Nguyen Thi Khanh Van and C. Jampatong. Haploid Technique: an approach to improve maize adaptation to marginal environment. Proceedings of the International Conference on Maize Adaptation to Marginal Environments; March 6-9, 2005 Nakhon Ratchasima, Thailand, pages 99 103. 6. Nguyễn Thị Khánh Vân, Lê Huy Hm, Lu Mỹ Dung, Đỗ Năng Vịnh (2005). Bớc đầu nghiên cứu nuôi cấy noãn ngô cha thụ tinh thông qua mô nuôi. Tạp chí Nông nghiệp v Phát triển nông thôn, số 18-2005, trang 20 22. Mở đầu 1. Tính cấp thiết của đề ti Công nghệ đơn bội, đặc biệt l các kỹ thuật nuôi cấy bao phấn, hạt phấn tách rời v noãn cha thụ tinh có ý nghĩa quan trọng đối với nghiên cứu di truyền v chọn tạo giống (Bajaj, 1990; Khush v cs, 1996). Công nghệ ny cho phép tạo ra hng loạt các dòng thuần đơn bội kép có khả năng cố định u thế lai v khả năng kết hợp cao trong tạo giống u thế lai F1. Công nghệ ny còn cho phép rút ngắn thời gian tạo giống v đơn giản hoá quá trình chọn giống. Ngoi ra, công nghệ đơn bội còn cho phép tạo ra nguồn tế bo mô sẹo đơn bội, đơn bo hoặc nhị bội kép có khả năng tái sinh mạnh dùng trong chuyển gen (Khush v cs, 1996). ở nớc ta, ngô l cây lơng thực quan trọng thứ hai sau lúa. Năng suất ngô của Việt Nam đã tăng đáng kể trong những năm qua nhờ hng loạt các giống ngô lai năng suất cao đã đợc đa vo sản xuất. Tuy vậy, năng suất ngô trung bình của nớc ta còn thấp (34,9 tạ /ha - số liệu của năm 2004). Theo tinh thần QĐ 09 của Chính phủ sản lợng ngô phải đạt 5 - 6 triệu tấn trong giai đoạn 2006 - 2010, trong đó cần tăng tỷ lệ diện tích ngô lai lên 85 - 90% (Ngô Hữu Tình, 2005). Để tạo đợc các giống ngô lai có năng suất cao, ổn định v thích nghi với các vùng sinh thái khác nhau thì yêu cầu số một l phải có bố mẹ có độ đồng hợp tử cao, khả năng kết hợp cao để thể hiện u thế lai cao. Theo phơng pháp truyền thống việc sản xuất các dòng thuần nh vậy thờng đòi hỏi 6-8 thế hệ tự thụ để thu đợc mức đồng hợp tử mong muốn. Trong khi đó sử dụng kỹ thuật đơn bội có thể rút ngắn việc tạo dòng thuần chỉ còn 1 thế hệ (Lê Huy Hm v cs, 2005). Thực tiễn tạo giống ngô lai ở nớc ta đang đòi hỏi phải có đợc nguồn dòng thuần đa dạng phong phú, có khả năng kết hợp cao để sử dụng trong chơng trình phát triển giống ngô lai. Để đạt đợc mục tiêu ny việc nghiên cứu phát triển các phơng pháp mới tạo dòng thuần l rất cần thiết. Trên cơ sở những phân tích trên chúng tôi đã tiến hnh thực hiện đề ti: Nghiên cứu phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh trong ống nghiệm để tạo dòng ngô đơn bội kép. 2. Mục tiêu của đề ti Xây dựng quy trình công nghệ nuôi cấy trong ống nghiệm noãn cha thụ tinhngô nhằm tạo dòng đơn bội kép từ đó đề xuất