BỘ \ T Ế TRƯỜNG ĐẠI HỌC D c HÀ NỘI GĨP PHÂN NGHIÊN cứu MỘT LỒI RAUV OLFIA Ở VIỆT NAM KHỐ LUẬN T Ố T N G H IỆ P Dược s ĩ ĐẠI H ỌC Khố 1995-2000 Ngưòi thực Ngi hướng dẫn Noi thực Thòi gian thực kiện : sv Nguỵễn Ngọc Sơn : TSKH T rần Văn -Thanh PGS TS Nguyễn Kim c ấ n : Hộ mơn Dược liệu : 0l/()3-23/()5/2()0() I HÀ NỘĨ, 5-2000 \\ ' tri'i' ^ \ Ar ,\ "\.;X 7-;u- ' *ì / , MỤC LỤC Mục lụ c Phần I- Đặt vấn đề phần n-T quan tài iiệu I Đặc điểm thực vật chi RAU VOLPIA .3 n Hố học Alkaloid R auvolíia .4 Định tính Alkaloid Raưsioỉỹìa Định lượng m Tác dụng dược lý sử dụng y h ọc Ạịm alỉn Reserpin Aịm aỉicin rv Sơ lược Rau volíia vomitoria Afz ỉ Đặc điểm thực vật Nghiên cứu vềR vomitoria ngồi nư ớc 10 Phần III-thực nghiệm 13 I- Ngun liệu phương pháp nghiên cứu: .13 Ngun liệu : 13 2.Phương pháp nghiên cứu 14 Sai s ố xác định .16 n Thực nghiệm kết 17 AI Nghiên cứu hình thái thực vật 17 Đ ặc điểm hình thái thực vật: 17 Vi phẫu: 18 Đ ặc điểm hột lá, thân, rễ Raưvolỷia vom itoria 23 BI Nghiên cứu hố học R auvol/ia vom itoria .24 Định tính Alkaloid RaưVolfìa vom itoria 24 Định lượng Alkaloid 29 Hydro hố Serpentin làm giàu Ajm alicin 31 Phân lập Reserpin Aịmalin vỏ rễ R vom itoria 32 Phần IY: Kết luận đề x u ấ t 36 Tài liệu tham khảo 37 PHAN I- ĐẠT VẨN ĐE Các bệnh tim mạch cao huyết áp ỉà bệnh nsiuv ánh hirớne nhiều đến sức khỏe tính mạnu nairời Nsày nav nụuv mác bệnh có chiều hướnơ aia tănơ (theo thốnơ kê 40% nsười cao tuổi măc bệnh nàv nước phát triển, nước cơim nahiệp có l5-206r só người lớn mắc bệnh huyết áp cao ỏ' Việt Nam 6-12c/c sỏ nụười mắc bệnh trẽn 5-6 triệu) [8] [12] Nhu cáu thuốc chữa bệnh cao huvết áp ngày tăng Tnrớc thuốc thườtts đế chữa bệnh cao huvết áp la: • Cây h Sophora Japonia Linn họ Fabaceae • Cây dừa cạn Catharanthus roseus L họ Apocynaceae • Cây ba gạc có hai lồi thường dùng là: - Rauvolfia verticillata họ Apocynaceae - Rau Yolfia seipentina họ Apocvnaceae Tuv nhiên nsuồn nguvên liệu từ khơng đưọc dổi dào, cho đen nước ta chưa sản xuất thuốc chữa cao huyết áp ' im mạch, chủ yếu phải nhập từ nước ngồi Do việc nah ẻn cứu nguồn ngun liệu khác để thay nguồn nguvên liệu trên, đáp ứng nhu cầu sản xuất thuốc chữa bệnh cần thiết Mấy nám qua chúna tơi nahiên cứu thãm dò cày Rauyolíia vomitoria Afz Apocvnaceae câv có hàm lượng Aỉkaloiđ cao đặc biệt Reserprn Ajmalin Ajmalicin, câv lại phát triển trồng lớn băng, cách nhân giống hĩru tính, sinh trưởng phát triển tốt, phù họp với khí hậu nhiệt đới nước ta [5] Do chúng tơi tiến hành đề tài "Góp phần nshiên cứii câv RauVolfia vomitoria Afz Việt nam" với nội dung: Nghiên cứu hình thái giải phẫu, thành phần hố học R vomitoria Bước đẩu nghiên cứií làm giàu Aịmaỉiciĩì Aỉkaỉoid tồn phẩn PHẦN ĨI-T ổN G QƯAiN TÀI LIỆU I ĐẶC Đ IỂM THỰC VẬT C H I R A I V O LFIA Chi Rauvolíia chi lớn, chiếm vị trí quan trọns trons họ trúc đào (Apocvnaceae) phân bơ rộna rãi vùng nhiệt đới cận nhiệt đới (nhất vùim Đỏnsỉ Nam phi) Theo tài liệu [_2?i] chi Rauvoltìa có khốns 200 lồi, tronc dã nshiên cứu xác định 123 lồi, chia thành 13 lớp Việt nam chi Rauvolfia cổ 11 lồi, đa sơ mọc hoanơ, sơ di thực từ nước [7] Rauvolfia verticillata (Lour) Bail - Ba gạc Việt Nam: chủ yếu mọc hoana ó' tỉnh Cao Bằng, Lạng Sơn, Hà Giang, Thanh Hố R auvolíia littoralis Pierre ex Pitard hay R indochinensis Pichon mọc hoans; ỏ' Phú Quốc, An Giang, Khánh Hồ Rauvolíia cambod ana Pierre (Ba gạc to - Ba gạc Nghĩa Bình) có 0' Đồng Nai, Lâm Đồnu, Nghĩa Bình Rauvolíia chaudocensis có Phú Quốc, Khánh Hồ Rau volíia vietnamensis: mọc hoang vìins: Khánh Hồ Rau volíia latiíronsa: mọc hoang phía Bắc giáp Trung Quốc R auvolíia ynnanensis ỏ' phía bắc giáp Trung Quốc (tỉnh Sơn La, rừng độ cao 900-1300 m gọi ba gac Vân Nam) Rauvolfia tetraphvlla L (Ba sạc Cư ba R canescens) 2ỐC ó' Truns MT.ta nhập giốna tù' Liên xơ cũ Cuba, có nhiều Ba Rauvolíia seipentina Benth (Ba gạc Ấn Độ) di thực vào Việt Nam phát mọc hoans Đắc Lắc, Kontum [14] 10.RauVolfia caffra Sonder phân bố vếu Đơng Nam phi ta nháp vào năm 198 có trung tâm trổRS chế biến câv thuốc Hà Nội ò I LRauVolTia vomitoria Afz (Ba sạc - Ba aạc Vĩnh Phú) Có nạn aỗc Châu Phi năm 1965 viện dược liệu phát VTnh Phú tiên nõrn 1974 xác định rèn khoa học R.vomitoria Afz họ Apocynaceae II HỐ HỌC ALKALOID RAL VOLFIA Từ năm 1703 có nshiẽn cứu hố học 100 lồi ụiứi [29] phát hàns trăm Alkaloid Alkaloid Rauvolfia chia làm nhóm [29] • Alkaloid nhân Indol: Reserpin, R-escinnanmin Serpentin Altstonin Sarpagin tập trung nhiều R.canescen, R.veiticillata R.Serpentina, R.vomitoria, R.tetraphila, R.caffra • Alkaloid nhân Indolin: Ajmalin chủ yếu R.vomitoria R.canescens R.caffra • Alkaloid oc indocil: isoreserpilin a-indocil • Alkaloid indolenin: perakin có R.caffra, R.vomitoria • Alkaloid oxi indol Ngồi có số Alkaloid phát khơng thuộc tronc; năm nhóm Raucaffricil Raucaffrilin Raucaffridin Trons quan trọnẹ câ phải kê đến: 1931-1935 Siddiqui phân lập số Alkaloid tinh khiết là: Ajmalin, Ajmaỉicin, Serpentin Serpentinin [29] 1951-1952 Muller, Schlittler Bein [20] phân ỉập từ rễ câv chất Reserpin có tác dụn2 hạ huyết áp Định tính Alkaloid Raux/olfìa 1.1 Định tính thuốc thử chung Alkaloid Chủ yếu định tính sơ có mặt Alkaloid có 1.1.1 Nhóm thc thử tạo tua [9J Một sò thuốc thử thường dùns ỉà: Thc thử N-Iaver : Cho rua trán SI hav ne nhat với alkaioid Thnỏc thư Boucharđut xho tua nâu vứi alkalt)id - Thc thử DrauendortT : Cho túa vàng cam đên đỏ với alkaloiđ 1.1.2 Nhóm thc thử tao màu Có thé xác đinh có Alknloid dưa vào phan ứng màu đặc trưng, thuốc thứ tạo màu rhưòm dùnơ là: axit Sulfuric đặc axit Nitric đặc thuốc thử Frohde thuốc thử Merke, thuốc thử Mandelin (axit Sulfuric đãc axit Vanadic ) [9] V í dụ : Thuốc thử Alkaloid Reserpin Axit Nitric đặc Ajmalin Xanh chàm —> đỏ Đỏ máu [19] gạch —> ^iig [21] Vanilin HC1 đăc Đỏ [17] Serpentin Vàng [19] í Tím hồng [19] 1.2 Định tính phương pháp sắc ký lóp mỏng (SKLM) Trong dịch chiết có chứa nhiều Alkaloid tạp chất khác phản ứns màu khơna rõ bãns p.hữna Alkaloid chiết phân lóp dạns tinh khiết Do để kết luận xác người ta thườns dùns phán ứng màu đặc hiệu kết họp với phươns pháp sác kv có Alkaloiđ tinh khiết làm chất chuẩn Nsun tác: - Chiết Alkaloid trona dược liệu dunẹ mơi hữu thích họp - Khai triển sắc ký ban mỏng silicaơel (Merk Daim Stadt BRD) dã đưọ'c hoạt hố ỏ' 110°c ÌỜ khai triển bằn trona: hệ duns mơi sau: • Clorofoc: Methanoi: Amoniac (50:9:1 ) • Cloroc: Methanol: Amoniac (19:1:0,5) • Buranol: Axit acetic: H ,0 (4:1 1:40) • n Butanol: Ethvl acetat: Ethvlclorid (10: 30:60 ) Phát có mặt Alkaloid nhờ đèn tử imoại thuốc thử màu Draơendorff Bromothvmol xanh, đo Rf đơi chiếu với Rf chất chn Địrih lượng Có nhiều phươns pháp, trons có hai phương pháp định lươnu chủ vè 11 Phương pháp trọng lượnơ Phương pháp trắc quang (so màu, đo quang) Ngồi có phương pháp - Phương pháp tạo tủa - Dhương pháp cực phổ 2.1 Địriú lượng Atkaloid tồn phần 2.1.1 Phưưng pháp trọng lượng [13] Ngun tắc: Chiết Alkaloid tồn phần dung mơi hữu khác mơi trườns kiềm (thường dùng Cloroc cồn ) • Loại tạp loại axit sau: axit Sulfuric, Photphoric axit Tactaric chiết Alkaloid dạng muối • Kiềm hóa dịch chiết axit chuyển Alkaloid bazơ • Chiết Alkaloid bằnơ dung mơi hũii • Bốc dung mơi đến cạn • SấyV đến khối lương khơngI 'đổi • f ;■?' ■i.T ẩ ci - MEA?i.'RINb Mu DE í:kíu LU TÌũ l' ACC-MUL,“,T:ijN DE TEO Tu?; APODI2ATIŨN REMÁRKS ANALV/T í [...]... huyết áp tương đương vởi 7,5mơ/kg Reserpin [! 0] Ngoài ra cao Rauvolíia vomitoria còn có tác duns gây thu nhỏ đổng từ và làm sa mi mắt trên động vật thí nshiệm Về độc tính, cao Rauvolíia vomitoria có độ độc tương đương với độ độc của một sỏ loài Rauvolfia khác như R.verticillata Từ dạng cao toàn phần đã nghiên cứu dập viên nén với tên Rauvomin mỗi viên có hàm lượng Alkaloid toàn phần !à 0,002 a (Rauvomin... 216,268,295 C A N A • 1715 (CH3COO-): 1625, 1590 1505 (- Ar); 1 130 (- ị CO-) ! Nghiên cứu tác dụng dược lý Alkaloid Rauvolíia vomitoria Nsoài hoạt chất Reseipin, Ajmalin, Ajmalicin trong vỏ rễ ba sạc còn có các Alkaloid khác cũng có tác dụng như Rescinamin, Reserpilịn Mới đây Các giả Phạm Duv Mai đã nghiên cứu dạng cao toàn phần của Rauvolíia vomitoria để làm thuốc điều trị cao huyết áp [10] Cao Rauvolíia...2 Nghiên cứu về R vomitoria trong và ngoài nước 2.1 Nghiên CÚÌI trong nước: 0 Việt Nam càv ba iiac 4 lá (R.vomitoria) đã đuvvc các nhà thực \'ậi In>;í được chú V ràt nhiều • Vé thực vậi Năm 1983 các tác ĩúá Nsuvẻn Kim cấn Tạ Quans Nhiệm Trán Toàn Hạ Thị Na đã imhiên cứu thuán hoá ba iiạc 4 lá từ hoaim dại đua vào iTone trọt đổHíi rhò'i... Fujirnoto, Kenji Yamamoto, Osamu đã nghiên cứu sản xuất Reserpin bẳng nuôi cấy tế bào của Rauvolíia (trong tế bào mô cua R.vomitoria có 0,158 % Resetpip ^ [17] Năm 1997 Petati M, Ruffii J đã phân lập từ vỏ rễR vomitoria 2 Alkaloid idole mới là 3-epi resci.namine và 3, 4 - dimethoxv benzoyl- reserpin axit Me-este [22] í2 PHẦN III-THỰC NGHIỆM ĩ- NGUYÊN LIÊU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C Ú I : 1 Nguvên liệu: *... theo phần trăm s RSD % = 100% X Trongw đó X,I là 2 Ìá tri thưc nơhièm o n là số thí nghiêm 16 n- ỉ II THỰC NGHIỆM VÀ KẼT QUẢ A/ Nghiên cứu hình thái thực vật của cây 1 Đặc điểm thực vật: - Mô tả cây (hình dạng bên ngoài) Rauv/olíia vomitoria là cây nhỡ cao 2-6 m, có thể tới 10 m vỏ thân xù xì có màu xám bạc, có nhựa mủ trắng, cành phân nhánh nhiều Lá đơn nguyên mọc vòng, 4 lá một Cụm hoa một. .. mức, bình sac ký - Bộ cất quay - Máv đo quan£ phổ - Đèn tử nsoại Camax - Máv đo điểm cháy Mícro-Heiztisch — Boctus - Kính hiển vi - Máyj ly J tâm v.v uv ,IR, UV-VIS - Campec 2 Phương pháp nghiên cứu * Phương pháp nghiên cứu hình thái giải phẫu: Tiến hành cắt vi phẫu nsuvên liệu tươi các bộ phận lá , thân, rễ nhuộm theo phương pháp nhuộm kép thôns thườna, cỉùng xanh metylen và dỏ son phèn 14 Đinh tính:... màu đúc hiệu đè xác định các alkaioiđ ironii câv * tìịniĩ lượng Áỉkaloiả toàn phần Chiíns tòi đã tiến hành định lượns Alkaloid toàn phân tronsi : ỉá vó thân vỏ rẻ lõi rẻ theo phương pháp khối lượn 2 Theo cách tính của dược điển Việt Nam II, tập 3 a X 100 X 100 x = - (%) (1) p(ioo-b) X: hàm lượng Alkaloid toàn phần trong dược liệLL (%) a : Ịvhối lượng cắn (g) p : khối Ịượng dược liệu đem... triên và mùa thu hái [5] Năm 1987 tác giả Nsuyễn Kim cắn - Nsuyễn Văn Thanh đã nghiên cứu kích thích quá trình sinh trưởng, 1'úr ngắn thời ai an phát triển của câv và làm tăng hàm krợníỉ Alkaloid trong vỏ rễ của câv bằng nguyên tố Coban [6] • Hoá học Từ nám 1975 Trịnh Gia An, Nguyễn Văn Đàn, Phạm Đình Sửu đ ã n g h iê n cím thành phần hoá học rẽ cây R.vomitoria, chiết Reserpin [1] Đến năm 1976 các tác giả... một xim tán mọc ở kẽ lá hay đầu cành, hoa nhỏ màu trắng lục Quả hạch hình cầu hay hình trứng, đầu hơi nhọn, khi chín có màu đỏ, có một hạt hình trái xoan 9 Anh 1 Cây ba gạc Vũih Phú (Rau volfia vomitoria) Ảnh 2 Hoa cây ba gạc Vĩnh Phú ( R.vomitoria) 2 Vi phẫu: Vi phẫu lá Rau voỉíla vomitoria * Gân lá: Gân lá lồi cả hai mặt, gân trên lồi rõ bao gồm các phần: (1) Biểu bì (trên, dưới): Gồm một lớp tế bào... chiết tách Reserpin chữa cao huyết áp, Ajmalin chữa loạn nhịp tim, Ajmalicin là thuốc tuần hoàn não 2 Định lượng Alkaloid 2.1 Định lượng Alkaloid toàn phần Theo phương pháp khối lượng ghi trong dược điển Việt Nam II tập 3 [13] Tiến hành: * Chiết Alkaloid toàn phần từ dược liệu: cân chính xác khoáng 5s dược liệu (vỏ thân, vỏ rễ, lõi rễ, lá) làm ẩm bằng Amoniac 25% -t- 3ml ethanol 96° Đê 2 2 ÌỜ Chiết bầns ... tính, sinh trưởng phát triển tốt, phù họp với khí hậu nhiệt đới nước ta [5] Do tiến hành đề tài "Góp phần nshiên cứii câv RauVolfia vomitoria Afz Việt nam" với nội dung: Nghiên cứu hình thái... đới (nhất vùim Đỏnsỉ Nam phi) Theo tài liệu [_2?i] chi Rauvoltìa có khoáns 200 loài, tronc dã nshiên cứu xác định 123 loài, chia thành 13 lớp Việt nam chi Rauvolfia cổ 11 loài, đa sô mọc hoanơ,... Nghiên cứu vềR vomitoria nư ớc 10 Phần III-thực nghiệm 13 I- Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu: .13 Nguyên liệu : 13 2.Phương pháp nghiên cứu