BOY TE TRUNG DAI HOC DlTOC H NễI NGUYEN THI TU ANH TIẫP TUC NGHIấN CU THNH PHAN HO HOC V TC DUNG SINH HOC CĩA CY DON L XANH (Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis (Pat et Hoffm.) Merr Euphorbiaceae (KHO LUN TOT NGHIấP DUQC S KHễA 1998- 2003) Ngudi hirụng dõn : Th.S Nguyờn Thõi An Th.S Do Thi Vui Noi thirc hiờn : Bụ mon Diroc hoc c6 truyờn Thdi gian thirc hiờn : 3/2003 - 5/2003 : 5.AC H NOI, 5/2003 H I J V LOI CAM ON Vụi long biột on sõu sõc, tụi xin chõn thnh cõm cm: Th.S Nguyờn Thõi An Th.S Do Thi Vui L nguụfi truc tiộp huang dõn tụi quõ trợnh thuc hiờn khoõ luõn ny Tụi cỹng xin chõn thnh cõm an: PGS TS Pham Xuõn Sinh - Bụ mon Duoc hoc co truyờn TS Dụ Ngoc Thanh - Phụng thi nghiờm Trung tõm L nhỹng ngirụi dõ gop cho khoõ luõn cỹa tụi Nhõn dip ny tụi cỹng xin cõm on cõc thy cụ giõo bụ mon Duac hoc Cụ truyờn, bụ mon Dirgc l, phụng Thi nghiờm Trung tõm v cõc cõn bụ thu viờn Trung Dai hoc Duoc H Nụi dõ tõn tợnh hu'ong dõn, giỹp dụ, tao moi diờu kiờn cho tụi hon thnh cụng trợnh nghiờn cuu ny H Nụi, ngy 28-5-2003 Sinh viờn Nguyờn Thi Tu Anh MUC LUC Trang DAT VAN DE PHAN 1- TễNG QUAN 1.1 Dõc diởm thuc võt 1.1.1 Tờn khoa hoc 1.1.2 Mụ tõ thuc võt 1.2 Dc diởm vi hoc 1.3 Thnh phõn hoõ hoc 1.4 Tac dung sinh hoc v cụng dung 1.4.1 Tac dung sinh hoc 1.4.2 Cụng dung 1.5 Phõn bd 1.6 Trụng trot, thu hõi, chộ bien PHAN 2-THlTC NGHIấM V KET QU 2.1 Nguyờn võt lieu v phuong phõp nghiờn cuu 2.1.1 Nguyờn lieu nghiờn eau 2.1.2 Phuong tien nghiờn cihi 2.2 Kột qu, thuc nghiờm v nhõn xột 2.2.1 Nghiờn cuxi vờ thuc võt hoc 2.2.2 Nghiờn cỹu thnh phõn hoõ hoc 2.2.3 Nghiờn ciru tac dung sinh hoc PHAN 3- KẫT LUN V DE XUT TI LIEU THAM KHO 2 2 7 8 9 10 13 13 14 28 34 36 CHU GII CC CHĩ VIẫT TT y AST Anh sang thucmg CT Cụng thỷc SKLM Sõc k lụp mụng STT So thỷ tu TB Trung bợnh TT Thuục thir TTKHTN&CNQG Trung tõm Khoa hoc Tu nhiờn v Cụng nghờ Quoc gia DAT VAN DE Nirac ta nm vựng nhiờt dai giụ cụ hờ sinh thõi thuc võt rõ't phong phỹ Tir xa xua, nhõn dõn ta d biet sir dung nhiởu loai cõy cụ de phong v chựa bờnh Tuy nhiờn, phõn 1cm duoc sir dung theo kinh nghiờm dõn gian m chua duoc nghiờn cỹu eu thộ vờ thnh phõn hoõ hoc v tac dung sinh hoc Cõy Don la xanh (Excoecaria cochinchinensis Lour.var viridis (Pax.et Hoffm.) Merr ho Thõu du Euphorbiaceae) thirng duoc dựng nhu Don la dụ diờu tri bờnh Theo y hoc c6 truyờn cõy Don la xanh co tac dung tri mun nhot, mõn ngỷa, tiờu chõy [15] Cõy thudng duoc thu hõi lõn või Don la dụ v duoc sur dung bi thuụ'c diờu tri di ting, tiờu chõy De gụp phõn nõng cao giõ tri sir dung cỷa cõy Don la xanh mot cõch hop l, an ton v hiờu quõ, chỹng tụi tien hnh dờ ti Tiep tue nghiờn cuu thnh phõn hoõ hoc v tac dung sinh hoc cỹa cõy Don lõ xanh (Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis (Pax et Hoffm.) Merr Euphorbiaceae) Dờ ti thuc hiờn mot so nụi dung chmh sau: Vờ thuc võt: Xõc dinh tờn khoa hoc cỹa mõu nghiờn ciru Vố thnh phõn hoõ hoc: - Dinh tfnh cõc nhom chat hoõ hoc co mõt lõ Don lõ xanh - Dinh luong flavonoid v tanin chiột xuõt tựr lõ Don lõ xanh - Phõn lõp v nhõn dang chat phõn lõp duoc Vờ tac dung sinh hoc: - Khõo sõt dục tfnh cõ'p cỹa mõu nghiờn cuu - Thõm dụ tõc dung chụng di ỹng v tac dung trờn co tỹ cung cụ lõp PHAN 1- TễNG QUAN 1.1.B A C DIậM THIiC VT 1.1.1 Tờn khoa hoc Thộo Dụ Tõ't Loi (1999) [15], Nguyởn Nghla Thin (1996) [18], Pham Hong Hụ (2001) [12] loi Excoecaria cochinchinensis Lour cụ hai thur l Excoecaria cochinchinensis Lour var cochinchinensis v Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis Cụ thộ phõn biờt hai thtf bng mõu sõc mõt duụi cỹa la: - Excoecaria cochinchinensis Lour var cochinchinensis cụ mõt duụi la mu dụ tfm thõm - Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis cụ mõt duụi la mu xanh thõm Tuy nhiờn, theo Trung Quục thuc võt chf (1997) [23] Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis duoc xộp thnh mot loi riờng l Excoecaria formosana (Hayata) Hayata v cụ tờn synonym l Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis (Pax et Hoffm.) Merr Tờn Trung Quục l Luc bụi quờ hoa (trong dụ Don la dụ duoc goi l Hong bụi que hoa) 1.1.2 Mụ tõ thirc võt Cõy bui cao khoõng lm, cnh gi hinh tru trụn, cnh non cụ gục canh thộ hiờn hợnh canh La xanh thõm c mõt, khụng long, moc dụi hay moc cõch Phiộn la thuụn di, dợnh la nhon hoõc gn nhon, gụ'c la hep, mộp la cụ rõng cua nụng, gõn giựa noi rụ, gõn phu thua Cuụng ngõn 0,5-lcm, cụ la kốm hinh triùng, bụng (xem hợnh ) Cụ nhira mỹ trõng Hoa dan trnh cựng gục, moc nõch la hoõc du cnh Hoa duc trờn, hoa cõi duụi, hoa cụ la di, khụng cụ trng hoa Hoa duc cụ tien nhuy, hoa cõi cụ vụi nhuy nguyờn Mựa hoa vo thõng 4-5 v thõng 8-10 Cụng thtfc hoa: ^ KjC(iAợGt ? Kợ CoAsGđ Quõ nang mõnh, duụng krnh khoõng 0,8-lcm Hat hợnh cõu, duụng kmh khoõng 4mm Nụi nhỹ du Hợnh Cõy Don l xanh Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis (Pax et HoffmJ Merr Euphorbiaceae 1.2.D CD IẫM VI HOC Nm 2002, Hụ Thi Thanh Huyờn [13] dõ xõc dinh cõu truc vi hoc cỹa cõy Don la xanh gụm vi phõu la, vi phõu thõn, soi bot la Sa dụ tụng quõt vi phõu lõ: Hinh Sa tong quõt vi phõu lõ Mụ dy Biộu bi Sa dụ tụng quõt vi phõu thõn: Mụdõu Mụ mờm Mụ khuyột Bụ libe - gụ Hinh Sỷ dụ tong quõt vi phõu thõn 1.Biởubi Mụ dy Sai Mụ mờm vụ -4- 5.Bụlibe gụ Mụ mờm ruụt I flõ Soi bo Hợnh Soi bot l Tộ bo lụ Hat tinh bot Bo soi Mach xoõn Mụ mờm chỷa mõnh chõ't mu 1.3 Tinh thộ canxioxalat hinh cõu gai Mach mang THNH PHN HO HOC Nm 1989 cõc nh khoa hoc Trung Quục l Xie Jiamin v cụng sir dõ tien hnh nghiờn cuu thnh phn hoa hoc cua rộ v thõn cõy Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis (Pat et Hoffm.) Merr Euphorbiaceae v birục du phõn lõp duoc mot so thnh phõn sau: -5- Bdng Thnh phõn hoõ hoc cỹa rờ v thõn cõy Excoecaria cochinchinensis Lour var viridis (Pax et Hoffm.) Merr Euphorbiaceae Nhiờt dụ STT Tờn hop chat Cụng thỹc hop chat nụng chy Acid shikimic C7H 10O5 Acid tetracosanoic ^24^48^2 Acid palmatic Cl6H320 Acid stearic ^-"18^36^2 185-187C HO DH 82,5-83,5C O 59-61C 68-70C P-sitosterol C29h 50o 137-139C Hentriacontan C3.H.4 62-65C HO www/wwww Thộo Ho Thi Thanh Huyờn [13] + SKLM cỹa dich chiột ethanol sau dõ loai tap bõng ether du hoõ, thu duac 16 vột vai Rt khõc + Sõc k cụt vai chõ't hõp phu l Sephadex LH-20 dõ tõch dugc HAẽ, kiởm tra trờn SKLM cụ Rf = 0,88; cụ UV maxEtOH= 394,4nm; 275,5nm; Pho IR Bng Kờ't quõ dinh luỗmg tanin ton phõn Ln TB T2 T1 0,310 0,268 0,313 0,307 0,263 0,264 0,313 0,265 T3 0,047 0,050 0,053 0,050 Dụ õm: 18,73% Hm lugng % tanin dugc lieu dugc tmh theo (CT2): X= 10,36% Kột luõn: Hm lugng tanin la Don la xanh dat 10,36% 2.2.3 Nghiờn curu tac dung sinh hoc 2.2.3.1 Thỹ õục tợnh Chỹng tụi khõo sõt dục tfnh cõp cua cao long cõy Don la xanh nhm xõc dinh dụ an ton cỹa dugc lieu dở phuc vu cho nghiờn cuu tac dung sinh hoc v dieu tri Chuan bi dich thỹ: Lõy 200g dugc lieu cho vo nụi, dụ nuac ngõp dugc lieu khoõng 3cm, dun soi, bõt du soi thợ giõm nguụn nhiờt nhung võn dõm bo lue no cỹng du soi Dở soi khoõng 2-3 gicf roi chõt lõy nuục du dugc khoõng 200 ml Dụ nuục dõ dun soi vo bõ dugc lieu v dun nhu ln du, dở soi giụ roi chõt lõy nuục hai, dugc khoõng 100ml, lm tiộp nhu võy mot ln nỹa dugc khoõng 100ml Tụng cụng dugc 400ml dich chiờt Gụp cõc dich chiột lai, loc qua bụng roi dem cụ cõch thu cho dộn dugc cao 4:1 Dục tmh cap duoc xõc dinh theo phirong phõp Behrens- Karber [8] v LD50 duoc tmh theo (CT3) Tien hnh: Chuụt nhin n 12 gi nhung võn cho uụng nuục binh thuụng, sau dụ chia ngõu nhiờn thnh cõc lụ, mụi lụ Lụ chung cho uụng nuục muụi sinh l (0,5ml/con), cõc lụ thỹ cho uụng cao long lõ Don lõ xanh vụi liờu tõng dõn tir 41mg/kg dộn 100mg/kg (cho chuụt uụng bng kim cong du tự dua thuục vo thõng da dy) Theo dụi cõc biởu hiờn cỹa chuụt v ghi sụ chuụt chột 72 Kột quõ thỹ dục tmh cap cỹa chộ phm thỹ duoc trùnh by bng Bng Kột quõ nghiờn cỹu dục tinh cap cỹa lõ Don lõ xanh Lụ Liờu dựng (g/ kg) - 41 51 64 80 100 LD0 = 40,96g/kg Sụ chuụt thỹ 6 6 6 LD1()0= lOOg/kg Xõc dinh LD50 bõng phuong phõp Behrens - Karber Sụ chuụt chột 0 Bõng Kột qu thỹ dục tợnh cap cỹa dich chiột duỗfc liờu Dan lõ xanh Sụ chột Sụ Sễ Hiờu T lờ sụ Liờu TB Tợch sụ Nhụm chuụt chuụt liờu kộ chột dựng liờu kộ (a.d) thỹ (n,) chột (r,) tiờ'p (d) (%) tiờ'p (a) 40,96 0 51,2 10,24 0,5 5,12 16,67 64 12,8 19,2 33,33 1,5 80 16 3,5 56 83,33 100 6 20 5,5 110 100 - - - LD50 duoc tfnh theo CT: LD50 = LD100LD50 = 68,28g/kg Nhu võy cụ thộ so bụ nhõn xột lõ Don lõ xanh cụkhõ nõng gõy dục liờu gõp khoõng 200 ln liờu cụ tõc dung trờn nguụi Ngoi quan sõt trang thõi chuụt thõy: - Chuụt uụng thuục liờu cao bi ngụ dục vụi nhỹng biởuhiờn mõt nhõm nghiờn, nguụi run, da sụ chuụt chột sau 20 giụ - O liờu dục thõ'p hon, chuụt cụ biởu hiờn mõt lụ dụ, nguụi run - Vụi nhỹng liờu thõp hon, mỹc an ton mụi uụng thuục chuụt cụ biởu hiờn lụ dụ, chõm chap nhung hụi phuc dõn sau khoõng giụ 2.2.3.2 Nghiờn cỹfu tõc dung chụ'ng di ỹng Chộpham thỹ: Dich sõc Don lõ xanh (1:1) Dung dich Flavonoid ton phn 10% ? Phumg phõp thỹ: Phõn ỹng quõ mõn trờn da chuụt nhõt trõng Tien hnh: Gõy cõm ỹng cho chuụt theo k thuõt cỹa Perper: Dựng chuụt nhõt trõng dat cõc yờu cõu dõ nờu trờn, tiờm mng bung cho mụi 0,2ml long trõng trỹng g tuoi (1:2) tiờm ln, mụi ln cõch mot ngy - Dựng mõu thỹ: Sau ln tiờm cuụ'i cựng tuõn, tien hnh chia sụ chuụt dõ tiờm thnh lụ, mụi lụ Lụ chỹng: Uụng nuục muụi sinh l 0,5ml/20g chuụt Lụ thỹ 1: Uụng dich sõc 0,5ml/20g chuụt Lụ thỹ 2: Uụng dung dich flavonoid ton phn 10% 0,5ml/ 20g chuụt Cho chuụt uụng cõc chộ phõm ln: truục tiờm khõng nguyờn gi v 30 phut Gõy phõn ỹng quõ mõn trờn da: Tiờm tợnh mach dung dich xanh methylen 0,2% (0,1ml/ lOgchuụt), 40 phỹt sau tiờm da mỹi, mụi mỹi 0,02ml long trõng trỹng g tuoi (1:2) vo vựng lirng chuụt dõ nho long - Chiột v dinh luong xanh methylen: 30 phỹt sau tiờm long trõng trỹng giột chuụt bng chloroform, bục mõng da lung cụ vựng da phõn ỹng tuong ỹng vụi mỹi tiờm Nhỹng vựng da ny duoc cõt nhụ ngõm ong nghiờm, mụi ong nghiờm chỹa 5ml hụn hop aceton: dung dich Na2S04 (7:3) Cõc ong duoc nỹt km dở nhiờt dụ phụng, thợnh thoõng lõc nhe Sau 24 giụr, loc, b6 sung dung mụi cho dỹ 5ml Do dụ hõ'p thu quang cỹa dich loc buục sụng 659nm trờn mõy UV- shimadzu (Nhõt), ong trõng l hụn hop dung mụi trờn Lõp duụng chuan: Tiộn hnh pha xanh methylen cõc nụng dụ khõc 0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 0,6; 0,8; mg% roi mõt dụ quang Lõp dụ thi giỹa mõt dụ quang (D) v nụng dụ xanh methylen (C mg%) Hinh Dụ thi biờu diờn su liờn hờ giỹa mõt dụ quang D v nong dụ xanh methylen C mg% Trờn co sụ duụng chun tmh luong xanh methylen mụi ụ'ng Tmh toõn v xir l kờ't quõ theo phuong phõp thụ'ng kờ Bng 10: Kột quõ mõt dụ quang cỹa tựng lụ STT TB Lụ chỹtig 0,167 0,168 0,173 0,182 0,165 0,178 0,172 0,007 Lụ thỹr 0,037 0,034 0,042 0,040 0,039 0,038 0,003 Lụ thur 0,059 0,064 0,047 0,052 0,056 0,051 0,055 0,006 Bng 11 Anh huụng cỹa mõu thỹ Dan lõ xanh doi vụi su thoõt mach cỹa xanh methylen Lụ Chỹng Thỹ Thỹ2 Mõt dụ quang trung bùnh 0,172 0.007 0,038 0.003 0,055 0.006 Lugng xanh methylen (mg) trung bùnh 1,095 0,042 (100%) 0,296 0,022 (27,03%) 0,398 0,038(36,35%) P [...]... vờ cụng dung cỹa cõy Don lõ xanh Thuc te Don lõ xanh võn duoc thu hõi v bõn lõn vụi Don lõ dụ dựng dở diờu tri cõc bờnh mun nhot, mờợn ngỷa, 16 loột [15] 1.5 PHN Bễ 7 t ^ O Viờt Nam, cõy Don lõ xanh moc hoang hoõc duoc trong lõn vụi Don lõ dụ Cõy cụ nhiờu ụ cõc tợnh Thõi Nguyờn, Lang Son, Thanh Hoõ, Vợnh Phỹ, Ho Binh, 1.6 TRONG TROT, THU HI V CHấ BIẫN Thuụng gieo hat vo vu Dụng xuõn hoõc dõm cnh vo... nghiờn cuu La cõy Dan la xanh thu hõi tai H Nụi vo thõng 11,12 nõm 2002 Nguyờn lieu dugc sõy 50- 60C trong 2-3 giụ Bõo quõn noi khụ rõo 2.1.2 Phuong tien nghiờn cỷu 2.1.2.1 Dụng võt thi nghiờm Chuụt nhõt trõng, trong lugng 20 2g, khoố manh, khụng phõn biờt giụng, do Viờn Vờ sinh Dich tờ H Nụi cung cõ'p Chuụt lang cõi khoố manh, cụ trong lugng trung bợnh 200 20g, do Viờn Vờ sinh Dich tờ H Nụi cung... tng trnh thõm thnh mach Sau khi tiờm tlnh mach dung dich xanh methylen, cõn cir vo luỗmg xanh methylen thoõt mach giỷa lụ chỹng v lụ thỹ de dõnh giõ tac dung chụng di rùng cỹa mõu thỹ Mõu thỹ cụ tac dung chụng di ỹng thi luỗmg xanh methylen thoõt mach phõi ft hon lụ chỹ'ng Vợ võy cụ thở dõnh giõ cuụng dụ phõn ỹng dua vo viờc chiột v dinh luỗmg xanh methylen thoõt mach Gõy cõm ỷng cho chuụt theo k thuõt... lugng % tanin trong dugc lieu dugc tmh theo (CT2): X= 10,36% Kột luõn: Hm lugng tanin trong la Don la xanh dat 10,36% 2.2.3 Nghiờn curu tac dung sinh hoc 2.2.3.1 Thỹ õục tợnh Chỹng tụi khõo sõt dục tfnh cõp cua cao long cõy Don la xanh nhm xõc dinh dụ an ton cỹa dugc lieu dở phuc vu cho nghiờn cuu tac dung sinh hoc v dieu tri Chuan bi dich thỹ: Lõy 200g dugc lieu cho vo nụi, dụ nuac ngõp dugc lieu khoõng... ong trõng l hụn hop dung mụi trờn Lõp duụng chuan: Tiộn hnh pha xanh methylen cõc nụng dụ khõc nhau 0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 0,6; 0,8; 1 mg% roi do mõt dụ quang Lõp dụ thi giỹa mõt dụ quang (D) v nụng dụ xanh methylen (C mg%) Hinh 7 Dụ thi biờu diờn su liờn hờ giỹa mõt dụ quang D v nong dụ xanh methylen C mg% Trờn co sụ duụng chun tmh ra luong xanh methylen trong mụi ụ'ng Tmh toõn v xir l kờ't quõ theo phuong... 0,056 0,051 0,055 0,006 Bng 11 Anh huụng cỹa mõu thỹ Dan lõ xanh doi vụi su thoõt mach cỹa xanh methylen Lụ Chỹng Thỹ 1 Thỹ2 Mõt dụ quang trung bùnh 0,172 0.007 0,038 0.003 0,055 0.006 Lugng xanh methylen (mg) trung bùnh 1,095 0,042 (100%) 0,296 0,022 (27,03%) 0,398 0,038(36,35%) P ... Don lõ xanh l 1,24% - Bng phuong phõp bụt da dõ xõc dinh hm luong tanin lõ Don lõ xanh l 10,36% 3.3 Tõc dung sinh hoc - Thỹ dục tmh cõp: Qua quõ trinh thuc nghiờm so bụ nhõn thõ'y lõ Don lõ xanh. .. nhom chat hoõ hoc co mõt lõ Don lõ xanh - Dinh luong flavonoid v tanin chiột xuõt tựr lõ Don lõ xanh - Phõn lõp v nhõn dang chat phõn lõp duoc Vờ tac dung sinh hoc: - Khõo sõt dục tfnh cõ'p cỹa... cỹa cõy Don lõ xanh Thuc te Don lõ xanh võn duoc thu hõi v bõn lõn vụi Don lõ dụ dựng dở diờu tri cõc bờnh mun nhot, mờợn ngỷa, 16 loột [15] 1.5 PHN Bễ t ^ O Viờt Nam, cõy Don lõ xanh moc hoang