quy trình tạo dòng thuần phục vụ cho công tác chọn tạo giống ngô lai ở nớc ta. 1 3. ý nghĩa khoa học v thực tiễn của đề ti ý nghĩa khoa học: Kết quả nghiên cứu của đề ti sẽ cung cấp các dẫn liệu khoa học có giá trị về khả năng tạo dòng đơn bội kép bằng nuôi cấy noãn cha thụ tinh ở một số giống ngô Việt Nam. Kết quả nghiên cứu l ti liệu tham khảo cho việc nghiên cứu v giảng dạy về phơng pháp tạo dòng đơn bội képngô bằng nuôi cấy noãn cha thụ tinh. ý nghĩa thực tiễn: Xây dựng đợc quy trình tạo dòng đơn bội képngô bằng phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh v ứng dụng trong việc tạo giống ngô lai. 4. Đối tợng v phạm vi nghiên cứu của đề ti Đề ti tập trung nghiên cứu ở 25 giống ngô đại diện cho 5 nhóm giống do Viện nghiên cứu ngô v Trung tâm khảo kiểm nghiệm giống cây trồng cung cấp. Nội dung nghiên cứu: tập trung nghiên cứu một số yếu tố ảnh hởng đến nuôi cấy noãn cha thụ tinh ở ngô, đánh giá mức độ bội thể, độ thuần v một số tổ hợp lai sử dụng dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh. 5. Những đóng góp mới của luận án Đề ti đã nghiên cứu khả năng tạo dòng đơn bội kép của một số giống ngô bằng phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh trong ống nghiệm. Kết quả của đề ti lm cơ sở khoa học cho việc hon thiện v xây dựng quy trình tạo dòng đơn bội képngô bằng phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh trong ống nghiệm cũng nh ứng dụng các dòng đơn bội kép vo công tác chọn tạo giống ngô lai. 6. Cấu trúc của luận án Luận án đợc trình by trong 141 trang với 34 bảng số liệu v 31 hình. Luận án đã tham khảo 129 ti liệu trong đó có 26 ti liệu tiếng Việt, 103 ti liệu tiếng Anh. Chơng 1. Tổng quan ti liệu nghiên cứu 1.1. Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy noãn ngô cha thụ tinh trên thế giới Hiện nay chỉ có ba ti liệu về nuôi cấy noãn ngô đã đợc công bố vo đầu những năm 80 (Andre, 1980; Ao, 1982; Truong Andres, 1984). Các tác giả đầu tiên đã tạo mô sẹo từ noãn ngô cha thụ tinh, sau đó tái sinh cây 2 thông qua mô sẹo. Nghiên cứu các dòng tạo thnh bằng phơng pháp sinh học phân tử v quan sát trên đồng ruộng đã chứng minh rằng cây đợc tái sinh bằng phơng pháp ny l do tế bo trứng cha thụ tinh tự lỡng bội hoá tạo thnh. Tuy nhiên hiệu quả của quá trình nuôi cấy còn thấp. Sau những công bố đầu tiên ny mối quan tâm của cộng đồng thế giới lại hớng tới một phơng pháp tạo dòng thuần khác ở ngô - phơng pháp nuôi cấy bao phấn. Phơng pháp ny đã thu đợc những kết quả rất hứa hẹn. Trong khoảng những năm 80 - 90 các nghiên cứu tập trung vo cải tiến quy trình v phơng pháp nuôi cấy bao phấn. Trong một số trờng hợp đã đạt đợc nhiều kết quả khả quan. Tuy