Nghiên cứu phương pháp định lượng nifedipin trong huyết tương chó để đánh giá sinh khả dụng viên nén nifedipin tác dụng kéo dài

41 1.1K 3
Nghiên cứu phương pháp định lượng nifedipin trong huyết tương chó để đánh giá sinh khả dụng viên nén nifedipin tác dụng kéo dài

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC D ược HÀ NỘI - o ó o - NGUYỄN HẢI LINH NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG NIFEDIPIN TRONG HUYẾT TƯƠNG CHÓ ĐE ĐÁNH GIÁ SINH KHẢ DỤNG VIÊN NÉN NIFEDIPIN TÁC DỤNG KÉO DÀI KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP Dược sĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 1997-2002 Giáo viên hướng dẫn : TS Võ Xuân Minh ThS Phạm Thị Minh Huệ Nơi thực : Bộ môn Bào chế - ĐH Dược Trung tâm kiểm nghiệm dược quân đội Thời gian thực : 01/03 đến 25/5/2002 Hà N ội-5/2002 LỜI CẢM ƠN Lời em xin bày tỏ kính trọng lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo, cô giáo: TS: Vỗ Xuân Minh ThS: Phạm Thị Minh Huệ Và thầy cô giáo, cán công nhân viên môn bào chế, môn dược lý, môn dược lâm sàng, phòng thí nghiệm GMP trường Đại học Dược Hà Nội Em xin cảm ơn Labo dược động học, khoa vật lý, ban Giám đốc Trung tâm kiểm nghiệm dược quân đội hết lòng hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện để em thực hoàn thành khoá luận tốt nghiệp Em xin chân thành cảm ơn tất thầy giáo, cô giáo cán trường Đại học Dược Hà Nội tất bạn bè dạy bảo giúp đỡ em suốt năm học vừa qua Hà Nội, ngày 24 tháng 05 năm 2002 Nguyễn Hải Linh CÁC CHỮVIÊT TẮT c Nồng độ DĐH Dược động học HPLC Sắc kí lỏng hiệu cao NIFE Nifedipin RSD Độ lệch chuẩn tương đối SD Độ lệch chuẩn SKD Sinh khả dụng t°c Nhiệt độ TB Trung bình TDKD Tác dụng kéo dài MỤC LỤC ĐẶT VÂN ĐỂ PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 Nifedipin 1.1.1 Công thức cấu tạo tính chất 1.1.2 Dược động học 1.1.3 Tác dụng 1.1.4 Chỉ định 1.1.5 Tác dụng bất lợi 1.1.6 Liều dùng Trang 2 3 1.1.7 Một số chế phẩm nifedipin tác dụng kéo dài thị trường 1.1.8 Các phương pháp định lượng nifedipin 1.2 Sinh khả dụng cách đánh giá 1.2.1 Các khái niệm 1.2.2 Sinh khả dụng viên nén 11 1.2.3 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng 12 PHẦN 2: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 2.1 Nguyên vật liệu phương pháp thực nghiêm 16 2.1.1 Nguyên vật liệu, phương tiện nghiên cứu súc vật thí nghiệmló 2.1.2 Phương pháp thực nghiệm 17 2.2 Kết thực nghiệm 20 2.2.1 Khảo sát số hệ dung môi pha động để định lượng nifedipin huyết tương chó HPLC 20 2.2.2 Xây dựng đường chuẩn nifedipin huyết tương chó 23 2.2.3 Xác định tính xác độ lặp lại phương pháp 24 2.2.4 Xác định hiệu suất chiết nifedipin huyết tương chó 26 2.2.5 Định lượng nifedipin huyết tương chó .27 2.3 Bàn luận 34 PHẦN 3: KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUÂT 3.1 Kết luận 3.2 Đề xuất 35 35 Đ Ặ T V Ấ N ĐỂ Một chế phẩm thuốc bào chế, đặc biệt thuốc tác dụng kéo dài việc so sánh sinh khả dụng in vivo với chế phẩm đối chiếu (đã có uy tín hiệu điều trị) việc làm thực cần thiết để chứng minh tính khả dụng sinh học Hiện nay, xí nghiệp sản xuất dược phẩm trung tâm nghiên cứu dược nước nghiên cứu vấn đề khó khăn trang thiết bị phương pháp nghiên cứu Nifedipin thuốc chẹn kênh calci, dùng để điều trị cao huyết áp đau thắt ngực, bệnh đòi hỏi người bệnh phải sử dụng thuốc thường xuyên, kéo dài Nifedipin có thời gian bán thải ngắn (t1/2 = 2-5 giờ) nên cần bào chế dạng thuốc tác dụng kéo dài Bộ môn bào chế trường Đại học Dược Hà Nội nghiên cứu bào chế viên nén nifedipin tác dụng kéo dài hàm lượng 20 mg Để chế phẩm đến với người dùng đánh giá giải phóng in vitro cần đánh giá sinh khả dụng in vivo thử nghiệm lâm sàng Trong phạm vi khoá luận tốt nghiệp mục tiêu nghiên cứu : > Nghiên cứu, khảo sát điều kiện để định lượng nifedipin huyết tương chó sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) > Xác định nồng độ nifedipin huyết tương chó sau cho uống viên nén nifedipin tác dụng kéo dài viên đối chiếu (Adalat- retard 20mg) từ so sánh sinh khả dụng viên nén nifedipin tác dụng kéo dài với viên Adalat- retard PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 NIFEDIPIN 1.1.1 Công thức cấu tạo tính chất.[17] Nifedipin có công thức cấu tạo sau: H3cooc i>o52 H3COOC CTPT: C17H 18N2O ó TLPT: 346,34 Tên khoa học: 3,5 Pyridine dicarboxylic acid, 1,4- dihydro- 2,6- dimethyl - 4- (2- nitrophenyl) - dimethyl ester (Dimethyl 1,4- dihydro- 2,6 dimethyl- 4(0- nitrophenyl) - 3,5 - pyridine dicarboxylate) Tinh thể bột màu vàng, không tan nước, tan methanol, ethanol, 10 phần aceton, dễ tan cloroform Dưới tác dụng ánh sáng dễ bị biến đổi thành nitrosophenylpyridin Tnc= 171- 175°c 1.1.2 Dược động học[12] Hấp thu: nifedipin hấp thu nhanh qua đường tiêu hoá, nhiên sinh khả dụng thuốc dùng đường uống thấp (SKD 45- 75%) Nồng độ máu đạt tối đa sau uống 30 - 60 phút Thời gian bán thải 2-5 Phân bố: Nifedipin gắn vào huyết tương với tỷ lệ cao (Khoảng 92- 98%) Chuyển hoá: Chuyển hoá hoàn toàn gan thành chất không hoạt tính (Chất chuyển hoá chưa rõ) Thải trừ: Thải trừ qua nước tiểu ( 80% thải trừ qua phân mật 20%) Sau 24 thải trừ hết thuốc khỏi thể 1.1.3 Tác dụng/12] Nifedipin tác nhân chẹn kênh calci, có tác dụng ức chế cách chọn lọc ion calci vào tế bào tim, trơn mạch máu nồng độ thấp Nên gây giãn mạch, chậm nhịp tim, giảm co bóp tim,giảm dẫn truyền nhĩ thất Tác dụng nifedipin giãn động mạch vành mạch?vi (động mạch, tiểu động mạch), thuốc có tác dụng tĩnh mạch 1.1.4 Chỉ địnhl 12] - Dự phòng điều trị đau thắt ngực co thắt mạch vành - Chống loạn nhịp tim - Điều trị cao huyết áp thể vừa nhẹ - Điều trị triệu chứng tượng Raynaud sơ hay thứ phát 1.1.5 Tác dụng bất lợi [12] xảy ra, thường xảy người dùng thuốc, xảy bắt đầu điều trị Có thể gây bốc hoả đỏ bừng mặt, đau đầu, hoa mắt, chóng mặt, buồn nôn, đầy bụng, hạ huyết áp đứng, chậm nhịp tim, bloc nhĩ thất, phù chi dưới, Triệu chứng bất lợi tăng chứng thiếu máu cục đau thắt ngực, tăng nhạy cảm với thuốc chức thận suy giảm 1.1.6 Liều dù ng [1 2],[1] - Liều thường dùng lOmg X lần/ ngày Uống sau bữa ăn tăng dần liều cần - Liều tối đa : 180mg/ ngày- Dùng theo dẫn bác sĩ - Với bệnh nhân cao tuổi dùng kèm thuốc khác, liều bắt đầu 5mg X lần/ ngày - Dạng đặt lưỡi ngậm cho hiệu nhanh sau - 10 phút Uống nhắc lại sau 5-15 phút - Trong tăng huyết áp: Uống 10- 20mg, hiệu sau 15 - 20 phút, uống nhắc lại sau 30 phút - Với viên tác dụng kéo dài 20mg, dùng lviên/lần X lần/ngày - Phối hợp thuốc có lợi điều trị Dùng kèm thuốc chẹn p đau thắt ngực cao huyết áp Dùng kèm nitrat đau thắt ngực Phối hợp với ức chế enzym chuyển anginotensine cao huyết áp 1.1.7 Một s ố ch ế phẩm niýedipỉn tác dụng kéo dài thị trường[12], [17] - Viên nén Adalat - retard 20mg Hãng sản xuất: Bayer-Pharma Thuốc có tác dụng kéo dài 12 - Adalat LA viên nén thẩm thấu 30mg, 60mg, 90mg Thuốc có tác dụng kéo dài 24h Hãng sản xuất Bayer-Pharma - Viên nén Nifehexal Retard Hãng sản xuất: Hexal AG Viên nén dạng bao phim 20 mg tác dụng kéo dài 12giờ - Viên Nifedipin - Rationphar Hãng sản xuất: Lagon - Ration pharma Thuốc có tác dụng kéo dài 12 - Viên nén Nifelate 20 mg Hãng sản xuất Biogalenique Thuốc có tác dụng kéo dài 12h 1.1.8 Các phương pháp định lượng nifedipin a - Định lượng nifedipin nguyên liệu Phương pháp hoá h oci[13],[15]; Hoà tan nifedipin hỗn hợp gồm - methyl - propanol acid percloric (tỷ lệ 1:1 v/v) Định lượng dung dịch amoni ceric Sulfat 0,1M Chỉ thị Ferroin đến màu hồng biến Phương pháp vât lv: T221 sử dụng phương pháp HPLC Nguyên tắc phương pháp: Các chất hỗn hợp tách dựa khả phân bô khác chúng vào hai pha không hòa lẫn vào tiếp xúc, pha tĩnh pha động - Pha động gồm: nước/acetonitril/ methanol với tỷ lệ 50: 25 : 25 v/v - Detector UV: 235 nm - Dung dịch chuẩn dung dịch thử pha cách hoà tan chất chuẩn chất thử methanol, sau pha loãng pha động Tiến hành chạy sắc ký, ghi sắc đồ Tính kết dựa pic chuẩn b - Định lượng nifedipin viên nén + Phương pháp đo quang[16]: - Dung dịch thử: Nghiền viên chứa niíedipin thành bột mịn, hoà tan methanol, lọc lấy dịch sau pha loãng nước cất - Dung dịch chuẩn: Tiến hành song song điều kiện với dung dịch thử Tiến hành đo quang dựa vào mật độ quang chất chuẩn, chất thử ta tính hàm lượng niíedipin viên + Phương pháp HPLC[22]: - Pha động: nước/acetonitril/ methanol với tỷ lệ 50:25:25 v/v, - Detector UV: 235 nm - Dung dịch thử: Nghiền viên chứa niíedipin thành bột mịn, hoà tan methanol, lọc lấy dịch sau pha loãng pha động - Dung dịch chuẩn: Tiến hành song song điều kiện với dung dịch thử, chạy sắc kí thu sắc đồ, dựa vào pic thử, pic chuẩn yếu tố khác tính hàm lượng niíedipin viên c Định lượng niỷedipin huyết tương [14], [18], [19] K* Phương pháp chiết tách hoạt chất từ dịch sinh học: Nguyên tắc: chuyển hoạt chất từ dạng liên kết với protein thành dạng tự tan dung môi hữu sử dụng dung môi hữu thích hợp để chiết tách Dung môi điều kiện chiết xuất: để thu kết định lượng xác đòi hỏi phải có hiệu suất chiết cao Do việc lựa chọn dung môi quan trọng Một số hệ dung môi sử dụng: + Dicloromethan:n-pentan với tỷ lệ30/70 (v/v) + M ethyl-t-butyl ether: iso octan với tỷ lệ 75/25 v/v hệ pha động diện tích pic nồng độ niíedipin có tuyến tính chặt chẽ giới hạn khảo sát Khi sử dụng hệ pha động 1, pic thu không gọn, hệ số đối xứng thường lớn 1,5 phải chuẩn pH Vì có sai sót nhỏ dẫn đến thay đổi thời gian lưu Vậy chọn hệ pha động để sử dụng chạy sắc kí xây dựng đường chuẩn nifedipin pha động định lượng niíedipin huyết tương 2.2.2 Xây dựng đường chuẩn niýedipin huyết tương chó Đường chuẩn niíedipin huyết tương sở để xác định nồng độ niíedipin mẫu huyết tương chó uống viên thử niíedipin TDKD viên đối chiếu Adalat retard + Cân lượng xác 20mg nguyên liệu niíedipin cho vào bình định mức 25ml hoà tan pha động, thêm đủ đến vạch thu dung dịch c Từ dung dịch c dùng pha động để pha dung dịch có nồng độ : 50, 100, 200, 400, 800, 1600 ng/ml Ở dung dịch lấy 200|il cho vào ống nghiêm chứa huyết tương trắng (mỗi ống chứa lm l) để thu nồng độ niíedipin huyết tương 10; 20; 40; 80; 160; 320 ng/ml Tiến hành xử lý mẫu theo sơ đồ Chạy sắc kí, kết thể bảng hình 3: Bảng 3: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ niỷedipin (C) huyết tương c (ng/ml) 10 20 40 80 160 320 { Diện tích pic 423 834 1597 3240 6287 12835 23 Hình 3: Đường chuẩn niíedipin huyết tương 2.2.3 Xác định tính xác độ lặp lại phương pháp a Xác định tính xác phương pháp + Có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến kết chạy sắc kí pha động pha sử đụng ngày, dung dịch chuẩn niíedipin pha sử dụng kết thu đựoc có sai số + Tiến hành khảo sát ngày khác nhau: Pha dung dịch niíedipin với nồng độ 20, 40, 80, 160, 320ng/ml pha động Chạy sắc kí, kết biểu diễn bảng bảng 24 Bảng 4: Các đường chuẩn ni/edipin pha động chạy khác ngày < N : (ng/ml) Phương trình hồi quy 20 40 80 160 320 Diện tích pic ngày 574 1123 2129 4232 8397 17431 Y=54,178x 0,9996 30,398 Diện tích pic ngày 538 1147 2203 4316 8510 17652 Y=51,013x + 0,9998 66,657 Diện tích pic ngày 497 1103 2091 4043 8197 16421 Y=51,225x + 0,9999 11,562 Diện tíc h s pic/ngày \ 10 R2 Nhân x ét: Các ngày khác giới hạn nồng độ khảo sát cho kết tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ niíedipin pha động (R2« l) , phương trình hồi qui có hệ số tương đối gần nhau, chứng tỏ phương pháp có tính xác cao b Xác định độ lặp lại phương pháp: Chuẩn bị mẫu với nồng độ niíedipin 160 ng/ml huyết tương trắng, xử lý theo sơ đồ 2, tiêm lần vào cột tiến hành chạy sắc ký Kết thu thể bảng Bảng 5: Độ lặp lại phương pháp Lần thêm mẫu Diện tích pic Kết 6287 TB= 6251,2 6135 6409 5987 6438 25 SD=190 RSD%=3,04% Nhân xét: Với RSD% = 3,04% cho thấy phương pháp có độ lặp lại cao 2.2.4 Xác định hiệu suất chiết nỉýedipỉn huyết tương chó + Chuẩn bị mẫu huyết tương với nồng độ niíedipin không đổi 160ng/ml, xử lý mẫu theo sơ đồ nêu Sau chạy sắc kí Làm ba lần kết diện tích pic thu so sánh với diện tích pic nồng độ pha động Từ ta xác định hiệu suất chiết Bảng 6: Hiệu suất chiết nỉỷedipin Diện tích Diện tích Hiệu suất pic/huyết tương pic/pha động chiết 7859 8523 7786 8167 7491 8209 TB 7712 ± 194,8 8299,7 ± 195,5 Lần tiêm mẫu H%=92,9% Chú ý: sơ đồ lượng dung môi đem chiết 5ml thu lại 4ml để bốc lấy cắn, diện tích pic huyết tương (có so sánh với diện tích pic pha động) nhân với hệ số 5/4 Kết luân: Với tuyến tính chặt chẽ diện tích pic nồng độ niíedipin huyết tương (R2 * 1) khoảng nồng độ khảo sát, độ lệch chuẩn tương đối RSD% = 3,04% Hiệu suất chiết cao (92,9%) sai số ngày không đáng kể cho thấy 26 phương pháp áp dụng để định lượng niíedipin huyết tương chó 2.2.5 Định lượng niýedipỉn huyết tương chó: Đối với ngày khác trước lúc chạy mẫu huyết tương, tiến hành chạy mẫu niíedipin pha động để kiểm tra tính ổn định phương pháp Mẫu huyết tương sau bảo quản -20°c, để nhiệt độ phòng đến trở trạng thái lỏng bình thường Sau xử lý mẫu theo phương pháp 2.1.2 d Các mẫu huyết tương chó uống viên thử viên đối chiếu thời điểm lấy mẫu tiến hành chạy sắc kí song song Từ diện tích pic thu sau chạy sắc kí mẫu, dựa vào phương trình đường chuẩn ta tính nồng độ thuốc máu chó theo thời gian uống thử nifedipin TDKD viên Adalat retard Pic niíedipin thu gọn, tách tốt có hệ số đối xứng » 0,8 1,2, thời gian lưu khoảng 5,9 phút (Hình 4, 6) hO «^1 Hình 4: sắc đồ niíedipin huyết tương 27 HUCh'’Ẽ2H2 Hình 5: sắc đồ nifedipin huyết tương chó uống viên thử sau HU0NG23#0 Hình : sắc đồ nifedipin huyết tương chó uống viên Adalat sau 28 * Ảnh hưởng thời gian chạy mẫu: + Với thời gian chạy mẫu ngắn ([...]... gian chạy mẫu phải thích hợp để loại tạp tránh sai số khi định lượng mẫu tiếp theo d Phương pháp định lượng nỉfedipin trong huyết tương Định lượng niíedipin trong huyết tương bằng phương pháp HPLC vói hệ sắc kí thu được sau khi khảo sát ở mục 2.1.2 b Mẫu huyết tương của chó đã uống thuốc được định lượng sau khi xử lý theo sơ đồ 2 (không cho thêm niíedipin) Tiến hành định lượng song song từng mẫu thử... chúng tôi chọn hệ pha động 2 để sử dụng chạy sắc kí khi xây dựng đường chuẩn nifedipin trong pha động và định lượng niíedipin trong huyết tương 2.2.2 Xây dựng đường chuẩn niýedipin trong huyết tương chó Đường chuẩn niíedipin trong huyết tương là cơ sở để xác định nồng độ niíedipin trong các mẫu huyết tương chó đã uống viên thử niíedipin TDKD và viên đối chiếu Adalat retard + Cân lượng chính xác 20mg nguyên... phase extraction) Trong đó hay sử dụng là: Dicloromethan:n-pentan với tỷ lệ 30/70 v/v M ethyl-t-butyl ether:iso octan với tỷ lệ 75/25 Phương pháp định lượng: Các phương pháp định lượng niíedipin trong huyết tương bao gồm: phương pháp sắc kí khí, sắc kí lỏng hiệu năng cao * Phương pháp sắc kí khí để định lượng niíedipin trong huyết tương gặp một số khó khăn: Nhiệt độ cao sẽ ảnh hưởng đến nifedipin, độ lặp... thấp Kết quả của phương pháp này sẽ bị giảm khi xuất hiện một lượng đáng kể các chất có nguồn gốc từ pyridin trong mẫu sinh học * Phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao để định lượng niíedipin trong huyết tương đã được nghiên cứu nhiều Nó có khả năng định tính, định lượng với hàm lượng niíedipin hàng nanogam trong lm l huyết tương Với sắc kí lỏng " hiệu năng cao thì việc lựa chọn pha động để chạy sắc kí... gian xác định, người ta lấy mẫu máu (máu, nước tiểu), đem chiết lấy hoạt chất và xác định hàm lượng thuốc (có thể ở dạng chuyển hoá hoặc chưa chuyển hoá) Để xác định thuốc trong dịch sinh học, có nhiều phương pháp khác nhau nhưng hay được sử dụng nhất là phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) vì khả năng tách cao, định tính và định lượng đồng thời hoạt chất ở hàm lượng rất nhỏ Việc nghiên cứu SKD... trong pha động) được nhân với hệ số 5/4 Kết luân: Với sự tuyến tính chặt chẽ giữa diện tích pic và nồng độ niíedipin trong huyết tương (R2 * 1) ở khoảng nồng độ khảo sát, độ lệch chuẩn tương đối RSD% = 3,04% Hiệu suất chiết cao (92,9%) và sự sai số giữa các ngày là không đáng kể cho thấy 26 phương pháp này áp dụng được để định lượng niíedipin trong huyết tương chó 2.2.5 Định lượng niýedipỉn trong huyết. .. niýedipỉn trong huyết tương chó: Đối với các ngày khác nhau trước lúc chạy mẫu huyết tương, chúng tôi đều tiến hành chạy mẫu niíedipin trong pha động để kiểm tra tính ổn định của phương pháp Mẫu huyết tương sau khi bảo quản ở -20°c, được để ở nhiệt độ phòng đến khi trở về trạng thái lỏng bình thường Sau đó xử lý mẫu theo phương pháp 2.1.2 d Các mẫu huyết tương chó uống viên thử và viên đối chiếu ở cùng... xuất, bảo quản, lưu thông, cách sử dụng thuốc của người bệnh, đường dùng Theo J.G.Wagner, khi thuốc được đưa vào cơ thể quá trình giải phóng dược chất từ viên nén xảy ra theo sơ đồ sau: 11 Sơ đ ồ l: Quá trình giải phóng hoạt chất của viên nén theo John G.Wagner 1.2.3 Phương pháp đánh giá sinh khả dụng [8], [9], [22] Hiện nay có nhiều tiêu chuẩn để đánh giá sinh khả dụng như thử SKD in vitro, chỉ tiêu... ảnh hưởng đến thời gian lưu, khả năng tách và diện tích pic Một số pha động được sử dụng trong định lượng niíedipin + Acetonitril /đệm acetat pH=4 + M ethanol/ nước/acid acetic (thêm triethylamin) + M ethanol/ đệm phosphat (pH=6,l hoặc 6,7) + M ethanol/ nước + M ethanol/ dung dịch amoni/đệm acetat 7 * Một số phương pháp định lượng nifedipin trong huyết tương bằng HPLC Phương pháp 1: - Pha động: Acetonitril... n t(h) Hình 8: Đồ thị biểu diễn nồng độ nifedipin trong huyết tương chó uống viên Adalat retard Nhân xét: Nồng độ thuốc trong máu của các con chó thử nghiệm khác nhau nhiều chứng tỏ sự hấp thu thuốc ở các cá thể là rất khác nhau khi uống cả viên thử và viên đối chiếu Dựa vào nồng độ nifedipin trong huyết tương các thông số dược động học (DĐH) của viên thử và viên đối chiếu được tính Kết quả thể hiện ... định nồng độ nifedipin huyết tương chó sau cho uống viên nén nifedipin tác dụng kéo dài viên đối chiếu (Adalat- retard 20mg) từ so sánh sinh khả dụng viên nén nifedipin tác dụng kéo dài với viên. .. dụng định lượng niíedipin huyết tương + Xây dựng phương pháp lấy mẫu, xử lý mẫu, phương pháp xây dựng đường chuẩn phương pháp định lượng niíedipin huyết tương + Định lượng niíedipin huyết tương chó. .. lượng mẫu d Phương pháp định lượng nỉfedipin huyết tương Định lượng niíedipin huyết tương phương pháp HPLC vói hệ sắc kí thu sau khảo sát mục 2.1.2 b Mẫu huyết tương chó uống thuốc định lượng sau

Ngày đăng: 06/11/2015, 11:23

Từ khóa liên quan

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan