BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH VI SINH VẬT HỌC ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM MEN TRÊN BÃ BIA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS BÙI THỊ MINH DIỆU NGUYỄN TRUNG DUẨN MSSV: 3103949 LỚP: VSV K36 Cần Thơ, Tháng 11/2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC - - LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH VI SINH VẬT HỌC ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY ĐẾN SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM MEN TRÊN BÃ BIA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN TS BÙI THỊ MINH DIỆU NGUYỄN TRUNG DUẨN MSSV: 3103949 LỚP: VSV K36 Cần Thơ, Tháng 11/2013 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (ký tên) Bùi Thị Minh Diệu SINH VIÊN THỰC HIỆN (ký tên) Nguyễn Trung Duẩn DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………… Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG (ký tên) LỜI CẢM ƠN -* - Qua thời gian thực luận văn giúp em rèn luyện khả làm việc độc lập, học cách tiếp cận với vấn đề Để hoàn thành đề tài có đóng góp không nhỏ Quý thầy cô, bạn bè người thân Qua em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cô Bùi Thị Minh Diệu tận tình hướng dẫn, cung cấp tài liệu truyền đạt nhiều kiến thức kinh nghiệm quý báu giúp em hoàn thành luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cảm ơn Quý thầy cô Viện Nghiên cứu Phát triển Công nghệ Sinh học truyền đạt kiến thức suốt thời gian em học tập trường Xin cảm ơn anh chị, bạn phòng thí nghiệm Sinh học Phân tử Thực vật giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho em trình thực đề tài Cảm ơn tập thể lớp Vi sinh vật học khóa 36 nhiệt tình giúp đỡ, chia sẻ thông tin tài liệu trình học tập Kính chúc Quý thầy cô, anh chị bạn dồi sức khỏe thành công sống Ngày 20 tháng 11 năm 2013 Sinh viên thực Nguyễn Trung Duẩn Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ TÓM LƯỢC Ở Việt Nam, nhà máy sản xuất bia chưa ứng dụng bã bia thải cách có hiệu mà dừng lại việc dùng làm thức ăn thô cho gia súc làm phân bón Bã bia chứa nhiều thành phần dinh dưỡng (tinh bột, đường, acid amin, vitamin, canxi, photpho, kali, sắt, kẽm,…) thích hợp cho phát triển vi sinh vật có nấm men Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật xử lý bã bia sản xuất sản phẩm từ bã bia mang lại hiệu kinh tế cao nhờ tận dụng phụ phế phẩm để tạo sản phẩm có giá trị dinh dưỡng Do đó, đề tài “Ảnh hưởng yếu tố môi trường nuôi cấy đến phát triển nấm men bã bia” thực nhằm bước đầu nghiên cứu sản xuất sinh khối nấm men từ bã bia Các thí nghiệm tiến hành để khảo sát ảnh hưởng yếu tố môi trường nuôi cấy (độ pha loãng bã bia, nồng độ rỉ đường bổ sung, pH, mật số nấm men ban đầu) lên trình tăng sinh khối nấm men bã bia Mật số nấm men xác định phương pháp đếm trực tiếp kính hiển vi buồng đếm hồng cầu Kết thí nghiệm cho thấy, hàm lượng bã bia môi trường thích hợp cho phát triển nấm men 30 g/l Sinh khối nấm men tăng rõ rệt khác biệt có ý nghĩa thống kê bổ sung 3% rỉ đường Mật số nấm men ban đầu thích hợp 104 tế bào/ml đạt 108 tế bào/ml sau 48 nuôi cấy Nghiên cứu cho thấy sản xuất sinh khối nấm men Saccharomyces cerevisiae từ nguồn dinh dưỡng lại bã bia, mở hướng sản xuất thức ăn chăn nuôi giàu dinh dưỡng từ nguồn phụ phẩm Từ khóa: bã bia, nấm men, Saccharomyces cerevisiae, sinh khối Chuyên ngành Vi sinh vật học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ MỤC LỤC Trang PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM ƠN TÓM LƯỢC i MỤC LỤC ii DANH SÁCH BẢNG iv DANH SÁCH HÌNH v TỪ VIẾT TẮT vi CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan nấm men Saccharomyces cerevisiae 2.1.1 Phân loại 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Thành phần cấu tạo 2.1.4 Sinh trưởng sinh sản 2.1.5 Giá trị dinh dưỡng nấm men 2.1.6 Quá trình trao đổi chất nấm men 2.3 Bã bia .9 2.3.1 Tổng quan bã bia 10 2.3.2 Thành phần hóa học 10 2.4 Rỉ đường 11 Chuyên ngành Vi sinh vật học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ CHƯƠNG PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 3.1 Phương tiện nghiên cứu 14 3.1.1 Địa điểm – Thời gian nghiên cứu 14 3.1.2 Dụng cụ 14 3.1.3 Hóa chất 14 3.1.4 Vật liệu nghiên cứu 15 3.2 Phương pháp nghiên cứu 15 3.2.1 Quy trình chung cho thí nghiệm 15 3.2.2 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng độ pha loãng bã bia đến khả tạo sinh khối nấm men 16 3.2.3 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng nồng độ rỉ đường bổ sung đến khả tạo sinh khối nấm men 17 3.2.4 Thí nghiệm 3: Ảnh hưởng pH đến khả tạo sinh khối nấm men 17 3.2.5 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng mật số nấm men giống đến khả tạo sinh khối nấm men theo thời gian 18 3.3 Phương pháp xử lý số liệu 18 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 4.1 Ảnh hưởng độ pha loãng bã bia đến khả tạo sinh khối nấm men 19 4.2 Ảnh hưởng nồng độ rỉ đường đến khả tạo sinh khối nấm men 21 4.3 Ảnh hưởng pH đến khả tạo sinh khối nấm men 23 4.4 Ảnh hưởng mật số nấm men giống đến khả tạo sinh khối nấm men theo thời gian 25 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO 28 PHỤ LỤC Phụ lục 1: Các hình ảnh Phụ lục Kết Phụ lục Kết thống kê Chuyên ngành Vi sinh vật học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Trang Bảng Thành phần vách tế bào nấm men Saccharomyces cerevisise Bảng Hàm lượng amino acid, vitamin tế bào nấm men Saccharomyces cerevisise Bảng Thành phần bã malt Bảng Thành phần trung bình tro 10 Bảng Thành phần hóa học mầm malt 10 Bảng Giá trị thức ăn gia súc mầm malt (trong 100 kg mầm malt) 10 Bảng Thành phần dinh dưỡng rỉ đường mía 11 Bảng Kết đếm mật số thí nghiệm PL2 Bảng Kết đếm mật số thí nghiệm PL2 Bảng 10 Kết đếm mật số thí nghiệm PL2 Bảng 11 Kết đếm mật số thí nghiệm PL2 Bảng 12 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch độ pha loãng bã bia khác phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) .PL3 Bảng 13 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch nghiệm thức phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) .PL3 Bảng 14 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch pH khác phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) PL3 Bảng 15 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch nghiệm thức mật số giống khác phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) .PL3 Chuyên ngành Vi sinh vật học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Trang Hình Hình thái nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình Cấu tạo nấm men Saccharomyces cerevisiae Hình Đường cong sinh trưởng quần thể nấm men môi trường nuôi cấy Hình Quy trình thực thí nghiệm 15 Hình Ảnh hưởng độ pha loãng bã bia đến khả tạo sinh khối nấm men .19 Hình Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch độ pha loãng bã bia khác sau ngày nuôi cấy 20 Hình Ảnh hưởng nồng độ rỉ đường đến khả tạo sinh khối nấm men 21 Hình Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch nồng độ rỉ đường bổ sung khác sau ngày nuôi cấy 22 Hình Ảnh hưởng pH đến khả tạo sinh khối nấm men 23 Hình 10 Mật số nấm men mức độ pH khác sau ngày nuôi cấy 24 Hình 11 Ảnh hưởng mật số tế bào men giống đến khả tạo sinh khối nấm men theo thời gian 25 Hình 12 Hình ảnh thiết bị sử dụng phòng thí nghiệm PL1 Hình 13 Bình nấm men giống PL1 Hình 14 Khuẩn lạc nấm men Saccharomyces cerevisiae PL1 Hình 15 Tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae kính hiển vi PL1 Hình 16 Tế bào nấm men Saccharomyces cerevisiae môi trường bã bia thời điểm nuôi cấy PL1 Chuyên ngành Vi sinh vật học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ TỪ VIẾT TẮT DNA Deoxyribo Nucleic Acid YEPD Yeast Extract Peptone Dextrose Chuyên ngành Vi sinh vật