vậy phơng pháp ny cha thể đợc ứng dụng rộng rãi bởi tính phụ thuộc vo giống của nuôi cấy bao phấn . Vì vậy mối quan tâm lại quay trở về nuôi cấy tế bo sinh dục cái với hy vọng phơng pháp ny có thể khắc phục đợc những tồn tại của kỹ thuật nuôi cấy bao phấn. Gần đây các nh khoa học Trung Quốc đã tiến hnh nghiên cứu nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôi v đã thu đợc nhiều kết quả quan trọng. Họ đã xác định đợc môi trờng nuôi cấy cho tỷ lệ tạo hạt v cây cao nhất. Họ cũng đã đi sâu nghiên cứu nguồn gốc của những cây tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôi v xác định những cây ny có nguồn gốc từ túi phôi. Từ đó họ đã thu đợc dòng đơn bội kép v sử dụng thnh công trong chọn tạo giống ngô lai (Yming v cs, 2000). 1.2. Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy noãn ngô cha thụ tinh ở nớc ta Các nghiên cứu về nuôi cấy noãn cha thụ tinhngô mới chỉ đợc tiến hnh ở Viện nghiên cứu ngô v Viện Di truyền Nông nghiệp. Các kết quả ban đầu cho thấy có thể tạo dòng đơn bội kép bằng phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh (Ngô Hữu Tình v cs, 1997; Khuất Hữu Trung v cs, 1997; Đỗ Năng Vịnh, 2002). Kỹ thuật đơn bội có tầm quan trọng lớn trong công tác chọn tạo giống cây trồng nói chung v ở ngô nói riêng. Kỹ thuật ny cho phép rút ngắn thời gian tạo ra dòng thuần, từ đó rút ngắn thời gian tạo giống. Trong các hớng đơn bội ngô, nuôi cấy bao phấn đã đợc nghiên cứu kỹ v có thể đa ra áp dụng cho chọn tạo giống. Tuy vậy, việc nghiên cứu hon thiện các kỹ thuật khác nhằm hỗ trợ cho phơng pháp nuôi cấy bao phấn l rất cần thiết. Căn cứ vo yêu cầu thực tiễn v những thnh tựu đã đạt đợc trên thế giới cũng nh trong nớc, chúng tôi đã lựa chọn đề ti v các phơng pháp nghiên cứu phù hợp. 3 Chơng 2 . Nội dung, vật liệu v phơng pháp nghiên cứu 2.1. Nội dung nghiên cứu Đề ti nghiên cứu tập trung vo các nội dung chính sau: Nuôi cấy noãn cha thụ tinh tách rời; Nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôi; Đánh giá mức độ bội thể v một số đặc điểm nông sinh học của dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh; Đánh giá một số đặc điểm nông sinh học của một số tổ hợp lai sử dụng dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh. 2.2. Vật liệu nghiên cứu Nguồn vật liệu sử dụng cho nghiên cứu l 25 giống ngô thuộc các nhóm: Nhóm giống thụ phấn tự do: Q2, CV1, MSB 49; Nhóm ngô đờng: VN3; Nhóm giống lai đơn: MX1, P30A38, G5460, SC98-5, 3012, 9698, LVN32, TC96-1, DK888, LVN4, LVN24, LVN25, LVN29, LVN10; Nhóm lai kép: DC98-5, DX9801, DC98-2, LVN31; Nhóm lai ba: TC5910, LVN17. Các dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh cũng đợc đa vo lm vật