Thông tin tài liệu
BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
NGUYỄN XUÂN THÀNH
ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH SẢN XUẤT
CAO HY THIÊM LÀM NGUYÊN LIỆU
SẢN XUẤT THUỐC HY ĐAN
LUẬN VĂN DƯỢC SĨ CHUYÊN KHOA CẤP I
HÀ NỘI 2015
BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI
NGUYỄN XUÂN THÀNH
ĐÁNH GIÁ QUY TRÌNH SẢN XUẤT
CAO HY THIÊM LÀM NGUYÊN LIỆU
SẢN XUẤT THUỐC HY ĐAN
LUẬN VĂN DƯỢC SĨ CHUYÊN KHOA CẤP I
CHUYÊN NGÀNH: CND & BC
MÃ SỐ:
Người hướng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Văn Hân
Nơi thực hiện: Trường ĐH Dược Hà Nội
Công ty CP Dược VTYT Thanh Hóa
Thời gian thực hiện: Tháng 1 đến tháng 5 năm 2015
Theo Quyết định số 42/QĐ-DHN
HÀ NỘI 2015
LỜI CẢM ƠN
Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Văn
Hân – Bộ môn Công nghiệp dược, trường ĐH Dược Hà Nội đã trực tiếp
hướng dẫn, giúp đỡ và chỉ bảo tận tình trong suốt quá trình tác giả thực
hiện đề tài.
Tôi xin trân trọng cám ơn Lãnh đạo Công ty CP dược VTYT Thanh
hóa, lãnh đạo nhà máy Đông dược, các phòng ban chức năng của công ty
đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi tìm hiểu và nghiên cứu, hướng dẫn và chỉ
bảo tận tình giúp tôi hoàn thành khóa luận.
Xin trân trọng cám ơn Ban giám hiệu, Phòng sau đại học, các thầy cô
trường ĐH Dược Hà Nội đã tạo điều kiện cho tôi học tập và nghiên cứu.
Trong quá trình nghiên cứu và viết luận văn, tôi còn nhận được sự
giúp đỡ rất nhiệt tình và những ý kiến đóng góp của TS. Phương Thiện
Phương – Khoa Hóa phân tích tiêu chuẩn Viện dược liệu. Tôi xin chân
thành cám ơn sự giúp đỡ quý báu đó.
Và xin gửi cảm ơn gia đình, các bạn bè đồng nghiệp đã ủng hộ, chia
sẻ và động viên tôi trong học tập cũng như trong cuộc sống.
Dù đã có rất nhiều cố gắng, song đề tài còn có thể có những thiếu
sót. Kính mong nhận được sự chia xẻ và nhận được những ý kiến đóng góp
quý báu của các thầy cô giáo, các bạn đồng nghiệp.
Tôi xin trân trọng cảm ơn!
Tác giả đề tài
Nguyễn Xuân Thành
MỤC LỤC
ĐẶT VẤN ĐỀ ............................................................................................... 1
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN ......................................................................... 3
1.1. Cây Hy thiêm ......................................................................................... 3
1.1.1. Nguồn gốc và tên khoa học ................................................................. 3
1.1.2. Đặc điểm hình thái .............................................................................. 3
1.3.3. Phân bố và bộ phận dùng ................................................................... 4
1.2. Thành phần hóa học của cây hy thiêm ................................................... 4
1.3. Công dụng và tác dụng sinh học của hy thiêm ...................................... 8
1.3.1. Công dụng ........................................................................................... 8
1.3.2. Tác dụng sinh học ............................................................................. 12
CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG
PHÁP NGHIÊN CỨU................................................................................. 15
2.1. Nguyên liệu .......................................................................................... 15
2.2. Dung môi và hóa chất .......................................................................... 15
2.3. Thiết bị và phương tiện nghiên cứu ..................................................... 15
2.3.1. Thiết bị sử dụng cho kiểm nghiệm.................................................... 15
2.3.2. Hệ thống chiết xuất của nhà máy sản xuất thuốc đông dược, công
suất 130-170 kg/mẻ: .................................................................................... 16
2.4. Phương pháp thực nghiệm: .................................................................. 18
2.4.1. Phương pháp xác định độ ẩm của dược liệu ..................................... 18
2.4.2. Xác định khối lượng riêng biểu kiến................................................. 18
2.4.3. Phương pháp chiết xuất hy thiêm...................................................... 18
2.4.4. Phương pháp định tính acid clorogenic và rutin trong dược liệu bằng
sắc ký lớp mỏng: ......................................................................................... 19
2.4.5. Phương pháp định lượng clorogenic acid và rutin bằng sắc ký lỏng
hiệu năng cao (HPLC) ................................................................................. 20
2.5. Nội dung và phương pháp nghiên cứu ................................................. 23
2.5.1. Xây dựng TCCS dược liệu Hy thiêm ................................................ 23
2.5.2. Đánh giá ảnh hưởng của độ mịn dược liệu ....................................... 24
2.5.3. Đánh giá ảnh hưởng của số lần chiết xuất ........................................ 24
2.5.4. Đánh giá ảnh hưởng của thời gian chiết xuất ................................... 24
2.5.5. Đánh giá 2 phương pháp cô đặc ....................................................... 25
2.5.6. Đề xuất quy trình sản xuất cao hy thiêm........................................... 25
2.5.7. Triển khai sản xuất cao Hy thiêm ..................................................... 25
2.6. Thời gian và địa điểm thực hiện nghiên cứu........................................ 25
CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ ....................................... 26
3.1. Xây dựng TCCS dược liệu Hy thiêm ................................................... 26
3.2. Đánh giá ảnh hưởng của độ mịn dược liệu .......................................... 31
3.3. Đánh giá ảnh hưởng của số lần chiết xuất ........................................... 32
3.4. Đánh giá ảnh hưởng của thời gian chiết xuất....................................... 33
3.5. Đánh giá 2 phương pháp cô đặc ........................................................... 35
3.6. Đề xuất quy trình sản xuất cao hy thiêm.............................................. 36
3.7. Triển khai sản xuất cao Hy thiêm ........................................................ 36
CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN ........................................................................... 38
4.1. Về nguồn nguyên liệu Hy thiêm .......................................................... 38
4.2 Về xây dựng các tiêu chuẩn cơ sở cho dược liệu và cao Hy thiêm ...... 38
4.3. Về quy trình chiết xuất Hy thiêm ......................................................... 39
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT ........................................................................ 39
Kết luận ....................................................................................................... 39
Đề xuất ........................................................................................................ 40
TÀI LIỆU THAM KHẢO ...............................................................................
DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CHŨ VIẾT TĂT
AC
: Acid clorogenic
BuOH
: Buthanol
CHCl3
: Cloroform
DL
: Dược liệu
EtOAc
: Ethyl acetat
EtOH
: Ethanol
HPLC
: Sắc ký lỏng hiệu năng cao
TLC
: Sắc ký lớp mỏng
MeOH
: Methanol
SP
: Sản phẩm
TB
: Trung bình
TLC
: Sắc ký lớp mỏng
TT
: Thứ tự
tt/kl
: Thể tích/ khối lượng
tt/tt
: Thể tích/ thể tích
GĐ
: Giai đoạn
HS
: Hiệu suất
HL
: Hàm lượng
DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU
Trang
Bảng 1:
Danh mục thiết bị sử dụng cho kiểm nghiệm, phân tích
15
Bảng 2 :
Điều kiện sắc ký lỏng hiệu năng cao
21
Bảng3:
Hàm lượng hoạt chất trong các mẫu hy thiêm
30
Bảng 4:
Ảnh hưởng của độ mịn dược liệu đến hiệu suất và chất 32
lượng cao
Bảng 5:
Hiệu suất chiết của từng lần chiết
33
Bảng 6:
Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất
34
Bảng 7:
Đánh giá 02 phương pháp cô đặc
35
Bảng 8:
Hiệu suất chiết xuất và hàm lượng hoạt chất trong sản 37
phẩm theo quy trình chiết xuất đề xuất
Hình 1
Sắc ký đồ TLC của các mẫu dược liệu Hy thiêm
Hình 2
Sắc ký đồ của mẫu chuẩn và mẫu thử dược liệu Hy thiêm 29
Sơ đồ 1
Hệ thống chiết xuất của nhà máy sx thuốc Đông dược 17
Công ty cổ phần Dược VTYT Thanh Hóa
Sơ đồ 2
Sơ đồ quy trình chiết xuất cao Hy thiêm
27
19
ĐẶT VẤN ĐỀ
Hiện nay, không chỉ Việt Nam mà trên thế giới, với xu hướng “trở về
thiên nhiên” thì việc sử dụng các thuốc từ dược liệu của người dân ngày
càng tăng hơn so với việc sử dụng thuốc tân dược. Theo Tổ chức Y tế thế
giới (WHO), khoảng 80% dân số tại các quốc gia đang phát triển, việc
chăm sóc sức khoẻ ít nhiều có liên quan đến YHCT hoặc thuốc từ dược
thảo truyền thống để bảo vệ sức khoẻ. Thế giới đang có xu hướng định hình
lại phương pháp nghiên cứu tìm ra các thuốc mới. Thay vì chỉ chú trọng
đến việc tổng hợp hóa học trong phòng thí nghiệm với nhiều khó khăn và
nhiều độc tính, các nhà khoa học dược, các tập đoàn dược phẩm lớn hiện
đang chú trọng vào sàng lọc từ thiên nhiên để tìm ra các hoạt chất sinh học
mới có dược tính mạnh hơn, ít độc hơn. Hướng tân dược hóa thuốc đông
dược đã và đang phát triển mạnh ở nhiều nước có nền công nghiệp dược
phẩm tiên tiến như Mỹ, Pháp, Nhật Bản, Hàn Quốc, Ấn Độ và đặc biệt là ở
Trung Quốc.
Ở nước ta, định hướng phát triển thuốc từ dược liệu đã và đang được
Cục Quản lý dược – Bộ Y tế đưa ra lộ trình và hướng dẫn cho các doanh
nghiệp sản xuất thuốc bởi Việt Nam là quốc gia có tiềm năng lớn về dược
liệu trong khu vực Đông Nam Á. Dược liệu thuốc Nam sẽ đưa ngành dược
Việt Nam hội nhập quốc tế bởi thị trường tiêu thụ dược liệu và các sản
phẩm dược liệu là rộng lớn với thói quen, truyền thống phòng và chữa bệnh
bằng Y học cổ truyền của nhân dân, đồng thời do không dùng lý luận phức
tạp nên thuốc Nam dễ dàng được chứng minh tác dụng trên cơ sở khoa học
hiện đại. Từ nghiên cứu hóa thực vật đến nghiên cứu tác dụng dược lý thực
nghiệm và lâm sàng đều có thể thực hiện được nhằm xác định rõ thành
phần, cơ chế, tác dụng của thuốc. Điều này phù hợp quan điểm của các
nước phát triển trong việc phát triển thuốc mới.
1
Năm bắt xu hướng và tình hình trên, công ty cổ phần dược VTYT
Thanh Hóa đã hoàn thành xây dựng nhà máy sản xuất thuốc từ dược liệu
đạt tiêu chuẩn ”Thực hành tốt sản xuất thuốc - GMP – WHO” từ tháng 4
năm 2013. Công ty đã và đang từng bước nghiên cứu, phát triển các sản
phẩm thuốc từ dược liệu, trong đó viên hoàn trị phong tê thấp Hy đan - một
trong những sản phẩm truyền thống, gắn liền với thương hiệu đang được là
sản phẩm đang công ty tập trung nghiên cứu nâng cao chất lượng sản phẩm
với định hướng kiểm soát chất lượng dược liệu ban đầu, chất lượng và hiệu
quả quy trình sản xuất.
Từ tình hình thực tiễn như trên, nhằm góp phần nâng cao chất lượng
sản phẩm Hy đan đồng thời tiết kiệm tối đa chi phí sản xuất, nâng cao sức
cạnh tranh của sản phẩm thuốc Hydan, đề tài “Đánh giá quy trình chiết
xuất cao mềm Hy thiêm định chuẩn làm nguyên liệu sản xuất thuốc Hy
đan” được thực hiện với những mục tiêu:
1. Xây dựng được tiêu chuẩn dược liệu Hy thiêm làm nguyên liệu chiết
xuất cao Hy thiêm phục vụ cho sản xuất thuốc Hydan.
2. Đánh giá một số yếu tố ảnh hưởng tới quá trình chiết xuất Hy thiêm
và đề xuất quy trình chiết xuất với các thông số tối ưu trên hệ thống
thiết bị của nhà máy sản xuất thuốc đông dược.
2
CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN
1.1. Cây Hy thiêm
1.1.1. Nguồn gốc và tên khoa học
Cây thuốc hy thiêm được dùng phổ biến hiện nay trong y học cổ
truyền và công nghiệp dược ở Việt Nam có tên khoa học Siegesbeckia
orientalis L. thuộc họ Cúc - Asteraceae. Còn có tên gọi khác là cỏ đĩ, chó
đẻ hoa vàng [1] [2] [4]. Giải thích tên gọi khác nhau này theo Đỗ Tất Lợi
[3], cây hy thiêm ban đầu được dùng tại nước Sở (miền nam Trung Quốc)
dân địa phương gọi lợn là hy, gọi cỏ có vị đắng cay có độc là thiêm. Vì vị
của cây này có mùi như con lợn nên gọi là hy thiêm. Tên cứt lợn là tên dịch
nghĩa Việt của câu này, do vậy cần phân biệt với các loại khác cũng được
gọi là cứt lợn như Ageratum conyzoides hay Lantana camara. Tên gọi cỏ đĩ
là do cây này có chất dính vào người đi qua nó.
1.1.2. Đặc điểm hình thái
Hy thiêm là cây thân thảo (cỏ), sống hàng năm, cao từ 30 - 90 cm. Phân
nhiều cành nằm ngang có lông, lá mọc đối hình quả trám, có khi tam giác
hay hình thoi mũi mác, dài 4 - 10 cm, rộng 3 - 6 cm, cuống ngắn phiến lá
men theo cuống, đầu nhọn mép lá có răng cưa không đều và đôi khi chia
đều ở phía cuống, 3 gân chính mảnh, mặt dưới lá hơi có lông. Cụm hoa
hình ngù có lá, đầu màu vàng có cuống dài từ 1 - 2 cm, mảnh, có lông.
Năm lá bắc ngoài to, hình thìa mặt trong có lông dính, mặt ngoài có tuyến,
lá bắc trong hình trái xoan ngược, hoa màu vàng, 5 cái ngoài là hoa cái
hình lưỡi, những hoa khác lưỡng tính hình ống, không có mào lông, tràng
có lưỡi ngắn. Quả bế hình trứng có 5 cạnh, góc nhẵn tròn ở đỉnh, gốc thuôn
dần, nhẵn, màu đen [4].
3
1.3.3. Phân bố và bộ phận dùng
Ở Việt Nam cây hy thiêm phân bố rộng cả về kinh độ và vĩ độ. Thường
mọc rải rác ở trung du, miền núi và đồng bằng từ các tỉnh Lào Cai đến
Nghệ An, có gặp ở một số tỉnh Tây Nguyên. Hy thiêm thuộc loại cây thảo,
thường mọc ở những nơi đất tương đối ẩm và màu mỡ, trên các nương rẫy.
Ở những khu đất ẩm màu mỡ trên các bãi sông, triền sông, trong các thung
lũng, nương rẫy, ruộng hoang, ruộng trồng ngô hoặc trong vườn nhà màu
mỡ thường gặp hy thiêm mọc hoang [3].
Vùng trung du, đồng bằng Bắc Trung bộ của Việt Nam, hy thiêm
thường mọc vào đầu mùa xuân (tháng 1 - 2); ra hoa kết quả từ tháng 3 - 6,
cây lụi vào cuối mùa hè (tháng 7 - 8). Miền núi cao trên 800 m trở lên so
với mặt biển, hàng năm cây mọc vào cuối mùa xuân (tháng 3 - 4); ra hoa
kết quả vào mùa thu (tháng 9 - 10), tàn lụi vào đầu mùa đông (tháng 11 12) [5].
Hạt hy thiêm trong tự nhiên có thời gian ngủ nghỉ dài dưới đất, cây
mọc theo thời vụ trong điều kiện độ ẩm của đất cao 80 - 90% trở lên, nhiệt
độ không khí từ 25 - 270C. Tỷ lệ cây mọc ngoài tự nhiên rất thấp, ước tính
khoảng 2 - 3% [4].
1.2. Thành phần hóa học của cây hy thiêm
Các nghiên cứu về cây hy thiêm cho thấy, thành phần hóa học chính của
cây này (và các loài cùng chi Siegesbeckia) gồm các terpenoid và
flavonoid. Các terpenoid gồm chủ yếu là diterpenoid thuộc nhóm entpimaran các glycosid của chúng và các sesquiterpen.
Năm 2004, Xiang và cộng sự phát hiện 8 hợp chất ent-pimaran
diterpenoid và diterpenoid glycosid mới cùng với các diterpen đã biết [20].
Cũng nhóm tác giả này vào năm tiếp theo đã phân lập được 5 chất thuộc
4
nhóm sesquiterpenoid. Gần đây, Wang và cộng sự đã tìm ra 6 hợp chất entpimaran diterpenoid mới từ dịch chiết ethanol hy thiêm [24].
Các nghiên cứu cũng khẳng định, thành phần hóa học của hy thiêm Việt
nam có chủ yếu diterpenoid (darutosid, orientin, orientalid) và flavonoid.
Nguyen Hai Nam đã phân lập được hai diterpen từ hy thiêm đặt tên là
kirenol và pubetalin và đã chứng minh độc tính trên tế bào ung thư của 2
chất này [19]. Lê Thị Kiều Nhi đã phân lập được trong hy thiêm Việt nam
có flavonoid và các terpenoid (darutosid). Trong đó quercetin-3rhamnoglucosid (rutin), một hoạt chất tự nhiên có nhiều ứng dụng điều trị,
với hàm lượng xác định được là 0,0185 % tính theo dược liệu khô. Trong
phân đoạn n-butanol, hàm lượng này là 2,65% [9]. Năm 2004, Phan Minh
Giang phát hiện một ent-pimaran glucosid mới trong cây hy thiêm và đặt
tên là hythiemosid B [15].
Theo Võ Văn Chi [1], toàn cây hy thiêm có chất đắng daturosid, orientin
(diterpen lacton) và 3,7 dimethyl quercetin
Theo Viện Dược liệu [4], hy thiêm có chứa daturosid (chất này thuỷ phân
cho glucose và darutugenol), orientin, orientalid và 3,7 dimethylquercetin:
Theo Phạm Trương Thị Thọ, Phạm Duy Mai [8], trong lá hy thiêm
S.orientalis L. chứa Daturosid và darutigenol. Bằng phương pháp chiết
tách, các tác giả đã tách được 2 nhóm chất, trong đó nhóm I có tác dụng
chống viêm liều cao, nhóm II có tác dụng rõ ràng chống viêm trên chuột,
đây có thể là hoạt chất chống viêm của hy thiêm.
Một số tác giả nước ngoài; Nam Koo Dong, Kim Ja Hoan [14] cho rằng
trong hy thiêm có một chất đắng không phải là ancaloid hay glucozid gọi là
darutin dẫn xuất của acid salicylic. Các tác giả đã tách được 5 diterpenoids
từ cây hy thiêm lông Siegesbeekia pubescens Makino:
5
Rutin
6
HythiemosidB
Pubetalin
Kirenol
Ent -Pimarane
Diterpenoids
7
1.3. Công dụng và tác dụng sinh học của hy thiêm
1.3.1. Công dụng
Theo y học cổ truyền, hy thiêm có vị đắng, tính hàn, hơi có độc, qui
vào hai kinh can và thận. Hy thiêm có tác dụng khử phong thấp, lợi gân cốt
[3]. Dược liệu này được dùng khá phổ biến trong đông y để điều trị phong
thấp, tê bại, khớp sưng nóng đỏ và đau nhức, đau lưng mỏi gối, mụn nhọt,
lở ngứa, có kinh nguyệt không đều.
Vị thuốc hy thiêm có trong nhiều bài thuốc y học cổ truyền. Theo Đỗ
Tất Lợi [3], hy thiêm được sử dụng chủ yếu để chữa các bệnh phong tê thấp
hoặc thấp khớp. Một số bài thuốc tiêu biểu được áp dụng phổ biến trong
dân gian như sau:
* Chữa phong tê thấp
- Theo Hải Thượng Lãn Ông, nếu phong đau nên dùng:
Hy thiêm 80g, Vỏ Chân chim 80g, rễ Cỏ chỉ 80g, rễ Sung súc 80g, rễ
cây Bươm bướm 60g, cây Bấn đỏ 40g, cây Bấn trắng 40g, Ô dược 40g, Cỏ
xước 40g, rễ Bưởi bung 40g, Cỏ roi ngựa 24g, cây Bạc thau, cỏ Nụ áo, Ngò
đất.
Nếu là phong tê: dùng các vị nêu trên + rau Đắng đất.
- Theo kinh nghiệm cổ truyền:
Trị phong thấp: Hy thiêm thảo 100g, Thiên niên kiện 50g, ngày uống
2 lần trước khi ăn.
Trị phong thấp, tê mỏi, đau nhức xương: dùng cao mềm Hy thiêm
30g, bột Hy thiêm 20g, bột Thiên niên kiện 10g, bột Xuyên khung 5g làm
thành viên như hạt ngô đồng. Ngày uống 2 lần sau bữa ăn, mỗi lần 4 - 5
viên.
8
Chữa miệng méo, mắt xếch, phong thấp đau nhức: dùng Hy thiêm
thảo 10g bột, chưng 9 lần luyện mật làm viên bằng hạt ngô uống 2 lần/ngày
với rượu nóng.
Chữa phong tê thấp thân nhiệt, hay chân tê bại, đau lưng, buốt xương,
đau các khớp, lưng gối đau mỏi: dùng hy thiêm rửa sạch phơi khô, rưới
rượu và mật vào, đồ lên rồi phơi, lại tẩm, đồ và phơi 9 lần, sấy khô, tán
nhỏ, viên với mật, uống mỗi ngày 10-15g. Hoặc dùng Hy thiêm 50g, Ngưu
tất 20g, Thổ phục linh 20g, Lá lốt 10g làm bột ngày uống 3 lần, mỗi lần 1015g.
Chữa bại liệt nửa người, theo danh y Lê Kinh Hạp đời Tự Đức đã ghi
đơn cao Hy thiêm , Máu mào gà [3].
Chữa sốt rét cơn lâu ngày, đờm đọng hoặc tức đầy không muốn ăn:
Dùng Hy thiêm tươi giã nhỏ, chế nước sôi vào, vắt lấy nước cốt uống một
chén (30ml), uống nhiều thì nôn ra đờm.
* Trị viêm khớp
- Chữa viêm khớp dạng thấp: Hy thiêm 16g, rễ Vòi voi 16g, Thổ phục
linh 16g, Ngưu tất 12g, rễ Huyết đằng 12g, Sinh địa 12g, Nam độc lực 10g,
rễ cây Cà gai leo 10g, rễ cây Cúc áo 10g, Huyết dụ 10g.
- Chữa viêm đa khớp dạng thấp: dùng Hy thiêm thảo 2g sắc nước cốt
gia thêm đường đen, cô lại thành cao, lần uống 1 chén trà nhỏ, ngày uống 2
lần.
- Chữa giai đoạn sớm của viêm đa khớp dạng thấp, đau nhức khớp:
Hy thiêm 16g, Ngưu tất 16g, Thổ phục linh 12g, Ké đầu ngựa 12g, cành
Dâu 12g, Cà gai leo 12g, Tỳ giải 12g, Lá lốt 10g [3].
Theo Viện dược liệu, hy thiêm còn được dùng để chữa một số bệnh
khác như:
9
* Chữa cao huyết áp
Hy thiêm 8g, Ngưu tất 6g, Thảo quyết minh 6g, Hoàng cầm 6g,
Trạch tả 6g, Chi tử 4g, Long đởm thảo 4g sắc uống ngày một thang hoặc
dùng dạng chè thuốc. (Tài nguyên cây thuốc Việt Nam).
- Hy thiêm thảo, Hoè hoa mỗi thứ 5 chỉ sắc uống. Lại có tác dụng an
thần, cũng có thể dùng nó trong suy nhược thần kinh, mất ngủ (Lâm Sàng
Thường Dụng Trung Dược Thủ Sách).
* Chữa chàm: (Nhị rượu thang gia giảm)
Hy thiêm 12g, Hoàng bá 12g, Ké đầu ngựa 12g, Bình phù 12g, Bạch
tiên bì 12g, Thương truật 8g, Phòng phong 8g.
* Trị ung nhọt sung độc, các chứng lở dữ
Đinh nhọt sưng độc, vào tết Đoan ngọ hái Hy thêm thảo phơi khô tán
bột, lần uống nửa lượng với rượu nóng, khi mồ hôi ra là đạt, rất có hiệu quả
(Tập Giản Phương).
* Trị ăn vào bị nôn mửa ra
Dùng Hy thiêm thảo sấy khô tán bột luyện mật làm viên uống với
nước nóng (Bách Nhất Tuyên Phương).
* Những người bị chó cắn, cọp cắn, nhện cắn…
Giã nát Hy thiêm thảo mà đắp đều khỏi cả (bản thảo thập di) [4].
Hiện tại trên, trên thị trường có rất nhiều chế phẩm có chứa dịch chiết
Hy thiêm thiêm dưới các dạng bào chế hiện đại và cũng chủ yếu điều trị
các bệnh về khớp như thống phong, viêm khớp dạng thấp như:
1. Traly Gout (Hy thiêm thảo, dây đau xương, thổ phục linh, hổ trượng căn,
ba kích, tỳ giải, đào nhân, hoàng bá).
10
2. Gút Tuệ linh (Hy thiêm thảo, dây đau xương, nhũ hương, nhân sâm,
hoàng bá, đỗ trọng, đào nhân, nghệ vàng, thục địa, thổ phục linh, tỳ giải).
3. Hoàng Thấp Linh (bạch thược, Hy thiêm, sói rừng, nhũ hương,
pregnilolon, L-carnitin fumarat, magnesium).
4. Phong tê thấp (Hà thủ ô đỏ, thổphục linh,phòng kỷ, hy thiêm, thương nhĩ
tử, thiên niên kiện) - Thuốc nước uống của Công ty TNHH Dược phẩm
Fito Pharma
5. Tuzamin (Tục đoạn, phòng phong, hy thiêm, độc hoạt, tần giao, bạch
thược, ngưu tất, thiên niên kiện....) Viên nang Công ty CP Dược Trung
ương Mediplantex.
6. Viên phong thấp Fengshi-OPC (Mã tiền chế, hy thiêm, ngũ gia bì, tam
thất - Viên nang Công ty CP dược phẩm OPC.
7. Vương thảo thấp khớp hoàn (Tục đoạn, phòng phong, hy thiêm, độc
hoạt, tần giao, bạch thược, ngưu tất, thiên niên kiện....) Công ty TNHH
dược phẩm Thiên Thảo.
8. Xi xian feng shi wa (Hy thiêm thảo, L.,radix clematidis, Ramulus Mori,
radix Stephaniae tetrandrae), viên hydan (Hy thiêm, vỏ ngũ gia bì chân
chim, mã tiền chế) ….
Trong y học Trung Quốc, Hy thiêm được dùng phối hợp với các cây thuốc
khác để điều trị ung thư, chảy máu não kèm theo chứng liệt. Ở một số nơi,
Hy thiêm được dùng với tác dụng gây liền sẹo ở bên ngoài và bên trong cơ
thể, dịch ép rễ Hy thiêm trị vết thương, cao toàn phần có tác dụng kháng
khuẩn, trị tổn thương da, bệnh hoa liễu và nấm da, làm thuốc tẩy và chống
nôn [4]. Tại Bangladesh, Hy thiêm là một trong các cây thuốc được dùng
phổ biến để phòng và điều trị các bệnh liên quan đến tim mạch [106].
11
1.3.2. Tác dụng sinh học
* Tác dụng chống viêm
Nghiên cứu trên chuột cống trắng cho thấy lá Hy thiêm có tác dụng ức
chế khá mạnh viêm cấp tính trên mô hình gây phù bàn chân chuột và ức
chế viêm mạn tính, gây teo tuyến ức chuột cống non. Hơn nữa, hy thiêm
còn có tác dụng giảm tỷ lệ - globulin trong huyết thanh khi dùng phối hợp
trong bài thuốc gồm hy thiêm, mộc qua, thiên niên kiện và ngưu tất [4].
Kirenol phân lập từ hy thiêm đã được chứng minh có tác dụng chống viêm,
giảm đau tại chỗ trên chuột thực nghiệm [22]. Hiện nay, cơ chế chống viêm
của hy thiêm chưa được xác định, tuy nhiên có tác giả chứng minh hy
thiêm ức chế không rõ rệt COX-2 và iNOS (inducible nitric oxide synthase)
[17], [23].
Theo Đoàn Thị Nhu [6], lá hy thiêm có tác dụng ức chế rõ rệt giai
đoạn viêm cấp tính và ức chế yếu giai đoạn viêm mãn tính thực nghiệm.
Độc tính cấp của hy thiêm tương đối thấp (77,5g/kg trọng lượng). Do đó có
thể bào chế các thuốc điều trị bệnh khớp.
* Tác dụng chống oxi hóa
Dịch chiết methanol và ethyl acetat của hy thiêm có hiệu quả chống
oxy hóa (đặc biệt là dịch chiết methanol) [20]. Hy thiêm thiêm chống oxi
hóa trên cả gốc tự do OH* và O2*. Trên anion O2-*, dịch chiết trong nước có
tác dụng mạnh hơn còn trên OH* phân đoạn butanol có hiệu quả cao. Đặc
biệt khi nghiên cứu sâu về cơ chế chống oxi hóa trên O2-*, có tác giả còn
thấy, phân đoạn butanol chống oxi hóa mạnh trên dịch treo mô não đồng
thể và màng hồng cầu [18].
* Tác dụng ức chế miễn dịch
12
Dịch chiết ethanol của hy thiêm thể hiện tác dụng ức chế miễn dịch in
vitro và in vivo trên chuột nhắt trắng với liều thử nghiệm 0,25 – 0,5 và 1,0
mg/mỗi 7 ngày trong vòng 28 ngày. Dịch chiết ethanol hy thiêm có tác
dụng làm giảm nồng độ IgG, IgGI và IgG2b [13].
* Tác dụng chống dị ứng
Dịch chiết nước hy thiêm có tác dụng chống dị ứng do ức chế sản
xuất IgE từ lympho B, giải phóng histamin từ tế bào mast và kháng
histamin [4],[17].
* Độc với tế bào u hắc sắc tố
Hai chất pubetalin và kirenol được phân lập từ phân đoạn ethyl acetat
hy thiêm thể hiện độc tính rất mạnh đối với dòng tế bào u hắc sắc tố B16 ở
chuột [19]
* Tác dụng trên chuyển hóa lipid
Tác dụng của hy thiêm đối với chuyển hóa lipid ở động vật thí nghiệm
đã được nghiên cứu. Dược liệu gây giảm cả 3 chỉ số : cholesterol máu, tỷ
số / lipoprotein máu và mức lipid toàn phần trong máu động vật thí
nghiệm [8], [4].
* Tác dụng kháng khuẩn
Khi phân lập và thử tác dụng sinh học, Lê Thị Kiều Nhi đã chứng
minh rutin (quercetin-3-rhamnoglucosid) có hoạt tính kháng khuẩn (trên vi
khuẩn gram dương) và kháng nấm (nhưng không có tác dụng trên nấm
Candida albicans) [9].
* Tác dụng điều trị gout
Theo kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thùy Dương, cao toàn phần hy
thiêm với liều 600mg/kg và phân đoạn n-butanol với liều 120mg/kg có tác
13
dụng làm giảm nồng độ acid uric huyết thanh chuột nhắt trắng và chuột
cống trắng. Tại nồng độ 10g/1ml hỗn hợp phản ứng, phân đoạn n-butanol
thể hiện khả năng ức chế hoạt tính xanthin oxidase. Phân đoạn n-butanol hy
thiêm cho tác dụng chống viêm và giảm đau thực nghiệm trên chuột [9].
* Các tác dụng khác
Hy thiêm cũng được chứng minh có tác dụng hạ huyết áp, an thần, hạ
đường huyết, kháng acetylcholin và rút ngắn thời gian tiêu fibrin [8], [4].
14
CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ
PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nguyên liệu
Là cây hy thiêm được thu mua ở Hòa Bình – hiện đang là nguồn
nguyên liệu hy thiêm chính của công ty.
2.2. Dung môi và hóa chất
- Chất chuẩn acid clorogenic (HL: 99,97% ), rutin (HL: 99,95%) đạt tiêu
chuẩn phân tích được Viện Kiểm Nghiệm Thuốc TW cung cấp.
- Bản mỏng silicagel GF254 (bản mỏng tráng sẵn của hãng Merck)
- Methanol, ethanol, n-butanol, n-hexan, ethyl acetat, aceton, acetonitril,
toluen, acid acetic, … dùng trong định tính, định lượng đạt tiêu chuẩn phân
tích (PA). Methanol, ethanol, bột natri hydroxyd, dùng trong chiết xuất đạt
tiêu chuẩn công nghiệp được mua tại công ty hóa chất Đức Giang (Hà Nội).
Các dung môi được cất lại trước khi dùng cho chiết xuất.
2.3. Thiết bị và phương tiện nghiên cứu
2.3.1. Thiết bị sử dụng cho kiểm nghiệm
Tất cả các dụng cụ thiết bị đều được chuẩn hóa theo tiêu chuẩn GLP bao
gồm:
Bảng 1: Danh mục thiết bị sử dụng cho kiểm nghiệm, phân tích
Stt
Tên thiết bị
Nguồn gốc
1.
Cân phân tích Mettler AG 135
Thụy sỹ
2.
Cân xác định hàm ẩm AMB-50
Đức
3.
Máy HPLC Agilent 1100 series với detector
Mỹ
DAD
4.
Cột ODS-3 intersil (4.6mm x 250mm x 5mcm)
5.
Máy đo pH
Đức
15
6.
Tủ sấy áp suất giảm OV-02/jeitech/ Hàn quốc
Hàn quốc
7.
Tủ sấy Ecocell
Mỹ
8.
Các dụng cụ cần thiết khác ( Thùng, rây các kích
cỡ, môi inox, ống đong... )
2.3.2. Hệ thống chiết xuất của nhà máy sản xuất thuốc đông dược, công
suất 130-170 kg/mẻ:
Là thiết bị chiết nóng có áp suất với dung môi là nước.
- Nồi hơi 2.500 kg hơi/giờ
- Máy nghiền dược liệu
- Nồi chiết áp suất dung tích 2000 lít – áp suất làm việc 1kg/cm2
- Bình lắng xoáy dung tích 2000 lít
- Bộ phận cô tuần hoàn áp suất giảm: P = - 0,2 đến - 0,6 kg/cm2, dung tích
1,5m3.
- Nồi cô hở cách thủy, dung tích 750 lít: 03 thiết bị.
- Nồi cô hở kiểm soát nhiệt (có thể lật để ra sản phẩm cuối) 350 lít
16
17
1. Nồi chiết 2.000 lít
2. Bình ngưng thu tinh dầu
3. Bình ngưng thu tinh dầu
4. Bình thu hồi tinh dầu
5. Bình lọc vải
6. Bình lắng xoáy
Chú thích:
Sơ đồ 1: Hệ thống chiết xuất của nhà máy sx thuốc Đông dược
Công ty cổ phần Dược VTYT Thanh Hóa
7. Bình cô tuần hoàn áp suất giảm
8. Bình ngưng hơi nước
9. Bình thu hồi nước bay hơi
10. Bơm hút chân không
11.Bình trung gian chứa dịch chiết
12. Nồi cô hở thu cao thành phẩm
2.4. Phương pháp thực nghiệm:
2.4.1. Phương pháp xác định độ ẩm của dược liệu
Xác định độ ẩm của các mẫu thử theo phụ lục 9.6 DĐVN 4 “Xác
định mất khối lượng do làm khô”.
Khối lượng dược liệu đem sấy: 2 – 5 g,
Nhiệt độ sấy: 100 oC; thời gian sấy 4 giờ.
Tỷ lệ % độ ẩm của mẫu được tính theo công thức:
W
100(m1 m2 )
m
Trong đó:
m1: là số gam mẫu thử ban đầu.
m2: là số gam mẫu thử sau sấy.
m: là số g mẫu đã cân đem thử.
2.4.2. Xác định khối lượng riêng biểu kiến
- Khối lượng riêng có liên quan đến sự phân bố không gian của chất trong
một nguyên liệu.
- Khối lượng riêng của chất rắn được biểu thị bằng số g/cm3.
- Xác định khối lượng riêng biểu kiến của dược liệu đưa vào chiết xuất để
xác định thể tích chiếm chỗ của lượng dược liệu đưa vào chiết xuất.
Cách xác định: Cân khối lượng một thể tích dược liệu nhất định từ đó xác
định được khối lượng riêng tương đối của các mẫu dược liệu có kích thước
khác nhau.
2.4.3. Phương pháp chiết xuất hy thiêm
18
Hy thiêm
Cắt đoạn 3-5 cm
Chiết xuất lần 1
Nước 1200 lít
Bã dược liệu
Dịch chiết lần 1
Cô đặc
Dịch chiết lần 2
Cao hy thiêm
Bã dược liệu
Chiết xuất lần 2
Nước 800 lít
Dùng đê chiết mẻ khác
Bỏ
Sơ đồ 2:Sơ đồ quy trình chiết xuất hy thiêm
2.4.4. Phương pháp định tính acid clorogenic và rutin trong dược liệu
bằng sắc ký lớp mỏng:
- Pha tĩnh: Silica gel GF254 (Merck) đã được hoạt hóa ở nhiệt độ 1050C
trong 60 phút trước khi dùng.
- Hệ dung môi triển khai: EtOAc: CH3COOH: HCOOH: H2O (10:1:1:1)
Dung dịch đối chiếu: Là dung dịch của chất chuẩn Acid clorogenic và
Rutin trong MeOH có nồng đồ thích hợp.
Dung dịch thử: Chiết mẫu thử dược liệu trong dung môi chiết, lọc dịch
chiết qua giấy lọc, bay hơi dung môi thu được cắn MeOH hoặc cắn nước.
Hòa tan cắn trong 2 ml MeOH, lọc qua màng lọc 0,45 m được dịch chấm
sắc ký.
19
Tiến hành: chấm riêng biệt lên bản mỏng dung dịch thử và dung dịch chất
đối chiếu trên . Triển khai sắc ký trong bình kín đến khi dung môi chạy
cách mép trên của bản mỏng khoảng 1 cm. Lấy bản mỏng ra, sấy nhẹ bằng
máy sấy cho khô.
Quan sát các vết trên bản mỏng (sắc ký đồ).
Kết quả : Sắc ký đồ của dung dịch thử phải cho vết cùng màu, cùng Rf với
vết của acid clorogenic và rutin trong dung dịch đối chiếu.
2.4.5. Phương pháp định lượng clorogenic acid và rutin bằng sắc ký
lỏng hiệu năng cao (HPLC)
- Mẫu chuẩn: pha acid clorogenic chuẩn và rutin chuẩn trong methanol để
được các dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ chính xác khoảng: (acid
clorogenic: 5 µg/ml và rutin: 5 µg/ml); (acid clorogenic: 20 µg/ml và rutin:
20 µg/ml); (acid clorogenic: 50 µg/ml và rutin: 50 µg/ml); (acid clorogenic:
100 µg/ml và rutin: 100 µg/ml); (acid clorogenic: 200 µg/ml và rutin: 200
µg/ml); lọc qua màng lọc 0,45 µm.
- Mẫu thử cao đặc: Cân 0,5 g cao đặc vào bình nón 100 ml, thêm chính xác
50 ml methanol, cân khối lượng bình, lắc siêu âm 30 phút, để nguội. bổ
sung lượng MeOH hao hụt cho vừa đủ khối lượng cân trước, lọc qua giấy
lọc rồi lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm.
- Mẫu thử dược liệu: Cân 3g bột dược liệu vào bình nón 100 ml, thêm chính
xác 50 ml methanol, cân khối lượng bình, lắc siêu âm 30 phút, để nguội. bổ
sung lượng MeOH hao hụt cho vừa đủ khối lượng cân trước, lọc qua giấy
lọc rồi lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm.
Điều kiện sắc ký:
- Cột ODS-3 intersil (4.6mm x 250mm x 5mcm)
- Pha động : Gradient
20
Bảng 2: Điều kiện sắc ký lỏng hiệu năng cao
0
Dung dịch H3PO4 Methanol
0,5%
(HPLC)
75
25
20
60
40
Gradient
40
40
60
Gradient
49
40
60
Đẳng dòng
50
75
25
Gradient
Thời gian
Kiểu rửa giải
Gradient
- Detector PDA: 255 nm
- Thể tích tiêm mẫu: 20 mcl
- Tốc độ dòng: 1.0 ml/min
- Tiến hành
- Kiểm tra tính thích hợp của hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung
dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ chính xác khoảng 50 µg/ml đã chuẩn bị ở
trên, độ lệch chuẩn tương đối của các diện tích đáp ứng từ 6 lần tiêm lặp lại
không được lớn hơn 2,0% đối với cả hai hoạt chất.
- Tiêm riêng biệt các dung dịch chuẩn hỗn hợp, tiến hành sắc ký, ghi lại các
sắc ký đồ và phổ đồ 3D của các píc chuẩn. Thiết lập đường chuẩn của acid
clorogenic và đường chuẩn của rutin về mối tương quan giữa nồng độ dung
dịch ( µg/ml) và diện tích pic tương ứng theo phương trình: y1= a1x1+b1 đối
với acid clorogenic; y2= a2x2+b2 đối với acid clorogenic. (y: là diện tích píc,
x là nồng độ µg/ml).
- Tiến hành sắc ký với dung dịch thử. Ghi lại sắc ký đồ và phổ đồ 3D của
các píc thử.
21
- Định tính: yêu cầu píc của mẫu thử có thời gian lưu và dải phổ hấp thụ 3D
(từ bước sóng 210 nm đến 400 nm) của píc trùng với píc của dung dịch
chuẩn.
- Định lượng: Tính nồng độ (µg/ml) của acid clorogenic (X1: nồng độ acid
clorogenic trong mẫu cao đặc (µg/ml); X2: nồng độ acid clorogenic trong
mẫu dược liệu (µg/ml))và nồng độ rutin (X3: nồng độ rutin trong mẫu cao
đặc (µg/ml); X4: nồng độ rutin trong mẫu dược liệu (µg/ml)) có trong dung
dịch thử (dung dịch thử từ mẫu cao đặc và dung dịch thử từ mẫu dược liệu)
dựa vào đường chuẩn của acid clorogenic và đường chuẩn của rutin. Từ
nồng độ tìm được của acid clorogenic và rutin có trong cao đặc, dược liệu.
Tính hàm lượng (%) của các hoạt chất này có trong cao đặc và trong dược
liệu theo các công thức sau:
- Hàm lượng acid clorogenic trong cao được tính theo công thức:
X1*50*100*100
X1.1 (%) =
106*mcđ*(100-C1)
Trong đó:
- X1: nồng độ acid clorogenic trong cao đặc (µg/ml)
- mcđ: khối lượng của cao đặc (g)
- C1: độ ẩm của cao đặc (%).
- Hàm lượng acid clorogenic trong dược liệu được tính theo công thức:
X2*50*100*100
X1.2 (%)=
106*mdl*(100-C2)
Trong đó:
- X2: nồng độ acid clorogenic trong dược liệu (µg/ml)
22
- mdl: khối lượng của dược liệu (g)
- C2: độ ẩm của dược liệu (%).
- Hàm lượng rutin trong cao được tính theo công thức:
X3*50*100*100
X1.3 (%)=
106*mcđ*(100-C1)
Trong đó:
- X3: nồng độ rutin trong cao đặc (µg/ml)
- mcđ: khối lượng của cao đặc (g)
- C1: độ ẩm của cao đặc (%).
- Hàm lượng rutin trong dược liệu được tính theo công thức:
X4*50*100*100
X1.4 (%)=
106*mdl*(100-c2)
- Trong đó:
- X4: nồng độ rutin trong dược liệu (µg/ml)
- mdl: khối lượng của dược liệu (g)
- c2: độ ẩm của dược liệu (%).
2.5. Nội dung và phương pháp nghiên cứu
2.5.1. Xây dựng TCCS dược liệu Hy thiêm
Xác định hàm lượng acid clorogenic và rutin từ 3 - 6 mẫu dược liệu
khác nhau. Từ đó xây dựng TCCS cho dược liệu Hy thiêm, trong đó có chỉ
tiêu hàm lượng acid clorogenic và rutin.
Phương pháp xây dựng tiêu chuẩn của dược liệu hy thiêm :
Xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu hy thiêm dựa trên các chỉ tiêu
chung được quy định tại Dược điển Việt Nam IV, trong đó có chỉ tiêu định
tính và định lượng:
23
+ Độ ẩm: Thử theo DĐVN IV, phụ lục 12.13
+ Tạp chất: Thử theo DĐVN IV, phụ lục 12.11
+ Tỷ lệ vụn nát: Thử theo DĐVN IV, phụ lục 12.12
+ Định tính hy thiêm (thành phần acid clorogenic và rutin) bằng sắc ký
lớp mỏng (TLC).
+ Định lượng: Xác định hàm lượng acid clorogenic và rutin bằng sắc ký
lỏng hiệu năng cao.
2.5.2. Đánh giá ảnh hưởng của độ mịn dược liệu
- Xác định sự cần thiết và ý nghĩa việc chia nhỏ dược liệu trước khi chiết
xuất: Xác định kích thước dược liệu thích hợp để chiết xuất.
- Khảo sát với 2 mẫu dược liệu:
+ Mẫu 1 là dược liệu cắt đoạn 3-5 cm;
+ Mẫu 2 là bột nửa mịn dược liệu - được nghiền qua máy nghiền búa.
Tiến hành chiết xuất 02 lần, mỗi lần 02 giờ rồi cô dịch chiết thành cao đặc.
Đánh giá các chỉ tiêu: số lượng cao thu được, hàm lượng acid clorogenic và
rutin trong trong cao.
2.5.3. Đánh giá ảnh hưởng của số lần chiết xuất
- Tiến hành chiết xuất các mẻ dược liệu 3 lần, mỗi lần 2 giờ.
- Cô riêng dịch chiết từng mẻ.
- Cân xác định khối lượng cao và xác định hàm lượng hoạt chất có trong
cao: Hiệu suất chiết (%); Hàm lượng clorogenic/cao (%); Hàm lượng
Rutin/cao (%)
2.5.4. Đánh giá ảnh hưởng của thời gian chiết xuất
Dược liệu được chiết xuất 2 lần.
Tiến hành khảo sát 4 mức thời gian chiết xuất:
Mức 1: 1h + 1h (lần 1 chiết 1 giờ, lần 2 chiết 1 giờ).
Mức 2: 2h + 1h (lần 1 chiết 2 giờ, lần 2 chiết 1 giờ).
24
Mức 3: 3h + 1h (lần 1 chiết 3 giờ, lần 2 chiết 1 giờ).
Mức 4: 4h + 1h (lần 1 chiết 4 giờ, lần 2 chiết 1 giờ).
Chỉ tiêu đánh giá: khối lượng cao thu được; hàm lượng hoạt chất trong cao.
2.5.5. Đánh giá 2 phương pháp cô đặc
Tiến hành cùng điều kiện chiết xuất:
- Chiết xuất 03 mẻ (125 kg/mẻ), cô dịch chiết từng mẻ hoàn toàn bằng thiết
bị cô áp suất giảm đến khi thu sản phẩm cuối.
- Chiết xuất 03 mẻ (125 kg/mẻ), cô dịch chiết từng mẻ hoàn toàn bằng thiết
bị cô áp suất hở (cô áp suất thường) đến khi thu sản phẩm cuối.
- So sánh các chỉ tiêu: Thời gian cô, Số lượng cao thu được; Hàm lượng
hoạt chất rutin/acid clorogenic trong cao.
2.5.6. Đề xuất quy trình sản xuất cao hy thiêm
- Dựa trên các kết quả khảo sát các yếu tố ảnh hưởng tới quy trình chiết
xuất để đề xuất QTSX phù hợp để sản xuất cao Hy thiêm.
2.5.7. Triển khai sản xuất cao Hy thiêm
- Triển khai sản xuất 3 đến 6 mẻ, mỗi mẻ 125 kg dược liệu. Từ đó khẳng
định tính khả thi và ổn định của quy trình.
2.6. Thời gian và địa điểm thực hiện nghiên cứu
- Các nghiên cứu chiết xuất hy thiêm được tiến hành tại Nhà máy sản xuất
thuốc Đông dược – công ty CP dược VTYT Thanh Hóa từ tháng 2/2010
đến tháng 4/2015.
- Các nghiên cứu về phương pháp định tính, định lượng được nghiên cứu
và khảo sát tại: Bộ môn Công nghiệp dược trường ĐH dược Hà Nội; Khoa
phân tích hóa học Viện dược liệu; Phòng kiểm tra chất lượng GLP - công
ty CP dược VTYT Thanh Hóa, từ tháng 1 đến tháng 5/2015
25
CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ
3.1. Xây dựng TCCS dược liệu Hy thiêm
- Qua những khảo sát về nguồn nguyên liệu và xây dựng quy trình chiết xuất
hy thiêm thấy chất lượng dược liệu đầu vào cho quy trình sản xuất là yếu tố
quan trọng hàng đầu ảnh hưởng đến kết quả sản xuất.
- Tiêu chuẩn dược liệu hy thiêm bao gồm đầy đủ các chỉ tiêu quy định
trong DĐVN IV, bao gồm:
Độ ẩm: không lớn hơn 12%
Tạp chất: Không quá 1%
Tỷ lệ lá trong dược liệu: Không ít hơn 40%
Tỷ lệ vụn nát: Không quá 5,0%
- Trong khuôn khổ luận văn, tiến hành xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu
hy thiêm về các chỉ tiêu định tính và định lượng hai hoạt chất là acid
clorogenic và rutin.
Định tính bằng sắc ký lớp mỏng TLC
Tiến hành sắc ký lớp mỏng với các điều kiện như ở mục 2.4.4.
Dung dịch đối chiếu: Cân chính xác 1 mg các chất chuẩn rutin (Merck) và
acid clorogenic (Merck), hòa tan hoàn toàn trong 1 ml MeOH, lọc qua
màng lọc 0,45 m thu được các dung dịch chấm sắc ký.
Dung dịch thử: Cân đúng 3g dược liệu hy thiêm đã xay nhỏ (bao gồm mẫu
hy thiêm nghiên cứu và mẫu hy thiêm chuẩn của Viện Dược liệu) cho vào
bình nón 50ml, thấm ẩm dược liệu bằng dung môi chiết:
- Chiết bằng dung môi MeOH: cho khoảng 20 ml vào bình nón, lắc đều rồi
siêu âm 30 phút khi chiết bằng MeOH (20ml).
26
- Chiết bằng nước: cho khoảng 20 ml nước cất và đun sôi trong 10 phút.
Sau khi chiết xong, lọc dịch chiết qua giấy lọc, bay hơi dung môi thu
được cắn MeOH hoặc cắn nước. Hòa tan cắn trong 2 ml MeOH, lọc qua
màng lọc 0,45 m được dịch chấm sắc ký.
Tiến hành: chấm riêng biệt lên bản mỏng 15 l mỗi dung dịch thử và dung
dịch chất đối chiếu trên bản mỏng, cách mép dưới của bản mỏng khoảng 1
cm. Triển khai sắc ký trong bình kín đến khi dung môi chạy cách mép trên
của bản mỏng khoảng 1 cm. Lấy bản mỏng ra, sấy nhẹ bằng máy sấy cho
khô.
Quan sát các vết trên bản mỏng (sắc ký đồ) bằng mắt thường, dưới ánh
sang UV ở 254 nm (không phun thuốc thử) và 365 nm (phun thuốc thử acid
boric/ acid oxalic (2:1).
Kết quả:
Hình 1. Sắc ký đồ TLC của các mẫu dược liệu hy thiêm
(Siegesbeckia orientalis L.)
Ghi chú:
27
A: Hình ảnh quan sát ở UV 254
B: Hình ảnh quan sát ở UV 365 - sau khi phun thuốc thử axit boric/ axit
oxalic (2:1)
Trong đó:
Dc1: Hy thiêm (mẫu thử là DL Viện dược liệu) - chiết bằng nước
Dc2: Hy thiêm (mẫu thử là DL Viện dược liệu) - chiết bằng MeOH
C1: Chất đối chiếu Rutin
C2: Chất đối chiếu clorogenic acid
T1n: Hy thiêm (mẫu thử là nguyên liệu của công ty) - chiết bằng nước
T1m: Hy thiêm (mẫu nguyên liệu của công ty) - chiết bằng MeOH
T2n: Hy thiêm (mẫu DL mua tại nhà thuốc Sơn Lâm) - chiết bằng nước
T2m: Hy thiêm (mẫu DL mua tại nhà thuốc Sơn Lâm) - chiết bằng MeOH
- Sắc ký đồ của các mẫu thử Dc1; và Dc2; T1n; T2n; T1m; T2m có 02 vết
chính có cùng màu và cùng Rf với sắc ký đồ của dung dịch acid clorogenic
và rutin đối chiếu.
Định tính bằng sắc ký lỏng HPLC:
Với kết quả định tính bằng TLC và qua khảo sát sơ bộ bằng HPLC,
chúng tôi tiến hành thử các dung môi và điều kiện khác nhau lựa chọn ra
điều kiện HPLC để định tính acid clorogenic và rutin trong dược liệu hy
thiêm.
28
28.732
11.093
DAD1 A, Sig=255,4 Ref =of f (RUTIN\THUC0004.D)
mAU
10
rutin chuan nong do 50 mcg/ml
acid clorogenic chuan nong do 50 mcg/ml
8
6
4
2
0
-2
0
10
20
30
40
min
DAD1 A, Sig=255,4 Ref =of f (RUTIN\THUC0007.D)
mAU
30
25
20
15
rutin mau thu
A11.038
re
a:
24
2.
30
1
acid clorogenic mau thu
28.588
10
5
0
-5
0
5
10
15
20
25
30
35
40
min
Hình 2: Sắc ký đồ của mẫu chuẩn hỗn hợp (bên trên) và mẫu thử dược liệu
hy thiêm
- Sắc ký đồ thu được cho 2 pic tách rõ ràng, nhiễu nền thấp, thể hiện qua
sắc ký đồ của mẫu chuẩn, mẫu thử của hai chất acid clorogenic và rutin .
Trên các sắc ký đồ của mẫu thử đều có pic có thời gian lưu trùng với thời
gian lưu (tR) của pic acid clorogenic trong sắc ký đồ của mẫu chuẩn là 11,1
phút, trong khi thời gian lưu của rutin dài hơn, là 28,6 phút. Với thời gian
lưu và điều kiện tách như trên có thể thấy đây là điều kiện phù hợp để định
tính các hoạt chất này trong dược liệu.
29
Định lượng:
- Kết quả định lượng thành phần acid clorogenic và rutin bằng phương
pháp HPLC trong các mẫu hy thiêm như sau:
Bảng 3 : Hàm lượng hoạt chất trong các mẫu hy thiêm
HL % acid clorogenic
HL % Rutin
tính theo KL khô
tính theo KL khô
DL công ty
0,074%
0,045%
2
DL Sơn Lâm
0,069%
0,041%
3
DL viện dược liệu 0,070%
0,043%
TT
Tên mẫu
1
Trung bình
0,071%
0,043%
Nhận xét:
Hàm lượng acid clorogenic trong các mẫu thử nằm trong khoảng từ
0,069% đến 0,074 %.
Hàm lượng rutin trong các mẫu thử nằm trong khoảng từ 0,041% đến
0,045%.
- Để ổn định nguyên liệu đầu vào cho sản xuất cao hy thiêm, giới hạn hàm
lượng acid clorogenic trong dược liệu quy định trong tiêu chuẩn không
được thấp hơn 0,065% và giới hạn hàm lượng rutin trong dược liệu quy
định trong tiêu chuẩn không được thấp hơn 0,0350%
Từ các khảo sát trên, đưa ra tiêu chuẩn cho dược liệu hy thiêm là:
Độ ẩm: không lớn hơn 12%
Tạp chất khác: Không quá 1%
Tỷ lệ lá trong dược liệu: Không ít hơn 40%
Tỷ lệ vụn nát: Không quá 5,0%
30
+ Định tính: acid clorogenic và rutin bằng TLC
+ Định lượng: Hàm lượng acid clorogenic trong dược liệu không được
thấp hơn 0,065% và hàm lượng rutin trong dược liệu không được thấp hơn
0,035% tính theo dược liệu khô.
3.2. Đánh giá ảnh hưởng của độ mịn dược liệu
- Khi dược liệu quá thô, dung môi sẽ khó thấm vào dược liệu, hoạt chất khó
được chiết vào dung môi. Khi dược liệu quá mịn, bề mặt tiếp xúc giữa
dược liệu và dung môi tăng lên, tạo thuận lợi cho chiết xuất nhưng cũng
gây nhiều khó khăn như: dịch chiết có nhiều tạp do màng tế bào bị phá hủy,
bột dược liệu dễ dính bết vào nhau gây khó khăn trong quá trình rút dịch
chiết. Do vậy, cần phải khảo sát để lựa chọn kích thước dược liệu phù hợp.
- Tiến hành khảo sát chiết xuất hy thiêm với các kích thước khác nhau:
dược liệu khô xay qua rây 10 mm, dược liệu thái đoạn 3 – 5 cm.
Kích thước
Sự khác nhau
3 – 5 cm
Kích thước
Dược
liệu
nghiền thô
Khối lượng riêng biểu kiến của dược liệu
101kg/m3
3
(kg/m )
145 kg/m3
Tỉ lệ bột mịn < 1mm (%)
12%
3%
- Quy trình khảo sát được thực hiện như mục 2.5.2.
- Tiến hành chiết và cô cao 02 mẻ đối với mỗi loại kích thước dược liệu
trên với điều kiện chiết: Áp suất nồi chiết 1,0 kg/cm2, thể tích nước lần
chiết thứ nhất và thứ 2 lần lượt là: 1.200 lít và 800 lít.
- Kết quả khảo sát ảnh hưởng của kích thước dược liệu tới quy trình chiết
xuất được như sau:
31
Bảng 4. Ảnh hưởng của độ mịn dược liệu đến hiệu suất và chất lượng cao
Kích thước
Khối
lượng
DL (kg)
Hàm
Khối
Tỉ
lệ lượng
lượng SP cao/dược AC
(kg)
liệu (%) trong
cao (%)
Hàm
lượng
RUTIN
trong
cao (%)
Mẻ 1
Mẻ 2
3-5 cm
Mẻ 3
TB
Dược liệu Mẻ 1
qua xây Mẻ 2
thô rây 10
Mẻ 3
mm
TB
125
125
125
125
125
125
125
125
16,5
16,0
16,7
16,4
17,1
16,9
16,5
16,8
0,13
0,12
0,12
0,12
0,11
0,10
0,10
0,10
13,2
12,8
13,3
13,1
13,7
13,5
13,2
13,4
0,31
0,30
0,29
0,30
0,28
0,29
0,28
0,28
Nhận xét:
- Chia nhỏ dược liệu làm tăng khối lượng riêng của dược liệu, có ý nghĩa
trong việc tăng năng suất mẻ chiết (bình chiết nạp được khối lượng dược
liệu nhiều hơn nếu dược liệu được chia nhỏ). Khi dược liệu được nghiền
mịn, khối lượng cao thô thu được tăng (không đáng kể), nhưng hàm lượng
hoạt chất trong cao lại giảm đi, có nghĩa là tạp chất tăng lên.
- Hiệu suất chiết tính theo hoạt chất giảm đi khi bột dược liệu quá mịn có
thể được giải thích là do tạp chất khuếch tán vào dịch chiết quá nhiều, tạo
ra môi trường có độ nhớt cao làm cản trở hoạt chất khuếch tán. Hơn nữa,
bột dược liệu quá mịn còn gây khó khăn cho giai đoạn rút dịch chiết: thời
gian rút dịch chiết kéo dài và khó rút kiệt dịch chiết. Điều này cũng làm
giảm hiệu suất chiết.
- Như vậy, từ kết quả khảo sát trên thì với dược liệu Hy thiêm là loại thân
thảo, kích thước đưa vào chiết xuất phù hợp là 3-5 cm.
3.3. Đánh giá ảnh hưởng của số lần chiết xuất
- Tiến hành chiết xuất các mẻ dược liệu 3 lần, mỗi lần 2 giờ. Cô riêng dịch
chiết từng mẻ. Cân xác định khối lượng cao và xác định hàm lượng hoạt
chất có trong cao. Kết quả thu được như sau:
32
Bảng 5. Hiệu suất chiết của từng lần chiết
Thời gian 2 giờ/lần
Mẻ 1
Mẻ 2
Mẻ 3
Lần 1
Lần 2
Lần 3
Tổng
Lần 1
Lần 2
Lần 3
Tổng
Lần 1
Lần 2
Lần 3
Tổng
Tỉ lệ cao thu được
KL cao thu của
mỗi
lần HL rutin /cao
được (kg)
chiết/tổng
lượng (%)
cao thu được (%)
13,5
3,9
0,7
18,1
13,0
3,9
0,7
17,6
13,2
4,1
0,9
18,2
74,5
21,5
4,0
100
73,8
22,1
4,1
100
72,5
22,5
5,0
100
0,12
0,07
0,01
0,11
0,06
0,01
0,11
0,07
0,01
Nhận xét:
- Khối lượng cao của dịch chiết lần 1 chiếm tới trên 70 % tổng khối lượng
cao của cả 3 lần chiết, lượng cao thu được của chiết lần là rất thấp.
- Hàm lượng rutin trong cao thu được giảm dần theo số lần chiết, đặc biệt
cao của dịch chiết lần 3 hàm lượng của rutin dưới 0,01%, điều này cho thấy
rutin đã được chiết khá kiệt ở lần chiết đầu tiên, các lần chiết sau hàm
lượng rutin thấp và giảm nhiều do bị phân hủy khi thời gian chiết ở nhiệt
độ cao kéo dài.
- Do vậy, chiết xuất 2 lần, dịch chiết lần 1 được xử lý; dịch chiết lần 2 dùng
làm dung môi chiết cho mẻ sau là phù hợp.
3.4. Đánh giá ảnh hưởng của thời gian chiết xuất
- Thời gian chiết xuất quá ngắn sẽ không chiết kiệt được hoạt chất có trong
dược liệu. Ngược lại, nếu tiến hành chiết xuất quá lâu, dịch chiết sẽ lẫn
nhiều tạp chất và gây tốn kém về mặt thời gian, nhân công và năng lượng.
33
Do vậy cần phải khảo sát để lựa chọn được thời gian chiết xuất đem lại
hiệu quả cao nhất.
Tiến hành khảo sát thời gian chiết xuất dược liệu với điều kiện:
- Mỗi mẻ 125 kg dược liệu được chiết 02 lần.
- Áp suất chiết 1 kg/ cm2;
- Thể tích dung môi chiết lần 1 và lần 2 lần lượt là 1200 lít và 800 lít,
gộp 2 dịch chiết cô thu cao đặc).
Kết quả thu được như sau:
Bảng 6. Ảnh hưởng của thời gian chiết xuất (mẻ 125 kg)
Khối
lượng Tỉ lệ cao/dược Hàm lượng
cao thu được
liệu
Rutin
/cao
(kg)
(%)
(%)
Mẻ
số
Thời gian
1
1h+1h
13,2
10,56
0,13
2
1h+1h
12,7
10,16
0,12
3
1h+1h
12,9
10,32
0,13
Trung bình
12,9
10,34
0,13
1
2h+1h
15,5
12,40
0,12
2
2h+1h
15,9
12,72
0,12
3
2h+1h
15,3
12,24
0,11
Trung bình
15,56
12,45
0,12
1
3h+1h
17,9
14,32
0,11
2
3h+1h
17,5
14,00
0,12
3
3h+1h
17,6
14,08
0,11
Trung bình
17,6
14,1
0,11
1
4h+1h
17,9
14,32
0,07
2
4h+1h
18,0
14,64
0,06
3
4h+1h
17,8
14,24
0,07
Trung bình
17,9
14,32
0,07
chiết xuất
34
Nhận xét:
- Khối lượng cao thô thu được tăng tỉ lệ với thời gian chiết xuất, nhưng
hàm lượng rutin trong cao lại giảm dần. Sau 4 giờ (3h+1h), hiệu suất chiết
đạt 14,1 % nhưng sau 5 giờ (4h+1h), hiệu suất chiết chỉ tăng nhẹ trong khi
hàm lượng hoạt chất thì giảm mạnh. Như vậy thời gian chiết 4 giờ (3 giờ +
1 giờ) là hợp lý. Nếu kéo dài hơn nữa, hoạt chất không tăng thêm nhưng
tạp chất lại tan nhiều, đồng thời hàm lượng hoạt chất giảm đi thời gian tiếp
xúc nhiệt quá lâu, thời gian chiết kéo dài tốn thêm nhân lực và năng lượng.
3.5. Đánh giá 2 phương pháp cô đặc
- Chiết xuất 03 mẻ (125 kg/mẻ), cô dịch chiết từng mẻ hoàn toàn bằng thiết
bị cô áp suất giảm đến khi thu sản phẩm cuối.
- Chiết xuất 03 mẻ (125 kg/mẻ), cô dịch chiết từng mẻ hoàn toàn bằng thiết
bị cô áp suất hở (cô áp suất thường) đến khi thu sản phẩm cuối.
Kết quả thu được theo bảng sau:
Bảng 7: So sánh phương pháp cô đặc: áp suất giảm và áp suất thường
Phương pháp cô
Tổng
thể
HL
Thời
gian
KL
cao
thu
tích
dịch
/cao
cô
(giờ)
được
chiết (lít)
(%)
Mẻ 1
Áp suất Mẻ 2
Mẻ 3
giảm
TB
Mẻ 1
Áp suất Mẻ 2
Mẻ 3
thường
TB
1365
1340
1355
1353
1350
1345
1355
1350
7,3
7,4
7,3
5,33
37,5
37,5
36,5
37,0
17,8
17,5
17,6
17,6
17,0
17,1
16,8
16,9
rutin
0,12
0,13
0,13
0,13
0,07
0,08
0,07
0,07
Nhận xét:
- Kết quả trên cho thấy: cô áp suất thường thời gian kéo dài hơn rất nhiều
đồng thời hàm lượng hoạt chất cũng thấp hơn nhiều so với cô áp suất giảm.
35
- Trung bình mỗi giờ bộ phận cô áp suất giảm bay hơi được khoảng 300 lít
nước trong khi cô áp suất thường chỉ bay hơi được khoảng 30 lít. Công
đoạn cô hở tốn rất nhiều thời gian, tiêu tốn nhiều nhân lực và năng lượng,
làm giảm chất lượng cao thu được.
3.6. Đề xuất quy trình sản xuất cao hy thiêm
Qua khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến chiết xuất cao hy thiêm
trên hệ thống thiết bị hiện có của nhà máy như trên, chúng tôi đã từng bước
chọn được điều kiện tối ưu như sau:
- Dung môi chiết xuất : nước sinh hoạt
- Tỉ lệ dung môi/dược liệu: lần chiết 1 là 1.200 lít; lần 2 là 800 lít.
- Nhiệt độ chiết xuất : 1000C (áp suất nồi chiết 1 kg/cm2).
- Số lần và thời gian chiết : Chiết 02 lần
Lần 1: thời gian chiết là 03 giờ tính từ khi nồi đạt áp suất chiết.
Lần 2: thời gian chiết là 03 giờ tính từ khi nồi đạt áp suất chiết. Dịch
chiết thu được dùng làm dung môi cho mẻ chiết tiếp theo.
- Cô dịch chiết bằng hệ thống cô áp suất giảm đến khi còn khoảng
45% - 50% thể tích dịch chiết ban đầu.
- Cô hở ở nhiệt độ 60 - 700C đến khi cao có thủy phần khoảng 20%.
3.7. Triển khai sản xuất cao Hy thiêm
- Khảo sát sự ổn định của quy trình chiết xuất qua 6 mẻ chiết với khối
lượng dược liệu là 125 kg/mẻ.
- Lần lượt chiết xuất 06 mẻ dược liệu với điều kiện chiết xuất như mục 3.6.
- Hiệu suất chiết xuất và hàm lượng hoạt chất trong sản phẩm của 6 mẻ
dược liệu như sau:
36
Bảng 8 : Hiệu suất chiết xuất và hàm lượng hoạt chất trong sản phẩm theo quy
trình chiết xuất đề xuất
Mẻ
Mẻ
1
Mẻ
2
Mẻ
3
Mẻ
4
Mẻ
5
Mẻ
6
TB
Khối lượng cao đặc (kg)
18,5 17,8 18,2 18,0 17,9 18,4 18,1
Mất khối lượng do làm
23,0 22,5 23,0 22,3 21,0 22,7 22,5
khô (%)
Hàm lượng rutin (%)
0,12 0,13 0,12 0,12 0,11 0,12 0,11
Nhận xét:
Kết quả như trên cho quy trình chiết được đề xuất khá ổn định với
khối lượng cao đặc thu được trung bình là 18,1 kg/mẻ; hàm lượng rutin
trong sản phẩm là 0,11% đến 0,13%.
37
CHƯƠNG 4. BÀN LUẬN
4.1. Về nguồn nguyên liệu Hy thiêm
- Trong phạm vi thực hiện đề tài, tiến hành khảo sát trên 03 nguồn dược
liệu hy thiêm: Nguồn nguyên liệu công ty đang khai thác, nguồn của Viện
dược liệu và nguồn dược liệu có bán tại các nhà thuốc. Kết quả khảo sát
hàm lượng acid clorogenic và rutin từ 03 nguồn dược liệu trên bằng
phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao cho thấy các mẫu dược liệu đều có
hai thành phần này.
- Qua kết quả khảo sát cũng thấy rằng nguồn dược liệu công ty đang khai
thác có chất lượng không bằng các nguồn khác. Đây cũng chính là hạn chế
của việc thu mua dược liệu tự nhiên, không đánh giá đúng và kiểm soát
được chất lượng, sự đồng đều về chất lượng dược liệu... Do đó việc triển
khai nghiên cứu đưa dự án nuôi trồng hy thiêm (GACP) vào thực tế, kiểm
soát chất lượng nguồn dược liệu từ nuôi trồng là vấn đề cấp bách của Công
ty trong thời gian tới.
4.2 Về xây dựng các tiêu chuẩn cơ sở cho dược liệu và cao Hy thiêm
- Để đảm bảo được hiệu suất của quy trình chiết xuất và chất lượng sản
phẩm thì điều kiện bắt buộc là phải kiểm tra được chất lượng nguyên liệu
đầu vào và sản phẩm đầu ra. Do đó, cần thiết phải xây dựng được tiêu
chuẩn cơ sở cho dược liệu hy thiêm, trong đó ngoài các tiểu chuẩn được
quy định trong Dược điển Việt Nam IV thì việc xác định hàm lượng hoạt
chất chỉ điểm trong dược liệu cho phép đánh giá chính xác hơn chất lượng
của dược liệu. Với Hy thiêm, hàm lượng acid clorogenic và rutin có trong
dược liệu đã được công bố trong nhiều đề tài khoa học, cần được xây dựng
phương pháp định lượng chính xác để xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho dược
liệu Hy thiêm.
38
4.3. Về quy trình chiết xuất Hy thiêm
- Sau khi khảo sát và đánh giá ảnh hưởng của một số yếu tố liên quan đến
quy trình chiết xuất đã lựa chọn được các điều kiện phù hợp để hướng tới 2
tiêu chí: hiệu suất chiết xuất và hàm lượng hoạt chất trong cao.
- So với quy trình chiết xuất hiện hành đang áp dụng tại nhà máy sản xuất,
quy trình mới đã rút bớt được thời gian chiết xuất mà hiệu quả chiết xuất và
hàm lượng dược chất thu được tốt hơn. Như vậy sẽ giảm được bớt thời
gian, nhân lực và tiêu hao năng lượng. Khảo sát đánh giá được sự ảnh
hưởng của các yếu tố này là cơ sở cho các công tác nghiên cứu với các
dược liệu khác.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT
Kết luận
Sau thời gian thực hiện đề tài: “Đánh giá quy trình chiết xuất cao mềm hy
thiêm định chuẩn làm nguyên liệu sản xuất thuốc Hy đan”, đã thu được
một số kết quả sau:
1. Đã khảo sát và đánh giá được tiêu chuẩn dược liệu Hy thiêm của một số
nguồn khác nhau. Bước đầu xây dựng được tiêu chuẩn và phương pháp
định tính và định lượng hai thành phần acid clorogenic và rutin trong Hy
thiêm để xây dựng tiêu chuẩn cơ sở dược liệu Hy thiêm, làm cơ sở đánh giá
chất lượng thu mua dược liệu đảm bảo yêu cầu về chất lượng.
2. Đã khảo sát ảnh hưởng một số yếu tố (kích thước dược liệu, thời gian
chiết xuất, số lần chiết, so sánh 2 công đoạn cô cao) đến hiệu suất chiết
xuất và hàm lượng hoạt chất trong cao; đánh giá và lựa chọn được thông số
kỹ thuật phù hợp để xây dựng quy trình chiết xuất.
3. Đề xuất được quy trình chiết xuất cao hy thiêm trên hệ thống thiết bị
hiện có của Công ty CP dược VTYT Thanh Hóa. Quy trình có tính ổn
định, với hiệu suất trung bình 18,1kg cao/1 mẻ chiết.
39
Đề xuất
Do thời gian thực hiện đề tài có hạn, những kết quả nghiên cứu thu được
mới là bước đầu để định hướng cho những nghiên cứu tiếp theo. Chúng tôi
xin có một vài đề xuất hướng nghiên cứu sau đây:
- Tiếp tục khảo sát chất lượng các nguồn dược liệu hy thiêm, xây dựng tiêu
chuẩn cơ sở cho nguyên liệu này trong đó có chỉ tiêu định tính và định lượng
hoạt chất acid clorogenic và rutin làm sơ sở để đánh giá nguyên liệu đầu vào
đồng thời là tiền đề cho việc thực hiện các dự án nuôi trồng hy thiêm của
Công ty sắp triển khai trong thời gian tới.
- Tiếp tục tiến hành khảo sát và điều chỉnh các thông số, xây dựng quy trình
chiết xuất tối ưu, có định hướng đề xuất bổ sung thêm thiết bị phù hợp cho hệ
thống chiết xuất để cao thu được có chất lượng định chuẩn và cho hiệu quả
cao nhất trên hệ thống thiết bị hiện có của nhà máy.
- Tiếp tục khảo sát chất lượng của sản phẩm cao thu được, đánh giá chất
lượng và. Xây dựng tiêu chuẩn cơ sở cho cao hy thiêm có các chỉ tiêu định
lượng.
40
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tài liệu trong nước
2.1.
Vâ V¨n Chi (1997), Tõ ®iÓn c©y thuèc ViÖt Nam, NXB Y häc 1997.
2.
Ph¹m Hoµng Hé (2000), C©y cá ViÖt Nam QIII, NXB TrÎ (in lÇn thø
2).
3.
Đỗ Tất Lợi - Những c©y thuốc và vị thuốc Việt Nam - NXB Y học 2003. Tr. 494-495.
4.
Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt nam Tập I. - NXB khoa học và
kỹ thuật - 2004. Tr. 1036-1039.
5.
20 Së Y tÕ Thanh Ho¸ (1996), Thu thËp, kh¶o s¸t ®iÒu tra nguån D-îc
liÖu ë Thanh Ho¸, B¸o c¸o khoa häc thuéc ®Ò tµi cÊp tØnh.
6.
§oµn ThÞ Nhu, §ç Kim Chi (1976), “Nghiªn cøu t¸c dông chèng viªm
cña l¸ Hy thiªm trong ®iÒu trÞ khíp”, Th«ng b¸o D-îc liÖu, TËp 8,
ViÖn D-îc liÖu.
7.
Ph¹m Tr-¬ng ThÞ Thä, Ph¹m Duy Mai (1978), “Nghiªn cøu t¸c dông
chèng viªm cña l¸ Hy thiªm”, Th«ng b¸o D-îc liÖu, Sè 4, TËp 10, ViÖn
D-îc liÖu.
8.
Nguyễn Văn Đồng, Hoàng Trạch, Nguyễn Thích Bình (1994), “Tác
dụng của Hy thiêm tới chuyển hóa lipid và đông máu”, Tạp chí Dược
học, 6, trang 17-18.
9.
Lê Thị Kiều Nhi (2001), “Nghiên cứu hoá học một số hoạt chất có tác
dụng chống oxy hoá và chống nhiễm khuẩn từ cây hy thiêm
(siegesbeckia orientalis l.) và cây bòn bọt (glochidion eriocarpum
champ.) của Việt Nam, Luận án Tiến sỹ hóa học, Trường đại học Khoa
học Tự nhiên.
10. Nguyễn Viết Thân - Kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hiển vi
Tập I- NXB khoa học và kỹ thuật- 2003
11. Bài giảng Dược liệu Tập I - 1998. Tr. 210-211
12. Dược điển Việt Nam III. Tr.386-387.
Tài liệu nước ngoài:
13. Nam Koo dong, Kim jac Hoon (1974), Chemistry and farmacology of
diterpenoids of Siegesbeekia pubescens, Terpenoids pros, pp. 17 - 31.
14. Hwang WJ1, Park EJ, Jang CH, Han SW, Oh GJ, Kim NS, Kim HM.
(2001) “Inhibitory effect of immunoglobulin E production by jin-deukchal
(Siegesbeckia
orientalis)”
Immunopharmacology
and
Immunotoxiclogy, 23(4), pp. 555-563.
15. Giang, Phan-Minh; Son, Phan-Tong; Otsuka, Hideaki, 2005: EntPimarane-type diterpenoids from Siegesbeckia orientalis L. Chemical
and Pharmaceutical Bulletin (Tokyo) 53(2): 232-234
16. Hamill FA1, Apio S, Mubiru NK, Mosango M, Bukenya-Ziraba
R, Maganyi OW, Soejarto DD (2003), “Traditional herbal drugs of
southern Uganda, I.”, journal of Ethnopharmacology, 84(1), pp. 57-78.
17. Hong CH1, Hur SK, Oh OJ, Kim SS, Nam KA, Lee SK (2002)
“Evaluation of natural products on inhibition of inducible
cyclooxygenase (COX-2) and nitric oxide synthase (iNOS) in cultured
mouse macrophage cells” Journal of Ethnopharmacology, 83(1-2), pp.
153-159.
18. Kang DG1, Yun Ck, Lee HS. (2003) “Screening and comparison of
antioxidant activity of solvent extracts of herbal medicines used in
Korea” Journal of Ethnopharmacology, 87(2-3), pp. 231-236.
19. Nguyen Hai Nam (2000) “Cytotoxic principle of Siegesbeckia
orientalis growing in Vietnam”, journal of Chemistry, 38 (4), pp. 8486.
20. Ying Xiang , Hua Zhang , Cheng-Qi Fan Jian-Min Yue (2004) “Novel
Diterpenoids and Diterpenoid Glycosides from Siegesbeckiaorientalis”
, Journal of Natural Products, 67, pp.1517-1521.
21. Xie F, Li X, Sun K, Chu Y, Cao H, Chen N, Wang W, Liu M, Liu
W, Mao D (2001), “An experimental study on drugs for improving
blood circulation and removing blood stasis in treating mild chronic
hepatic damage”, Journal of Traditional Chinese medicines, 21 (3), pp.
225-231.
22. M.A.H.
Mollika, M.R.
Faruquea, M.
Badruddazab, A.
Chowdhuryc, M.S. Rahmand (2009) “Medicinal plants from
Sundarbans used for the prevention of cardiovascular diseases: A
pragmatic randomized ethnobotanical survey in Khulna division of
Bangladesh”, European Journal of Integrantive Medicine, 1(4), PP.
231-232.
23. Yin MH1, Kang DG, Choi DH, Kwon TO, Lee HS. (2005) “Screening
of vasorelaxant activity of some medicinal plants used in Oriental
medicines” Journal of Ethnopharmacology, 99(1), pp. 113-117
24. Wang F1, Cheng XL, Li YJ, Shi S, Liu JK (2009) “ent-Pimarane
diterpenoids from Siegesbeckia orientalis and structure revision of a
related compound” Journal of Natural Products, 72, pp.2005-2008.
PHỤ LỤC
1. Tiêu chuẩn cơ sở cây Hy thiêm
2. Quy trình sản xuất cao Hy thiêm
TIÊU CHUẨN KỸ THUẬT
CÔNG TY CP DƯỢC
-
TCCS: 037 – B – 055
- 15
CÂY HY THIÊM
VTYT THANH HÓA
Có hiệu lực từ ngày
ký
I. YÊU CẦU KỸ THUẬT
1.1. Tên khoa học: Siegesbeckia orientalis L.
1.2. Mô tả: Thân rỗng ở giữa, đường kính 0,2 cm đến 0,5 cm. Mặt ngoài
thân màu nâu sẫm đến nâu nhạt, có nhiều rãnh dọc song song và nhiều lông
ngắn sít nhau. Lá mọc đối, có phiến hình mác rộng, mép khía răng cưa tù,
có ba gân chính. Mặt trên lá màu lục sẫm, mặt dưới màu lục nhạt, hai mặt
đều có lông. Cụm hoa hình đầu nhỏ, gồm hoa màu vàng hình ống ở giữa, 5
hoa hình lưỡi nhỏ ở phía ngoài. Lá bắc có lông dính.
1.3. Soi bột:
- Soi kính hiển vi thấy: Lông che chở đa bào, dài, thường có 6 tế bào đến 8
tế bào xếp thành hàng, vách ngăn giữa các tế bào phình to đặc biệt, các tế
bào càng gần đầu lông càng càng dài và nhỏ dần. Hai loại lông tiết: loại đầu
hình cầu đa bào, chân đơn bào và loại đầu hình cầu đơn bào, chân đa bào.
Mảnh biểu bì mang lỗ khí. Mảnh mô mềm thân (tế bào hình chữ nhật), và
mô mềm lá (tế bào trong). Sợi đứng riêng lẻ hoặc tập trung thành bó, tế bào
sợi ngắn và nhỏ, khoang rộng. Hạt phấn hoa hình cầu gai tương đối to, gai
thưa và nhọn, bề mặt có 3 lỗ rãnh, đường kính khoảng 33 μm đến 35 μm,
màu vàng nhạt. Mảnh cánh hoa gồm tế bào màu vàng nhạt, thành mỏng.
Mảnh mạch vạch, mạch mạng.
1.4. Định tính:
- Pha tĩnh: Silica gel GF254 (Merck) đã được hoạt hóa ở nhiệt độ 1050C
trong 60 phút trước khi dùng.
- Hệ dung môi triển khai: EtOAc: CH3COOH: HCOOH: H2O (10:1:1:1)
Dung dịch đối chiếu: Cân chính xác 1 mg các chất chuẩn rutin (Merck) và
acid clorogenic (Merck), hòa tan hoàn toàn trong 1 ml MeOH, lọc qua
màng lọc 0,45 m thu được các dung dịch chấm sắc ký.
Dung dịch thử: Cân đúng 3g dược liệu hy thiêm đã xay nhỏ (bao gồm mẫu
hy thiêm nghiên cứu và mẫu hy thiêm chuẩn của Viện Dược liệu) cho vào
bình nón 50ml, thấm ẩm dược liệu bằng dung môi chiết:
- Chiết bằng dung môi MeOH: cho khoảng 20 ml vào bình nón, lắc đều rồi
siêu âm 30 phút khi chiết bằng MeOH (20ml).
- Chiết bằng nước: cho khoảng 20 ml nước cất và đun sôi trong 10 phút.
- Sau khi chiết xong, lọc dịch chiết qua giấy lọc, bay hơi dung môi thu
được cắn MeOH hoặc cắn nước. Hòa tan cắn trong 2 ml MeOH, lọc qua
màng lọc 0,45 m được dịch chấm sắc ký.
Tiến hành: chấm riêng biệt lên bản mỏng 15 l mỗi dung dịch thử và dung
dịch chất đối chiếu trên bản mỏng, cách mép dưới của bản mỏng khoảng 1
cm. Triển khai sắc ký trong bình kín đến khi dung môi chạy cách mép trên
của bản mỏng khoảng 1 cm. Lấy bản mỏng ra, sấy nhẹ bằng máy sấy cho
khô.
Quan sát các vết trên bản mỏng (sắc ký đồ) bằng mắt thường, dưới ánh
sang UV ở 254 nm (không phun thuốc thử) và 365 nm (phun thuốc thử acid
boric/ acid oxalic (2:1).
Kết quả: Mẫu thử phải có các vết cùng màu, cùng Rf với các vết của mẫu
đối chiếu.
1.5. Định lượng:
Điều kiện sắc ký:
Cột ODS-3 intersil (4.6mm x 250mm x 5mcm)
Pha động : Gradient
Thời
Dung dịch
gian
H3PO4 0,5%
0
75
20
60
40
40
49
40
50
75
Methanol
(HPLC)
25
40
60
60
25
- Detector PDA: 255 nm
- Thể tích tiêm mẫu: 20 mcl
- Tốc độ dòng: 1.0 ml/min
Mẫu chuẩn: pha acid clorogenic chuẩn và rutin chuẩn trong methanol để
được các dung dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ chính xác khoảng: (acid
clorogenic: 5 µg/ml và rutin: 5 µg/ml); (acid clorogenic: 20 µg/ml và rutin:
20 µg/ml); (acid clorogenic: 50 µg/ml và rutin: 50 µg/ml); (acid clorogenic:
100 µg/ml và rutin: 100 µg/ml); (acid clorogenic: 200 µg/ml và rutin: 200
µg/ml); lọc qua màng lọc 0,45 µm.
Mẫu thử cao đặc: Cân 0,5 g cao đặc vào bình nón 100 ml, thêm chính xác
50 ml methanol, cân khối lượng bình, lắc siêu âm 30 phút, để nguội. bổ
sung lượng MeOH hao hụt cho vừa đủ khối lượng cân trước, lọc qua giấy
lọc rồi lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm.
Mẫu thử dược liệu: Cân 3g bột dược liệu vào bình nón 100 ml, thêm chính
xác 50 ml methanol, cân khối lượng bình, lắc siêu âm 30 phút, để nguội. bổ
sung lượng MeOH hao hụt cho vừa đủ khối lượng cân trước, lọc qua giấy
lọc rồi lọc qua màng lọc kích cỡ 0,45µm.
- Tiến hành
- Kiểm tra tính thích hợp của hệ thống sắc ký: Tiến hành sắc ký với dung
dịch chuẩn hỗn hợp có nồng độ chính xác khoảng 50 µg/ml đã chuẩn bị ở
trên, độ lệch chuẩn tương đối của các diện tích đáp ứng từ 6 lần tiêm lặp lại
không được lớn hơn 2,0% đối với cả hai hoạt chất.
- Tiêm riêng biệt các dung dịch chuẩn hỗn hợp, tiến hành sắc ký, ghi lại các
sắc ký đồ và phổ đồ 3D của các píc chuẩn. Thiết lập đường chuẩn của acid
clorogenic và đường chuẩn của rutin về mối tương quan giữa nồng độ dung
dịch ( µg/ml) và diện tích pic tương ứng theo phương trình: y1= a1x1+b1 đối
với acid clorogenic; y2= a2x2+b2 đối với acid clorogenic. (y: là diện tích píc,
x là nồng độ µg/ml).
Tiến hành sắc ký với dung dịch thử. Ghi lại sắc ký đồ và phổ đồ 3D của các
píc thử.
Định tính: yêu cầu píc của mẫu thử có thời gian lưu và dải phổ hấp thụ 3D
(từ bước sóng 210 nm đến 400 nm) của píc trùng với píc của dung dịch
chuẩn.
Định lượng: Tính nồng độ (µg/ml) của acid clorogenic (X1: nồng độ acid
clorogenic trong mẫu cao đặc (µg/ml); X2: nồng độ acid clorogenic trong
mẫu dược liệu (µg/ml))và nồng độ rutin (X3: nồng độ rutin trong mẫu cao
đặc (µg/ml); X4: nồng độ rutin trong mẫu dược liệu (µg/ml)) có trong dung
dịch thử (dung dịch thử từ mẫu cao đặc và dung dịch thử từ mẫu dược liệu)
dựa vào đường chuẩn của acid clorogenic và đường chuẩn của rutin. Từ
nồng độ tìm được của acid clorogenic và rutin có trong cao đặc, dược liệu.
Tính hàm lượng (%) của các hoạt chất này có trong cao đặc và trong dược
liệu theo các công thức sau:
Hàm lượng acid clorogenic trong cao được tính theo công thức:
X1*50*100*100
X1.1 (%) =
106*mcđ*(100-C1)
Trong đó:
- X1: nồng độ acid clorogenic trong cao đặc (µg/ml)
- mcđ: khối lượng của cao đặc (g)
- C1: độ ẩm của cao đặc (%).
Hàm lượng acid clorogenic trong dược liệu được tính theo công thức:
X2*50*100*100
X1.2 (%)=
106*mdl*(100-C2)
Trong đó:
- X2: nồng độ acid clorogenic trong dược liệu (µg/ml)
- mdl: khối lượng của dược liệu (g)
- C2: độ ẩm của dược liệu (%).
Hàm lượng rutin trong cao được tính theo công thức:
X3*50*100*100
X1.3 (%)=
106*mcđ*(100-C1)
Trong đó:
- X3: nồng độ rutin trong cao đặc (µg/ml)
- mcđ: khối lượng của cao đặc (g)
- C1: độ ẩm của cao đặc (%).
Hàm lượng rutin trong dược liệu được tính theo công thức:
X4*50*100*100
X1.4 (%)=
106*mdl*(100-c2)
- Trong đó:
- X4: nồng độ rutin trong dược liệu (µg/ml)
- mdl: khối lượng của dược liệu (g)
- c2: độ ẩm của dược liệu (%).
1.6. Độ ẩm: Không quá 12%.( Thử theo DĐVN IV, phụ lục 9.6; sử dụng
1,0g dược liệu, 1000C, 5 giờ)
1.7. Tạp chất: Không quá 1,0%.( Thử theo DĐVN IV, phụ lục 9.7; phương
pháp 1)
1.8. Tỷ lệ vụn nát: Qua rây có kích thước mắt rây 4 mm: Không quá 5,0 %
(Phụ lục 12.12).
II. ĐÓNG GÓI, GHI NHÃN, BẢO QUẢN, HẠN DÙNG.
- Đóng gói: Đóng bó khoảng 30 kg, bên ngoài bì tải.
- Ghi nhãn: Ghi nhãn rõ ràng, đúng quy chế
- Bảo quản:. Nơi khô ráo, tránh ẩm.
- Hạn dùng: 36 tháng.
Ngày ...... tháng ...... năm 2015
TỔNG GIÁM ĐỐC
QUY TRÌNH SẢN XUẤT CAO HY THIÊM
NỘI DUNG
I. THÔNG TIN SẢN PHẨM
Trang 2
II. CÔNG THỨC
Trang 2
III. TIÊU CHUẨN NGUYÊN PHỤ LIỆU
Trang 2
IV. THIẾT BỊ VÀ DỤNG CỤ
Trang 3
V. QUÁ TRÌNH SẢN XUẤT
1. Rửa dược liệu
Trang 4
Trang 4 -
2. Chiết xuất dịch chiết dược liệu
3. Cô cao
4. Đóng gói
5. Bảo quản
5
Trang 5
Trang 6
Trang 6
VI. HÌNH THỨC LƯU TRỮ
Trang 6
VII. SỬA ĐỔI VÀ BỔ SUNG
Trang 6
I. THÔNG TIN SẢN PHẨM
TÊN SẢN PHẨM
CAO ĐẶC HY THIÊM
MÃ SỐ SẢN PHẨM
NL 501
DẠNG BÀO CHẾ
Cao đặc
TIÊU CHUẨN KỸ THUẬT
TCCS: 037 – B – 868 - 12
CỠ LÔ LÝ THUYẾT
130 kg
QUY CÁCH ĐÓNG GÓI
Thùng nhựa 30 – 50 kg trong 2 lần túi PE
HẠN DÙNG
60 tháng
II. CÔNG THỨC:
TT
Nguyên liệu
1
Hy thiêm
2
Natri benzoat
Độ ẩm
12 %
Hàm lượng
1 lô 130 kg cao
đặc
1.000 kg
467 gam
III. TIÊU CHUẨN NGUYÊN PHỤ LIỆU:
Nguyên liệu
Đạt tiêu chuẩn
Hy thiêm
DĐVN IV.
Natri benzoat
DĐVN IV.
IV. THIẾT BỊ DỤNG CỤ
TÊN THIẾT BỊ VÀ
STT
DỤNG CỤ
Đặc tính kỹ thuật
Mã số
Số
lượng
Thiết bị đo lường
1
Cân đồng hồ
100 kg ± 0,2 kg
01
2
Cân điện tử
2000 g ± 2g
01
Thiết bị sản xuất
3
Máy rửa dược liệu
TB 5.51
01
4
Máy thái dược liệu
TB 5.52
01
5
Hệ thống chiết xuất dược liệu
- V = 1500 lít
TB 5.56
01
6
Hệ thống cô cao hở
- V = 700 lít
TB 5.57
01
Thiết bị kiểm tra
8
Máy xác định hàm ẩm nhanh
Các dụng cụ cần thiết khác
01
V. QUÁ TRÌNH SẢN XUẤT:
1. Rửa dược liệu: Chia lô sản xuất 130 kg cao đặc (1.000 kg dược liệu hy thiêm) làm 8
mẻ rửa dược liệu, mỗi mẻ 125 kg.
1.1. Công thức: Cho 1 mẻ
Hy thiêm
125,0 kg
Nước máy
Vừa đủ
1.2. Tiến hành:
- Thiết bị sản xuất: Máy rửa dược liệu (TB 5.51).
- Cho dược liệu vào máy, rửa sạch dược liệu bằng nước máy.
2. Chiết xuất dịch chiết dược liệu: Chia lô sản xuất 130 kg cao đặc (1.000 kg dược
liệu hy thiêm) làm 8 mẻ chiết xuất, mỗi mẻ 125 kg.
2.1. Công thức: Cho 1 mẻ
Hy thiêm
125,0 kg
Nước máy
Vừa đủ
2.2. Tiến hành:
- Thiết bị sản xuất: Hệ thống chiết xuất dược liệu (TB 5.56).
- Cho dược liệu vào nồi chiết.
- Xả nước máy ngập mặt dược liệu. Cài vỉ.
- Mở van xả hơi nước cấp nhiệt cho nồi chiết xuất.
- Thông số chiết xuất lần 1:
+ Nước đưa vào (ngập dược liệu)
+ Thời gian chiết (tính từ lúc sôi, áp suất
trong nồi: 1,0 kg/cm2)
+ Thể tích dịch chiết
1.100 - 1.200 lít
03 giờ
Khoảng 800 – 900 lít
- Dịch chiết được lọc qua bình lọc vải.
- Sau khi qua lọc vải dịch chiết được lắng qua thiết bị lắng xoáy, thời gian lắng xoáy: 1
giờ.
- Dịch chiết sau khi lắng xoáy được đưa vào thiết bị cô tuần hoàn, mở van xả hơi nước
cấp nhiệt cho thiết bị cô tuần hoàn.
- Thông số cô tuần hoàn:
Thời gian cô tuần hoàn
Áp xuất cô tuần hoàn
2 - 4 giờ
- 0,04 đến - 0,06 1,0 kg/cm2
- Thông số chiết xuất lần 2:
+ Nước đưa vào (ngập dược liệu)
800 lít
+ Thời gian chiết (tính từ lúc sôi, áp suất
trong nồi: 1kg/cm2 )
1 giờ
+ Thể tích dịch chiết
Khoảng 800 lít
- Dịch chiết 2 được sử dụng để chiết mẻ tiếp theo.
- Dịch chiết 2 của mẻ chiết cuối tiến hành lọc, lắng xoáy, cô tuần hoàn như dịch chiết 1.
3. Cô cao:
3.1. Công thức: Cho lô sản xuất 130 kg cao đặc
Dịch chiết
Natri benzoat
467,0 gam
3.2. Tiến hành
- Thiết bị sản xuất: Hệ thống cô cao hở (TB 5.57)
- Mở van xả dịch chiết trong bình trung gian vào 3 nồi cô cao lỏng đến vạch. Tiến hành
cô cao. Nhiệt độ nồi cô 60 - 70 oC
- Liên tục bổ sung dịch chiết vào 3 nồi đến khi hết dịch chiết.
- Cô đến khi dịch chiết còn khoảng ½ nồi, chuyển dịch chiết nồi 1 sang nồi 2 và 3.
- Tiếp tục cô nồi 2 và nồi 3 đến khi dịch chiết còn khoảng ½ nồi. Chuyển dịch chiết từ
nồi 2 sang nồi 3.
- Tiếp tục cô nồi 3, cài nhiệt độ khoảng 60oC.
- Cô nồi 3 đến khi còn 1/3 dịch chiết, chuyển cao lỏng từ nồi cô cao lỏng sang nồi cô
đặc.
+ Nhiệt độ cô cao đặc: 50 - 60oC
- Khi cao gần đạt (cảm quan). Cho 467 gam natri benzoat vào. Và tiếp tục cô cao đến
khi đạt độ ẩm < 20%.
- Sau khi kết thúc quá trình cô cao. Cao được làm mát ở điều kiện bình thường.
- Trước và trong khi lấy cao đóng gói, nồi cô cao được đặt dưới LAF di động.
- Sản phẩm trung gian: Cao đặc hy thiêm.
- Kiểm tra sản phẩm trung gian.
- Đóng gói sản phẩm.
4. Đóng gói:
- 20 kg cao/2 lần túi PE, buộc kín, đóng vào thùng carton. Dán nhãn đúng quy định.
5. Bảo quản: Nơi khô, nhiệt độ dưới 30 oC, tránh ánh sáng.
VI. HÌNH THỨC LƯU TRỮ
- Tập văn bản gốc “QTSX gốc” lưu tại phòng Đảm bảo chất lượng.
- File: QSX NL501 - 00 lưu tại máy tính phòng Đảm bảo chất lượng
VII. SỬA ĐỔI VÀ BỔ SUNG QUI TRÌNH PHA CHẾ
Ngày
TT
sửa
đổi/BS
Nội dung sửa
Lý do sửa đổi/bổ
đổi/bổ sung
sung
Lô áp
Người
Người
dụng sửa
thực
xét
đổi /BS
hiện
duyệt
[...]... xuất quy trình sản xuất cao hy thiêm - Dựa trên các kết quả khảo sát các yếu tố ảnh hưởng tới quy trình chiết xuất để đề xuất QTSX phù hợp để sản xuất cao Hy thiêm 2.5.7 Triển khai sản xuất cao Hy thiêm - Triển khai sản xuất 3 đến 6 mẻ, mỗi mẻ 125 kg dược liệu Từ đó khẳng định tính khả thi và ổn định của quy trình 2.6 Thời gian và địa điểm thực hiện nghiên cứu - Các nghiên cứu chiết xuất hy thiêm được... dựng TCCS dược liệu Hy thiêm - Qua những khảo sát về nguồn nguyên liệu và xây dựng quy trình chiết xuất hy thiêm thấy chất lượng dược liệu đầu vào cho quy trình sản xuất là yếu tố quan trọng hàng đầu ảnh hưởng đến kết quả sản xuất - Tiêu chuẩn dược liệu hy thiêm bao gồm đầy đủ các chỉ tiêu quy định trong DĐVN IV, bao gồm: Độ ẩm: không lớn hơn 12% Tạp chất: Không quá 1% Tỷ lệ lá trong dược liệu: Không... thước khác nhau 2.4.3 Phương pháp chiết xuất hy thiêm 18 Hy thiêm Cắt đoạn 3-5 cm Chiết xuất lần 1 Nước 1200 lít Bã dược liệu Dịch chiết lần 1 Cô đặc Dịch chiết lần 2 Cao hy thiêm Bã dược liệu Chiết xuất lần 2 Nước 800 lít Dùng đê chiết mẻ khác Bỏ Sơ đồ 2:Sơ đồ quy trình chiết xuất hy thiêm 2.4.4 Phương pháp định tính acid clorogenic và rutin trong dược liệu bằng sắc ký lớp mỏng: - Pha tĩnh: Silica gel... năng cao 2.5.2 Đánh giá ảnh hưởng của độ mịn dược liệu - Xác định sự cần thiết và ý nghĩa việc chia nhỏ dược liệu trước khi chiết xuất: Xác định kích thước dược liệu thích hợp để chiết xuất - Khảo sát với 2 mẫu dược liệu: + Mẫu 1 là dược liệu cắt đoạn 3-5 cm; + Mẫu 2 là bột nửa mịn dược liệu - được nghiền qua máy nghiền búa Tiến hành chiết xuất 02 lần, mỗi lần 02 giờ rồi cô dịch chiết thành cao đặc Đánh. .. Đánh giá các chỉ tiêu: số lượng cao thu được, hàm lượng acid clorogenic và rutin trong trong cao 2.5.3 Đánh giá ảnh hưởng của số lần chiết xuất - Tiến hành chiết xuất các mẻ dược liệu 3 lần, mỗi lần 2 giờ - Cô riêng dịch chiết từng mẻ - Cân xác định khối lượng cao và xác định hàm lượng hoạt chất có trong cao: Hiệu suất chiết (%); Hàm lượng clorogenic /cao (%); Hàm lượng Rutin /cao (%) 2.5.4 Đánh giá ảnh... liệu) - chiết bằng MeOH C1: Chất đối chiếu Rutin C2: Chất đối chiếu clorogenic acid T1n: Hy thiêm (mẫu thử là nguyên liệu của công ty) - chiết bằng nước T1m: Hy thiêm (mẫu nguyên liệu của công ty) - chiết bằng MeOH T2n: Hy thiêm (mẫu DL mua tại nhà thuốc Sơn Lâm) - chiết bằng nước T2m: Hy thiêm (mẫu DL mua tại nhà thuốc Sơn Lâm) - chiết bằng MeOH - Sắc ký đồ của các mẫu thử Dc1; và Dc2; T1n; T2n; T1m;... trong dược liệu (µg/ml) - mdl: khối lượng của dược liệu (g) - c2: độ ẩm của dược liệu (%) 2.5 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 2.5.1 Xây dựng TCCS dược liệu Hy thiêm Xác định hàm lượng acid clorogenic và rutin từ 3 - 6 mẫu dược liệu khác nhau Từ đó xây dựng TCCS cho dược liệu Hy thiêm, trong đó có chỉ tiêu hàm lượng acid clorogenic và rutin Phương pháp xây dựng tiêu chuẩn của dược liệu hy thiêm : Xây... Quốc, Hy thiêm được dùng phối hợp với các cây thuốc khác để điều trị ung thư, chảy máu não kèm theo chứng liệt Ở một số nơi, Hy thiêm được dùng với tác dụng gây liền sẹo ở bên ngoài và bên trong cơ thể, dịch ép rễ Hy thiêm trị vết thương, cao toàn phần có tác dụng kháng khuẩn, trị tổn thương da, bệnh hoa liễu và nấm da, làm thuốc tẩy và chống nôn [4] Tại Bangladesh, Hy thiêm là một trong các cây thuốc. .. phun thuốc thử) và 365 nm (phun thuốc thử acid boric/ acid oxalic (2:1) Kết quả: Hình 1 Sắc ký đồ TLC của các mẫu dược liệu hy thiêm (Siegesbeckia orientalis L.) Ghi chú: 27 A: Hình ảnh quan sát ở UV 254 B: Hình ảnh quan sát ở UV 365 - sau khi phun thuốc thử axit boric/ axit oxalic (2:1) Trong đó: Dc1: Hy thiêm (mẫu thử là DL Viện dược liệu) - chiết bằng nước Dc2: Hy thiêm (mẫu thử là DL Viện dược liệu) ... ngắn thời gian tiêu fibrin [8], [4] 14 CHƯƠNG 2: NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu Là cây hy thiêm được thu mua ở Hòa Bình – hiện đang là nguồn nguyên liệu hy thiêm chính của công ty 2.2 Dung môi và hóa chất - Chất chuẩn acid clorogenic (HL: 99,97% ), rutin (HL: 99,95%) đạt tiêu chuẩn phân tích được Viện Kiểm Nghiệm Thuốc TW cung cấp - Bản mỏng silicagel GF254 (bản ... nõng cao cht lng sn phm Hy an ng thi tit kim ti a chi phớ sn xut, nõng cao sc cnh tranh ca sn phm thuc Hydan, ti ỏnh giỏ quy trỡnh chit xut cao mm Hy thiờm nh chun lm nguyờn liu sn xut thuc Hy. .. lng cao thu c; Hm lng hot cht rutin/acid clorogenic cao 2.5.6 xut quy trỡnh sn xut cao hy thiờm - Da trờn cỏc kt qu kho sỏt cỏc yu t nh hng ti quy trỡnh chit xut xut QTSX phự hp sn xut cao Hy. .. Xõy dng c tiờu chun dc liu Hy thiờm lm nguyờn liu chit xut cao Hy thiờm phc v cho sn xut thuc Hydan ỏnh giỏ mt s yu t nh hng ti quỏ trỡnh chit xut Hy thiờm v xut quy trỡnh chit xut vi cỏc thụng
Ngày đăng: 22/10/2015, 10:36
Xem thêm: Đánh giá quy trình sản xuất cao hy thiêm làm nguyên liệu sản xuất thuốc hy đan, Đánh giá quy trình sản xuất cao hy thiêm làm nguyên liệu sản xuất thuốc hy đan