học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ Phụ lục Kết Bảng Kết đếm mật số thí nghiệm Ô1 10 13 16 19 10 28 12 14 3 7 16 10 10 11 11 18 26 10 Số tế bào đếm Ô2 Ô3 11 15 21 24 10 15 22 15 16 23 21 18 17 13 14 21 18 10 14 6 8 5 6 12 13 4 11 14 7 9 4 8 3 11 11 14 14 15 17 13 11 Chuyên ngành Vi sinh vật học Ô4 17 19 12 17 19 23 29 9 8 6 14 13 12 5 15 10 19 14 19 13 Nghiệm thức 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Thời gian nuôi cấy(giờ) 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 48 48 48 48 48 15 48 48 48 48 48 Log mật số tế bào 7,52 7,68 7,52 7,66 7,63 7,75 7,46 7,6 7,58 7,19 7,07 7,21 7,12 7,16 7,18 7,18 7,24 7,21 7,27 7,23 7,4 6,75 6,97 6,88 7,16 7,12 7,18 7,34 7,36 7,23 7,29 7,38 7,31 7,07 6,75 7,18 7,12 6,88 7,31 7,38 7,18 7,19 7,51 7,46 7,65 7,49 7,39 Mật số tế bào (tb/ml) 3,31E+07 4,81E+07 3,31E+07 4,56E+07 4,25E+07 5,63E+07 2,88E+07 4,00E+07 3,81E+07 1,56E+07 1,19E+07 1,63E+07 1,31E+08 1,44E+08 1,50E+08 1,50E+08 1,75E+08 1,63E+08 1,88E+08 1,69E+08 2,50E+08 5,63E+07 9,38E+07 7,50E+07 1,44E+08 1,31E+08 1,50E+08 2,19E+08 2,31E+08 1,69E+08 1,94E+08 2,38E+08 2,06E+08 1,19E+08 5,63E+07 1,50E+08 1,31E+08 7,50E+07 2,06E+08 2,38E+08 1,50E+08 1,56E+08 3,25E+08 2,88E+08 4,50E+08 3,13E+08 2,44E+08 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 10 16 18 17 11 10 11 12 23 11 6 12 17 13 12 11 15 14 13 12 14 13 5 14 13 18 19 22 21 10 12 10 21 21 8 20 10 14 26 16 17 14 16 Trường ĐH Cần Thơ 16 17 11 13 12 4 18 10 17 27 13 15 15 1 2 3 4 1 2 3 4 48 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 7,45 7,19 7,14 7,33 7,44 7,41 7,57 7,59 7,49 7,3 7,45 7,43 7,12 7,05 7,19 7,6 7,38 7,53 7,73 7,54 7,67 7,42 7,39 7,51 2,81E+08 1,00E+08 1,56E+08 1,38E+08 2,13E+08 2,75E+08 2,56E+08 3,75E+08 3,88E+08 3,06E+08 2,00E+08 2,81E+08 2,69E+08 1,31E+08 1,13E+08 1,56E+08 3,94E+08 2,38E+08 3,38E+08 5,31E+08 3,50E+08 4,63E+08 2,63E+08 2,44E+08 3,25E+08 Nghiệm thức 1 2 3 4 1 2 3 Thời gian nuôi cấy(giờ) 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 Log mật số tế bào 7,58 7,45 7,52 7,71 7,82 7,77 7,85 7,92 7,84 7,87 7,91 7,89 7,57 7,8 7,7 7,91 7,97 8,03 8,05 7,91 8,1 Mật số tế bào (tb/ml) 3,81E+07 2,81E+07 3,31E+07 5,19E+07 6,56E+07 5,94E+07 7,00E+07 8,31E+07 6,88E+07 7,38E+07 8,13E+07 7,69E+07 3,75E+07 6,25E+07 5,00E+07 8,13E+07 1,00E+08 9,38E+07 1,06E+08 1,13E+08 8,13E+07 1,25E+08 Bảng Kết đếm mật số thí nghiệm Ô1 15 11 12 20 28 23 28 31 35 27 34 31 3 6 Số tế bào đếm Ô2 Ô3 17 14 16 10 15 13 21 18 26 24 19 25 31 30 27 36 23 30 35 26 29 36 27 20 1 4 3 Chuyên ngành Vi sinh vật học Ô4 15 13 24 27 28 23 39 22 30 31 45 3 5 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 5 8 15 11 11 14 7 13 16 15 17 16 13 15 21 18 14 11 12 18 21 19 25 26 21 5 5 8 10 11 12 11 15 10 12 11 15 14 11 12 14 16 13 14 10 15 23 22 19 20 18 Chuyên ngành Vi sinh vật học 2 7 9 10 8 5 14 12 16 13 11 11 13 11 16 17 17 14 13 11 13 18 16 18 18 14 18 15 Trường ĐH Cần Thơ 12 11 13 13 8 10 18 16 18 10 16 12 15 16 19 23 12 16 16 20 17 10 14 23 24 24 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 24 24 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 8,16 8,23 7,84 7,88 8,1 7,94 8,12 8,23 8,23 8,31 8,19 8,34 8,18 8,38 8,14 8,16 8,31 8,24 8,26 8,14 8,48 8,41 8,33 8,43 8,51 8,5 8,31 8,24 8,38 8,53 8,4 8,43 8,57 8,49 8,54 8,57 8,65 8,65 8,4 8,46 8,39 8,49 8,38 8,61 8,57 8,65 8,66 8,7 8,74 8,69 1,44E+08 1,69E+08 6,88E+07 7,50E+07 1,25E+08 8,75E+07 1,31E+08 1,69E+08 1,69E+08 2,06E+08 1,56E+08 2,19E+08 1,50E+08 2,38E+08 1,38E+08 1,44E+08 2,06E+08 1,75E+08 1,81E+08 1,38E+08 3,00E+08 2,56E+08 2,13E+08 2,69E+08 3,25E+08 3,19E+08 2,06E+08 1,75E+08 2,38E+08 3,38E+08 2,50E+08 2,69E+08 3,69E+08 3,13E+08 3,44E+08 3,75E+08 4,44E+08 4,44E+08 2,50E+08 2,88E+08 2,44E+08 3,13E+08 2,38E+08 4,06E+08 3,75E+08 4,50E+08 4,56E+08 5,06E+08 5,50E+08 4,88E+08 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ Bảng 10 Kết đếm mật số thí nghiệm Ô1 10 28 22 25 14 14 11 13 14 15 23 18 22 23 35 26 14 15 26 17 16 21 10 11 4 13 21 26 10 Số tế bào đếm Ô2 Ô3 11 8 13 11 21 18 19 15 21 16 17 13 19 20 16 12 15 16 14 10 12 15 13 21 17 14 16 34 21 24 32 29 22 11 25 18 19 24 17 10 15 13 18 16 19 3 7 4 3 3 3 11 14 12 14 25 16 13 11 12 Chuyên ngành Vi sinh vật học Ô4 10 10 23 29 14 15 12 18 11 13 11 13 19 18 27 14 21 27 14 11 23 5 12 6 5 19 20 14 10 Nghiệm thức 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Thời gian nuôi cấy(giờ) 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 Log mật số tế bào 7,29 7,23 7,24 7,26 7,33 7,41 7,75 7,73 7,68 7,57 7,61 7,55 7,51 7,46 7,49 7,59 7,63 7,65 7,78 7,87 7,75 7,65 7,69 7,7 7,48 7,56 7,69 7,84 7,88 7,97 8,03 8,38 8,31 8,07 7,97 7,97 7,8 7,97 7,91 8,18 8,03 7,91 8,55 8,62 8,7 8,34 8,33 8,34 Mật số tế bào (tb/ml) 1,94E+07 1,69E+07 1,75E+07 1,81E+07 2,13E+07 2,56E+07 5,63E+07 5,31E+07 4,75E+07 3,69E+07 4,06E+07 3,56E+07 3,25E+07 2,88E+07 3,13E+07 3,88E+07 4,31E+07 4,44E+07 6,00E+07 7,38E+07 5,69E+07 4,44E+07 4,94E+07 5,06E+07 3,00E+07 3,63E+07 4,94E+07 6,88E+07 7,50E+07 9,38E+07 1,06E+08 2,38E+08 2,06E+08 1,19E+08 9,38E+07 9,38E+07 6,25E+07 9,38E+07 8,13E+07 1,50E+08 1,06E+08 8,13E+07 3,56E+08 4,19E+08 5,06E+08 2,19E+08 2,13E+08 2,19E+08 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 23 16 23 11 10 12 23 11 10 12 12 25 23 20 12 14 13 7 14 19 23 21 10 Chuyên ngành Vi sinh vật học 11 10 21 18 16 9 11 10 26 16 19 14 16 Trường ĐH Cần Thơ 16 18 22 25 13 12 10 17 20 27 17 15 15 1 2 3 4 1 2 3 4 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 8,19 8,23 8,14 8,27 8,45 8,03 8,74 8,69 8,72 8,35 8,45 8,43 8,07 8,21 8,19 8,34 8,3 8,45 8,73 8,64 8,68 8,49 8,39 8,51 1,56E+08 1,69E+08 1,38E+08 1,88E+08 2,81E+08 1,06E+08 5,44E+08 4,94E+08 5,25E+08 2,25E+08 2,81E+08 2,69E+08 1,19E+08 1,63E+08 1,56E+08 2,19E+08 2,00E+08 2,81E+08 5,31E+08 4,38E+08 4,75E+08 3,13E+08 2,44E+08 3,25E+08 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ Bảng 11 Kết đếm mật số thí nghiệm Ô1 17 15 15 10 17 19 14 11 14 12 27 25 27 46 51 43 50 46 33 12 11 15 17 19 18 7 15 11 18 18 11 12 20 Số tế bào đếm Ô2 Ô3 3 11 15 16 13 17 19 21 15 12 11 16 24 15 17 23 15 21 18 17 10 19 31 36 28 31 24 30 62 65 54 47 60 53 35 46 57 43 54 45 6 11 10 17 18 13 15 21 12 13 9 6 5 13 10 11 17 25 12 15 13 17 19 15 16 22 14 18 Chuyên ngành Vi sinh vật học Ô4 13 14 22 14 18 21 18 17 14 15 29 35 23 54 40 39 51 38 42 13 12 16 20 10 11 23 21 13 17 13 Nghiệm thức 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 Thời gian nuôi cấy(giờ) 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 12 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 24 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 36 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 48 Log mật số tế bào 6,97 7,03 6,75 7,54 7,52 7,44 7,68 7,5 7,59 7,69 7,65 7,49 7,57 7,46 7,51 7,89 7,87 7,81 8,15 8,08 8,09 8,06 8,06 8,04 8,1 7,97 7,94 8,23 8,23 8,23 8,48 8,39 8,54 8,49 8,63 8,57 8,31 8,26 8,21 8,31 8,35 8,41 8,68 8,62 8,55 8,56 8,62 8,61 Mật số tế bào (tb/ml) 9,38E+06 1,06E+07 5,63E+06 3,50E+07 3,31E+07 2,75E+07 4,81E+07 3,19E+07 3,88E+07 4,94E+07 4,50E+07 3,13E+07 3,75E+07 2,88E+07 3,25E+07 7,69E+07 7,44E+07 6,50E+07 1,42E+08 1,20E+08 1,22E+08 1,14E+08 1,15E+08 1,09E+08 1,25E+08 9,38E+07 8,75E+07 1,69E+08 1,69E+08 1,69E+08 3,00E+08 2,44E+08 3,44E+08 3,06E+08 4,25E+08 3,75E+08 2,06E+08 1,81E+08 1,63E+08 2,06E+08 2,25E+08 2,56E+08 4,75E+08 4,13E+08 3,56E+08 3,63E+08 4,19E+08 4,06E+08 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 19 11 13 21 19 24 23 21 12 17 15 15 13 17 13 13 14 17 24 26 15 16 12 15 10 16 25 15 17 16 18 16 8 16 22 16 14 16 15 22 21 20 14 16 13 19 21 16 14 18 25 26 20 16 15 17 19 14 17 14 23 26 19 14 15 11 Trường ĐH Cần Thơ 17 12 22 14 26 15 12 23 11 21 15 16 10 11 15 15 18 23 17 13 1 2 3 4 1 2 3 4 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 60 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 72 8,6 8,51 8,56 8,72 8,54 8,45 8,72 8,7 8,67 8,47 8,6 8,55 8,67 8,6 8,54 8,52 8,54 8,61 8,68 8,74 8,71 8,53 8,5 8,44 4,00E+08 3,25E+08 3,63E+08 5,25E+08 3,44E+08 2,81E+08 5,25E+08 5,06E+08 4,69E+08 2,94E+08 4,00E+08 3,56E+08 4,69E+08 3,94E+08 3,50E+08 3,31E+08 3,50E+08 4,06E+08 4,75E+08 5,50E+08 5,13E+08 3,38E+08 3,19E+08 2,75E+08 Phụ lục Kết thống kê Phụ lục 3.1 Kết phân tích thống kê thí nghiệm a Kết phân tích thống kê 12 One-way ANOVA: 12log versus nt Source nt Error Total DF 11 SS 0,42677 0,05313 0,47990 S = 0,08150 MS 0,14226 0,00664 R-Sq = 88,93% F 21,42 P 0,000 R-Sq(adj) = 84,78% Grouping Information Using Fisher Method nt N 3 3 Mean 7,68000 7,57333 7,54667 7,18000 Grouping A A A B b Kết phân tích thống kê 24 One-way ANOVA: 24log versus nt Source nt Error Total DF 11 S = 0,09092 SS 0,31356 0,06613 0,37969 MS 0,10452 0,00827 R-Sq = 82,58% F 12,64 P 0,002 R-Sq(adj) = 76,05% Grouping Information Using Fisher Method Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 nt N 3 3 Mean 8,30333 8,21000 8,15333 7,87000 Trường ĐH Cần Thơ Grouping A A A B c Kết phân tích thống kê 36 One-way ANOVA: 36log versus nt Source nt Error Total DF 11 SS 0,21257 0,01031 0,22287 S = 0,03589 MS 0,07086 0,00129 R-Sq = 95,38% F 55,01 P 0,000 R-Sq(adj) = 93,64% Grouping Information Using Fisher Method nt N 3 3 Mean 8,33506 8,31447 8,15473 8,00637 Grouping A A B C d Kết phân tích thống kê 48 One-way ANOVA: 48log versus nt Source nt Error Total DF 11 SS 0,35060 0,02667 0,37727 S = 0,05774 MS 0,11687 0,00333 R-Sq = 92,93% F 35,06 P 0,000 R-Sq(adj) = 90,28% Grouping Information Using Fisher Method nt N 3 3 Mean 8,54333 8,44000 8,25000 8,10000 Grouping A A B C e Kết phân tích thống kê 60 One-way ANOVA: 60log versus nt Source nt Error Total DF 11 SS 0,30580 0,00849 0,31429 S = 0,03258 MS 0,10193 0,00106 R-Sq = 97,30% F 96,00 P 0,000 R-Sq(adj) = 96,28% Grouping Information Using Fisher Method nt N 3 3 Mean 8,55586 8,39771 8,39625 8,11308 Grouping A B B C Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ f Kết phân tích thống kê 72 One-way ANOVA: 72log versus nt Source nt Error Total DF 11 SS 0,43583 0,01406 0,44989 S = 0,04192 MS 0,14528 0,00176 R-Sq = 96,88% F 82,69 P 0,000 R-Sq(adj) = 95,70% Grouping Information Using Fisher Method nt N 3 3 Mean 8,64583 8,50413 8,43344 8,12467 Grouping A B B C Phụ lục 3.2 Kết phân tích thống kê thí nghiệm a Kết phân tích thống kê 12 One-way ANOVA: 12H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,27118 0,01877 0,28995 S = 0,04843 MS 0,09039 0,00235 R-Sq = 93,53% F 38,53 P 0,000 R-Sq(adj) = 91,10% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 7,90019 7,86737 7,77199 7,51682 Grouping A A B C b Kết phân tích thống kê 24 One-way ANOVA: 24H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,34301 0,04889 0,39191 S = 0,07818 MS 0,11434 0,00611 R-Sq = 87,52% F 18,71 P 0,001 R-Sq(adj) = 82,85% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,16059 7,99577 7,96060 7,68963 Grouping A B B C c Kết phân tích thống kê 36 One-way ANOVA: 36H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,2374 0,1112 0,3486 MS 0,0791 0,0139 Chuyên ngành Vi sinh vật học F 5,69 P 0,022 Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ S = 0,1179 R-Sq = 68,10% R-Sq(adj) = 56,14% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,2972 8,2452 8,0958 7,9364 Grouping A A A B B d Kết phân tích thống kê 48 One-way ANOVA: 48H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,17426 0,04255 0,21681 MS 0,05809 0,00532 F 10,92 P 0,003 S = 0,07293 R-Sq = 80,37% R-Sq(adj) = 73,01% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,48156 8,40438 8,21321 8,20343 Grouping A A B B e Kết phân tích thống kê 60 One-way ANOVA: 60H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,15748 0,02423 0,18171 MS 0,05249 0,00303 F 17,33 P 0,001 S = 0,05504 R-Sq = 86,66% R-Sq(adj) = 81,66% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,62277 8,53261 8,45185 8,31103 Grouping A A B B C f Kết phân tích thống kê 72 One-way ANOVA: 72H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,15941 0,03612 0,19553 MS 0,05314 0,00451 F 11,77 P 0,003 S = 0,06719 R-Sq = 81,53% R-Sq(adj) = 74,60% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,71090 8,62882 8,49310 8,41451 Grouping A A B B Phụ lục 3.4 Kết phân tích thống kê thí nghiệm a Kết phân tích thống kê 12 One-way ANOVA: 12H versus NT Source DF SS Chuyên ngành Vi sinh vật học MS F P Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 NT Error Total 11 0,41664 0,01781 0,43444 0,13888 0,00223 Trường ĐH Cần Thơ 62,40 0,000 S = 0,04718 R-Sq = 95,90% R-Sq(adj) = 94,36% Grouping Information Using Fisher Method NT N Mean Grouping 3 7,71737 A 7,57576 B 7,33143 C 7,25251 C b Kết phân tích thống kê 24 One-way ANOVA: 24H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,15114 0,01235 0,16350 S = 0,03930 MS 0,05038 0,00154 R-Sq = 92,44% F 32,63 P 0,000 R-Sq(adj) = 89,61% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 7,80028 7,68167 7,62338 7,48846 Grouping A B B C c Kết phân tích thống kê 36 One-way ANOVA: 36H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,6818 0,1101 0,7919 MS 0,2273 0,0138 F 16,51 P 0,001 S = 0,1173 R-Sq = 86,09% R-Sq(adj) = 80,88% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,2388 8,0062 7,8948 7,5766 Grouping A B B C d Kết phân tích thống kê 48 One-way ANOVA: 48H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,95633 0,06336 1,01969 S = 0,08899 MS 0,31878 0,00792 R-Sq = 93,79% F 40,25 P 0,000 R-Sq(adj) = 91,46% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,62602 8,33575 8,03741 7,89256 Grouping A B C C e Kết phân tích thống kê 60 One-way ANOVA: 60H versus NT Source DF SS Chuyên ngành Vi sinh vật học MS F P Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 NT Error Total 11 0,5043 0,1004 0,6047 0,1681 0,0125 Trường ĐH Cần Thơ 13,40 0,002 S = 0,1120 R-Sq = 83,40% R-Sq(adj) = 77,17% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,7164 8,4102 8,2495 8,1865 Grouping A B B C C f Kết phân tích thống kê 72 One-way ANOVA: 72H versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,42299 0,03556 0,45856 MS 0,14100 0,00445 F 31,72 P 0,000 S = 0,06667 R-Sq = 92,24% R-Sq(adj) = 89,34% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,68099 8,46456 8,36336 8,15977 Grouping A B B C Phụ lục 3.5 Kết phân tích thống kê thí nghiệm a Kết phân tích thống kê 12 One-way ANOVA: log 12h versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,9798 0,0869 1,0667 MS 0,3266 0,0109 F 30,06 P 0,000 S = 0,1042 R-Sq = 91,85% R-Sq(adj) = 88,80% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 7,6139 7,5914 7,5012 6,9161 Grouping A A A B b Kết phân tích thống kê 24 One-way ANOVA: log 24h versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,64211 0,01321 0,65532 MS 0,21404 0,00165 F 129,60 P 0,000 S = 0,04064 R-Sq = 97,98% R-Sq(adj) = 97,23% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,10567 8,05103 7,85671 7,51485 Grouping A A B C c Kết phân tích thống kê 36 One-way ANOVA: log 36h versus NT Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Source NT Error Total DF 11 SS 0,56732 0,03512 0,60244 MS 0,18911 0,00439 Trường ĐH Cần Thơ F 43,08 P 0,000 S = 0,06626 R-Sq = 94,17% R-Sq(adj) = 91,98% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 3 Mean 8,56283 8,46677 8,22724 8,00363 Grouping A A B C d Kết phân tích thống kê 48 One-way ANOVA: log 48h versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,27727 0,01986 0,29713 MS 0,09242 0,00248 F 37,22 P 0,000 S = 0,04983 R-Sq = 93,32% R-Sq(adj) = 90,81% Grouping Information Using Fisher Method NT N 3 Mean Grouping 8,61462 A 8,59669 A 8,35841 B 8,26118 C e Kết phân tích thống kê 60 One-way ANOVA: log 60h versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,07453 0,01871 0,09325 MS 0,02484 0,00234 F 10,62 P 0,004 S = 0,04836 R-Sq = 79,93% R-Sq(adj) = 72,41% Grouping Information Using Fisher Method NT 2 N 3 3 Mean 8,69849 8,55775 8,54060 8,48444 Grouping A B B B Kết phân tích thống kê 72 One-way ANOVA: log 72h versus NT Source NT Error Total DF 11 SS 0,07589 0,01860 0,09448 MS 0,02530 0,00232 F 10,88 P 0,003 S = 0,04821 R-Sq = 80,32% R-Sq(adj) = 72,94% Grouping Information Using Fisher Method NT N Mean Grouping 8,70892 A 8,60341 B 8,55767 B C 8,49035 C Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ Bảng 12 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch độ pha loãng bã bia khác phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) Độ pha loãng Thời gian (giờ) 12 24 36 48 60 72 10 g/l 7,57a 8,15a 8,15b 8,10c 8,11c 8,12c 20 g/l 7,68a 8,21a 8,31a 8,25b 8,39b 8,50b 30 g/l 7,54a 8,30a 8,33a 8,54a 8,55a 8,64a 40 g/l 7,18b 7,87b 8,00c 8,44a 8,39b 8,43b *Ghi chú: Giá trị bảng giá trị trung bình lần lặp lại Các giá trị có mẫu tự giống khác biệt không ý nghĩa mặt thống kê với độ tin cậy 95% Bảng 13 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch nghiệm thức phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) Nồng độ rỉ đường Thời gian (giờ) 12 24 36 48 60 72 0% 7,52c 7,69c 7,94b 8,20b 8,31c 8,41b 1% 7,77b 7,97b 8,10ab 8,21b 8,45b 8,44b 3% 7,87a 7.99b 8,25a 8,40a 8,53ab 8,63a 5% 7,90a 8,16a 8,30a 8,48a 8,62a 8,71a *Ghi chú: Giá trị bảng giá trị trung bình lần lặp lại Các giá trị có mẫu tự giống khác biệt không ý nghĩa mặt thống kê với độ tin cậy 95% Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ Bảng 14 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch pH khác phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) pH Thời gian (giờ) 12 24 36 48 60 72 7,25c 7,48c 7,58c 7,89c 8,18c 8,16c 7,33c 7,62b 7,89b 8,04c 8,25bc 8,36b 7,72a 7,80a 8,23a 8,63a 8,72a 8,69a 7,57b 7,68b 8,13b 8,34b 8,41b 8,46b *Ghi chú: Giá trị bảng giá trị trung bình lần lặp lại Các giá trị có mẫu tự giống khác biệt không ý nghĩa mặt thống kê với độ tin cậy 95% Bảng 15 Mật số tế bào S cerevisiae ml dung dịch nghiệm mật số men giống khác phương pháp đếm hồng cầu (qui giá trị logarit) Mật số men giống Thời gian (giờ) 12 24 36 48 60 72 102 6,91b 7,51c 8,00c 8,26c 8,56b 8,60b 104 7,50a 7,86b 8,22b 8,36b 8,48b 8,56bc 106 7,59a 8,11a 8,47 a 8,61a 8,70a 8,71a 108 7,61a 8,05a 8,56a 8,60a 8,54b 8,49c (tế bào/ml) *Ghi chú: Giá trị bảng giá trị trung bình lần lặp lại Các giá trị có mẫu tự giống khác biệt không ý nghĩa mặt thống kê với độ tin cậy 95% Chuyên ngành Vi sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học [...]... cao Từ đó, đề tài Ảnh hưởng của các yếu tố môi trường nuôi cấy đến sự phát triển của nấm men trên bã bia được đưa ra nhằm bước đầu nghiên cứu ứng dụng sản xuất sinh khối nấm men từ bã bia 1.2 Mục tiêu đề tài Xác định các mức độ thích hợp về độ pha loãng bã bia, nồng độ rỉ đường bổ sung, pH, mật số tế bào nấm men ban đầu cho sự phát triển của sinh khối nấm men trong môi trường bã bia Chuyên ngành Vi... Bên cạnh các yếu tố về môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến sự phát triển của nấm men, mật số và chất lượng men giống cũng là một trong những yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả của quá trình nuôi cấy (Nguyễn Đình Thưởng và Nguyễn Thanh Hằng, 2000) Do đó, thí nghiệm được bố trí nhằm khảo sát ảnh hưởng của mật số tế bào của men Log mật số té bào (tế bào/ml) giống đến quá trình tăng sinh khối của nấm men 10e 0... Đại học khóa 36 – 2013 Trường ĐH Cần Thơ 4.4 Ảnh hưởng của mật số nấm men giống đến khả năng tạo sinh khối nấm men theo thời gian Ở các thí nghiệm trên, môi trường nuôi cấy nấm men được khảo sát và tìm ra môi trường phù hợp với sự sinh trưởng và phát triển của nấm men nhằm thu được sinh khối tốt nhất Từ kết quả các thí nghiệm trên, môi trường bã bia được pha loãng với hàm lượng bã bia là 30 g/l, bổ sung... nấm men Nấm men Saccharomyces cerevisiae được nuôi trên môi trường YEPD đặc sau đó cấy nấm men sang môi trường YEPD lỏng nuôi trong bình tam giác trong 3 ngày Đếm mật số nấm men bằng buồng đếm hồng cầu Mật số tế bào của huyền phù mẫu được tính theo công thức: N = (a/0,016)x103x hệ số pha loãng Trong đó: N là số tế bào trong 1ml a là số tế bào đếm được trong 4 ô lớn  Chuẩn bị môi trường bã bia Bã bia. .. Quá trình sinh trưởng, phát triển và sinh sản của nấm men chịu ảnh hưởng mạnh mẽ bởi pH của môi trường nuôi cấy, nếu ở pH thích hợp sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho nấm men phát triển và sinh sản, nếu pH ở ngoài ngưỡng giới hạn sẽ kìm hãm sự phát triển của nấm men Thí nghiệm này khảo sát ảnh hưởng của pH lên quá trình tăng sinh khối của nấm men Saccharomyces cerevisiae pH3 Log mật số té bào (tế bào/ml)... và kết thúc sau 3 ngày ủ 3.2.5 Thí nghiệm 4: Ảnh hưởng của mật số nấm men ban đầu đến khả năng tạo sinh khối nấm men theo thời gian Mục đích thí nghiệm: chọn được mật số nấm men ban đầu thích hợp cho quá trình phát triển của nấm men trong môi trường bã bia Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với 4 nghiệm thức là các mật số nấm men khác nhau, mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại... thấp nhất là nghiệm thức pH 3 đạt 8,16 pH của môi trường được thể hiện ở nồng độ H+ trong môi trường Ở mức pH thấp có thể làm thay đổi điện tích màng làm giảm khả năng trao đổi chất của nấm men pH tối ưu cho sự tăng trưởng của nấm men là 4,2 – 5,5 (Lương Đức Phẩm, 2006) Do đó, mức pH 5 thích hợp cho nấm men Saccharomyces cerevisiae phát triển trên môi trường bã bia Chuyên ngành Vi sinh vật học 23 Viện... mật số men là 100 tế bào/ml Nghiệm thức 2: mật số men giống là 102 tế bào/ml Nghiệm thức 3: mật số men giống là 104 tế bào/ml Nghiệm thức 4: mật số men giống là 106 tế bào/ml Cách tiến hành: Chuẩn bị môi trường bã bia theo các nghiệm thức tốt nhất từ các thí nghiệm trên Khử trùng môi trường ở 1210C/20 phút Tế bào nấm men được nuôi trong môi trường YEPD lỏng, sau đó nhân sinh khối trong môi trường rỉ... thức 10g/l, mật số nấm men đạt cực đại ở thời điểm 36 giờ do trong giai đoạn nấm men phát triển, tăng sinh khối mạnh, nhu cầu dinh dưỡng cao trong khi dinh dưỡng trong môi trường không đủ cho sự phát triển của nấm men, hơn nữa do sự tích tụ các sản phẩm trao đổi chất không có lợi cho sự phát triển của chúng dẫn đến lượng tế bào chết và tự phân nhiều hơn lượng tế bào sinh ra dẫn đến mật số giảm Nghiệm... thước 7-10 µm Khuẩn lạc thường có màu trắng hoặc màu kem khi được nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng rắn Nấm men có thể thay đổi hình dạng và kích thước trong các giai đoạn phát triển và điều kiện môi trường xung quanh, trừ khi được nuôi cấy trong các môi trường dinh dưỡng tiêu chuẩn (Lương Đức Phẩm, 2006) Nếu môi trường giàu dinh dưỡng, nấm men Saccharomyces cerevisiae có hình bầu dục, trong điều kiện ... đường chỉnh pH Bên cạnh yếu tố môi trường nuôi cấy ảnh hưởng đến phát triển nấm men, mật số chất lượng men giống yếu tố ảnh hưởng đến hiệu trình nuôi cấy (Nguyễn Đình Thưởng Nguyễn Thanh Hằng,... phát triển nấm men bã bia thực nhằm bước đầu nghiên cứu sản xuất sinh khối nấm men từ bã bia Các thí nghiệm tiến hành để khảo sát ảnh hưởng yếu tố môi trường nuôi cấy (độ pha loãng bã bia, nồng... Ảnh hưởng pH đến khả tạo sinh khối nấm men Quá trình sinh trưởng, phát triển sinh sản nấm men chịu ảnh hưởng mạnh mẽ pH môi trường nuôi cấy, pH thích hợp tạo điều kiện thuận lợi cho nấm men phát