liệu nghiên cứu, ký hiệu các dòng ny từ G1 đến G25. Các dòng G ny tạo ra từ mô sẹo, trực tiếp từ mô nuôi. 2.3. Phơng pháp nghiên cứu 2.3.1. Thu mẫu v xử lý mẫu: Các bắp đợc bao cách ly ngay sau khi xuất hiện. Mẫu đợc thu vo các buổi sáng, khi bắp có chiều di râu đạt 2 - 10 cm tuỳ theo giống. Sau khi thu, mẫu đợc xử lý lạnh ở các chế độ nhiệt v thời gian khác nhau tùy theo mục đích của mỗi thí nghiệm. Trong một số trờng hợp mẫu đợc sử dụng lm thí nghiệm ngay sau khi thu. 2.3.2. Môi trờng v điều kiện nuôi cấy: Môi trờng nuôi cấy đợc chuẩn bị trên nền khoáng đa lợng v vi lợng theo công thức của môi trờng MS, B5, N6, YP, bổ sung các vitamin, các chất điều ho sinh trởng, đờng, phụ gia hữu cơ, thạch khác nhau tuỳ theo mục đích của mỗi thí nghiệm. Mẫu sau cấy đợc nuôi tối ở nhiệt độ 25 0 C trong 10 ngy, sau đó chuyển ra nuôi trong điều kiện chiếu sáng 8 giờ/ ngy. 2.3.3. Tạo cây hon chỉnh: Cây sau khi tái sinh từ mô sẹo đợc cấy vo môi trờng tạo rễ: RN (MS/2 + 6g/l thạch + 30 g/l đờng + (0 - 3) mg/l - NAA) để tạo cây hon chỉnh. Hạt tạo ra từ nuôi cấynuôi đợc tách khỏi bắp v cấy vo môi trờng MS/2 + 6g/l thạch + 30 g/l đờng. 4 2.3.4. Xác định mức bội thể của cây tái sinh từ noãn cha thụ tinh 2.3.4.1. Kỹ thuật tế bo học xác định số lợng nhiễm sắc thể v mức bội thể của cây ngô tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh. Các bớc xác định số lợng nhiễm sắc thể v mức bội thể đợc tiến hnh theo phơng pháp của B. Kindiger, 1994. 2.3.4.2. Kiểm tra độ bội thể bằng máy đo độ bội thể (Flow Cytometry). Các bớc xác định mức bội thể của cây tái sinh từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh đợc tiến hnh theo phơng pháp của Laat v cs, (1987). 2.3.5. Đánh giá một số đặc tính nông sinh học của các dòng tạo thnh từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh: Khảo sát đánh giá một số đặc tính nông sinh học của dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên đồng ruộng (theo 10TCN). Số liệu đợc xử lý bằng các phơng pháp thống kê, sử dụng chơng trình Excel 5.0 v biện luận kết quả theo Nguyễn Đình Hiền, 1998; Chu Văn Mẫn, 2003. Chơng 3. kết quả v thảo luận 3.1. Nuôi cấy noãn cha thụ tinh tách rời 3.1.1. Nghiên cứu phản ứng của noãn ngô cha thụ tinh trên các môi trờng nuôi cấy khác nhau 12 môi trờng nuôi cấy khác nhau chia lm 3 nhóm bao gồm: - Nhóm 1: bao gồm các môi trờng khoáng MS, B5, N6, YP bổ sung 2mg/l 2,4D, 2 mg/l BAP v 5 mg/l adenin sulphat (công thức 1, 2, 3, 4). - Nhóm 2: bao gồm các môi trờng khoáng MS, B5, N6, YP bổ sung 0,5mg/l -NAA, 2 mg/l kinetin (công thức 5, 6, 7, 8). - Nhóm 3: bao gồm các môi trờng khoáng MS, B5, N6, YP bổ sung các axit amin (công thức 9, 10, 