MUC LUC Trang DAT VAN DE Phn TONG QUAN 1.1 Dõc diởm thuc võt 1.2 Thnh phn hụa hoc 1.3 Tac dung v cụng dung Phõn NGUYấN LIEU V PHĩONG PHAP NGHIấN CLfU 2.1 Nguyờn lieu 2.2 Phuong phõp nghiờn cỷu Phn THlTC NGHIấM V KET QU NGHIấN CU 10 3.1 Kột quõ nghiờn ciru vố thuc võt 10 3.1.1 Dõc diởm thuc võt 10 3.1.2 Dõc diởm vi phõu v bot diroc lieu 10 3.2 Kột quõ nghiờn cuu thnh phn hoõ hoc 12 3.2.1 Dinh tmh cõc nhụm chõt bõng phn ung hoõ hoc 12 3.2.2 Kột quõ nghiờn cuu saponin 19 3.2.3 Kột quõ nghiờn ciru flavonoid 22 3.3 Kột quõ nghiờn cuu tõc dung sinh hoc 28 3.3.1 Thu' dục tmh cap 28 3.3.2 Tõc dung chong oxy hoõ Phõn KẫT LUN V DE NGHI 29 34 4.1 Kột luõn 34 4.2 Dờ nghi 35 TI LIEU THAM KHO 36 CAC CHĩ VIẫT TT V K HIấU V Dao dụng hoõ tri AOA Anti oxydant activity E Mõt dụ quang EDTA Ethylen diamin tetraacetic acid IR Infraed (hụng ngoai) MC Mõu chỹ'ng MDA Malonyl dialdehyd MS Mass Spectrum (pho khoi) MT Mõu thir PBS Dờm phosphate SKLM Sõc k lofp mụng TT Thuoc thir UV Ultraviolet (tir ngoai) DAT VN DE Viờt Nam vựng hõu nhiờt dụi giụ co nguụn ti nguyờn thuc võt rõ't phong phỹ v da dang Nhõn dõn ta co nhiờu kinh nghiờm su dung cõy cụ lm thuoc tir lõu dụi Nhiờu cõy thuoc dõ duac nghiờn cỹu, dua vo trờn qui mụ Ion, tao cõc chộ pham phuc vu cụng tac phong v chỷa bờnh cho nhõn dõn Tuy nhiờn cụn rõ't nhiờu cõy thuoc chua duoc nghiờn cỹu hoc nghiờn cỹu chua dõy dỷ; viờc sir dung cụn dua theo kinh nghiờm cỹa nhõn dõn tựng dia phuong Cõy rung rue la to (Berchemia giraldiana, ho Tao ta - Rhamnaceae) phõn bụ nhiờu noi Viờt Nam nhu Quõng Ninh, Cao Bang Nhõn dõn ta dựng lm thuoc chỷa tờ thõp, dau lung moi gụi, sot rột v ợa chõy De gụp phn vo viờc tim hiởu v nõng cao giõ tri sir dung cỹa duoc lieu rung rỹc la to, chỹng tụi thuc hiờn dờ ti: Nghiờn curu dõc diởm thuc võt, thnh phn hoõ hoc v mot so tac dung sinh hoc cỹa cõy rung rue lõ to Berchemia giraldiana Schneid. Vụi cõc nụi dung sau: + Vộ thuc võt: - Mụ t dõc diởm thuc võt v kiộm dinh tờn khoa hoc cỹa cõy nghiờn cỹu; - Xõc dinh dõc diởm vi phõu lõ, thõn v dõc diởm bụt lõ, bot thõn + Vộ thnh phn hoõ hoc: - Dinh tmh cõc nhụm chõt chmh duoc lieu; - Dinh luong mot sụ thnh phõn chmh duoc lieu; - Chiờt xuõt v phõn lõp thnh phõn chmh duoc lieu; - So bụ nhõn dang chõt phõn lõp duoc + Ve tõc dung sinh hoc: - Thir dục tmh cõp; - Thỹ tõc dung chụng oxy hoõ PHN TONGQUAN 1.1 DC DIẫM THlfC VT 1.1.1 Vi tri phõn loai chi Berchemia [4], [15] Thộo hờ thong phõn loai Takhtajan 1987, chi Berchemia thuục: Ho Tõo ta: Rhamnaceae Bụ Tõo ta: Rhamnales Phõn lụp Hoa hụng: Rosidae Lụp Ngoc lan: Magnoliopsida Ngnh Ngoc lan: Magnollophyta 1.1.2 Phõn bụ ho Tõo ta - Rhamnaceae [16] Ho Tõo ta trờn thộ giụi co khoõng 60 chi v hon 900 loi, phõn bụ trờn ton trõi dõ't nhung tõp trung cõc vựng nhiờt dụi v nhiờt dụi, mụt phõn ụn dụi (Takhtajan 1966) ễ Viờt Nam, ho Tõo ta co 12 chi, 43 loi 1.1.3 Dõc diởm thyc võt ho Tõo ta - Rhamnaceae [17], [3] Cõy bui hay gụ nhụ, cụ dõy leo Cnh co long hay gai Lõ don moc so le, nguyờn hay khia rang, thuong cụ 3-5 gõn goc noi rụ Lõ kốm nhụ dở rung hay hợnh gai Cum hoa: xim, chu, hoa nhụ, dờu, luụng tmh 4-5 lõ di dmh lai vụi gục, phn trờn tõch rụi v nhụ 4-5 cõnh hoa roi nhau, rat nhụ, dụi khụng cụ, 4-5 nhi Dùa tuyộn mõt dy, 2-5 lõ noõn, bu 2-5 ụ, mụi ụ mụt noõn, bõu thuong hay an sõu dùa tuyộn mõt, dung dộ hoa hùnh chộn, tiộn tụi bu trung hay bu Quõ hach hay cụ cõnh Hat cụ nụi nhỹ So dụ hoa: * K4.5 C4.5 A4.5 Gq_5) 1.1.4 Dõc diởm thuc võt chi Berchemia [20 ] Cõy nhụ, dõy leo Lõ moc cõch, gõn lõ thng, song song Cum hoa gụm nhiờu hoa tõp hop thnh bụng, hoa luụng tmh; cum hoa moc ụ nõch lõ hoõc ngon cnh Di cụ cõnh, dang ong Dợa mõt trựm lờn ong di,mộp nguyờn Bu ụ; voi nhuy kiởu chờ dụi Qu hach, phia dirai duoc bao phỹ bụi ong di; Vụ qu cỹng co ngõn, mang hat, nhiờu phõn hoa - Phõn bụ: Vựng nhiờt dụi chõu A, chõu Phi v chõu M 1.1.5 Dõc diởm thirc võt cỹa mot sụ loi thuục chi Berchemia, ho Tõo ta Rhamnaceae [12], [15] 1.1.5.1 Berchemia lineata (L.) DC [15] Tờn Viờt Nam: Rung rue, rut de, dụng bợa Mụ t: Cõy nhụ dang bui leo cao 1-4 m, cnh non mõnh co mu xanh nhat, khụng long La moc so le; phiộn nhụ, xoan, bõu duc, di 1,5-2,5 cm, rụng 0,7-1,2 cm, tự hai dõu, gõn phu 5-6 cap noi rụ, gn song song; cuụng 5-7 mm Hoa moc thnh chựm dõu cnh hay nõch la; hoa nhụ mu trng, mõu 5, cõnh hoa di hon di, thuụn, cụ mụng nhụ ụ phia duụi; dợa mõt dy, mộp chia thu, bu an dợa mõt, ụ Qu hach di 5-6 mm, hùnh trỹng, mu den; hat 1.1.5.2 Berchemia giraldiana Schneid.( B poilanei Tard.) [12], [15] Tờn Viờt Nam: Rung rue lõ lụn, rung rue Poilane Mụ tõ: Dõy leo cao 20 m, cnh non cụ mu vng lue, khụng long Lõ cụ phiờn bu duc di 3,5-7 cm, rụng cm, gục trụn hoi lụm khụng long, mụng; gõn phu 10-11 cap; gõn bõc nhiờu, hùnh thang, cuụng lõ 1,5 cm Chu hoa nõch lõ di 6-20 cm; hoa mu trng cụ dụm nõu Qu hach, mu nõu tfa den di 11 mm 1.1.5.3 Berchemia floribunda (Wall ) Brongn.[15] Tờn Viờt Nam: Rung rue nhiờu hoa Mụ t: Cõy nhụ moc thnh bui cao m, cnh non cụ mu vng lue Lõ cụ phiộn xoan rụng, di 4-7 cm, rụng 2,5-3,5 cm, dõu tự cụ mỹi, gục trụn hay ct ngang, gõn phu 7-10 cap, cuụng di cm Chựy hoa ngon nhõnh, cao 5-6 cm Nhõnh di 2-3 cm; lõ di 5, cõnh hoa 5, nhụ hon lõ di, nhi dmh truục cõnh hoa; dùa mõt to Quõ hanh xoan di 0,8-1 cm 1.1.5.4 Berchemia loureiriana Lee [12] Tờn Viờt Nam: Rut rộ, rung rut, rõo rõo Mụ ta: Tiộu mục leo cao m; cnh non mõnh, khụng long Lõ co phiộn nhụ, xoan, bu duc, kich thuục 1,5-2,5 x 0,7- 1,2 cm, tự hai du, gõn phu 5-6 cap; cuụng dy 5-7 mm Chựm nõch lõ; hoa nhụ, trng; cm; cõnh hoa di mm; dợa mõt dy; noõn so ụ Quõ nhõn cung di 5-6 mm, mu den, hat 1.1.5.5 Berchemia franchetiana (Lesvl.) Johs [ 12 ] Tờn Viờt Nam: Biờt sõm Franchet Mụ tõ: Tiởu mục leo Lõ cụ phiộn bu duc kfch thuục 9-10 x 5-5,5 cm, du tự, dõy trụn hoi hùnh tim, gõn phu 15-18 cõp, gõn bõc nhiờu, hùnh thang ; cuụng di 1,5 cm Chựm-tu tõn cao 20 cm, nhõnh di Quõ cụ nhõn cung hùnh thoi cao mm 1.2 THNH PHAN HOA HOC Trong hõu hờt cõc ti lieu thu thõp duoc vờ cõc loi thuục chi Berchemia, chua thõy cụ nghiờn ctfu vờ thnh phõn hoõ hoc Riờng ti lieu Nhỷng cõy thuục v vi thuục Viờt Nam cỹa Dụ Tõt Loi cụ ghi cõy rung rue lõ nhụ (Berchemia lineata) cụ saponin, cụn cõc thnh phn khõc chua rụ [8 ] 1.3 TC DUNG V CễNG DUNG 1.3.1 Cõy rung rue lõ nhụ (Berchemia lineata DC.) [15] + Tõc dung: KhU U, chợ khõi, khir dm, giõm dau + Cụng dung Thuụng duoc dựng de tri: - Khõi huyờt lao phụi, viờm phộ qun cõp - Chõy mõu da dy v ruụt, chõy mõu cam, nụi thuong xuõt huyờt - Bờnh tinh thõn phõn lõp - Viờm gan, viờm tinh hon - Don ngõ, ton thuong dau nhỹ'c khụp xuong phong thõp - Dựng ngoi dộ tri viờm mự da, rõn dục cõn Dõn gian cốn dựng tri sot rột ia chy 1.3.2 Cõy rung rue lõ Ion (Berchemia giraldiana Schneid.) [15] + Tõc dung: Thanh nhiờt trự thõp, hoat huyột thụng lac chợ khõi hoõ dm, kiờn t ich + Cụng dung: - Viờt Nam: Chỷa tờ thõ'p, dau limg moi goi, sot rột v ợa chy - Trung Quoc: Tri phong thõp, dau nhuc khop, dau lu'ng, dau bung kinh, lao phoi, bờnh trng nhac, trờ em cam tich, viờm gan, giun vo ụng mõt, rõn dục cõn, don ngõ ton thuong 1.3.3 Cõy rung rue nhiốu hoa (Berchemia floribunda Brongn.) [15] - Tõc dung: Khu phong loi thõp, hoat huyột chợ thong, tõn ỹ' tiờu thỹng - Cụng dung: + Viờt Nam: Tri phong thõp dau nhuc xuong, dờ xong dau bung Dựng ngoi bụ gõy xuong + Trung Quục: Dựng de tri xo gan co trucmg, hong dn, nhiờt dục thai, kinh nguyờt khụng dốu; thõn duoc dựng tri phong thõp tờ dau, dau bung truục hnh kinh; lõ duoc dựng tri lao phoi, sung vu PHAN NGUYấN LIEU V PHĩONG PHP NGHIấN CĩU 2.1 NGUYấN LIEU Cõy v lõ tu'aợ cỹa cõy rung rue lõ to duoc thu hõi tai tợnh Cao Bõng vo thõng den thõng nõm 2002 Dem phai v sõy khụ de lm thuc nghiờm 2.2 PHITONG PHP NGHIấN CĩU 2.2.1 Vờ mõt thyc võt + Mụ tõ dõc diởm hùnh thõi ton cõy theo phuang phõp ghi ti lieu Thuc võt hoc [4], Hinh thõi thuc võt [13] + Lm vi phõu v nhuụm kộp theo phuong phõp ghi ti lieu Bi ging duoc lieu [ 1], Thuc tõp duoc lieu [2] v Hùnh thõi thuc võt [13] - Vi phõu sau nhuụm kộp duoc quan sõt du'ụi kmh hiởn vi v chup õnh - Cnh v lõ duoc nghiờn thnh bot min, dem quan sõt duai kợnh hiởn vi v chup õnh 2.2.2 Ve m õt hoa hoc + Dinh tợnh theo phuong phõp hoõ hoc ghi ti lieu Bi ging duoc lieu [1], Thuc tõp duoc lieu [2] v Phuong phõp nghiờn cỹu hoõ hoc cõy thuục [ 11 ] + Dinh tmh flavonoid bang SKLM vefi bõn mụng silica gel GF254 (MERCK) dõ trõng sõn theo ti lieu Phuong phõp nghiờn ciru hoõ hoc cõy thuục [ 11 ] + Xõc dinh chù sụ bot theo ti lieu Bi ging duoc lieu, tõp [1], Thuc tõp duoc lieu [2 ] + Dinh lu'ỗmg flavonoid ton phõn, saponin ton phõn bõng phuong phõp cõn theo ti lieu Bi ging duoc lieu, tõp [ 1], Hoõ hoc saponin [10] + Phõn lõp flavonoid bng sõc k cụt theo ti lieu Phuong phõp nghiờn cỷu hoõ hoc cõy thuục [ 11 ] + Do dụ am trờn mõy Sartorius tai bụ mon Duoc liờu-Truụng dai hoc Duoc H Nụi + Do tỹ ngoai (UV) trờn mõy UV-VIS Spectrophotometer cary IEvarian (Australia) tai Phong thi nghiờm trung tõm, Tru'ụng dai hoc Duoc H Nụi + Do hụng ngoai (IR) trờn mõy FI-IR Spectrophotometer 1650-Perkin Elmer tai phong thi nghiờm trung tõm, Trirng dai hoc Du'oc H Nụi + Do khụi (MS) trờn mõy 5989-B-MS tai Phong cõu trỹc-Viờn hoõ hoc -Trung tõm khoa hoc tu nhiờn v cụng nghờ quục gia 2.2.3 Thu tõc dung sinh hoc 2.2.3.I Tõc dung chong oxy hoõ: + Thỹ tõc dung chụng oxy hoõ bo vờ tộ bo gan v nõo chuụt Viờc dõnh giõ tõc dung chụng peroxi hoõ lipid mng tộ bo duoc thuc hiờn qua viờc xõc dinh hm luong malonyl dialdehyd (MDA), mot sõn phõm trung gian cỹa quõ trùnh ny dua theo phuong phõp dõ duoc miờu tõ bụi Jadwiga Robak (Ba Lan, 1987) v Mitsno Tanaka (Nhõt Bõn, 1994) vụi mot sụ thay doi nhụ Nguyờn l cỹa phuong phõp l MDA, mot sn phm duoc tao quõ trinh peroxi hoõ lipid, cụ thộ phn ỹng vụi acid thiobarbituric dộ tao phrùc trimethin cụ mu hụng v cụ dợnh hõp thu eue dai 530-532 nm Phõn uùig cỹa MDA vụi acid thiobarbituric : ^ Malonyl dialdehyd Thiobarbituric acid O H H O hV V < U c h -(U r - V * ^ H phựe hop Trimethine Cu'ong dụ mu cỹa dung dich t le thuõn vụi nong dụ MDA Hm lu'ỗfng MDA l sụ nmol MDA to chirc v tmh theo cụng thuc: E x 3,2 x MDA = = 30,8 x E ,1 x Trong do: E : Dụ hõp thu quang : Thộ tich mõu quang 3,2 : The tich ton phn cỹa mõu phõn tich : The tich dich de xõc dinh MDA 0,156 : Dụ hõp thu cỹa dung dich MDA ImM/g duoc dobng Cuvet cụ dụ dy cm, tai buục sụng 532 nm theo cõcdiờu kiờn thi nghiờm cỹa Jadwiga Robax Hoat tmh chụng oxy hoõ (AOA) duoc tmh theo cụng thỹ'c: AOA (%) = 100 - -MDA| x 100 MDA0 Ghi chu: MDA,: Luong MDA tao thnh cỹa dung dich chtfa chõt thỹ MDA0: Luong MDA tao thnh cỹa dung dich khụng chtra chõt thỹ + Xõc dinh hoat tmh don gục tu anion superoxide cỹa flavonoid ton phn Hoat tmh cỹa gục tu anion superoxide duoc xõc dinh theo phuong phõp cỹa Imanari v cụng su [19] bng cõch xõc dinh phtrc tao thnh giua anion superoxide O hờ xanthin/ xanthin oxydase v nitro blue tộtrazolium Hụn hop phõn ỹug gụm: 7001^1dd Na2C 0,05 M 50 |xl dd xanthin mM 50M-1 dd EDTA mM pl dd thỹ cõc nụng dụ khõc I och3 OCH CH3 OH O Hùnh 3.9 Cụng thuc cõu tao chõt TA, 3.3 KẫT QU NGHIấN CĩtJ TC DUNG SINH HOC 3.3.1 Thir dục tinh cõp 3.3.1.1 Chuatt bi mõu thỹ Lõy 200 g bụt duoc lieu (thõn v lõ) dõ duoc sõy khụ, chiột bng nuục trờn bộp diờn ln Thụi gian chiột nhu sau : Ln : 500 ml nuục giụ 30 phỹt, Ln 2: 200 ml nuục giụ, Ln 3: 200 ml nuục giụ Gụp cõc dich chiột, bục hoi cõch thu tụi dang cao long 2:1 (1 ml cao long tuong duong vụi 2,0 g duoc lieu) 3.3.1.2 Tien hnh Cho chuụt uụng bng kim cong dõu tự, dua dich chiột cõy rung rỹc lõ to vo thõng da dy chuụt (khuõy dờu dich chiột truục cho chuụt uụng) Thi nghiờm duoc tiộn hnh trờn 60 chuụt, chia lm nhụm duoc bụ tri v cho uụng djch chiột dõ chuõn bi trờn vụi cõc mỹc liờu khõc Theo dụi chuụt thụi gian ngy sau cho chuụt uụng mõu thỹ 3.3.1.3 Kột quõ Kột quõ thf nghiờm duoc ghi ụ bng 3.7 28 Bõng 3.7 Kột quõ thir dục tmh cõp cựa dich chiột duoc lieu rung rue lõ to Sụ chuụt Lieu dựng (g duoc liờu/kg chuụt) thi nghiờm Nhụm chỹng 10 Sụ chuụt chột Thở tfch cho uụng (ml cao lụng/10 g chuụt) 1,0 ml nuục cõt 0,6 ml dich chiột 60,0 10 0,8 ml dich chiột 80,0 10 1,0 ml dich chiột 100,0 30 Nhụm - Sau uụng, chuụt nhụm chỹng (nhụm 1) hoat dụng, an uụng bợnh thuong - Chuụt nhụm 2, 3, cụ biởu hiờn giõm hoat dụng khoõng 30-60 phỹt, khụng õn uụng Sau dụ chuụt dõn Ira lai hoat dụng, õn uụng bợnh thuong Khụng cụ chuụt no chởt thoi gian theo dụi - Chuụt nhụm uụng mot lõn thuục thỹ tụi lieu dựng tuong duong 100,0 g duoc liờu/kg thở trong, khụng nhõn thõy biởu hiờn ngụ dục 3.3.I.4 Kột luõn: - Dich chiột nuục duoc lieu rung rỹc lõ to khụng cụ LD50 - Liộu khụng chột LD0 = 100 g duoc liờu/kg chuụt 3.3.2 Thu" tac dung chong oxy hoõ 3.3.2.I Xõc dinh hoat tinh don goc tu anion superoxide O 2* cỹa flavonoid ton phõn chiột tự cõy rung rỷc lõ to - Mõu thự l flavonoid ton phõn chiột tự thõn cõy rung rỹc lõ to - Hoõ chat: Na2C 3, xanthin, EDTA, dờm phosphate (PBS), nitro blue tộtrazolium, CuCl2, xanthin oxidase - Kột quõ Mõu thỹ duoc ho tan PBS, chon liộu thich hop cho thỹ hoat tmh don gục tu O Kột quõ thỹ so bụ cho thõy dung dich cỹa mõu thỹ cụ mu 29 xanh tfm v dụ dõm thay dụi theo nụng dụ tir |ig/ml dộn 40 (J-g/ml Vi võy, mõu thuduoc chu an bi bng cõch pha loõng de cụ dung dich thỷ l jj,g/ml Kột quõ duoc ghi bng 3.8 Bõng 3.8 Tõc dung cỷa dich thỷ (xg/ml dụi vụi su tao thnh anion superoxide hờ xanthin/xanthin oxidase Mõu Thetfdimõu BựPBS duavo(|il) W 50 Nụng dụ mõu thỷ(fxg/ml) ậ SD 0,354 0,002 % so vụi dụi chỹng 100 Dụỹc chộ(%) 45 0,281 + 0,003 79,38 20,62 10 40 10 0,267 0,001 75,42 24,58 20 30 20 0,242 0,001 68,36 31,64 25 25 25 0,225 0,003 63,56 34,44 Nhõn xột: Kột quõ thi nghiờm cho thõy, mõu thỹ cụ tõc dung ỷc chộmanh su: tao thnh goc tu hờ xanthin/xanthin oxidase Khi tõng nụng dụ, dụ ỷc chờ'cỹng tõng lờn Tuy nhiờn, tõng tiờ'p nụng dụ, mu cỹa dung dich s i õnh htfõng dờn kột quõ quang nờn cõc thi nghiờm chi duac tien hnh vụi cõc nụng dụ nờu trờn 3.3.2.2 T hỹ tõc dung chong oxy hoa bõo vờ tộ bo gan v nõo chuụt - Mõu thỹ : Flavonoid ton phõn duoc pha loõng vụi nuục theo tợ le 1:1 (Cõn mg flavonoid ton phn pha 1ml nuục cõt duoc dung dich thỷ cụ nụng dụ C= lmg/ml) - Bụng võt thi nghiờm: Chuụt nhõt trõng chỹng Swiss cụ lu'o'ng 20 g dat tiờu chun thi nghiờm - Kột quõ: Cõc dich chiột duoc chun bi ụ cõc nụng dụ duoc goi l nụng dụ ban du Sau dụ tiộn hnh thi nghiờm vụi cõc nụng dụ pha loõng khõc nham tim duoc cõc nụng dụ thợch hop, cụ thộ xõc dinh duoc nụng dụ ỷc chộ 30 50% X E SD l hm luong MDA trung bợnh tmh theo mol Dung dich thir co nụng dụ C=lmg/ml duoc dua vo cõc ụng phn Ung vụi cõc liờu luong khõc theo bng 3.9 v bng 3.10 Bng 3.9 : Kột qu thir hoat tmh chụng oxy hoõ cỷa flavonoid ton phn trờn dich dụng thở tộ bo gan chuụt Dung dich flavonoid Mõu Thở tich (ml) Nụng dụ (mg/ml) Chỹng 0,000 Thir Mõt dụ quang MDA (nmol/1) AOA (%) 0,000 X F + SD 0,273 0,02 X MDA SD 7,71+ 0,07 0,00 0,100 0,050 0,188 0,03 5,29+ 0,09 31,40 Thir 0,200 0,100 0,140+0,004 3,96+ 0,12 48,64 Thỹ 0,300 0,150 0,119 + 0,003 3,36+ 0,08 56,42 Thir 0,400 0,200 0,103 + 0,003 3,06+ 0,08 60,31 Thir 0,500 0,250 0,097 + 0,002 2,74+ 0,06 64,46 Bõng 3.10: Kột quõ thir hoat tmh chụng oxy hoõ cỷa flavonoid ton phn trờn dich dụng thở tộ bo nõo chuụt Dung dich flavonoid Mõu Thở tich (ml) Nụng dụ (mg/ml) ChUng 0,000 Thir Mõt dụ quang MDA (nmol/1) AOA (%) 0,000 X P + SD 0,282+ 0,01 SD 7,87+ 0,33 0,00 0,100 0,050 0,208 + 0,009 5,87+ 0,25 25,41 Thir 0,200 0,100 0,188 + 0,003 3,31+ 0,08 32,53 Thir 0,300 0,150 0,168 + 0,002 3,74+ 0,07 39,77 Thỹ 0,400 0,200 0,136 + 0,001 3,83+ 0,04 51,33 Thỹ 0,500 0,250 0,123 + 0,006 3,35+ 0,07 31 ^ MDA 57,43 Trong do: MDA: Luong manonyl dialdehyd ( nmol/lit) AOA: Hoat tmh chụng oxy hoõ Hoat tmh chong oxy hoõ cựa flavonoid chiột tự thõn cõy rung rỹc lõ to trờn tộ bo gan v nõo chuụt thộ hiờn trờn cõc biởu dụ o hinh 3.9 v 10 AOA(%) MC MT1 MT2 MT3 MT4 MT5 Su thay doi AOA Hùnh 3.10 Hoat tmh AOA thự trờn tộ bo gan chuụt AOA% MC MT1 MT2 MT3 Siù thay doi AOA MT4 MT5 MC: Mõu chuan MT: Mõu thu Hinh 3.11 Hoat tmh AOA thự trờn tộ bo nõo chuụt 32 Nhõn xột: Qua bõng 3.9, 3.10 v qua hai biởu dụ 3.10, 3.11 cho thõy hoat tinh chụng oxy hoõ tõng theo nụng dụ cỹa flavonoid ton phõn thõn cõy rung rỷc lõ to thỹ trờn te bo gan v nõo chuụt Kột qu thuc nghiờm cho thõy nụng dụ 0,250 mg/ml flavonoid ton phõn co hoat tmh chụng oxy hoõ dat 64,46% thu* trờn tộ bo gan chuụt v 57,43% thir trờn tộ bo nõo chuụt diờu kiờn thi nghiờm 33 PHN KẫT LUN V DE NGHI 4.1 KẫT LUN Sau thi gian lm thuc nghiờm, chung tụi dõ thu duac kột quõ sau: > Ve thyc võt: - Dõ mụ ta dõc diởm hùnh thõi thuc võt cỷa cõy rung rue lõ to, lõy duoc mõu cõy v chup nh cõy co quõ, GS Vỹ Võn Chuyờn dõ xõc dinh tờn loi cõy chỹng tụi nghiờn cỹu l: Berchemia giraldiana Schneid., ho Tõo ta Rhamnaceae (= Berchemia poilanei Tard.) - Dõ mụ t v chup nh vi phõu lõ v thõn cõy, dõc diởm bụt lõ v bụt thõn cõy rung rỹc lõ to gụp phn tiờu chun hoõ duoc lieu > Vờ thnh phn hoõ hoc: - Bng cõc phõn ỹng dinh tmh dõ xõc dinh lõ cõy co saponin, coumarin, tanin, du'ng, acid hựu co, carotenoid; thõn cõy cụ flavonoid, anthranoid saponin, coumarin, tanin, duụng, acid hựu co, carotenoid - Dõ dinh luong saponin lõ v thõn cho kột quõ hm luong saponin lõ (3,174%) cao hon thõn (2,176%) - Dõ xõc dinh chợ so bot cỹa saponin lõ l 80, thõn l 66,7 - Dõ dinh luong flavonoid ton phõn thõn bng phuong phõp cõn cho thõy hm luong dat 1,269 % 0,082 tmh theo duoc lieu khụ tuyờt doi - Dõ dinh tmh bng SKLM, cụ vột chõt vụi hờ dung mụi toluen-ethyl acetat-acid formic [5:6:1] - Dõ phõn lõp duoc flavonoid tinh khiột, k hiờu l TA, dua vo UV, IR, MS v so vụi thu viờn khụi Chỹng tụi nhõn dang TA, l:5,7 dihydroxy, \ \ trimethoxy flavon (C18Hl60 7) > Vờ tõc dung sinh hoc - Dõ thỹ dục tmh cõp vụi mỹc liờu 100 g/kg thở chuụt khụng cụ chuụt no chột chỹng tụ duoc liờu ợt dục 34 - Dõ thir tac dung chong oxy hoõ cỹa flavonoid ton phõn, kột quõ cho thõy flavonoid ton phõn chiột tự thõn cõy cụ tõc dung chong oxy hoõ khõ manh vụi liộu 0,250 mg/ml Hoat tmh chong oxy hoõ (AOA) dat 64,46% dụi vụi gan v 57,43% dụi vụi nõo chuụt Flavonoid ton phõn chiột tự thõn cõy cỹng cụ tõc dung ỷc chộ su tao thnh gục tu hờ xanthin/xanthin oxydase diờu kiờn thi nghiờm Nhỹng kột quõ vờ thnh phõn hoõ hoc cỹa lõ v thõn cõy rung rỹc lõ to v kột qu vờ thự dục tmh cõp cỹa dich chiột lõ v thõn cỹng nhu tõc dung chong oxy hoõ cỹa flavonoid ton phõn chiột tự thõn cõy l nhỷng cụng bụ dõu tiờn nghiờn cỹu vờ cõy ny 4.2 DE NGHI Vi thụi gian cụ han, nhỹng kột qu chỹng tụi thu duoc mụi chợ l buục dõu, dụ chỹngtụi dờ nghi cõn nghiờn cỹu tiộp vờ thnh phõn hoõ hoc v tõc dung sinh hoc dộ cụ thở dua cõy rung rỹc lõ to vo sỹ dung lm phong phỹ thờm kho tng cõy thuục Viờt Nam 35 TI LIEU THAM KHO [1] Bụ mon duoc lieu truụng dai hoc Duoc H Nụi (1998), Bi giõng duỗfc lieu, tõp 1, tõp 2, Trucmg dai hoc Duoc H Nụi [2], Bụ mon duoc lieu trucmg dai hoc Duoc H Nụi (1998), Thuc tõp duac lieu, Tru'cmg dai hoc Duoc H Nụi [3] Bụ mon thuc võt (1997), Bi giõng thuc võt duoc [4] Bụ mon thuc võt, Thuc võt hoc, Nh xuõt ban Y hoc, trang 260-261 [5] Bụ Y tộ (1996), Huụng dõn vờ khõo sõt dục tinh cap cỹa thuoc co truyờn, Tap chi Duoc hoc, sụ 5, 3-5 [6 ] Bụ Y tộ (1996), Huụng dõn vờ nghiờn cỷu duoc ly thuoc co truyờn, Tap chi Duoc hoc, sụ 5, 4-6 [7] Bụ Y tộ (1996), Qui chờ dõnh giõ tợnh an ton v hiờu lue thuoc co truyờn ban hnh (Ban hnh theo quyột dinh sụ: 371/BYT-QD cỷa Bụ trucmg Bụ Y tộ [8 ] Dụ Tõt Lỗfi (1999), Nhỹng cõy thuoc v vi thuoc Viờt Nam, Nh xuõt bn Khoa Hoc K Thuõt H Nụi, trang 534-535 [9] Dụ Trung Dm (1996), Phuong phõp xõc dinh dục tợnh cap cỹa thuoc, NXB Y hoc [10] Ngụ Vn Thu (1997), Hoõ hoc Saponin, Truụfng dai hoc Y Duỗfc thnh Hụ Chi Minh [11] Nguyờn Võn Dn, Nguyờn Viột Tuu (1985), Phuong phõp nghiờn cỷu hoõ hoc cõy thuoc, Nh xuõt ban Y hoc thnh Hụ Chi Minh [12] Pham Hong Hụ (2000), Cõy cụ Viờt Nam II, Nh xuõt bõn Trố, trang 445- 446 36 [13] Trn Cụng Khõnh (1996), Hinh thõi thuc võt, Tritụng dai hoc Duoc H Nụi [14] Vụ Van Chi, Dirong Dỷc Tien (1978), Phõn loai hoc thuc võt, Nh xuõt bn Dai hoc v trung hoc chuyờn nghiờp [15] Vụ Võn Chi (1997), Tự diộn cõy thuục, Nh xuõt bõn Y hoc, trang 1003-1004 [16] Vỹ Võn Chuyờn, Lờ Trn Chõn, Trõn Hop 1987, Dia l cõc ho cõy Viờt Nam, Nh xuõt bõn Khoa Hoc K Thuõt, H Nụi, trang 158-159 [17], Vỹ Võn Chuyờn, Tõm tat dac õiờm cõc ho cõy thuục, Nh xuõt bõn Y hoc 1976, trang 157-158 [18] A Wallace Hayes (1994), Principles and Methods o f Toxicology, Third Edition, Raven Press, New York [19] Imanari, T., Hirota M (1977), Improved assay method for superoxyde dismutase, Igaku no Ayumi, 101, 496-497 [20] Lecomte M.H (1808), Flore gộnộrale de L 'indochine, Tom 1, 923 37 PHU LUC Bien bõn dinh tờn cõy rung rue lõ to ? Anh cõy rung rue lõ to Hùnh 3.1: Mõu cõy tuoi co quõ ? t ^ Hùnh 3.2: Anh chup vi phõu lõ cõy rung rue lõ to ^ Hùnh 3.3: Anh vi phõu thõn cõy rung rỷc lõ to t e, Hùnh 3.4: Anh cõc dõc diờm bụt lõ duoc liờu 9 Hùnh 3.5: Anh chup cõc dõc diờm bụt thõn duoc liờu Hùnh 3.7: Sõc k dụ flavonoid ton phn so sõnh vụi quercetin v rutin Hùnh 3.8: Sõc k kiộm tra dụ tinh khiột chõt ATI Pho : Pho tu ngoai (UV) Ph6 hụng ngoai (IR) Ph6 khoi (MS) ĩ li s Bẽ! SJlùE ùÊrt o i n ngi d i ộiùa nõu : ? xờn cd quan : hoc t r o cua th a y Ky : c h iờ u t o i ngy 30/ 3/2003 rigy dỹa cõu So lijdng isõu v õ t : t a c õnh x , cụ thỷdc d l e mõu cõy khụ dung cõỗh , co cõ mat cua l a ợ n cõy g h i nhvfng KHễHG^Cễ HOA QU La : 5ce : Run^ rỷc l a lrin Ndi th u oau : Cao Bng ngy th u mõu : 05-08- 2003 ??? I T il L Iấ U THAJợ KHO x ,5 cs.'Cuong2cù : kkt Phan Hoằ*r l ỗ - Cõy co V iờ t Ham Kh x u a t ban t r ố - 2000- t r a n ằ so 5?47- B e r e h e a ia l o u r e i r i o n a Lee Rut r e , Rung r u t , R a o rõ o Supple J a c k Thõn ộựns: San re , re t r i t t h a p , dau l t f n * , t r i o t , i a Leaves - cm l o n g , So 5?44 - Berchemia f lo r i b u n d a (W all, )3rongn.' B i t sam n h iố u hoa Leaves o v ate 5745' - B e r e h e s ia f r a n c h e t i a n a (L ev l,* Jo h n s.Ê > iet s õ n r r a n c h e t ù o c a i 5?46 - Berchemia g i r a r d i a n a SCHn B iỗ t sn G ir a rd le a v e s x cm d ie n bõ^fe khoa dtfrfe hoc Nh r u õ t bõằ tCf d ie n M bõch khoa 19^9 tram ? 540, so 43 Bercheatia l i n e a t a (L.)DC Rut r e Bonr b i a Ct ch u ỗt cõu n h i t r õ lõ o to n , thtf dống ko Tao t a Rhamnaceae cõy chuta sap o n in lm dõy buoc , ben re l o t tioi , v v , Ơụ Vởn C h i - T\ợt d ie n cny thu'ục v i e t Nam 8h x u õ t ban x hoỗ l ^ y , t r a n g 100^ So Rung rỷc l a I d n , nung rỷc P o i l a n e * ^1R'1 B erchem ia g i r a l d i a n a c h n e i d - B erchem ia p o i l a n e i i a r d , - 7*đ c ằ rụn g cđ gõn cubng l õ , e ằ Chỹa La d i phu - 1 cap , crõn bõe n h i u , h i n h fcờ th õ p dau ltfng moi g o i , chỹa s o t th a n g r ộ t v xa chõv So 178 ỹung rỷ c r ỷ t d e ,d o n g b i a Bercheraia l i n e a t a La , - , cm x O , / - , cm uong t>- f mm 160 Kung rỷc n h iờ u hoa hinh (L )B ĩ k in h Berchemia f lo r i b u n d a ( W a l l , r x>rongn cOfT-, k So l a t L j i - Nhtfns* cõy t h u o c v v i thuoc V iờt Kara KXB Y hỗc 1999 Tran* 534 h in h l4 Berchemia l i n e a t a (L.)DC I I KấB Q.ui VI$C 8JHH TấH : ho Tao t a Rkanna^ea* ù n kbõằ hoc : Berchem ia G ir a r d ia n a S c h n e i d H tfụi l l h 3 /5 /2 0 Kgtùdi d in h t n : Vu V*n Chuyởn I HẽNH 3.1 NH CHUP CY RUNG RĩC L TO TAI TẻNH CAO BNG HẽNH 3.7: NH CHUP SC K DO FLAVONOID TON PHAN SO SNH VễI QUERCETIN V RUTIN t* n A V-l _ HINH 3.8: ANH CHUP SAC KY KIEM TRA DO TINH KHIET CHAT TAI HINH 3.2: NH CHUP VI PHU L CY RUNG RĩC L TO HINH 3.3: NH CHUP VI PHU THN CY RUNG RĩC L TO HẽNH 3.4: NH CHUP CAC DC DIEM BễT L DUOC LIấU HẽNH 3.5: NH CHUP CC DC DIEM BễT THN DUOC LIấU [...]... Cụ Cụ Kột luõn: Trong thõn cõy rung rue lõ to cụ antranoid, flavonoid, saponin, coumarin, tanin, õudng khỹ, acid hỹu co, carotenoid Trong lõ cõy rung rue lõ to cụ saponin, coumarin, tanin, õudng khỹ, acid hỹu co, carotenoid 3 2 2 Kột quõ nghiờn cuti vờ saponin 3.2.2.I Dinh luong saponin ton phõn Cõn chợnh xõc khoõng 10g bụt duoc lieu, xõc dinh dụ am bng mõy do dụ õm Sartorius cỹa Dỷc tai Bụ mon duoc... 5x6 Kờt qu: 2 x 1 0 x 100 CSB = ^ ^ = 80 Kột luõn: Chi so bot cỹa saponin trong duoc lieu thõn cõy rung rỷc lõ to l 66,7; trong lõ cõy rung rỷc lõ to l 80 3.2.3 Kờt quõ nghiờn cuu vờ flavonoid 3.2.3.I Dinh luong flavonoid ton phõn Cõn chmh xõc khoõng 20 g duoc lieu, xõc dinh dụ õm bng mõy do dụ õm Sartorius cỷa Diic tai Bụ mon duoc lieu Cho duoc lieu vo tỹi loc Dõt tỹi vo bợnh Soxhlet roi chiờt loai... khụng chột LD0 = 100 g duoc liờu/kg chuụt 3.3.2 Thu" tac dung chong oxy hoõ 3.3.2.I Xõc dinh hoat tinh don goc tu do anion superoxide O 2* cỹa flavonoid ton phõn chiột tự cõy rung rỷc lõ to - Mõu thự l flavonoid ton phõn chiột tự thõn cõy rung rỹc lõ to - Hoõ chat: Na2C 0 3, xanthin, EDTA, dờm phosphate (PBS), nitro blue tộtrazolium, CuCl2, xanthin oxidase - Kột quõ Mõu thỹ duoc ho tan trong PBS, chon... 2: Ethyl acetat: acid formic: nuục [19:1:1] Hờ 3: Ethyl acetat: methanol [8:2] Hờ 4: Aceton: nuục [1:1] Hờ 5: Cloroform: acid acetic: aceton [75: 25: 10] Hờ 6 : Ethyl acetat: toluen: methanol [2:2:1] Hờ 7: Toluen: ethyl acetat: aceton: acid formic [5:2:2:1] Hờ 8 : Toluen : ethyl acetat : acid formic [5 :6 : 1] Hờ 9: Ethyl acetat : cloroform : acid formic [3 :3 :1] Hờ 10: Ethyl acetat: butanol: acid... thuục co truyờn ban hnh kốm theo Quyờt dinh sụ 371/BYT-QD ngy 12/3/1996 cỹa Bụ Y tộ [7], - Principles and Methods of Toxicology-A.Wallace Hayes, 1994 [18] 9 Phn 3 THUC NGHIấM V KET QU 3.1 KẫT QU NGHIấN Cĩtl VE THUC VT 3.1.1 Dõc diởm thuc võt cõy rung rue lõ to Quan sõt mõu cõy rung rue lõ to (hùnh 3.1 phn phu lue) thu duoc tai tinh Cao Bõng chỹng tụi thõy co cõc dõc diởm nhu sau: Cõy moc thnh bui, song... tinh vụi cõ thõn v lõ) Kột luõn: Thõn v lõ cõy rung rỷc lõ to cụ tanin 15 3.2.I.7 Dinh tinh õixng khỹ tu do Cho vo ong nghiờm khoõng 2 ml dich chiờt nuục duoc lieu, thờm 0,5 ml thuoc thir Fehling A v 0,5 ml thuục thir Fehling B Dun soi cõch thu vi phỹt Xuõ't hiờn tua mu dụ gach (phõn ỷng duong tợnh vụi cõ thõn v lõ) Kột luõn: Thõn v lõ cõy rung rỷc lõ to chỷa duụng k h ỹ 3.2.1.8 Dinh tmh acid hỹu... cho toi khi dich chiột khụng mu Chiột bõ duoc lieu bng methanol cho toi khi dich chiột trờn bợnh trong suụt v khụng cho phõn ỹng vụi H2S0 4 dc Loc, cõ't thu hụi dung mụi, dich chiột cụn khoõng 20 ml, rot tự tự vo 100 ml aceton thõy xuõt hiờn tỹa Loc lõy tựa trờn phờu loc nờn dõ sõy khụ v cõn bợ Sõy phờu loc 80C dộn khụl luong khụng doi Cõn phờu roi tmh ra hm luong theo cụng thỹc: v Hm luong saponin ton... nguụi quan sõt trờn kmh hiởn vi: - Thi nghiờm ụ bụt thõn duoc lieu: Tinh thở mu vng nhat - Thi nghiờm ụ bụt lõ duoc lieu: Khụng cụ tinh thở Kột luõn: Cụ anthranoid ụ thõn cõy rung rỷc lõ to Khụng cụ anthranoid ụ lõ cõy rung rỷc lõ to 16 3.2.1.10 Dinh tinh steroid Lõy 10 g bụt duoc lieu, cho vo cõc binh non dung tich 250 ml, thờm 40 ml cụn 25 ngõm trong 24 giụ, gan dich chiờt, loai tap bng chi acetat 30... hiờn vụng dụ tim trờn mõt phõn cõch (Phõn ỷng õm tinh või cõ thõn v lõ) Kột luõn: Thõn v lõ cõy rung rỷc lõ to khụng cụ steroid 3.2.1.11 Dinh tinh chõt bộo Nhụ dich chiờt cloroform lờn t giõ'y loc, ho khụ Khụng dộ lai vờt mụ trờn giõy loc (phõn ỷng õm tinh või cõ thõn v lõ) Kột luõn: Thõn v lõ cõy rung rỷc lõ to khụng chỷa chõt bộo 3.2.1.12 Dinh tinh carotenoid Lõy 5ml dich chiờt CHC13 cho vo ụng nghiờm... chiột duoc lieu rung rue lõ to Sụ chuụt Lieu dựng (g duoc liờu/kg chuụt) thi nghiờm Nhụm chỹng 10 Sụ chuụt chột 1 Thở tfch cho uụng (ml cao lụng/10 g chuụt) 1,0 ml nuục cõt 2 0,6 ml dich chiột 60,0 10 0 3 0,8 ml dich chiột 80,0 10 0 4 1,0 ml dich chiột 100,0 30 0 Nhụm 0 - Sau khi uụng, chuụt nhụm chỹng (nhụm 1) hoat dụng, an uụng bợnh thuong - Chuụt nhụm 2, 3, 4 cụ biởu hiờn giõm hoat dụng trong khoõng ... 'indochine, Tom 1, 923 37 PHU LUC Bien bõn dinh tờn cõy rung rue lõ to ? Anh cõy rung rue lõ to Hùnh 3.1: Mõu cõy tuoi co quõ ? t ^ Hùnh 3.2: Anh chup vi phõu lõ cõy rung rue lõ to ^ Hùnh 3.3:... Hờ 4: Aceton: nuục [1:1] Hờ 5: Cloroform: acid acetic: aceton [75: 25: 10] Hờ : Ethyl acetat: toluen: methanol [2:2:1] Hờ 7: Toluen: ethyl acetat: aceton: acid formic [5:2:2:1] Hờ : Toluen :... tri sir dung cỹa duoc lieu rung rỹc la to, chỹng tụi thuc hiờn dờ ti: Nghiờn curu dõc diởm thuc võt, thnh phn hoõ hoc v mot so tac dung sinh hoc cỹa cõy rung rue lõ to Berchemia giraldiana Schneid.