Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip TRNG I HC S PHM H NI KHOA HểA HC ************************** PHM THANH BèNH NGHIấN CU THNH PHN HểA HC PHN ON CHIT HEXAN CA CY MN TI (EUPATOLRIUM FORTUNEI) Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip KHểA LUN TT NGHIP I HC Chuyờn ngnh: Húa hu c Ging viờn hng dn khoa hc: Ts Nguyn Tin t H Ni, - 2011 M U Xó hi ngy cng phỏt trin, kinh t ngy cng phỏt trin, ca ci vt cht lm cng nhiu nhng bờn cnh nhng mt tt ú thỡ lm cho mụi trng ngy cng b ụ nhim, ti nguyờn cn kit, sinh nhiu bnh tt Vic tỡm kim v s dng hp lớ, cú hiu qu cỏc ngun ti nguyờn thiờn nhiờn l yờu cu tr nờn cp bỏch Vit Nam l nc nm khu vc nhit i cú khớ hu núng m, m cao trờn 80%, lng ma ln, nhit trung bỡnh 15-270C iu kin khớ Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip hu thun li ú khin Vit Nam cú mt h thc vt phong phỳ a dng vi 10585 loi, thuc 2342 chi, 337 h (trong ú cú 24 h cú t 100 loi tr lờn) Thc vt cú vai trũ ht sc quan trng: Cung cp thc n cho ngi, ng vt, iu tit khớ hu, cung cp nguyờn vt liu cho cỏc ngnh xõy dng, sn xut giyv c bit nhiu loi cõy cú tỏc dng tr bnh rt tt dựng lm thuc Thc t cho thy ngun ti nguyờn thc vt phong phỳ k trờn cú ti khong 4000 loi c nhõn dõn s dng lm thuc Cỏc bi thuc cú ngun gc tho dc th hin nhiu u im vt tri iu tr bnh ú l: ớt c tớnh, ớt tỏc dng ph v ớt nh hng n mụi sinh Vỡ vy cỏc nh khoa hc v ngoi nc ó, ang tớch cc nghiờn cu, tỡm hiu thnh phn húa hc v dc lớ ca cỏc loi cõy thuc v tỡm nhng bi thuc giỳp iu tr nhng cn bnh him nghốo cho ngi, ci thin cht lng cuc sng v kộo di tui th Ngy nay, khoa hc k thut ngy cng phỏt trin mnh m, vic nghiờn cu ngy cng gp nhiu thun li Lỏ, cõy Mn ti t lõu ó c nhõn dõn s dng nhiu bi thuc gii nhit, gii cm, sỏt trựng, li tiu, kớch thớch tiờu húa, mn nht, sang l, kinh nguyt khụng u, cỏc chng sn hu (chúng mt, st, ho, mt mi, kộm n, suy nhc, au bng, huyt, rong huyt, b kinh, hón thng) Ngoi ph n cũn dựng gi u cho sch túc, v dựng tr mt g, b Tuy nhiờn vic nghiờn cu v lỏ, thõn cõy Mn ti cũn nhng hn ch nht nh Vỡ vy tụi ó chn ti: Nghiờn cu thnh phn húa hc phõn on chit hexane ca cõy Mn ti nhm gúp phn tỡm kim cỏc hp cht thiờn nhiờn, to c s cho nhng nghiờn cu tip theo, t ú tỡm nhng ng dng hp lớ cho cõy Mn ti, gúp phn phỏt trin nn y hc c truyn dõn tc Ni dung khúa lun gm: Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip 1.Nghiờn cu tng quan v thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc cú cõy Mn ti Phõn lp mt s hp cht t cõy Mn ti bng phng phỏp chit, sc kớ Xỏc nh cu trỳc húa hc ca cỏc hp cht ó phõn lp bng cỏc phng phỏp ph Chng : TNG QUAN 1.1 S lc v h cỳc H cỳc (Asteraceae) bao gm ch yu cỏc cõy thõn c, cõy bi v mt s rt ớt cõy thõn g vi 1100 ging v gn 20.000 loi Lỏ ca h ny cú th mc i, so le hoc ớt ph bin hn l kiu mc vũng Lỏ cú th l n hỡnh lụng chim hoc lỏ kộp hỡnh chõn vt v khụng cú lỏ kốm Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip H cỳc chia lm ba b ln: - Heliantheceae - Lactuceae - Senecionceae Chi Eupatorium cú khong 400 loi trờn th gii, phõn b trung vựng nhit i chõu M Vit Nam cú khong 10 loi Cú 10 loi chi ny [2]: * Eupatorium cannabinum: Yờn bch lỏ gai, Hoa nt, Trch lan lỏ gai mốo, Thch lam, Bch sn * Eupatorium capillifolium: Yờn bch lỏ kim * Eupatorium chinense: T m, Trch lan Trung Quc, Yờn bch Trung Quc * Eupatorium coelestinum: M sn, c lo tớm * Eupatorium fortunei: Mn ti, lan, hng tho * Eupatorium heterophyllum: Thch lam, Trch lan khỏc lỏ * Eupatorium japonicum: Sn lan, Trch lan, Yờn bch nht * Eupatorium lindleyanum: Bi lan, Yờn bch, lindley * Eupatorium odoratum: C lo, Chú , Bp bp, Yờn bch * Eupatorium triplinerve: B dt, Mn ti, c dt, ba dút 1.2 S lc v cõy mn ti 1.2.1 Gii thiu chung Tờn khoa hc l : Eupatorium fortunei Turcz Tờn ng ngha : Eupatorium staechadosmum Hance Phõn lp thc vt : Ngnh : Magnoliophyta Lp Magnoliopsida Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip B Asterales H Asteraceae Chi Eupatorium Tờn khỏc : Trch lan, Lan tho, Co pht ph (Thỏi), Eupatoire (Phỏp) 1.2.2 Hỡnh thỏi thc vt v phõn b [1],[4],[5] Mn ti: Mụ t: Cõy thuc tho, cao trung bỡnh 50cm cú th n 1m Thõn tr trũn, thõn v cnh nhn, cnh phõn nhiu nhỏnh Lỏ mc i thuụn, hỡnh di rng, di 7-11 cm, rng 1,2-2,5 cm, nhn u, thon hp gc, mộp lỏ cú rng ca nh, gõn lỏ hỡnh lụng chim, gõn chớnh ni gia, cú nhiu gõn ph phõn nhỏnh v vũ lỏ cú mựi thm c bit Ton thõn: cnh, cõy, cung lỏ cú mu hi tớm, lỏ bc nh, tự v trũn; cm hoa l ngự kộp, hoa tớm hng, ụi cú mu hi trng hng, mu u cnh hay k lỏ, trng hoa loe dn v phớa u, mo lụng di 3cm, bao phn khụng cú tai gc Qu b, mu en, cú nm cỏnh li Mựa hoa vo thỏng 711, qu vo khong thỏng 9-12 Phõn b: Cõy mc hoang nhiu ni, cõy c trng ri rỏc mt s nụng thụn cỏc tnh Min Bc Trung Quc Mn ti mc nhiu cỏc tnh: Giang Tụ, Tụ Chõu, Nam Kinh, Phỳc Kin Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 1.1: Cõy Mn ti Eupatorium fortunei B phn s dng: Ton thõn, hay dựng l cnh lỏ, ngn l ch yu v dựng ti tt hn dựng khụ Cú th thu ton cõy cõy mi hoa, loi b cht ct 3-4 cm phi khụ búng rõm hoc sy 45-500C n khụ ri dựng dn Cỏch trng: + Cõy mc hoang v rng khp ni cỏnh hoa bay v mang theo ht + Cỏch trng n gin, ct tng on di khong 20-30cm cm xung t, 2-3 t chỡm di t, cnh hi nghiờng Sau mt tun l cõy bộn r Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip 1.2.3 Cụng dng y hc dõn tc - Cụng nng: V cay, tớnh bỡnh, hi m, vo hai kinh: can, tỡ tỏc dng hot huyt, phỏ huyt, thụng kinh, li tiu, sỏt trựng - Cụng dng: + Cha st, cha mn nht l nga + Nhõn dõn ta thng dựng lỏ Mn ti non n sng, n gi nh cỏc loi rau thm Cng dựng lỏ nu canh n cho mỏt, gii cm, gii nhit Lỏ cng dựng hóm nc ung li tiờu húa, kớch thớch n ngon ming v lm rau thm + Ngi ta dựng Mn ti tr ho g, mt g, rp, b t cnh lỏ Mn ti vo h ng u xanh, u en, cau khụ tr mt v sõu, hỏi cnh lỏ Mn ti cho vo g, sau ó lm v sinh s tr c b g, b cú , c vi ngy li lm v sinh v thay lỏ mt ln Ging cú rp sau gi v dit rp, ri cnh lỏ Mn ti vi ln s dit ht rp + Ngi ta dựng lỏ Mn ti gió nh cho vo tỳi vi v xỏt trc tip lờn tay hay chõn xoa mui v dn (con b mỏt) cú hiu qu tt vũng hai ba gi Ph n nụng thụn cng dựng Mn ti nu nc gi u cho sch túc [1],[5] -Bi thuc [2]: + Cha mỏu hụi khụng sau : Mn ti (c gc v lỏ), Ngi tớm, Qu chi, u Tỏn thnh bt, ly chng 80g, chia lm ln ung vi ru + Cha phự thng sau : Mn ti, Phũng k, u bng tỏn nh, mi ln ung 8g vi gim lm thang + Cha mn nht, vt thng huyt: Mn ti, Huyt giỏc u 20g Sc ung Ngoi thỡ dựng lỏ Mn ti gió nh v p lờn vt thng Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip + Cha st, tiờu húa kộm: Mn ti khụ 20g, sc vi 600ml cũn 200ml, chia lm ln ung 15 phỳt trc hai ba n chớnh + Cha bnh ph n (thiu mỏu, suy nhc, au bng kinh, kinh nguyt khụng u): Mn ti phi hp vi c Gu, ch mu, Ngi cu, Nh ni (mi th 120g) phi khụ, tỏn nh, rõy thnh bt min, trn vi bt go v ng kớnh (nu thnh sirụ), lm thnh viờn to bng ht ngụ Ngy ung hai ln, mi ln 25-30 viờn + Cha rong huyt: Mn ti, Kộ hoa vng, Ch thiờn, Mó mi loi 20g thỏi nh vng sc vi 400ml cũn li 100ml, ung lm hai ln ngy, dựng 3-5 ngy + Cha bnh ph n sau (b st, ho, kộm n, mt mi): Mn ti 20g, Mch mụn 20g, Ngi cu 10g, Nhõn trn 6g, R qut 4g, v qu bi o khụ 4g, sc ung ngy, dựng 10 ngy lin + Cha bnh mỏu sau : an sõm, Mn ti mi th 9gam, Xuyờn khung 12gam, Kinh gii 6gam Sc ung + xong huyt h: Mn ti 9gam, lỏ Ngi (sao) 6gam, ng 30gam Sc c, ung ht mt tun + au bng sau : Diờn h sỏch, lỏ Mn ti mi th 9gam Sc thờm ru vo ung + Trỳng phong sau : Kinh gii, lỏ Mn ti mi th 9gam, Xuyờn khung 4,5gam, ng sõm 18gam Sc ung 1.3 Thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc cú cõy Mn ti 1.3.1 Vi nột v hp cht Phenolic 1.3.1.1 Gii thiu chung Phenolic l nhúm cỏc hp cht cõy m cha ớt nht mt vũng thm b th ớt nht mt nhúm hydroxyl, nhúm ny t hay liờn kt vi cỏc nhúm chc khỏc nh: este, ester hoc glycoside Cỏc hp cht phenol cú mu sc t Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip nhiờn nờn cú th li dng mu sc ca chỳng theo dừi quỏ trỡnh chit sut v phõn lp Cú hai hng chớnh thm húa sinh cỏc phenolic thc vt: - Hng ph bin nht l i qua Shikimate (axit Shikimic), t cỏc monosaccarit to thnh cỏc aminoaxit (Phenyl amin v Tyrosime), sau ú loi nhúm amin cho cỏc axit Cinnamic v cỏc dn xut ca chỳng gm: Axit benzoic, Acetophenone, Lignan, Lignin v Caumarin - Con ng th hai l i t axetat v dn n to thnh cỏc Poly-ketoester ca cỏc Polyketit di bng cỏc phn ng úng vũng (phn ng ngng t Claisen hoc Andol) Cỏc sn phm thng l polycyclic gm: Choromen, Isocaumarin, Orcinol, Depside, Depsidoen, Xanthone, Quinone Cu trỳc a dng ca cỏc hp cht phenol cú c l quỏ trỡnh sinh tng hp v bi s tng dn tn s kt hp gia hai ng Shikimate v acetate i vi cỏc hp cht c to thnh hn hp Kh nng tham gia cỏc thnh t th ba l hon ton cú th mc dự vi tn s thp hn S kt hp ny c to bi cỏc thnh t to bi hai ng Shikimate v Mevalonate, vớ d nh mt s loi Quinone hoc khung Furano v Polycoumarin 1.3.1.2 Mt vi c im ca hp cht Phenol Mt vi hp cht ca Phenol cú th d dng nhn bit bng mt thng nh cỏc Anthocyanin t hoa, cỏc hp cht khỏc cú th nhn bit di ỏnh sỏng ốn UV hoc bi cỏc phn ng mu c trng Cỏc phn ng mu ny c s dng quỏ trỡnh sc kớ, phõn lp cỏc hp cht Phenolic Tuy nhiờn, vic s dng cỏc phn ng mu trờn cỏc dch chit thng khú phỏt hin v khụng nhy bi cỏc tng tỏc ca cỏc yu t gõy nhiu kt qu thc nghim Cỏc húa cht thng c s dng phỏt hin cỏc cht phenol ú l: Clorit st, Vanllinin, Phosphomolybdate-phosphotungstate i vi mt vi 10 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip SRB [9] 4tecpenoid mi cú tờn l rel-(1R,2S,3R,4R,6S)-p-menthane-1,2,3,6tetrol, rel-(1R,2R,3R,4S,6S)-p-menthane-1,2,3,6,tetrol, 9-hydroxythymol 3O-angelate v (3,20R)-20-hydroxylanost-25-en-3-yl-palminate, chỳng cú hot tớnh xitotoxic chng li cỏc dũng t bo HL-60, SMMC-7721 v LO2 [10] Cỏc loi thc vt chi Eupatorium th hin nhiu hot tớnh sinh hc thỳ v, c bit cỏc dn xut thymol cú kh nng khỏng c loi vi khun Vic nghiờn cu thnh phn húa hc ca cỏc loi chi ny cũn mi nờn cũn nhiu hn ch, phn ln mi trung vo loi Eupatorium staechadosmum Hance Vic tip tc i sõu nghiờn cu thnh phn húa hc v hot tớnh sinh hc ca cỏc cht cú loi thuc chi Eupatorium cú tỏc dng lm thuc l mt thỳ v ang cn cỏc nh khoa hc quan tõm Chng : I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 54 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip 2.1 Mu thc vt Cõy Mn ti c thu hỏi vo thỏng 06 nm 2010 ti Hũa Bỡnh Mu cõy c TS Trn Huy Thỏi, Vin Sinh thỏi v Ti nguyờn sinh vt, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam giỏm nh Mu tiờu bn c gi ti Vin Húa sinh bin, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam 2.2 Phng phỏp phõn lp cỏc hp cht 2.2.1 Phng phỏp chit 2.2.1.1 c im chung 2.2.1.2 C s ca quỏ trỡnh chit Quỏ trỡnh chit da trờn nh lut phõn b Nerst: KA = CA/CB Vi KA l hng s phõn b CA, CB: nng cht hũa tan hai pha lng A, B khụng tan ln 2.2.1.3 Quỏ trỡnh chit thc vt 2.2.1.3.1 Hp cht t nhiờn cõy 2.2.1.3.2 Chn dung mụi chit 2.2.1.3.3 Quỏ trỡnh chit 2.2.2 Cỏc phng phỏp sc kớ 2.2.2.1 c im chung ca cỏc phng phỏp sc kớ 2.2.2 Cỏc phng phỏp sc kớ 2.2.2.1 c im chung ca cỏc phng phỏp sc kớ n = nbC/(1+bC) Vi: n: lng cht b hp ph lờn pha tnh lỳc t cõn bng n: lng cc i ca cht cú th b hp ph lờn mt cht hp ph no ú b: Hng s C: nng ca dung dch 2.2.2.3 Phõn loi cỏc phng phỏp sc kớ 2.2.2.3.1 Sc kớ lng 2.2.2.3.2 Sc kớ khớ 2.3 Cỏc phng phỏp xỏc nh cu trỳc ca cỏc hp cht hu c 2.3.1 o im chy 2.3.2 Ph hng ngoi (IR) 2.3.3 Ph t ngoi (UV Vis) 2.3.4 Ph lng (MS) 2.3.5 Ph cng t ht nhõn (NMR) 55 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Chng : THC NGHIM 3.1 Phng phỏp tỏch chit Sc kớ lp mng (TLC) c thc hin trờn bng mng sn DCAlufolien 60 F254 v RP18 F254 (Merck-c) Cỏc vt cht c phỏt hin bng ốn t ngoi hai bc súng 254nm v 368nm hoc dựng thuc th l dung dch H2SO4 10% phun u lờn bn mng ri sy nhit cao cho n xut hin mu Sc kớ ct (CC) c tin hnh vi cht hp ph pha thng (Silicagel 240-430 mesh, Merck) hoc o pha (ODS-60-14/63, Fujisilisa-Nht Bn) 3.2 Cỏc phng phỏp ph Ph lng phun mự in t (ESI-MS) c o trờn mỏy AGILENT 1200 LC-MSD Trap ca Vin Húa hc, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam Ph cng hng t ht nhõn (NMR) c o trờn mỏy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Vin Húa hc, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam 3.3 Phõn lp cỏc cht Phn trờn mt t ca cõy Mn ti sau thu hỏi v c phi khụ búng rõm, xay nh (3,5g) v ngõm chit vi methanol (101x3 ln) bng thit b siờu õm Ultrasonic 2010 nhit 40-500C (3x20 phỳt) Dch chit sau c cụ c bng mỏy ct quay vi ỏp sut gim thu c 300g cn chit methanol Cn chit ny c hũa tan vi nc v chit phõn on ln lt vi n-hexan v ethylaxetat thu c cn chit n-hexan (60g) v ethylaxetat (30g) tng ng Tin hnh sc kớ ct silicagel i vi cn chit nhexan gii bng h dung mụi gradient n-hexan-acetone (100:1 v/v100% acetone) thu c nm phõn on ký hiu l F1F5 Tin hnh phõn lp phõn on F3 trờn sc kớ ct vi cht hp ph l silicagel pha thng, h dung mụi gii l n-hexan-etyl axetat 4:1 thu c hp cht (40mg) Hp cht (7,0 mg) c tỏch t phõn on F5 bng sc ký ct silicagel pha thng gii bng n-hexan-acetone 2:1 v tinh ch li trờn ct pha o RP18 vi h dung mụi metanol-nc 10:1 Hp cht 1: 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol (1) 56 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Cht du khụng mu Ph lng phun mự in t ESI-MS ca xut hin pic [M + Na]+ ti m/z 302.9 cho phộp xỏc nh cú cụng thc phõn t l C15H20O5 (M=280) Trờn ph 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) (pp): 6,69 (1H, d, 1,0, H-2); 6,94 (1H, d, 8,5, H-5); 6,64 (1H, dd, 8,5, 1,0, H-6); 2,25 (3H, br s, H-7); 4,49 (1H, d, 11,0, H-9); 4,56 (1H, d, 11,0, H-9); 3,88 (1H, d, 12,0, H-10); 3,83 (1H, d, 12,0, H-10); 6,12 (1H, qq, 1,5, 7,0, H-3); 1,92 (3H, dq, 1,5, 7,0, H4); 1,84 (3H, d, 1,5, H-5) Ph 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) (pp): 139.9 (C-1); 118.5(C-2) ; 156.5(C-3); 119.8(C-4); 126.3(C-5); 120.5(C-6); 20.9(C-7); 78.9(C-8); 67.3(C-9); 66.0(C-10); 168.7(C-1); 140.2(C-2); 126.9(C-3); 15.8(C-4); 20.4(C-5) Hp cht 2: 9-angeloyloxy-10-acetoxy-8-hydroxythymol (2) Cht du khụng mu Ph ESI-MS: m/z 321.1 [M-H]-, cụng thc phõn t C17H22O6 (M=322) Ph 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) (pp): 6,70 (1H, d, 1,0, H-2); 6,92 (1H, d, 8,0, H-5); 6,65 (1H, dd, 8,0, 1,0, H-6); 2,27 (3H, br s, H-7); 4,46 (2H, d, H-9); 4,51 (1H, d, 12,0, H-10); 4,54 (1H, d, 12,0, H-10); 6,13 (1H, qq, 1,5, 7,0, H-3); 1,93 (3H, dq, 1,5, 7,0, H-4); 1,85 (3H, d, 1,5, H-5); 2,07 (3H, s, H-2) Ph 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) (pp): 140.0 (C-1); 118.7 (C-2); 156.6 (C-3); 118.9(C-4) ; 126.3(C-5); 120.5(C-6); 20.9(C-7); 78.5(C-8); 67.6(C-9); 67.3(C-10); 168.1(C-1); 140.2(C-2); 126.9(C-3); 15.8(C-4); 20.4(C-5); 171.2(C-1); 20.7(C-2) Chng : KT QU V THO LUN T dch chit clorofoc cõy Mn ti, mt hp cht ú c phõn lp Cu trỳc ca hp cht c xỏc nh bng cỏc phng phỏp ph bao gm ph ESI-MS v ph cng hng t ht nhõn 1D NMR 57 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hp cht 1: 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol Hp cht c phõn lp di dng cht lng dng du, khụng mu cho thy õy l dn xut thymol Trờn ph 1H-NMR ca (Hỡnh 4.1.2) cú cỏc tớn hiu c trng cho mt h proton ABX ca vũng thm ti 6,69 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-2), 6,94 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-5) 6,64 (1H, dd, J = 8,5, 1,0 Hz, H-6); ba tớn hiu nhúm CH3 ti 2,25 (3H, br s, H-7), 1,92 (3H, dq, J = 1,5, 7,0 Hz, H-4'), 1,84 (3H, d, J = 1,5 Hz, H-5') Ph 13 C-NMR v DEPT ca hp cht cho thy s xut hin ca 15 vch tớn hiu gm nhúm CH3, nhúm CH2, nhúm CH v nhúm cac-bon bc bn (Hỡnh 4.1.3-4.1.4) Tớn hiu ca nhúm CH2 ti 67,3 v 66,0 v nhúm CH ti 78,9 chng t cỏc nhúm ny cú gn vi oxi Ngoi ra, cỏc tớn hiu c trng ca nhúm angeloyl ti 168,7, 126,9, 140,2, 15,8 v 20,4 cng c xỏc nh (Bng 1) So sỏnh cỏc d kin ny vi ti liu tham kho cho thy s liu ph ca hon ton trựng khp vi hp cht 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol ó cụng b trc ú [11][12] Ngoi ph lng ESI-MS ca xut hin pic ion ti m/z 302.9 [M + Na]+ hon ton phự hp vi cụng thc phõn t C15H20O5 (M=280) T nhng kt qu trờn hp cht c khng nh l 9-angeloyloxy8,10-dihydroxythymol 58 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 4.1 Cu trỳc húa hc ca Hỡnh 4.1.1 Ph ESI-MS ca hp cht 59 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 4.1.2 Ph 1H-NMR ca hp cht Hỡnh 4.1.3 Ph 13C-NMR ca hp cht 60 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 4.1.4 Ph DEPT ca hp cht Hp cht 2: 9-angeloyloxy-10-acetoxy-8-hydroxythymol Hp cht cng thu c di dng cht lng dng du, khụng mu ca dn xut thymol S liu ph 1H, 13C-NMR v DEPT ca rt tng ng vi s liu ca cht ngoi tr s xut hin thờm tớn hiu ca mt nhúm axetat ti C 171,2 v 20,7 v H 2,07 (3H, br s) (Hỡnh 4.2.1- 4.2.2) iu ny cng c khng nh li bng ph lng phun mự in t ca vi pic [M-H]- ti m/z 321,1 tng ng vi cụng thc phõn t C17H22O6 ca dch chuyn húa hc ca C-10 ca hp cht dch chuyn 1,3 ppm v phớa trng thp hn so vi hp cht chng t nhúm axetat ớnh vo v trớ C-10 Nh vy hp cht c xỏc nh l 9-angeloyloxy-10-acetoxy-8hydroxythymol, mt hp cht ó c bit t cõy mn ti [13] 61 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 4.2 Cu trỳc húa hc ca Hỡnh 4.2.1 Ph ESI-MS ca hp cht 62 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 4.2.2 Ph 1H-NMR ca hp cht Hỡnh 4.2.3 Ph 13C-NMR ca hp cht 63 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip Hỡnh 4.2.4 Ph DEPT ca hp cht Bng S liu ph 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) ca hp cht v TT 10 3' 4' 5' H (J=Hz ) H (J=Hz ) 6,69 (1H, d, 1,0) 6,94 (1H, d, 8,5) 6,64 (1H, dd, 8,5, 1,0) 2,25 (3H, br s) 4,49 (1H, d, 11,0) 4,56 (1H, d, 11,0) 3,88 (1H, d, 12,0) 3,83 (1H, d, 12,0) 6,12 (1H, qq, 1,5, 7,0) 6,70 (1H, d, 1,0) 6,92 (1H, d, 8,0) 6,65 (1H, dd, 8,0, 1,0) 2,27 (3H, br s) 4,46 (2H, d) TLTK * H (J=Hz ) 6,72 (br,s) 6,94 (d,7,9) 6,67 (br, d, 7,9) 2,29 (s) 4,46 (d, 12,0) 4,54 (d, 12,0) 4,51 (1H, d, 12,0) 3,90 (d, 12,0) 4,54 (1H, d, 12,0) 3,81 (d, 12,0) 6,13 (1H, qq, 1,5, 7,0) 1,62 (m) 1,51 (m) 1,92 (3H, dq, 1,5, 7,0) 1,93 (3H, dq, 1,5, 7,0) 0,84 (m) 1,84 (3H, d, 1,5) 1,85 (3H, d, 1,5) 1,11 (d, 7,7) 64 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip 2'' 2,07 (3H, s) * S liu theo ti liu tham kho Bng S liu ph 13C-NMR (125 MHz, CDCl3) ca hp cht v TT TLTK * C C C 139.9 140.0 118.5 118.7 156.5 156.6 119.8 118.9 126.3 126.3 120.5 120.5 20.9 20.9 78.9 78.5 67.3 67.6 10 66.0 67.3 168.7 168.1 140.2 140.2 126.9 126.9 15.8 15.8 20.4 20.4 1'' 171.2 2'' 20.7 * S liu theo ti liu tham kho [13] 140.1 118.6 156.6 118.9 126.3 120.5 20.9 78.5 67.3 67.6 168.1 126.9 140.2 15.8 20.4 171.2 20.7 KT LUN Cõy Mn ti t lõu ó c s dng y hc c truyn nhng hu nh cha c nghiờn cu v húa hc Vit Nam Lun ny bc u nghiờn cu thnh phn húa hc ca phn lỏ cõy Mn ti T dch chit hexan cõy mn ti, hai hp cht l dn xut ca thymol ó c phõn lp bng cỏc phng phỏp sc ký Bng cỏc phng phỏp ph bao gm ph ESI-MS v ph cng hng t ht nhõn mt chiu cu trỳc ca cỏc hp cht ny c 65 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip xỏc nh l 9-angeloyloxy-8,10-dihydroxythymol (1) v 9-angeloyloxy-10acetoxy-8-hydroxythymol (2) TI LIU THAM KHO Ting Vit: 66 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip [1] Huy Bớch, ng Quang Chung v cỏc cng s, Cõy thuc v ng vt lm thuc Vit Nam, Nh xut bn Khoa hc v K thut, 2004, II, trang 246-247 [2] Ngụ Tnh, Trn V Phi, Ton b phng thuc truyn dõn gian Trung Hoa, Nh xut bn Nng, cụng ty phỏt hnh sỏch H Ni hp tỏc xut bn nm 1999 (Dch theo nguyờn bn: Nh xut bn Khoa hc K thut Bc Kinh), 1993, trang 1454-1486 [3] Lờ Vn Hc, Nguyễn Văn Sơn, Trần Đình Thắng, Nguyễn Xuân Dũng,Thnh phn húa hc cu cõy Mn ti trng (Eupatorium staechadosmum Hance) Thanh Hóa, Tạp chí Dược học, 2000, trang 342 [4] Tt Li, Nhng cõy thuc v v thuc Vit Nam, Nh xut bn Y hc H Ni , 2003, trang 252-253 [5] Vừ Vn Chi, T in cõy thuc Vit Nam, Nh xut bn Y hc, 1997, trang 729-730, 1642 Ting Anh: [6] Motoo Tori, Yukiko Ohara, Katsuyuki Nakashima, and Masakadu Sono, Thymol Derivativesfrom Eupatorium fortunei, J.Nat Prod, 2001, 68 (8), pp 1048-1051 [7] M.Haruna, M.Haruna, Y.Sakakibara, and K.Ito, Structure and conformation of Eupatofortunin, a new germacrane-type sesquiterppene lactone from Eupatorium fortune Turcz, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 1986, 34(12), pp 5157-5160 [8] Liu K, Roeder E, Chen HL, Xju XJ, Pyrrolizidine Alkaloids from Eupatorium fortune Phytochemistry, 1992, 31(7), pp 2573-2574 [9] Hai Xia Jiang, Kun Gao, Highly Oxygennated Monoterpene from Eupatorium fortune, Chinese Chemical latters, 2005, 16, pp 1217-1219 67 Trng HSP H Ni Khúa lun tt nghip [10] Hai Xia Jiang, Ya Li, Jing Pan, Kun Gao, Terpenoids from Eupatorium fortune Turcz, Helvetica Chimica Acta, 2006, 89, pp 258266 [11] Araceli Perez-Vasquez, Edelmira Linares, Robert Bye, Carlos M Cerda-Garca-Rojas, Rachel Mata Phytotoxic activity and conformational analysis of thymol analogs from Hofmeisteria schaffneri Phytochemistry 69 (2008) 13391347 [12] Nguyen Thi Diem Trang, Wanner MJ, Koomen GJ, Nguyen Xuan Dung New acetophenone and thymol derivatives from Eupatorium stoechadosmum Planta Medica 1993, 59, 480-481 [13] Tori M, Ohara Y, Nakashima K, Sono M Thymol derivatives from Eupatorium fortunei Journal of Natural Products 2001, 64, 10481051 68 [...]... tính sinh học của cây Mần tưới 1.3.2.1 Thành phần hóa học Ở Việt Nam, hiện chưa có một công trình nghiên cứu khoa học nào được công bố về loài Mần tưới (Eupatorium fortunei) Mới chỉ có một công trình nghiên cứu về loài Mần tưới trắng (Eupatorium staechadosmum Hance) được nhóm nghiên cứu của Lê Văn Hạc công bố vào tháng 10 năm 2004 Trong công trình này, nhóm nghiên cứu đã tách được tinh dầu của cây Mần... pháp chiết 2.2.1.1 Đặc điểm chung Khái niệm: Chiết là quá trình tách và phân ly các chất dựa vào quá trình chuyển một chất hòa tan trong một pha lỏng vào một pha lỏng khác không hòa tan với nó Mục đích: Sử dụng phương pháp chiết để chuyển một lượng nhỏ chất nghiên cứu trong một lượng lớn thể tích dung môi này vào một thể tích nhỏ dung môi khác nhằm nâng cao nồng độ của chất nghiên cứu và được gọi là... hạn trong một số lớp chất mà chủ yếu là các chất có cấu trúc dây nối đôi liên hợp Đặc điểm của phổ tử ngoại là phổ của một chất phức tạp có thể giống với phổ của một chất đơn giản nếu hai chất ấy có cùng một nhóm cấu trúc giống nhau Chính vì thế phổ tử ngoại dùng để xác định cấu trúc của hợp chất hữu cơ một cách sơ bộ 30 Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp 2.3.4 Phổ khối lượng (MS) Nguyên tắc của. .. phần AcOEt của dịch chiết MeOH của Eupatorium fortunei Thêm vào đó, 2 monotecpenoid khác là axetone thymol-8,9-diyl ketal và 8-methoxy-9-hydroxythymol 3-O-angelate cũng được xác định [10] Dưới đây là một số cấu trúc của một số hợp chất được công bố trong công trình này: 16 Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Hình 1.10 Cấu trúc hóa học của một số hợp chất từ cây Mần tưới 1.3.2.2 Hoạt tính sinh học... loài thực vật trong chi Eupatorium thể hiện nhiều hoạt tính sinh học thú vị, đặc biệt các dẫn xuất thymol có khả năng kháng được 8 loại vi khuẩn Việc nghiên cứu thành phần hóa học của các loài trong chi này còn mới nên còn nhiều hạn chế, phần lớn mới tập trung vào loài Eupatorium staechadosmum Hance Việc tiếp tục đi sâu nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các chất có trong loài thuộc... trình chiết Một số chất dẻo lẫn trong dung môi như diankylphtalat, tri-n-butyl-axetylcitrat, tributylphosphat…do trong quá trình sản xuất hay bảo quản, sẽ làm sai lệch kết quả phân lập trong các quá trình nghiên cứu hóa thực vật Clorofom, metanol và etanol là những dung môi thường được lựa chọn trong quá trình chiết sơ bộ một bộ phận của cây như lá, thân, rễ, hoa… 21 Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt... khu trú trong các bộ phận riêng biệt của cây như ở hạt (dầu béo), ở hạch tiết của lá, vỏ thân (tinh dầu) Ngoài ra trong cây còn chứa các muối vô cơ Các muối vô cơ này ít tham gia vào tác dụng sinh lý của dược liệu, tuy nhiên đây chính là các nguồn nguyên tố vi lượng không thể thiếu đối với cây cỏ Ở một số loài các muối vô cơ cũng có một số tác dụng như tác dụng lợi tiểu của muối kali (natri) trong râu... này được phân thành 3 nhóm phụ thuộc vào mức độ oxi hóa: một nhóm chức oxi hóa ở vị trí 9, hai nhóm chức oxi hóa ở các vị trí 8 và 9, ba nhóm chức oxi hóa ở các vị trí 8,9,10.[6] Sau đây là cấu trúc của 16 hợp chất phân lập được này: 13 Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp 14 Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Hình 1.7 Cấu trúc hóa học một số dẫn xuất thymol từ cây Mần tưới Năm 2005, Hai Xia... ngô, tác dụng trị vi khuẩn của lưu huỳnh trong họ cải, tác dụng trị bướu cổ của các hợp chất Iot của các loại tảo biển Mặt khác trong cây cũng có các loại enzyme, do đó trong quá trình nghiên cứu, nếu không khống chế sự hoạt động các enzyme này thì các glycozit có thể bị thủy phân một phần hoặc toàn phần làm thay đổi tính phân cực, do đó thay đổi độ hòa tan của hợp chất trong dung môi 2.2.1.3.2 Chọn... độ của tín hiệu tỷ lệ với mức chênh lệch năng lượng giữa các trạng thái Đối với hóa học các hợp chất thiên nhiên, hai phổ NMR phổ biến nhất là phổ cộng từ proton 1H-NMR và phổ cộng từ cac-bon 13C-NMR Trong phổ 1H-NMR, hai thông số quan trọng là tích phân và hằng số liên kết Chỉ số tích 31 Trường ĐHSP Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp phân cho ta biết số lượng tương đối của proton có hằng số liên kết đặc ... g, mt g, rp, b t cnh lỏ Mn ti vo h ng u xanh, u en, cau khụ tr mt v sõu, hỏi cnh lỏ Mn ti cho vo g, sau ó lm v sinh s tr c b g, b cú , c vi ngy li lm v sinh v thay lỏ mt ln Ging cú rp sau gi... 2010 ti Hũa Bỡnh Mu cõy c TS Trn Huy Thỏi, Vin Sinh thỏi v Ti nguyờn sinh vt, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam giỏm nh Mu tiờu bn c gi ti Vin Húa sinh bin, Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam 2.2 Phng... (flavonoid, carotenoid)v.v Do cú tỏc dng sinh lý v dc lý nh tỏc dng khỏng sinh, dit nm, tỏc dng c ch hoc tỏc dng gõy c i vi t bo, tỏc dng kớch thớch hoc c ch sinh trng v cỏc tỏc dng khỏc m cỏc cht