11,12). Quan sát sự phát sinh hình thái cho thấy phản ứng của noãn trong môi trờng nuôi cấy gồm 3 dạng chính: Phản ứng tạo cấu trúc tơng tự mô sẹo (callus like structure = CS): hạt có cấu trúc giống nh mô sẹo, mu trắng trong hoặc hơi vng, xốp mềm. Tiến hnh giải phẫu cấu trúc tơng tự mô sẹo ny v cấy chuyển vo môi trờng mới chúng có khả năng hình thnh mô sẹo v tái sinh thnh cây. Phản ứng tạo mô sẹo: trên môi trờng nuôi cấy một số hạt tạo mô sẹo. Phản ứng tạo cây trực tiếp: sau 4- 5 tuần nuôi cấy ở một số ít noãn hình thnh cây. Kết quả quan sát phản ứng tạo CS của noãn trong môi trờng nuôi cấy đợc thể hiện ở bảng 3.3. 5 Bảng 3.3. ảnh hởng của môi trờng nuôi cấy đến tỷ lệ tạo cấu trúc tơng tự callus của noãn cha thụ tinh (tính theo %) Công thức môi trờng Nhóm giống Giống 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 TB1 TB2 Q2 17,4 6,0 13,4 13,8 1,0 0,0 0,0 0,4 0,0 0,0 0,2 0,2 4,4 CV1 32,0 36,2 17,4 11,2 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 8,1 Thụ phấn tự do MSB49 20,7 18,0 23,5 16,3 7,7 8,5 5,5 8,8 0,0 0,0 0,0 0,0 9,1 7,2 Đờng VN3 26,8 26,0 35,3 36,5 15,3 14,8 13,5 12,5 0,0 0,0 0,0 0,0 15,1 15,1 MX1 33,0 30,6 17,7 25,7 4,0 9,7 6,6 1,1 2,9 1,1 0,9 0,3 11,2 P30A38 14,3 8,0 27,0 18,0 6,0 5,0 6,0 0,0 0,7 0,0 0,3 0,0 7,1 G5460 12,8 22,3 20,5 20,5 4,8 9,3 5,8 9,8 4,0 1,0 2,0 2,3 9,6 SC98-5 23,5 33,9 34,4 32,5 15,7 14,7 14,7 5,3 2,1 0,0 0,0 0,0 14,7 3012 9,5 12,3 11,3 9,3 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 3,5 9698 12,3 6,5 7,0 6,5 2,8 5,0 10,0 11,0 0,8 1,5 1,8 1,8 5,6 DK888 22,2 16,5 19,9 15,3 2,6 2,3 5,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 7,0 LVN4 23,1 26,7 31,1 18,9 9,6 13,4 8,8 7,9 1,7 1,9 3,2 4,1 12,5 LVN24 37,3 54,9 35,1 46,3 33,7 39,8 31,2 29,7 3,5 4,1 6,8 4,8 27,3 LVN25 72,1 67,9 61,5 65,1 66,3 56,3 70,5 60,1 5,3 3,9 4,3 3,1 44,7 LVN29 63,8 54,6 72,1 63,8 44,3 33,3 49,7 51,5 7,9 8,1 8,1 6,5 38,6 Lai đơn LVN10 31,9 27,2 25,3 28,3 20,0 18,1 14,7 15,8 0,8 1,8 2,5 0,7 15,6 16,5 LVN33 16,8 6,8 13,8 16,8 1,5 0,0 9,8 9,3 0,0 0,0 0,0 0,0 6,2 LVN32 39,5 42,1 48,0 49,6 3,3 9,2 4,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 16,3 TC96-1 24,3 11,0 17,5 7,3 13,8 4,5 9,5 4,8 0,0 0,0 0,0 0,0 7,7 TC5910 18,9 11,6 9,7 9,9 3,8 2,9 5,5 3,1 0,0 0,3 0,4 0,5 5,6 Lai ba LVN17 51,9 41,2 46,0 43,2 38,2 42,3 35,6 39,6 3,1 1,7 1,9 3,7 29,0 12,9 DC98-5 23,1 13,7 22,9 18,6 8,6 9,7 8,9 5,7 3,4 0,0 0,0 0,0 9,6 DX9801 11,0 17,3 22,3 12,0 3,5 7,5 3,3 1,8 0,0 0,0 0,0 0,0 6,6 DC98-2 10,5 8,6 8,0 3,6 2,1 5,5 9,3 10,9 1,7 0,0 1,3 0,0 5,1 Lai kép LVN31 28,6 21,5 22,5 23,3 10,1 14,2 14,2 10,9 1,5 1,8 1,3 2,0 12,7 8,5 TB3 27,1 24,8 26,5 24,5 12,7 13,0 13,7 12,0 1,6 1,1 1,4 1,2 TB4 25,7 12,9 1,3 Ghi chú: TB1: giá trị trung bình tỷ lệ tạo CS của 1 giống ở 12 công thức môi trờng. TB2: giá trị trung bình tỷ lệ tạo CS của các giống ở 12 công thức môi trờng thuộc cùng một nhóm (thụ phấn tự do, đờng, lai đơn, lai kép, lai ba) TB3: giá trị trung bình 6 tỷ lệ tạo CS của các giống trong cùng một môi trờng nuôi cấy. TB4: giá trị trung bình tỷ lệ tạo CS của các giống ở cùng một nhóm môi trờng (nhóm bổ sung 2,4D+BAP+adenin sulphat; nhóm bổ sung kinetin, -NAA v nhóm bổ sung các axit amin). Kết quả bảng 3.3. cho thấy trên các môi trờng nuôi cấy khác nhau, tỷ lệ tạo CS rất khác nhau. Xét ảnh hởng của các chất điều ho sinh trởng ta thấy: + Đối với các công thức: 1, 2, 3, 4 (nhóm 1), tỷ lệ tạo CS đạt cao nhất l (25,7%) (giá trị TB4). + Đối với các công thức 5, 6, 7, 8 (nhóm 2) tỷ lệ tạo CS đạt trung bình (12,9%) (giá trị TB4). + Trên các môi trờng: 9, 10, 11, 12 (nhóm 3) tỷ lệ tạo CS đạt thấp nhất (1,3%) (giá trị TB4). Nh vậy, các chất điều ho sinh trởng đã tác động mạnh mẽ đến phản ứng tạo CS khi nuôi cấy noãn cha thụ tinh. Xét tác dụng của các thnh phần khoáng trong môi trờng đến phản ứng tạo CS của noãn cha thụ tinh chúng tôi thấy rằng: Trên các môi trờng có cùng thnh phần chất điều ho sinh trởng (nhóm 1) hoặc (nhóm 2) hoặc bổ sung các axit amin (nhóm 3) nhng có thnh phần khoáng khác nhau: MS, B5, N6 v YP thì tỷ lệ tạo CS không có sự khác nhau đáng kể. Xét phản ứng của các giống trên môi trờng nuôi cấy: ở 25 giống đợc nghiên cứu về phản ứng của noãn cha thụ tinh trên các môi trờng nuôi cấy trong ống nghiệm, hầu hết đều tạo CS (100%) tuy nhiên tỷ lệ tạo CS ở các giống, các nhóm giống có sự khác nhau đáng kể. Các giống thuộc nhóm thụ phấn tự do có tỷ lệ tạo CS thấp nhất (7,2%), tỷ lệ CS cao nhất thu đợc ở các giống thuộc nhóm lai đơn (16,5%). Nh vậy, trong cùng điều kiện nuôi cấy nh nhau mức phản ứng tạo CS của các giống khác nhau l khác nhau. Ngoi phản ứng tạo CS, trên các môi trờng l, 2, 3, 4 có thnh phần muối khoáng MS, B5, N6, YP bổ sung: 2mg/l 2,4D, 2 mg/l BAP, 5 mg/l adenin sulphat, các noãn còn tạo mô sẹo. Kết quả đợc trình by ở bảng 3.5. 7 Bảng 3.5. ảnh hởng của môi trờng v giống đến tỷ lệ (%) tạo mô sẹo trong nuôi cấy noãn cha thụ tinh Công thức môi trờng Nhóm giống Giống 1 2 3 4 TB1 TB2 Q2 0,80 0,40 0,00 0,00 0,30 CV1 0,47 0,00 0,23 0,00 0,18 Thụ phấn tự do MSB49 0,25 0,50 0,00 0,50 0,31 Đờng VN3 0,50 0,75 0,25 0,50 0,50 0,50 MX1 1,40 0,60 0,90 0,90 0,80 SC98-5 1,10 0,30 0,50 0,50 0,60 LVN4 0,10 0,10 0,00 0,00 0,05 LVN24 1,20 2,00 1,00 0,60 1,20 LVN25 0,15 0,40 0,10 0,00 0,16 LVN29 0,92 1,78 2,10 1,60 1,60 Lai đơn LVN10 0,00 0,00 0,30 0,05 0,09 0,64 TC5910 0,70 0,20 0,40 0,80 0,53 LVN32 0,50 0,50 1,25 0,50 0,69 TC96-1 0,60 0,40 0,60 0,30 0,48 Lai ba LVN33 1,00 0,50 0,00 0,00 0,38 0,52 DC98-5 0,50 0,50 0,00 0,75 0,44 Lai kép LVN31 1,00 1,00 0,80 1,00 0,95 0,69 TB3 0,66 0,58 0,50 0,54 Ghi chú: TB1: tỷ lệ tạo mô sẹo trung bình của một giống trên 4 công thức môi trờng. TB2: tỷ lệ tạo mô sẹo trung bình của các giống cùng nhóm trên 4 công thức môi trờng. TB3: tỷ lệ tạo mô sẹo của các giống trên cùng một công thức môi trờng. Trong số 25 giống thí nghiệm, 17 giống thuộc cả 5 nhóm giống có phản ứng tạo mô sẹo với tỷ lệ dao động từ 0,18% (giống CV1) đến 1,6% giống LVN29. Tỷ lệ tạo mô sẹo của nhóm giống ngô thụ phấn tự do đạt thấp nhất (0,26%). Nhóm giống ngô lai kép có phản ứng tạo mô sẹo cao nhất (0,69%). Với cùng thnh phần chất điều ho sinh trởng, trên các môi trờng khoáng khác nhau, tỷ lệ tạo mô sẹo cũng không có sự khác nhau đáng kể (0,66; 0,58; 0,5; 0,54%) ứng với các thnh phần khoáng MS, B5, N6, YP. 8 [...]... tục nghiên cứu phơng pháp nuôi cấy khác để tạo dòng ngô đơn bội kép, đó l phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôi 3.2 Tạo hạt đơn bội từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôinuôi l mô của thịt bắp đợc đa vo môi trờng nuôi cấy cùng với noãn m không có sự phân tách Dinh dỡng từ môi trờng sẽ đợc noãn hấp thu thông qua mô nuôi Trong trờng hợp ny tác dụng của các thnh phần môi trờng lên noãn. .. tạo ra từ nuôi cấy noãn trên mô nuôi trong dung dịch có 0, l mg/l GA3 rồi cấy trở lại vo môi trờng MS/2 đã kích thích hạt nảy mầm trong ống nghiệm 5 Đánh giá mức bội thể của 128 cây tái sinh từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh đã xác định đợc có 51 cây nhị bội kép (39,8%), 77 cây đơn bội chiếm u thế (60,2%) 6 Các dòng ngô thu từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh có độ thuần cao v một số tổ hợp lai sử dụng các dòng. .. cha thụ tinh có độ thuần cao v một số tổ hợp lai sử dụng các dòng ngô ny có triển vọng đang đợc khảo nghiệm Đề nghị 1 ứng dụng quy trình nuôi cấy noãn cha thụ tinh tạo dòng ngô đơn bội kép vo công tác chọn tạo giống ngô lai ở Việt Nam 2 Tiếp tục nghiên cứu để nâng cao hơn nữa hiệu quả tạo dòng thuần bằng nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôi 24 ... sinh học của các dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh Các cây thu đợc từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh đợc xác định l thế hệ S1 Thế hệ con ngay sau đó l thế hệ S2 Dòng tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh đợc trồng khảo nghiệm, đánh giá trên đồng ruộng để từ đó phục vụ cho công tác chọn tạo giống ngô lai Thí nghiệm đợc bố trí theo khối ngẫu nhiên 3 