HỌC VIỆN NÔNG NGHIỆP VIỆT NAM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC CÔNG NGHỆ CẤY TRUYỀN PHÔI Ở NGỰA GVHD: TS Nguyễn Hữu Đức SVTH: Lương Kim Anh 585887 Đỗ Thị Hằng 586381 Bùi Thị Hoa 586473 HÀ NỘI – 10/2015 NỘI DUNG TRÌNH BÀY A Đặt vấn đề B Nội dung C Kết Luận ĐẶT VẤN ĐỀ Một lý lẽ Con cho phôi có tiềm di truyền tốt (nhất ngựa đua) lại không sinh đẻ trội Năm 2000, giới có 5398 ngựa giội rửa phôi, 3139 phôi thu có khả cấy truyền thực tế cấy 2830 phôi cho ngựa nhận (IETS, 2001) Mong muốn cấy truyền phôi kỹ thuật khai thác tiềm di truyền tốt (tốc độ, sức dẻo dai, bước chạy v.v…) ngựa không phép sinh đẻ (vì kỷ lục) NỘI DUNG Gây rụng trứng nhiều Cấy truyền phôi 2.Kỹ thuật thu phôi Các công nghệ khác Kỹ thuật gây động duc pha Bảo quản phôi ngựa GÂY RỤNG TRỨNG NHIỀU Các phương pháp gây dụng trứng Gonadotropin ngoại Chất chiết tuyến yên ngựa thô tinh khiết sinh Tiêm hai lần /ngày 14 ngày Tiêm lần/ ngày từ năm vào mùa không rụng trứng đến bảy ngày vào giai đoạn động ngựa Pony dục hay động đực Phản ứng Nghiên cứu đầu tiên, năm 1974 Douglas, Nuti, Ginther NGHIÊN CỨU CỦA WOODS VÀ GINTHER,1983 Sử dụng HCG Tiêm vào ngày thứ 15-19 cho kết rõ ràng vào ngày 19-23 chu kỳ động dục Sử dụng liều PGF2α vào ngày tiêm chất chiết tuyến yên với 750-1500 IU hay 2500 IU Cho lượng trứng rụng tương ứng 2,9+_0,5 1,3+_0,2 Nghiên cứu B.Remy J.B.Beckers (1997), J.F.Bruyas cs (1997) Kếttác Thao Chỉ tiêu theo dõi eFSH Gây rụng trứng nhiều ngựa để cho(phôi n=22)bằng Đối chứng ( n=22) FSH ngựa tinh khiết (e-FSH) 10.8(4-18) 10,57(5-17) Số nang trứng trung bình /con cho trước rụng * 1,81 (1-3) * 1,13 (1-2) Số trứng rụng trung bình / cho * 1,59 (0-3) * 1.09 (0-2) 11/22* 1/22** Số ngày tiêm trung bình Số ngựa có trứng rụng nhiều (2) Thụ tinh nhân tạo cho ngựa với tinh tươi có phẩm chất Số phôi trung bình / cho 0,47(0-3) từ nang trứng có đường kính 33mm rụng Số phôi trung bình / rụng trứng 0,26(9/33) 0,19(0-1) 0,22(5/23) trứng Bảng 2: Số trứng rụng số phôi thu trung bình ngựa ( Remy Bruyas, 1997 ) KỸ THUẬT THU PHÔI Dung dịch dụng cụ Thu phôi phương pháp không THỜI GIAN THU PHÔI mổ tốt ngựa nguy giội rửa áp dụng nhiễm trùng sau mổ cao phục bò chậm hồi Ngựa bình thường Thường 7, ngày sau rụng trứng Ngựa có tiền sử viêm tử cung Ngày thứ sau rụng trứng nhằm hạn chế ảnh hưởng tác nhân gây bệnh tử cung http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927 http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927 Kết thu phôi đạt tới 80% Phôi ngựa trạng thái phôi dâu Đi đến tử cung vào ngày thứ sáu sau rụng trứng (Ginther, 1979) có đường kính xấp xỉ 100µm Ngày thứ bảy phát triển thành phôi nang có kích thước 200µm Ngày thứ chín 2mm (Douglas, 1982) http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927 Kỹ thuật gây động dục đồng pha Bổ sung progesterone thông qua thức ăn Cho ngựa ăn Altrenogest liều 0,044mg/kg 15 ngày Sau ngựa động dục từ đến ngày Tiêm PGF2α vào chu kì động dục Tiêm fluprostenol với liều 250µg vào ngày thứ 14 chu kỳ, trước rụng trứng, ngựa tiêm bổ sung HCG với liều 2000-3000 IU Xác định ngựa động đực rụng trứng , phải sờ khám buồng trứng ngày để kết luận mức độ đồng pha cấy phôi có kết Việc kích thích cho ngựa động dục gặp nhiều khó khăn kết chưa đạt theo yêu cầu số gia súc khác 10 CẤY TRUYỀN PHÔI Kỹ thuật cấy phôi phương pháp mổ không mổ ngựa thực giống bò Castalberry cs:Tỉ lệ chửa 60% Iuniano Squire:Tỉ lệ chửa 75% Mổ (cấy vào ngày thứ 8) Imen cs: Tỉ lệ chửa 53% (1981) Allen Rowson: Tỉ lệ chửa 71% (1975) Không mổ Wade cs Wilson Tỉ lệ chửa 60-70% (1987) http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927 11 CÁC CÔNG NGHỆ KHÁC Hiệu khai thác phôi gây rụng trứng nhiều phối giống ngựa đạt kết thấp so với Chiều hướng nghiên cứu khai thác trứng loại gia súc khác Sự tiến triển nhân thành thục tế bào Kích thích nang trứng trứng nang trứng trước tăng trưởng rụng Trạng thái tế bào trứng nuôi chín tiêm tinh trùng vào trứng Sự phát triển tế bào trứng 12 • nguyên sinh chất đồng có bóng tối M.E.Dell Aquala cs (1977) nghiên cứu trạng thái tế bào trứng nuôi chín (IVM) tiêm tinh trùng vào trứng (ICSI) đạt tỷ lệ trứng thụ tinh bình quân 38,5% ( bảng 1) ⇒tỉ lệ % trứng thụ tinh cao nguyên sinh chất xuất thể phân cực hạt lipit tối 2: tỷ lệ thụ tinh tế bào • • Nhóm trứng Bảng trứng giai đoạn MII( metaphase II) tiêm tinh trùng (ICSC) • nguyên sinh chất chấm hạt lipit rải rác Nhóm trứng Nhóm Số lượng trứng MII tiêm Số lượng trứng sống (%) Số lượng trứng thụ tinh (%) 133 127(95,5) 48(37,8) 18 17(94,4) 10(58,8) 19 17(89,5) 4(23,5) Tổng số 170 161(94,7) 62(38,5) Nhóm trứng trứng thụ tinh phải có hai tiền nhân ( pronucle ) hai thể nhiễm sắc phân cực 13 J.Bezard cs (INRA –Pháp ,1997) nghiên cứu Bảng 3.Kết thu trứng từ nang trứng rụng Kết luận khả thành thục đồng loạt nuôi tiến triển nhân thành LH thục tế bào chín ống nghiệm (IVM) tế bào trứng nang trứng trước rụng (≥28mm) sau trứng nang trứng [...]... Cấy truyền phôi ở ngựa tuy còn nhiều hạn chế và khó khăn nhưng đã có vai trò to lớn trong việc tạo ra thế hệ mới tốt hơn, có ý nghĩa cao trong đời sống kinh tế sản xuất của con người Cấy truyền phôi ở ngựa đã góp phần vào việc bảo tồn và duy trì những vốn gen quý hiếm, đồng thời mở ra nhiều triển vọng mới cho ngành khoa học công nghệ nuôi cấy phôi tế bào động vật 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO Công nghệ cấy truyền. ..CẤY TRUYỀN PHÔI Kỹ thuật cấy phôi bằng phương pháp mổ hoặc không mổ ở ngựa được thực hiện giống như ở bò Castalberry và cs:Tỉ lệ chửa 60% Iuniano và Squire:Tỉ lệ chửa 75% Mổ (cấy vào ngày thứ 7 và 8) Imen và cs: Tỉ lệ chửa 53% (1981) Allen và Rowson: Tỉ lệ chửa 71% (1975) Không mổ Wade và cs Wilson Tỉ lệ chửa 60-70% (1987) http://baigiang.violet.vn/present/show/entry_id/222927 11 CÁC CÔNG NGHỆ... dụng phôi ĐÔNG LẠNH PHÔI -giải đông trong nước ấm 37, lắc đều sao cho tan nhiệt Nhập các giống mới (trước khi giải đông cần kiểm tra cẩn thận các nhãn và mũ ống để chắc chắn nắp còn chặt) ⇒Kếtquảthụthaicủaphươngphápnàyđạttỷlệ 50% -70% vàcácphôinangđạtđượctrạngtháipháttriểntốt Giảm chi phí đẻ duy trì cái nhận phôi Thương mại hóa quốc tế Giảm lây truyền bệnh Sơ đồ về lợi ích đông lạnh phôi 15 KẾT LUẬN Cấy. .. bào trứng ở nang trứng trước khi rụng (≥28mm) sau trứng ở những nang trứng ... Cấy truyền phôi ngựa góp phần vào việc bảo tồn trì vốn gen quý hiếm, đồng thời mở nhiều triển vọng cho ngành khoa học công nghệ nuôi cấy phôi tế bào động vật 16 TÀI LIỆU THAM KHẢO Công nghệ cấy. .. lý lẽ Con cho phôi có tiềm di truyền tốt (nhất ngựa đua) lại không sinh đẻ trội Năm 2000, giới có 5398 ngựa giội rửa phôi, 3139 phôi thu có khả cấy truyền thực tế cấy 2830 phôi cho ngựa nhận (IETS,... muốn cấy truyền phôi kỹ thuật khai thác tiềm di truyền tốt (tốc độ, sức dẻo dai, bước chạy v.v…) ngựa không phép sinh đẻ (vì kỷ lục) NỘI DUNG Gây rụng trứng nhiều Cấy truyền phôi 2.Kỹ thuật thu phôi