lần nhắc lại Kết quả khảo nghiệm 10 dòng lấy ngẫu nhiên... có thể đi đến kết luận rằng: - Phản ứng của noãn ngô cha thụ tinh trong môi trờng nuôi cấy có 3 kiểu phát sinh hình thái: tạo cây trực tiếp, tạo mô sẹo v tạo CS - Kỹ thuật nuôi cấy noãn cha thụ tinhtính phụ thuộc vo giống, nhóm giống - Trên các môi trờng nuôi cấy khác nhau, phản ứng nuôi cấy noãn cha thụ tinh rất khác nhau Môi trờng nuôi cấy cho tỷ lệ tạo CS, mô sẹo v tái sinh cây trực tiếp cao... 3.3 Kiểm tra mức độ bội thể v khảo sát một số đặc tính nông sinh học của cây tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh 3.3.1 Kiểm tra mức bội thể của cây tái sinh từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh Mức bội thể của cây tái sinh từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh đợc xác định bằng phơng pháp tế bo học v bằng máy đo mức bội thể Kết quả kiểm tra mức bội thể của cây tạo ra từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh đợc trình by ở... cho nuôi cấy Kết quả nghiên cứu đợc trình by ở bảng 3.27 Bảng 3.27 Tỷ lệ tạo hạt của dòng thu từ nuôi cấy noãn cha thụ tinh (%) Dòng từ nuôi cấy noãn G1 G2 G3 G4 G5 G6 G7 Tỷ lệ tạo hạt (%) 0,30 0,80 0,70 0,50 0,20 0,80 0,90 Giống cây mẹ Tỷ lệ tạo hạt (%) LVN24 LVN29 LVN29 DC98-2 CV1 MX1 LVN24 1,92 2,18 2,18 1,56 0,92 1,52 1,92 Kết quả thí nghiệm cho thấy tỷ lệ tạo hạt của các dòng thu từ nuôi cấy noãn. .. giống LVN37 (đối chứng) Đây l tổ hợp lai có nhiều đặc điểm tốt: hình thái cây đẹp, năng suất khá, mu hạt đẹp, chống đổ tốt, có thời gian sinh trởng ngắn 95- 105 ngy 3.5 So sánh phơng pháp tạo dòng thuần ở ngô bằng nuôi cấy bao phấn v nuôi cấy noãn cha thụ tinh trên mô nuôi Một số chỉ tiêu cơ bản thể hiện hiệu quả của hai phơng pháp tạo dòng thuần ở ngô bằng nuôi cấy bao phấn v nuôi cấy noãn cha thụ tinh. .. mô nuôi đợc so sánh trên bảng 3.34 22 Tơng tự nh phơng pháp nuôi cấy bao phấn, phơng pháp nuôi cấy noãn cũng có tính phụ thuộc vo giống cao, tỷ lệ tạo phôi, hạt v cây thấp Tuy nhiên phơng pháp ny có một số u điểm l tỷ lệ tự lỡng bội hoá cao hơn, tỷ lệ cây sống sót khi chuyển ra đất cũng cao hơn so với phơng pháp nuôi cấy bao phấn Một u điểm nữa của phơng pháp nuôi cấy noãn cha thụ tinh l quy trình nuôi. .. nuôi cấy đơn giản, dễ thao tác v thực hiện Bảng 3.34 Một số đặc điểm chính của nuôi cấy bao phấn v noãn cha thụ tinh trên mô nuôingô Nuôi cấy noãn cha thụ tinh Đặc điểm so sánh Nuôi cấy bao phấn Tính phụ thuộc vo giống Cao Cao Tỷ lệ tạo phôi, hạt (%) 0-100% 0 3,5% Tỷ lệ tạo cây (%) 5% của tổng số phôi tạo ra 33 % của tổng số hạt tạo ra Tỷ lệ tự lỡng bội hoá

Ngày đăng: 22/04/2013, 11:28

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan