BÔ Y TÉ TRUÔNG DAI HOC DUOC HÀ NÔI NGUYÊN THI HONG NHIÊN NGHIÊN CLTU TÂC DUNG CHÔNG VIÊM MÂN CÜA SAPONIN CÂY KIM NGÂN ( LONICERA JAPONICA THUNB., CAPRIFOLIACEAE ) KÉT HOP VÔI a-CHYMOTRYPSIN VÀ a-AMYLASE ( KHOÂ LUÂN TOT NGHIÊP DUOC SŸ KHOA 2002 - 2007 ) Ngudi huông dân : Th.S Lê Thi Diêm Hong Noi thuc hiên : Bô mon Sinh Hoâ Thài gian thuc hiên : 2/2007 - 4/2007 HÀ NÔI, 5 - 2007 LÔI CÂM ON Tôi xin bày tô long biét cfn sâu sac toi GS.TS. Nguyên Xuân Thâng, chu nhiêm Bô mon Sinh Hoâ truông Dai hoc Duoc Hà Nôi - nguôi thày dà giup dô và dông viên tôi rat nhiêu trong suô't quâ trînh nghiên crïu khoa hoc. Tôi xin bày tô long biét on chân thành nhâ't toi Th.S Lê Thi Diêm Hong, giâng viên Bô mon Sinh hôa truông Dai hoc Duoc Hà Nôi - ngirôri dâ truc tiê'p huông dân tôi tân tînh trong suô't quâ trînh làm luân vân tôt nghiêp. Tôi xin gui lcfi câm on dén câc thày giâo, cô giâo truông Dai hoc Duoc Hà Nôi, dàc biêt là câc thày giâo, cô giâo, câc chi kÿ thuàt viên Bô mon Sinh Hoâ dâ giüp dô tôi nhiêt tînh trong suô't quâ trînh hoc tàp và thuc hiên dê tài. Tôi xin câm on cha me, nhûng nguôi thân và ban bè dâ luôn co vü, dông viên và giüp dô tôi trong cuôc sô'ng và hoc tàp. Hà Nôi, ngày 20 thâng 5 nam 2007 Sinh viên Nguyên Thi Hong Nhiên CAC KŸ HIÊU VIÉT TÂT a-A a-Amylase a-CT a-Chymotrypsin BC Bach eau COX Cyclooxygenase ESR Toc dô mâu lâng IL Interleukin INF-y Interferon-y PAF Yéu to hoat hoâ tiëu eau TNF Yéu to hoai tu khoi u SE Standard Error (Sai so chuân) SKNC Saponin kim ngân cuông MUC LUC Trang DAT VAN DE 1 Phàn 1: TONG QUAN 3 1.1. BÊNH HOC VIÊM 3 1.1.1. Dai ciïüng vê viêm 3 1.1.2. Câc té bào tham gia vào quâ trînh viêm 4 1.1.3. Câc phân lîng xây ra trong viêm 5 1.1.4. Câc yéu to trung gian hoâ hoc trong quâ trînh viêm 6 1.1.5. Viêmmantmh 9 1.1.6. Hàn gàn vêt thirong 11 1.2. DAI CÜONG VÊ SAPONIN 12 1.2.1. Khâi niêm chung 12 1.2.2. Phân loai và câ'u trüc hoâ hoc 12 1.2.3. Phânbô' 14 1.2.4. Tfnh chât cüa saponin 15 1.2.5. Tâc dung sinh hoc 16 1.3. CÂC THUÔC CHÔNG VIÊM 18 1.3.1. Thuô'c chô'ng viêm steroid 18 1.3.2. Thuô'c chô'ng viêm phi steroid 19 1.3.3. Câc enzyme chô'ng viêm 19 1.3.4. Duoc lieu chô'ng viêm 21 Phân 2: THlTC NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ 24 2.1. NGUYÊN LIEU VÀ PHlTONG PHÂP NGHIÊN CÜU 24 2.11. Nguyên lieu 24 2.1.2. Phtfofng phâp nghiên cüu 26 2.2. KÊT QUÂ NGHIÊN CÜtJ VÀ NHÂN XÉT 30 2.2.1. Théo dôi tâc dung chô'ng tâng sinh u hat 30 2.2.2. Théo dôi su bien doi cüa mot vài chï so trong viêm man tînh 2.3. BÀN LUÂN 2.3.1. Tac dung chô'ng viêm cüa saponin cây kim ngân két hop voti a-amylase và a-chymotrypsin trên mô hînh gây viêm man bàng amian 2.3.2. Tac dung chong viêm man cüa saponin kim ngân két hop vai a-amylase và a-chymotrypsin qua viêc theo dôi mot sô chî sô hoâ sinh và sinh hoc KÉT LUÂN VÀ DE XUÂT TÀI LIEU THAM KHÂO DAT VAN DE Viêm là mot bênh lÿ rat phé bien, gâp à nhiêu bênh và do nhiéu nguyên nhân gây ra. Vê mât sinh lÿ, viêm là mot phân ûng bâo vê cüa co thé, giüp chong lai câc tac nhân cô hai khi chüng xâm nhâp vào ca thé. Tuy nhiên, khi phân un g viêm trô nên nâng và kéo dài, dâc biêt là trong nhûng truông hop viêm trô thành man tmh thi ngoài vai trô tich eue trong viêc loai trùf tac nhân gây bênh thï viêm côn gây nên nhûng ton thuong mô co thë tram trong dân dén nhung roi loan vê chûc nâng cüa câc co quan, bô phân co thë, gây ra nhiêu ânh huông xâ'u thâm chi gây nguy hai dén tmh mang nguôi bênh. Do vây, viêc nghiên cûu và sân xuât ra câc loai thuôc ngân chân quâ trînh viêm trô thành mot nhiêm vu không thë thiê'u cüa nên y hoc thê' giôi. Tû nhiêu nâm nay, câc loai thuôc chông viêm co nguôn gôc hoâ duoc dà ra dôi và duoc ung dung rông rài trên lâm sàng. Trong do, hai nhôm thuôc duoc su dung chü yeu là thuôc chông viêm cô câu truc steroid và thuôc chông viêm phi steroid. Qua thôi gian sü dung, câc thuôc này co uu diëm là tac dung tôt và dat hiêu quâ cao trong viêc han ché và ngân chân quâ trinh viêm. Tuy nhiên, cùng dô, chüng cüng bôc lô nhiêu yéu tô bât loi dôi vôi co thë nhu: gây suy giâm miên dich, xôp xuong, teo co, viêm loét duông tiêu hoâ, ânh huông dén quâ trinh dông mâu và tao mâu,... Trong khi dô, su kéo dài cüa viêm man tfnh dôi hôi nguôi bênh phâi sü dung thuôc chông viêm mot câch lâu dài. Diêu dô dân dén müc dô tram trong cüa nhûng phân üng phu do câc thuôc chông viêm hoâ duoc ngày càng cao, gây de doa dén tmh mang cüa nguôi bênh. Trong nhûng nâm gân dây, su ra dôi cüa câc ché phâm enzyme nôi sinh co tâc dung chông viêm dâ mô ra mot khuynh huông môi cho y duoc hoc hiên dai. Câc enzyme này không nhûng mang lai hiêu quâ diêu tri tôt cho câc bênh lÿ vê viêm mà nô côn làm giâm toi thiëu câc tâc dung phu cüa nhôm thuôc hoâ duoc. Bên canh dô, câc hoat chat chiét xuât tû duoc lieu cüng cô tiêm nâng to lôn vôi viêc nghiên cûu thuôc chông viêm. Nhûng công trînh nghiên cûu gàn dây vê tâc dung chông viêm cüa duoc lieu cho thâ'y mot trong câc nhôm hoat chat xuât hiên nhiêu trong câc duoc lieu cô khâ nâng chông viêm manh là câc saponin. Nhûng 1 bàng chüng lâm sang dâ cho thây câc duoc liêu này không nhûng mang lai hiêu quâ chông viêm tôt mà con làm giâm toi da nhûng tac dung không mong muô'n trên nguôi bênh khi diêu tri lâu dài. Trong nên y hoc truyèn thông phuong Dông nôi chung và nên y hoc dân toc Viêt Nam nôi riêng thï cây kim ngân tir lâu dâ duoc coi là vi thuôc thanh nhiêt giâi dôc co tac dung tri mun nhot, man ngüa, viêm nhiêm thông dung và co hiêu quâ tôt. Câc nghiên cü’u gân dây dâ chî ra vai trô cüa mot trong nhûng nhôm hoat chat co trong kim ngân dôi vai quâ trinh viêm do là saponin, trong do dâc biêt là câc thành phàn loniceroside A, B và C. Trên co sô do, chüng tôi tien hành dê tài: “ Nghiên cüfu tac dung chông viêm màn cüa saponin cây kim ngân (Lonicera japonica Thunb., Caprifoliaceae) két hop voi a- chymotrypsin và a-amylase.” Dé tài duoc thuc hiên nhâm mot sô mue tiêu sau : 1. Théo dôi tâc dung chông viêm cüa saponin kim ngân trên mô hinh gây viêm man tînh. 2. Thü két hop tâc dung chông viêm man trnh cüa saponin kim ngân à liêu hiêu quâ nhât trên viêm câp tînh két hop vdi a-chymotrypsin và vôi a-amylase. 3. Théo dôi su bién doi trong quâ trinh viêm trên câc chî sô : bach câu, protein toàn phàn trong huyét thanh, seromucoid huyét thanh, câc thành phàn protein và tÿ sô A/G (albumin/ globulin). 2 Phân 1 TONG QUAN 1.1. BENH HOC VIÊM 1.1.1. Dai ctïtfng vê viêm a. Khâi niêm viêm Viêm là mot hiên tuong pho bien du'çfc biét dén tùf lâu. Trong y hoc co dai, ngudi ta dâ mô tâ viêm vôi câc hiên tuçmg strng, nông, dô, dau và ton thuong chü'c nâng. Théo Aldo (1973), viêm là mot phân üng tai chô cüa câc mach mâu, to chüc liên két và hê thàn kinh dôi voi câc tâc nhân gây bênh và co liên hê voi tfnh phân üng cüa co thé. Con theo tü diën Bâch khoa Duoc hoc dinh nghîa: “ Viêm là phân üng tai chô cüa co thé do câc mô bi kfch thich hoâc thuong ton. Do là mot phân üng phüc tap cüa câc mô liên két và cüa tuân hoàn mao mach à noi bi tâc dông, duoc biëu hiên bàng câc triêu chüng sung, nông, dô, dau và roi loan chüc phân” [18, 630]. b. Nguyên nhân gây viêm Phân üng viêm do nhièu nguyên nhân khâc nhau. Co thé chia làm 2 loai : *** Nguyên nhân bên ngoài • Nhiêm khuân: vi khuân và kÿ sinh trùng. • Tâc nhân vât lÿ: co hoc, nhiêt hoc, büc xa ion. • Tâc nhân hoâ hoc: chât hoà tan gây hoai tü té bào và ton thuong chât gian bào, chât dâc gây thuc bào cüa bach eau da nhân. '/* Nguyên nhân bên trong: hoai tü to chüc, xuât huyét, tàc mach, roi loan thàn kinh dinh duông, hînh thành phüc hop miën dich, su thay doi nôi sinh chât gian bào. c. Phân loai viêm *** Theo nguyên nhân: viêm nhiêm khuân và viêm vô khuân. *** Theo vi tri: viêm nông, viêm sâu (bên ngoài và bên trong). *** Theo dich ri viêm: viêm thanh dich, viêm to huyét, viêm mü,... tuÿ theo dich viêm giong huyét thanh, huyét tuong hay chüa nhiêu bach càu thoâi hoâ. *** Theo diên bien: viêm câp và viêm man 3 *** Théo tînh chat: • Viêm dâc hiêu: thuông man tmh do phân ûng khâng nguyên - khâng thë. • Viêm không dâc hiêu: thucmg là viêm câp. 1.1.2. Câc té bào tham gia vào quâ trinh viêm Viêm huy dông rat nhiêu thành phân té bào, bao gôm câc bach càu hat, té bào mast, hê lympho - don bào, tiëu càu và câc thành phàn cüa mô dêm. a. Bach càu da nhân trung tinh Bach càu da nhân trung tinh chiém khoâng 60 - 70% tong sô bach càu trong mâu ngoai vi, bào tuong cô dura nhiêu hat nhô. Trong viêm, bach càu da nhân trung tinh cô vai trô là hàng rào bào vê dàu tiên cüa co thë vôi nhiêm trùng, thuc bào câc vi sinh vàt, câc phuc hop khâng nguyên - khâng thë và câc chat tro. Bach càu da nhân trung tmh tàng trong nhûng truông hop nhiëm khuân cap. b. Bach eau âi toan Bach càu âi toan chiém khoâng 1 - 5% tong sô bach càu trong mâu ngoai vi, bào tuong cô câc hat dâc hiêu Ua acid, trong chûa nhiêu protein cô hoat tmh sinh hoc dâc biêt là protein tinh kiêm cao - là yéu tô diêt khuân và dôc vôi câc kÿ sinh trùng. c. Bach càu âi kiêm và ditâng bào (têbào Mast) Là nhûng té bào viêm quan trong. Bach càu âi kiêm tuàn hoàn trong mâu và duoc huy dông khi cô di ûng. Duông bào eu trü và thuàn thuc trong câc mô. Bach càu âi kiêm và duông bào sân xuàt ra nhiêu chat trung gian hoâ hoc lipid và protein cô hoat tmh viêm nhu câc chat hoâ huông dông, câc chat hoat hoâ té bào và câc yéu tô phât triën té bào. d. Bach càu don nhân (te bào Mono) và dai thuc bào Bach càu don nhân tao thành ô tuy xuong qua quâ trînh phân chia và biêt hoâ tû nguyên bào don nhân. Sau dô, chüng di vào vông tuàn hoàn roi vào mô. Tai mô, chüng duoc thuàn thuc thành câc dai thuc bào. Thuc bào don nhân tham gia vào moi thë cüa viêm và vào moi giai doan cüa quâ trînh viêm, sân xuât câc cytokine khuéch dai viêm và câc chat trung gian hoâ hoc tai vi tri viêm. e. Lympho bào B, T và tê bào NK Lympho bào duoc chia thành 2 dông theo chûc nâng là lympho B và T. 4 Lympho T: dông vai trô trong miën dich té bào. Khi tiép xüc vai khâng nguyên, néu lympho T phù hop vai khâng nguyên thï sê tâng sinh và hinh thành câc typ lympho bào khâc nhau roi theo dông mâu, thoât mach, vào mô. Lympho T mang dâu CD4 sinh câc lymphokin diêt thé la, kfch thich tong hop globulin miën dich, kfch thfch phàn üng viêm quâ mân muôn. Lympho T mang dâu CDg ûc ché tâng sinh lympho, sân xuât globulin miën dich, và là trung gian trong câc phân ûng dôc té bào. Lympho B: dông vai trô trong miën dich dich thé. Khi khâng nguyên vào co thé sê gân vôi té bào B co khâng thé bê mât tuong üng, kfch thich biêt hoâ té bào B thành nguyên bào plasma, roi thành té bào plasma chfn và sân xuât IgE, IgG, IgA, IgD, IgM. Môi clon té bào chî ché tiê't mot loai Ig duy nhât. T é bào K, NK: là nhûng lympho bào không biêt hoâ thành té bào B hoâc T và tham gia vào dâp ûng miën dich qua trung gian té bào do gây dôc té bào. Dông bach eau don nhân phât triën thành dai thuc bào, lympho T và lympho B là nhûng thành phàn cüa hê lympho - don bào, dam nhiêm nhûng chûc nâng co liên quan mât thiê't vai nhau: thuc bào và thông tin, sân xuât câc khâng thé, loai trû vât la. Khi viêm kéo dài, hàu hét câc té bào hê lympho - don bào sê duoc huy dông. /. Tiéu câu Tiëu câu tham gia vào moi giai doan cüa viêm. Tiéu câu chûa nhiêu loai enzyme và câc thành phàn hat vai hoat tfnh viêm manh. Vî vây, viêm thuông két hop vai tâng tiëu câu và tâng tinh trang dông mâu. g. Câc thành phàn cüa mô âêm Gôm câc té bào nôi mô, nguyên bào xO và té bào co tron, chüng giû vai trô tich eue trong viêm do không chî dâp ûng vai câc tm hiêu phân tü cüa bach câu mà côn dieu hoà câ chûc nàng cüa bach càu. Câc té bào nôi mô phü mât trong tât câ câc huyét quan và tao thành hàng rào dâu tiên giûa câc thành phàn mâu và mô dêm, dông vai trô là câc té bào quan trong trong viêm. 1.1.3. Câc phân img xây ra trong viêm Trong quâ trinh viêm, tai o viêm và trong câ co thë diën ra hàng loat câc phân ûng, theo nhiêu giai doan khâc nhau. Câc phân ûng này co thë duoc khâi quât theo so dô nhu sau: 5 9 QUA TRINH VIÊM Sir xâm nhâp cûa tâc nhân gây viêm ai PHAN ÜNG TAI CHÔ PHÀN ÜNG HÊ THQNG Giân tînh mach, châm tuân hoàn - Tâng thân nhiêt Tâng dô nhôt mâu, ro rî nôi mô - Dau LJ’trê hông càu, két tu tiëu càu - Tâng BC hat, lympho bào Giâi phông câc chât trung gian hoâ hoc - Tâng ESR, fibrinogen Hînh thành eue mâu dông (2) Tfch tu fibrin và lâng eân - Tâng protein C hoat hoâ "*■ - Giâm albumin Tich tu bach eau trung tfnh, lympho bào - Tâng a, (3, y- globulin Tâng thuc bào phâ huÿ mô - Giâm sât, tâng dông Giâm bach câu và tiëu eau - Tâng glycoprotein Tâng câc enzyme huyét thanh - Tâng mucoprotein Giâi phông enzyme lysosom bào tuong - Tâng chüc nâng tuyén yên - Tâng sinh và phï dai mô thuong thân THOAT DICH MANG TE BAO (Té bào nôi mô, bach càu, duông bào, màng trong bào tuong) Hînh 1.1. Câc phân ûng tai chô và hê thong cüa quâ trinh viêm [26,28] 1.1.4. Câc yéu tô trung gian hoâ hoc trong quâ trinh viêm Sau câc tâc dông ban dau cüa viêm, nhiéu chât trung gian hoâ hoc duoc giâi phông ra, duy trï và khuê'ch dai phân uïig viêm. Nhüng chât này cô nguôn gôc tir huyét tuong, té bào và mô bi ton thuong. Câc chât trung gian hoâ hoc gôm: 6 a. Câc yéu tô trung gian cô nguon gôc huyét tuong (câc protease huyét tuong) Câc chat trung gian nguon gôc huyét tuong duoc hînh thành à phàn cuôi cüa mot chuôi câc buôc hoat hoâ theo kiëu “dông thâc”. Cô 4 hê thông hoat dông theo kiëu “dông thâc” nhô su hoat hoâ cüa yéu tô Hageman và lien hê tuong tâc nhau là: hê thông kinin, hê thông bo thë, hê thông dông mâu và hê thông tiêu to huyét. *** Kinin Là nhûng polypeptid cô tmh hoat mach duoc tao thành do su phân tâch protein tien thân là kininogen nhô enzyme tiêu protein. Câc kinin làm tâng tmh tham thành mach, co co tron, kich thich bach càu di dông và là nhûng chat trung gian cüa dau. Chüng là nhûng chat phât dông và duy tri viêm. Câc kinin quan trong là bradykinin và kallikrein. *** Hê thông bo thê Hê thông bo thë là mot trong nhûng chat trung gian hoâ hoc cüa phân ûng viêm và tâc dông nhu mot bô phân quan trong cüa hê thông miên dich. Sau khi duoc hoat hoâ, câc thành phàn C3a và C5a làm tàng tmh tham thành mach và gây giân mach do kich thich giâi phông histamin tû câc duông bào. C5a hoat hoâ con duông chuyën hoâ lipooxygenase cüa acid arachidonic ô câc bach càu da nhân trung tmh và bach eau don nhân, gây giâi phông câc chat trung gian hoâ hoc cüa viêm và là tâc nhân gây hoâ ûng dông manh bach càu. C3b hoat hoâ lympho B và T dë tham gia vào quâ trinh viêm. *** Câc yéu to dông mâu Hê thông dông mâu bao gôm mot loat nhûng protein huyét tuong duoc hoat hoâ bôi yéu tô Hageman. Kê't quâ cuôi cüng là chuyën fibrinogen thành fibrin nhô tâc dông cüa thrombin. Trong quâ trînh này, cô su hînh thành câc fibrinopeptide, gây tâng tmh tham thành mach và hoâ ûng dông dôi vôi bach càu. *** Hê thông tiêu tcf huyét Câc sân phâm tiêu to huyét cüng gôp phàn vào phân ûng viêm. Enzyme gây tiêu to huyét dâu tiên là plasmin - cô nguon gôc tû tiên enzyme plasminogen. Plasmin phân chia fibrin à nhûng vi tri dâc biêt sinh ra dimer D-D và câc doan E, gây kich thich tmh tham huyét quan. 7 b. Câc yéu tô trung gian cô nguôn gôc tù té bào *** Câc amin hoat mach Histamin diroc giai phông ra do su mat hat cüa câc duông bào, gây giàn mach và tâng tmh tham thành mach cüa câc tiëu tînh mach. Serotonin duoc giai phông tù tiëu eau, co tâc dông tuong tu histamin. *** Câc thành phân cüa lysosom (proteasc) Câc hat lysosom duoc chûa trong câc bach câu da nhân trung tînh và bach câu don nhân. Nhûng hat này khi duoc giai phông cô thë tham gia vào phân ûng viêm. Câc protease acid phân huÿ vi khuân và câc mânh vun té bào trong câc thë thuc bào lysosom. Côn câc protease trung tfnh lai cô khâ nâng phân huÿ câc thành phàn ngoài té bào; chüng tan công câc soi tao keo, màng dây, to huyét, soi chun và sun gây nên su phâ huÿ mô diën hinh cüa mot viêm mü và viêm bién dang; dông thôi, câc enzyme này cüng phân tâch truc tiép C3 và C5, giâi phông dôc tô choâng phân vê và câc peptide dang kinin tù kininogen. Câc hydrolase và yéu tô hoat hoâ plasminogen trong bach câu don nhân và dai thuc bào hoat dông manh trong viêm man tmh. *** Câc chat chuyén hoâ cüa acid arachidonic Acid arachidonic duoc giâi phông tù phospholipid màng té bào, chuyën hoâ theo hai con duông. Theo con duông cyclooxygenase tao prostaglandin, prostacyclin và thromboxane A2. Theo con duông lipooxygenase tao leukotriene. Prostacyclin và thromboxane cô vai trô rât quan trong trong quâ trinh diêu hoà dông mâu. Leukotriene co tâc dung hoâ ûng dông bach câu. *** Yéu to hoat hoâ tiéu câu (PAF) PAF là mot dân xuât cüa phospholipid màng, duoc sinh ra sau khi hoat hoâ phospholipase A2. PAF hoat hoâ bach câu da nhân trung tmh, kfch thfch su dfnh và xuyên mach cüa bach câu, giâi phông câc enzyme cüa thë tiêu, sinh oxy phân ûng và câc eicosanoid. *** Câc goc dân xuât oxy tu do Gôc tu do oxy hinh thành trong ti thë dai thuc bào dâ hoat hoâ. Chüng tiêu huÿ dôi tuong thuc bào. Trong viêm, khi dai thuc bào bi ly giâi gây tràn gôc tu do ra ngoài, tao diêu kiên cho quâ trinh peroxyd hoâ lipid màng té bào, gây tâng tfnh tham 8 thành mach, tao diêu kiên thuân lçfi cho su giâi phông acid arachidonictù phospholipid màng té bào de tong hop ra câc chât trung gian hoâ hoc. *** Câc cytokine Là câc polypeptid do dai thuc bào và lympho bào tiét ra. Trong viêm, nông dô câc cytokine à o viêm tâng cao. Tât câ câc biê'n dôi tai o viêm nhir: ton thuong tô chirc, roi loan chuyën hoâ, roi loan tuân hoàn, té bào tâng sinh cüng nhu câc biëu hiên toàn thân (sot, tâng bach câu, khâng thé, bô thé) dêu cô su tham gia cüa câc cytokine. Câc cytokine quan trong trong viêm là interleukin (IL) và yéu tô hoai tü khôi u (TNF). 1.1.5. Viêm man tmh a. Khâi niêm Viêm man tfnh (hay viêm dâc hiêu) cô thôi gian kéo dài (hàng tuàn, hàng thâng) trong dô viêm tiê'p tue hoat dông, su phâ huÿ mô và hàn gân ton thuong xây ra dông thôi. Viêm man thuong bât dau km dâo, mue dô phân üng thâp, âm î và thu'ong không cô triêu chüng. Câc viêm man thuông bao gôm câc bênh: viêm khôp dang thâp, vüa xo dông mach, lao phôi, bênh phôi man tfnh. b. Nguyên nhân dân den viêm man tinh *** Nhiêm trùng kéo dài: bôi mot vi khuân (nhu truc khuân lao,xoântrùng Treponema pallidum gây viêm giang mai) và mot sô nam. Câc tâc nhân gây bênh này cô dôc tô thâp và gây nên mot phân üng miên dich goi là quâ mân châm. Phân üng viêm cô thë cô hinh thâi dâc hiêu goi là viêm u hat. *** Tiê'p xûc kéo dài vâi tâc nhân gây dôc manh: câc tâc nhân này cô thë là ngoai sinh nhu vât lieu tro không phân huÿ duoc (bui silic bi hit vào phoi gây bênh silic), hoâc nôi sinh (nhu câc thành phân lipid cüa huyét tuong néu tâng lên man tînh së gây vüa xo dông mach). *** Câc bênh tu miên dich: câc phân üng miên dich chông lai chfnh mô cüa co thë chü gây nhiêu bênh man tmh (viêm khôp dang thâ'p, bênh lupus ban dô). c. Dâc diêm cüa viêm man tinh Khâc vôi viêm cap biëu hiên chü yê'u là nhüng thay dôi vê huyê't quân, phù và xâm nhâp bach càu da nhân trung tmh manh. Viêm man tmh cô câc dâc diëm sau: 9 *** Su xâm nhâp cüa câc té bào viêm mà chû yéu là bach càu don nhân - dai thuc bào và câc té bào lympho Trong viêm man tmh, su xâm nhâp cüa câc té bào viêm chü yéu diên ra vôi câc bach càu don nhân, câc dai thuc bào, lympho bào và tuong bào, trong khi bach càu da nhân trung tmh và bach càu âi toan chî chiém tÿ lê nhô. Bach càu don nhân di chuyën dén o viêm và chuyën dang thành câc dai thuc bào, tiê't ra câc chat cô hoat tmh sinh hoc gây phâ huy mô, tâng sinh huyét quân và xo hoâ - dây là nhûng dâc diëm cüa viêm man tmh. Nguoc lai vôi viêm cap, khi kich thich duoc loai trù, câc dai thuc bào sê bién mât (cô thë chê't hoâc quay lai bach mach và hach) thî trong viêm man, dai thuc bào tiê'p tue tu tâp trong o viêm do su chiêu mô câc bach càu don nhân tû mâu, sân sinh tai chô câc dai thuc bào và su dùng di chuyën cüa câc dai thuc bào. Nhô dô, chüng sân sinh ra mot luong lôn câc chat cô hoat tmh sinh hoc trong viêm. Bên canh dai thuc bào, câc lympho bào cüng duoc huy dông trong viêm. Hai loai té bào này cô tâc dung qua lai lân nhau trong viêm man tmh. Lympho bào sân sinh ra câc lymphokin (dâc biêt là INF-y) kich thich câc bach càu don nhân và dai thuc bào. Nguoc lai, câc cytokine tû câc dai thuc bào lai hoat hoâ câc lympho bào. Do dô, tao ra thôi kÿ dai dang cüa phân ûng viêm. *** Su phâ huy mô chû yéu gây nên do câc té bào viêm Trong viêm man tmh, su tâp trung cüa câc dai thuc bào tai o viêm tao nên mot “kho lôn” câc chat trung gian hoâ hoc tham gia vào quâ trinh dê khâng cüa co thë chông lai nhûng tâc nhân cô hai. Nhung, mât khâc, nô cüng cô thë gây nên nhûng ton thuong mô nâng nè do dai thuc bào bi hoat hoâ mot câch không thich hop. Vî vây, ton thuongjnôià mfa trong nhûng Hâu hiê.ii_rna_yjp.rn jp^r^fnh^ *** Süa chüa bang mô liên két Phâ huy mô ton tai dai dang vôi ton thuong cüa câ té bào nhu mô và khung mô dém là dâu hiêu cüa viêm man tmh. Lüc này, quâ trînh süa chüa không don thuân là tâi sinh té bào nhu mô. Viêc süa chüa câc ton thuong mô bàng câch thay thé câc té bào nhu mô không tâi sinh bôi mô liên két sê gây xô hoâ và seo. Cô 4 yéu tô cüa quâ trînh này, dô là: - Hînh thành câc huyét quân môi (tao mach) 10 - Di chuyën và tâng sinh câc nguyên bào soi - Lâng dong cüa câc chat màm ngoai te bào - Thuân thuc và to chûc hoâ câc mô xo Quâ trinh süa chûa bât dâu s6m trong quâ trinh viêm. Dôi khi, süa chûa xây ra ngay vào thôi diëm 24 gid sau ton thuong; câc nguyên bào xo, câc te bào nôi mô huyét quân tâng sinh và tao thành mot loai mô chuyên biêt goi là mô hat - là dâu hiêu cüa su süa chûa. Viêm u hat : là mot hinh thâi dâc biêt cüa viêm man tmh trong dô loai té bào chiém Uu thé là dai thuc bào duoc hoat hoâ và chuyën dang thành té bào bân liên. Phân ûng này gàp chü yéu trong câc bênh nhiêm trùng và bênh miën dich nhu bênh lao, bênh saccharoid, bênh u hat lympho à ben, bênh phong,... U hat là mot ton thuong o cüa viêm u hat. No là mot tu tâp vi thë cüa câc dai thuc bào bi chuyën dang thành té bào bân liên và bi vây quanh bôi mot riêm bach câu don nhân, mà chü yéu là lympho bào và dôi khi co câ tuong bào. Co hai loai u hat: u hat di vât (do phân ûng vciï câc di vât tuong dôi tro nhu aminan) và u hat miën djch. 1.1.6. Hàn gân vêt thiïcmg Khi co bât kÿ su ton thuong viêm xây ra thî quâ trinh süa chûa và hàn gân vêt thuong sê duoc khôi dông. Vôi nhûng ton thuong nhô thi câc mô cô thë duoc tâi tao lai hoàn toàn câu truc nguyên ven ban dâu. Nhung khi mât té bào và mô rông Ion hon (nhu trong nhôi mâu co tim, loét do viêm tao thành o ap-xe, vêt thuong cô bé mât rông) sê tao nên mot su thiéu hut mô lôn khiën su tâi sinh cüa té bào nhu mô không dü dë tâi tao lai mot câch hoàn chînh câu truc ban dâu. Khi dô, hàn gân vêt thuong tro nên phûc tap, cô trât tu liên quan dén nhiêu quâ trinh bao gôm: Mot viêm cap do vêt thuong gây nên: su thiéu hut mô lôn vôi nhiêu to huyét và nhiêu mânh vun té bào bi hoai tü cüng nhu chat xuât tiét phâi duoc don sach. Vï vây phân ûng viêm sê manh hon. Giai doan tao xcr. câc té bào nhu mô duoc tâi sinh, cüng dô là su di chuyën và tâng sinh cüa te bào trung mô và mô liên két dë tong hop câc protein cüa chat màm ngoài té bào, tao lai mô hinh cüa mô liên két và câc thành phàn trung mô, tâi tao soi tao keo và dat dô bên cüa vêt thuong. 11 Quâ trînh tâi tao mô và seo hoâ: là bufoc cuoi cùng quan trong cüa hàn gân và süa chûa vêt thuong, str lang dong cüa câc chât màm cüa mô liên két dâc biêt là soi tao keo sê dân dê'n tâi tao mô liên két và chuyën thành mot seo. 1.2. DAI ClTONG VE SAPONIN 1.2.1. Khâi niêm chung Saponin (hay saponosid) là mot nhôm glycosid tir nhiên lôn, thuong gâp trong thuc vât. Mot sô gâp ô dông vât nhu câc loai hâi sâm, câ sao,... Saponin cô mot sô tfnh chât dâc trung nhu sau: -Làm giâm suc câng bê mât, tao nhiêu bot khi lâc voi nuôc, cô tâc dung nhü hoâ và tây sach. - Làm vô hông càu ngay à nhûng nông dô rat loâng. - Dôc voi câ do làm tâng tmh thâm cüa biëu mô duông hô hâp gây mât câc chât diên giâi càn thiét. Cô tâc dung diêt câc loài thân mêm nhu giun, sân,... - Kfch thfch niêm mac gây hât hoi, dô mât; cô tâc dung long dôm, loi tiëu; liêu cao gây non müa, di long. - Tao phüc vôi cholesterol hoâc câc chât 3-P-hydroxysteroid khâc. Tuy vây, mot sô tfnh chât trên không thë hiên à mot vài saponin. Vf du: sarsaparillosid thi không cô tînh phâ huyét và tfnh tao phüc vôi cholesterol. Saponin là câc hop chât két tinh hoâc dang bot vô dinh hînh, tan trong nuôc, alcol, rat ît tan trong acetone, ether, hexan và cô thë bi tüa bôi chî acetate, bari hydroxyd, amoni sulfate. 1.2.2. Phân loai và câu truc hoâ hoc Saponin là nhûng hop chât glycoside câu tao phân tü gôm 2 phân: - Phân duông: cô thë gôm mot hoàc mot vài phân tü duông - Phân không duông: côn goi là aglycon hoâc genin. Dua vào câu truc hoâ hoc, saponin cô thë chia làm 2 loai: saponin triterpenoid và saponin steroid. a. Saponin triterpenoid Phân aglycon cüa saponin triterpenoid là 1 khung hydrocarbon vôi SOC (trit mot vài truông hôp không dü 30C). Khung hydrocarbon cô thë chia thành 6 nhôm 12 hemiterpen sâp xép theo “quy tâc dâu duôi” (trCr vông a giûa). Câc saponin triterpenoid (chu yéu là nhôm olean, ursan) khi deshydrogen hoâ vôi selen thï cho hôn hop câc dân chat naphtalen và phenanthren, chü yéu là sapotalen (1,2,7 trimethyl naphtalen). Saponin triterpenoid co thë chia thành 2 nhôm: saponin triterpenoid pentacyclic và saponin triterpenoid tetracyclic. Saponin triterpenoid pentacyclic cô câu truc phàn aglycon gôm 5 vông và phân thành 4 nhôm nhô là: olean, ursan, lupan, hopan. Saponin triterpenoid tetracyclic cô câu truc phàn aglycon gôm 4 vông và mot mach nhânh, cô thë phân thành 3 nhôm nhô là: dammaran, lanostan và cucurbitan. 29 30 b. Saponin steroid Phàn aglycon cüa câc sapogenin steroid gôm 1 khung cholesterol giong nhu nhûng acid mât và hormone sinh duc. Nhân steroid cô nôi vông C/D luôn là trans. Tuy theo câu truc cûa mach nhânh mà chia thành câc nhôm nhô: 13 Ngoài ra, côn cô mot so sapogenin steroid co câu truc mach nhânh khâc. Vf du: polydosaponin và oslandin duoc phân lâp tù rê cây Polypodium vulgare L. Oslandin và a-spinasterol glycosid cô trong cây chè Camélia sinensis (L) O.Ktze (Thea sinensis L.). 1.2.3. Phân bo Saponin triterpenoid thuong gâp trong câc cây hai lâ mâm thuôc câc ho: Acanthaceae, Amaranthaceae, Araliaceae, Campanulaceae, Carÿophyllaceae, Fabaceae, Polygalaceae, Rubiaceae, Sapindaceae, Sapotaceae. Saponin steroid thuong gâp trong nhûng cây mot lâ màm. Câc ho hay gâp là Amaryllidaceae, Dioscoreaceae, Liliaceae, Smilaceae. Dâc biêt là mot sô loài thuôc chi Dioscorea L., Agave L., Yucca L. 14 Trong cây, saponin thirong tfch luÿ ô nhûng bô phân khâc nhau. Vf du: tich lüy trong quâ nhu bô kët, bô hôn; rë nhu cam thâo, viên chf, cât cânh; la nhu dü'a Mÿ;... 1.2.4. Tmh chât cüa saponin a. Tinh chât tao bot Dây là tfnh chât dâc trung nhât cüa saponin. Tmh chât tao bot cüa saponin liên quan dën khâ nâng làm giâm sûc câng bê mât do phân tü saponin lôn, cô cùng mot dau ua nuôc và mot dau ky nuôc. Nëu thuÿ phân cât phân duông - phân ua nuôc thi tmh tao bot không côn. Dua vào tmh chât tao bot, cô thë so bô xâc dinh su cô mât cüa saponin trong duoc lieu. Dông thôi, dua vào hiên tuong gây bot trong môi truông kiêm và acid cüng cô thë so bô phân biêt saponin steroid và triterpenoid. b. Tinh chât phâ huyét Dây cüng là tfnh chât dâc trung cüa saponin. Tuy nhiên, cô mot vài saponin không thë hiên rô tfnh chât này. Khâ nâng phâ huyét khâc nhau nhiêu tuy loai saponin. Cô giâ thuyët cho ràng tmh phâ huyêt cüa saponin cô liên quan dën su tao phüc vôi cholesterol và câc ester cüa nô trong màng hông càu; tuy nhiên, chî sô phâ huyët và khâ nâng tao phüc lai cô nhiêu truông hop không tÿ le thuân, do dô càn phâi xét dën ânh huông cüa saponin trên câc thành phân khâc cüa màng hông càu. Qua viêc theo dôi tînh phâ huyët nhân thây câ phân aglycon và phân duông dêu cô ânh huông tôi tmh chât này. Hông càu cüa câc dông vât khâc nhau cüng tâc dông khâc nhau dôi vôi mot saponin. Dë dânh giâ mot nguyên lieu chüa saponin, nguôi ta dua trên chî sô phâ huyët - là sô mL dung dich dêm càn thiët dë hoà tan saponin cô trong lg nguyên lieu gây ra su phâ huyët dau tiên và hoàn toàn dôi vôi mot thû mâu dâ chon (tiën hành trong dieu kiên quy dinh). c. Tinh chât tao phûc vôi cholesterol Dây cüng cô thë coi là tfnh chât dâc trung cüa saponin do chua tïm thây nhôm hoat chât khâc trong cây cô khâ nâng tao phûc vôi cholesterol manh nhu saponin. Vê tfnh chât tao phûc vôi cholesterol, saponin triterpenoid kém hon saponin steroid. Trong câc saponin steroid, digitonin kët hop vôi cholesterol gàn nhu hoàn toàn. Do vây, digitonin duoc dùng là thuôc thü dinh luçfng cholesterol trong sinh hoâ. 15 1.2.5. Tâc dung sinh hoc a. Tâc dung khâng khuân —khâng nâm Saponin co mât trong cây cô tâc dung tu bâo vê chông lai nâm mô'c xâm nhâp. Saponin làm mât nhanh câc ion Kali, Magie cüa soi nâm dât trong môi truông dêm phosphate và acetate. Tâc dông khâng nâm thay doi trong mot giôi han râ't rông phu thuôc vào câu truc saponin và chüng loai nâm. Câc saponin steroid cô tâc dung chông nâm manh hon saponin triterpenoid. Cô giâ thuyét cho ràng tâc dung chông nâm cô liên quan dén khâ nâng tao phüc vôi câc sterol cüa màng té bào nâm làm màng té bào tan rà. Câc saponin nhôm spirosolan mà câc tomatine là nhüng chât dai diên duoc biêt dén tir lâu cô tâc dung chông nâm. Tâc dung khâng khuân cüa mot sô saponin cüng dâ duoc xâc nhân. Thi du: asiaticosid trong rau mâ cô tâc dung khâng truc khuân Koch và Hansen, cyclamin trong cây Cyclamen europeum và câc spinasaponin A, B cüng cô tâc dung khâng khuân dâng kë,... b. Tâc dung chông viêm Trên thuc nghiêm in vivo, râ't nhiêu saponin dâ duoc nghiên cûu là cô tâc dung chông viêm manh và dat hiêu quâ cao trong diêu tri câc bênh lÿ vê viêm. Saponin cüa sài hô - Bupleurum falcatum cô tâc dung chông phù trên chuôt công. Saponin cây trà - The a sinensis chông tâng tiê't dich và chông viêm rô, làm binh thuông tmh thâ'm cüa mao mach. Hederagenin cô tâc dung chông viêm trên mô hînh gây viêm khôp bàng formaldehyd và gây phù bàng carragenin. Saponin tû cây gâc Momordica cochinchinensis cô tâc dung üc ché phù trên chuôt công. Glycyrrhizin trong cây cam thâo cüng duoc chüng minh là cô tâc dung chông viêm hiêu quâ và ûng dung trên lâm sàng. Nâm 1998, Just và câc công su phân lâp duoc ba saponin cô tâc dung chông viêm (Fruticesaponin A,B và C) tû cây Bupleurum fruticescens\ câ 3 saponin dêu cô tâc dung chông phù chân trên chuôt, tuy nhiên trong dô fruticesaponin B là manh nhât. Nâm 2001, Navarro và câc công su cüa ông phân lâp duoc 7 saponin triterpenoid tû dich chiét trong methanol cüa phàn trên mât dât cây Bupleurum roîundifolium, tât câ câc saponin này dêu duoc chüng minh là cô tâc dung giâm phù tai gây ra do 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) trên chuôt; 16 và trong dô chî cô 2 saponin là cô tâc dung làm giâm viêm da man tfnh gây ra bôi TPA da liêu trên chuôt. Esculentoside A - mot saponin triterpenoid phân lâp tù Phyîolacca esculenî cô tâc dung chông viêm câ'p và man tmh tuong dôi tôt trên nhiêu dông vât thù nghiêm (Zheng QY và công sur, 1992). Hai saponin triterpenoid (Kalopanaxsaponin A và pictoside A) phân lâp tù thân và vô cây Kalopanax pictus cüng duoc chî ra là cô tâc dung giâm tmh tham mao mach manh khi uông vôi liêu 50mg/ml (Li DW và công s u 2002); và Kalopanaxsaponin A cô thë làm giâm tînh trang viêm khôp dang thâp gây ra bôi thuôc thü Freund trên chuôt theo co ché chông oxy hoâ (Choi và công su, 2002). Hôn hop saponin phân lâp tù lâ trà - Camellia sinensis cô tâc dung üc ché phù chân chuôt gây ra bôi carragenin, hai nhôm saponin TS-1 và TS-2 phân lâp tù rê cây Camellia sinensis cüng cho tâc dung tuong tu (Sagesaka YM và công su, 1996). Aescin - thành phàn chmh cüa Aesculus hippocastanum, trong hôn hop câc saponin triterpenoid glycoside dâ duoc chî ra là cô tâc dung chông phù chân, chông viêm và làm bên thành mach trên nhiêu dông vât thi nghiêm (Sur P và công su, 2001). Nâm 2002, da Silva và công su phân lâp duoc mot saponin steroid môi tù lâ cây Agave aîtenuata cô tâc dung làm giâm tînh tham mao mach gây ra bôi acid acetic. Loniceroside A phân lâp tù phàn trên mât dât cüa cây kim ngân Lonicera japonica cô tâc dung chông viêm tuong duong vôi aspirin (Lee SJ và công su, 1995). Nâm 2003, mot saponin khâc trong cây kim ngân là Lonicerûside-C-cüng duoc phân lâp tù phàn trên mât dât cüa cây (Kwark và công su) và duoc chüng minh là cô tâc dung chông viêm in vivo trên thü nghiêm gây phù tai nhô dâu bông. Buddlejasaponin IV phân lâp tù phàn trên mât dât cüa cây Pleurospermum kamtschaticum ûc ché tông hop NO dông thôi làm giâm tong hop PGE2 và TNF-a, do dô cô tâc dung chông viêm (Jung và công su, 2005),... [27,147]. c. Tâc dung ûc chékhôi u Nhiêu saponin duoc tim thâ'y là cô tâc dung üc ché khô'i u và kim hâm su phât triën cüa câc khô'i u. Câc saponin cây cuôc ngô công - Hedera hélix L., Araliaceae và câc muô'i magie cüa chüng cô tâc dung kim hâm giân phân rô rêt, ûc chê' su phât triën cüa tê' bào nhung không phâ huÿ tê' bào, dâ duoc dê nghi dùng dë üc chê' câc u và công su dâ tâch chiét duoc ginsenosid Rh2 trong nhân sâm và thü thây co tâc dung chông ung thu. Mot saponin khâc duoc Wen Chinh Liu và công su phân lâp tü hat cây Entada phaseoloides cüng cô tâc dung chông ung thu carcinosarcom,... d. Tâc dung kich thich thàn kinh trung uang Saponin cô tâc dung lên thàn kinh trung UOng. Tuy nhiên, tâc dung này cüng thay doi tuy theo loai saponin nhung nôi chung vôi liêu cao thi cô tâc dung ûc chê' và liêu thâp cô tâc dung kfch thich. Do vây, càn phâi luu ÿ khi su dung trên lâm sàng. Thi du: saponin cüa rau mâ - Centella asiatica cô tâc dung an thàn trên chuôt công thi nghiêm, vôi saponin nhân sâm thï câc chât ginsenosid Rg cô tâc dung kfch thfch côn nhôm Rb lai cô tâc dung an thàn,... e. Tâc dung kich duc Mot sô saponin duoc tîm thây là cô tâc dông lên bô mây sinh duc cüa dông vât thf nghiêm. Thf du: saponin cüa Schefflera capitata chü yéu là schefflerosid và samanin D trong cây Pithecolobium saman cô tâc dung khâng tinh trùng cüa chuôt công và nguôi, protopanaxatriol saponosid và protopanaxadiol trong nhân sâm dêu làm tâng co ong dân tinh, hai saponin phân lâp tü Gledischia horrida cô tâc dung chông thu thai trên chuôt câi,... f. Mot so tâc dung khâc - Saponin cô tâc dung long dôm chüa ho. Saponin là hoat chât chfnh trong câc duoc liêu chüa ho: viên chf, cât cânh, cam thâo, thiên mon, mach mon,... - Mot sô duoc liêu chüa saponin cô tâc dung thông tiëu: rau mâ, tÿ giâi,... - Nhiêu saponin cô tâc dung diêt loài thân mêm (nhuyên thë) - Mot sô saponin cô tâc dung ha duông huyét, chông tâng lipid mâu và chông phân giâi protein. - Saponin làm tâng tfnh thâm cüa té bào; su cô mât cüa saponin së làm cho câc hoat chât khâc dê hoà tan và hâp thu. Thf du: digitonin trong lâ Digital... 1.3. CÂC THUÔC CHÔNG VIÊM 1.3.1. Thuôc chông viêm steroid Là nhôm thuôc cô câu truc giong vôi câc hormone cüa tuyê'n thuong thân. Tâc dung chông viêm cüa nhôm thuôc này liên quan dén viêc üc ehé nhiêu yéu tô cô liên 18 quan dén câc dâp iïng viêm. Co ché chông viêm cüa nhôm thuôc này là do chüng ûc ché enzyme phospholipase A2, làm giâm quâ trînh hînh thành acid arachidonic, üc ché tong hop và giâi phông câc cytokine (IL-1, IL-6, yéu tô hoai tû u TNF-a), ûc ché su két dînh cüa bach càu lên thành nôi mô, ûc ché giâi phông histamin. Nhôm thuôc chông viêm steroid cô tâc dung duoc lÿ khâ toàn diên dôi vôi quâ trînh viêm. Tuy nhiên, trên lâm sàng, nhôm thuôc này bôc lô khâ nhiêu tâc dung phu nhu: ûc ché miën dich, loàng xuong, hôi chüng suy giâm thuong thân khi düng thuôc, bênh vê co, châm phât triën chiêu cao à trê em,... 1.3.2. Thuôc chông viêm phi steroid Là nhôm thuôc chông viêm, giâm dau cô câu trüc da dang, thuôc nhiêu nhôm hoâ hoc khâc nhau. Co ché chông viêm cüa nhôm này là do chüng ûc ché enzyme cyclooxygenase (câ COX 1 và 2), ngân cân tong hop prostaglandin là chat trung gian hoâ hoc gây viêm, do dô làm giâm quâ trinh viêm. Ngoài ra, câc thuôc này côn dôi khâng vôi hê enzyme phân huy protein, ngân cân quâ trînh bien doi protein làm ben vüng màng lysosom và dôi khâng tâc dung cüa câc chat trung gian hoâ hoc nhu : bradykinin, histamin, serotonin; ûc ché hoâ huông dông bach càu, ûc ché su di chuyën cüa bach càu tôi o viêm. Ngoài tâc dung chông viêm, câc thuôc chông viêm phi steroid côn cô tâc dung giâm dau ngoai vi và ha nhiêt. Do ûc ché tong hop prostaglandin - mot yéu tô cô tâc dung bâo vê nên câc thuôc chông viêm phi steroid thuông gây nhiêu tâc dung phu trên duông tiêu hoâ (nhu gây loét, chây mâu duông tiêu hoâ...), kéo dài thôi gian chây mâu, gây co thât phé quân,... 1.3.3. Câc enzyme chông viêm Ngày nay, câc enzyme chông viêm duoc sü dung rông râi bên canh câc thuôc chông viêm steroid và phi steroid. Câc protease chông viêm cô bân chat tu nhiên, cô iru diëm gân güi vôi co thë hon nên phàn nào giüp trânh duoc nhûng tâc dung không mong muôn cüa thuôc hoâ duoc. Câc enzyme thuông sü dung là: chymotrypsin, bromelain, serratiopeptidase, amylase,... Mac dù cô nguon gôc khâc nhau nhung chüng dêu cô khâ nâng chông viêm trên dông vàt thuc nghiêm cüng nhu trên nguôi. 19 a. a-Chymotrypsin a-Chymotrypsin là enzyme thuÿ phân protein, thu duoc do hoat hoâ chymotrypsinogen chiét xuât tùr tuy bô. a-Chymotrypsin co trong luong phân tù 21.600, câu tao bôi 3 chuôi peptide, so luong acid amin là 241, thuôc loai serinprotease uu tien cât câc liên két tyrosin, tryptophan, phenylalanin, leucin. a-Chymotrypsin thuÿ phân câc kinin duoc giâi phông bôi kininogen thông qua yéu tô Hageman, kim hâm su tiê't leukotriene tù bach câu don nhân trung tfnh. a-Chymotrypsin thuÿ phân fibrin, quâ trinh này duoc tâng cu’üng bôi tâc dung cüa heparin, dextran sulfate, polyvinyl sulfate trong dung dich NaCl 0,1M. a-Chymotrypsin cô tâc dung cüa mot enzyme phân giâi protein, tâc dung này phu thuôc vào trang thâi co chat. a-Chymotrypsin chî thuÿ phân nhûng protein bi biê'n tfnh mà không tâc dông tôi protein vân giû nguyên duoc câu truc không gian tù bâc hai trô lên. a-Chymotrypsin duoc dùng uô'ng, tiêm bâp hay dùng tai chô dë chông viêm và diêu trj mot sô chân thuong. Ngoài ra, a-chymotrypsin côn duoc chî dinh trong câc truông hop chông phù nê, khâng viêm trong chân thuong, dùng tai chô hoàc tiêm bâp trong câc khoa: nôi, tai müi hong, phu, ngoai khoa (chân thuong chînh hinh), da liêu,... b. a-Amylase Amylase là mot nhôm enzyme thuÿ phân, xüc tâc su phân giâi câc liên két glucoside nôi phân tü trong câc polysaccharide vôi su tham gia cüa nuôc. Amylase thuÿ phân tinh bot, glycogen, dextrin thành glucose, maltose và dextrin phân tü nhô. 9. _ G dông vât, amylase là mot chuôi polipeptide don chûa khoâng 496 acid amin cô hai nhôm -SH, 4 câu S-S và mot vùng chûc nàng gân chât vôi Ca2+. Amylase gôm 3 loai: a-amylase, (3-amylase và y-amylase. a-Amylase (1,4-a-D-glucan-glucanohydrolase) cô trong nuôc bot, tuyén tuy, nâm môc, vi khuân. a-Amylase xüc tâc cho phân ûng thuÿ phân tinh bot, glycogen và câc polysaccharide tuong tu, phân giâi liên két a-l,4-glucoside cüa co chât mot câch ngâu nhiên tao thành dextrin phân tü thâp. Duôi tâc dung cüa enzyme, dung dich tinh bôt nhanh chông mât khâ nàng tao màu vôi iod và giâm dô nhôt manh. 20 Üng dung cüa a-amylase trên thuc té là rat to 1cm, duoc sü dung câ trong công nghiêp, nông nghiêp và y hoc. Trong y duoc, a-amylase duoc dua thêm vào co thë nguôi bênh khi không sân xuâ't du enzyme này. a-Amylase tü câc nguôn khâc nhau duoc sü dung là thành phân cüa câc ché phâm enzyme tiêu hoâ và giâm viêm duông hô hâp, sung phù tai chô. Mot sô ché phâm chông viêm, giâm phù nê: Mégamylase (Leurquin Mediolanum), Fungamyl (Novo),... 1.3.4. Duoc liêu chông viêm Trong nhüng nâm gàn dây, y duoc hoc trong nuôc và trên thé giôi dâ cô nhiêu công trînh nghiên cüu cho thây duoc liêu mang lai nhüng tiêm nâng to lôn trong viêc diêu tri nhüng bênh lÿ liên quan dén viêm. Phân lôn câc vi thuôc cô khâ nâng chông viêm thuông thuôc nhôm thanh nhiêt giâi dôc nhu ké dau ngua, kim ngân, bô công anh, rau ma,... Ngoài ra, chüng côn duoc dùng dë chüa mot sô bênh nhu mun nhot, mân ngüa, di üng. Qua mot sô nghiên cüu vê nhôm thuôc thanh nhiêt giâi dôc, cho thây câc duoc liêu này dêu cô chüa câc hop chât saponin vôi hàm luong dâng kë. Do vây, saponin cô thë là nhüng hop chât cô hoat tinh chông viêm, giâi dôc. Trong nên y hoc co truyên Viêt Nam, cây kim ngân và câc vi thuôc duoc bào ché tü nô tü lâu dâ trô thành mot duoc liêu thanh nhiêt, giâi dôc, tri mun nhot, mân ngüa,... vô cùng thông dung và hiêu quâ. Gân dây, nhüng công trînh nghiên cüu dâ chî ra vai trô chông viêm cüa cây kim ngân liên quan dê'n su cô mât cüa hai nhôm hop chât chü yê'u là saponin và flavonoid. Duoc liêu kim ngân chiira saponin a. Tên khoa hoc Lonicera japonica Thunb., thuôc ho Kim ngân Caprifoliacae Tên goi khâc: Dây nhân dông b. Bô phân dùng - Hoa kim ngân (Flos Lonicera) là hoa phoi sâ'y khô cüa cây kim ngân. - Cành và lâ kim ngân (Cauliscum folium Lonicera) là cành và lâ phoi hay sâ'y khô cüa cây kim ngân. c. Thành phân hoâ hoc - Cây chüa tanin và mot saponin 21 Tù cây kim ngân dâ phân lâp duoc câc hoat châ't co tâc chong viêm là Lonicerosid A, B, C và xâc dinh duoc câu truc cüa chüng. - Hoa chüa mot flavonoid là scolymosid (lonicerin) OH R R’ 1. Luteolin H H 2. Scolymosid Rutinose H La chüa Logalin HO H O_glucose H :ooch3 d. Tâc dung duoc lÿ và sinh hoc cüa cây kim ngân Kim ngân cô vi ngot nhat, tmh mât, co tâc dung thanh nhiêt, giâi dôc. - Tâc dung khâng khuân: kim ngân co pho khâng khuân rông. Nuôc sâc hoa kim ngân cô tâc dung üc ché rât manh liên câu, tu càu, vi khuân thuong hàn, truc 22 khuân ly Shigella, truc khuân ly E.coli, phë câu. Nuôc sâc lâ nông dô 1,2 - 20% üc chê' truc khuân ly Shigella, 5 - 20% ûc chê' phô thuong hàn A, 100% üc chê' tu câu. - Tâc dung chông viêm: Nâm 2003, Kwark WJ và công su dâ công bô tâc dung chông viêm cüa saponin cây kim ngân. Cùng nâm â'y, Jin Tae và công su cho biêt hiêu lue chông viêm cüa cây kim ngân trong bênh phù chân do châ't dân truyèn receptor 2 kfch hoat proteinase. - Tâc dung trên duông huyét: sau khi cho thô uô'ng nuôc sâc hoa kim ngân thi duông huyê't tâng kéo dài 5 - 6 giô môi trô lai binh thuông. - Tâc dung ngân chân choâng phân vê: Nâm 1996, Dô Tâ't Loi, Nguyên Nâng An, Bùi Chf Hiêu (Hôi nghi thuôc nam lân thû 4, H à Nôi) dâ bâo câo nuôc sâc kim ngân cô khâ nâng ngân chân choâng phân vê trên chuôt lang. - Dô dôc: Cüng theo câc tâc giâ trên, cho chuôt nhat trâng uô'ng nuôc sâc kim ngân trong 7 ngày vôi liêu gâp 150 lân liêu diêu tri cho nguôi (tfnh theo gam thë trong), không dân dê'n su thay doi dâng kë trong phü tang và 100% chuôt sô'ng sot. Diêu này chüng tô râng nuôc sâc kim ngân thuc té không dôc. e. Công dung và lieu dùng - Công dung: thuông dùng tri mun nhot, ban sôi, mày day, lô ngûa, nhiêt dôc, tâ ly, ho do phê' nhiêt, di ûng, thâ'p khôp. - Liêu dùng: ngày dùng 4 - 15g hoa hay 10 - 16g cành lâ duôi dang thuôc sâc, hâm, cao, ruou thuôc hoàc hoàn tân. Cô thë dùng riêng kim ngân hay phô'i hop vôi nhiêu vi thuôc khâc. 23 Phân 2 THl/C NGHIÊM VÀ KÊT QUÂ 2.1. NGUYÊN LIÊU VÀ PHUONG PHÂP NGHIÊN CÛU 2.1.1. Nguyên liêu a. Duoc liêu *** Kim ngân cuông Là thân, cành lâ phoi sâ'y khô cüa cây Kim ngân: Lonicera japonica Thunb, Caplifoliaceae. Thân, cành lâ cây Kim ngân duoc thu hâi à thôn Nghîa Trai, xâ Tân Quang, huyên Vân Lâm, tînh Hung Yen và duoc Bô mon Thuc vât truông Dai hoc Duoc Hà Nôi dinh tên khoa hoc. Nguyên liêu sau khi thu hâi duoc nhât bô tap chât, phoi trong râm mât và sâ'y à nhiêt dô 50 - 60°C dê'n khô. *** Saponin kim ngân cuông toàn phân Saponin kim ngân cuông toàn phân sü dung trong nghiên cüu duoc tien hành chiê't xuâ't tü thân, cành lâ cây kim ngân theo quy trinh tôm tat nhu sau: Duoc liêu duoc sâ'y 60 - 65°C trong tü sâ'y 1 gio, sau dô dem tân nhô thành bôt. Cân 600g bôt duoc liêu, dem làm âm bang côn 80° trong 2 gio roi tien hành chiê't theo phuong phâp ngâm kiêt vôi dung môi là côn 80° (duoc khoâng 3L dich chiê't). Dich chiê't thu duoc dem cât quay thu hôi dung môi dê'n khi côn khoâng 400mL. Sau dô, tien hành loai tap bàng chloroform dê'n khi lôp chloroform không màu. Dich chiê't thu duoc dem chiê't bang n-butanol dê'n khi lôp butanol không màu thu duoc dich chiê't trong n-butanol. Tiê'p dô, tien hành cô câch thuÿ loai dung môi thu duoc cân saponin kim ngân cuông toàn phàn. Quy trinh thuc hiên duoc mô ta nhu so dô Hînh 2.1. 24 Hînh 2.1. So'do quy trinh chiét tâch saponin kim ngân cuông toàn phân b. Enzyme *** a-Amylase Viên nén Mégamylase cüa hâng Leurquin Mediolanum chüa a-amylase hàm lirçfng 3000UI dùng de tien hành thü trên in vivo. *** a-Chymotrypsin a-Chymotrypsin dang ong tiêm, 1 ong chüa 5mg a-chymotrypsin trong 5mL nu[...]... cỹa cõy kim ngõn liờn quan dờ'n su cụ mõt cỹa hai nhụm hop chõt chỹ yờ'u l saponin v flavonoid Duoc liờu kim ngõn chiira saponin a Tờn khoa hoc Lonicera japonica Thunb., thuục ho Kim ngõn Caprifoliacae Tờn goi khõc: Dõy nhõn dụng b Bụ phõn dựng - Hoa kim ngõn (Flos Lonicera) l hoa phoi sõ'y khụ cỹa cõy kim ngõn - Cnh v lõ kim ngõn (Cauliscum folium Lonicera) l cnh v lõ phoi hay sõ'y khụ cỹa cõy kim ngõn... tõc nhõn gõy hoõ ỷng dụng manh bach cu C3b hoat hoõ lympho B v T dở tham gia vo quõ trinh viờm *** Cõc yộu to dụng mõu Hờ thụng dụng mõu bao gụm mot loat nhỷng protein huyột tuong duoc hoat hoõ bụi yộu tụ Hageman Kờ't quõ cuụi cỹng l chuyởn fibrinogen thnh fibrin nhụ tõc dụng cỹa thrombin Trong quõ trợnh ny, cụ su hợnh thnh cõc fibrinopeptide, gõy tõng tmh tham thnh mach v hoõ ỷng dụng dụi vụi bach cu... thõc Cụ 4 hờ thụng hoat dụng theo kiởu dụng thõc nhụ su hoat hoõ cỹa yộu tụ Hageman v lien hờ tuong tõc nhau l: hờ thụng kinin, hờ thụng bo thở, hờ thụng dụng mõu v hờ thụng tiờu to huyột *** Kinin L nhỷng polypeptid cụ tmh hoat mach duoc tao thnh do su phõn tõch protein tien thõn l kininogen nhụ enzyme tiờu protein Cõc kinin lm tõng tmh tham thnh mach, co co tron, kich thich bach cu di dụng v l nhỷng... Tự cõy kim ngõn dõ phõn lõp duoc cõc hoat chõ't co tõc chong viờm l Lonicerosid A, B, C v xõc dinh duoc cõu truc cỹa chỹng - Hoa chỹa mot flavonoid l scolymosid (lonicerin) OH R R 1 Luteolin H H 2 Scolymosid Rutinose H La chỹa Logalin HO H O_glucose H :ooch3 d Tõc dung duoc l v sinh hoc cỹa cõy kim ngõn Kim ngõn cụ vi ngot nhat, tmh mõt, co tõc dung thanh nhiờt, giõi dục - Tõc dung khõng khuõn: kim ngõn... duụng lipooxygenase tao leukotriene Prostacyclin v thromboxane cụ vai trụ rõt quan trong trong quõ trinh diờu ho dụng mõu Leukotriene co tõc dung hoõ ỷng dụng bach cõu *** Yộu to hoat hoõ tiộu cõu (PAF) PAF l mot dõn xuõt cỹa phospholipid mng, duoc sinh ra sau khi hoat hoõ phospholipase A2 PAF hoat hoõ bach cõu da nhõn trung tmh, kfch thfch su dfnh v xuyờn mach cỹa bach cõu, giõi phụng cõc enzyme cỹa thở... interleukin (IL) v yộu tụ hoai tỹ khụi u (TNF) 1.1.5 Viờm man tmh a Khõi niờm Viờm man tfnh (hay viờm dõc hiờu) cụ thụi gian kộo di (hng tun, hng thõng) trong dụ viờm tiờ'p tue hoat dụng, su phõ hu mụ v hn gõn ton thuong xõy ra dụng thụi Viờm man thuong bõt dau km dõo, mue dụ phõn ỹng thõp, õm ợ v thu'ong khụng cụ triờu chỹng Cõc viờm man thuụng bao gụm cõc bờnh: viờm khụp dang thõp, vỹa xo dụng mach, lao phụi,... chụng viờm cỹa cõy kim ngõn trong bờnh phự chõn do chõ't dõn truyốn receptor 2 kfch hoat proteinase - Tõc dung trờn duụng huyột: sau khi cho thụ uụ'ng nuục sõc hoa kim ngõn thi duụng huyờ't tõng kộo di 5 - 6 giụ mụi trụ lai binh thuụng - Tõc dung ngõn chõn choõng phõn vờ: Nõm 1996, Dụ Tõ't Loi, Nguyờn Nõng An, Bựi Chf Hiờu (Hụi nghi thuục nam lõn thỷ 4, H Nụi) dõ bõo cõo nuục sõc kim ngõn cụ khõ nõng... dang thuục sõc, hõm, cao, ruou thuục hoc hon tõn Cụ thở dựng riờng kim ngõn hay phụ'i hop vụi nhiờu vi thuục khõc 23 Phõn 2 THl/C NGHIấM V KấT QU 2.1 NGUYấN LIấU V PHUONG PHP NGHIấN CU 2.1.1 Nguyờn liờu a Duoc liờu *** Kim ngõn cuụng L thõn, cnh lõ phoi sõ'y khụ cỹa cõy Kim ngõn: Lonicera japonica Thunb, Caplifoliaceae Thõn, cnh lõ cõy Kim ngõn duoc thu hõi thụn Nghợa Trai, xõ Tõn Quang, huyờn Võn Lõm,... chuụt dựng kột hop saponin kim ngõn + a-amylase 39,39% (p ... chuụi cõc buục hoat hoõ theo kiởu dụng thõc Cụ hờ thụng hoat dụng theo kiởu dụng thõc nhụ su hoat hoõ cỹa yộu tụ Hageman v lien hờ tuong tõc l: hờ thụng kinin, hờ thụng bo thở, hờ thụng dụng mõu v... Dõy nhõn dụng b Bụ phõn dựng - Hoa kim ngõn (Flos Lonicera) l hoa phoi sõ'y khụ cỹa cõy kim ngõn - Cnh v lõ kim ngõn (Cauliscum folium Lonicera) l cnh v lõ phoi hay sõ'y khụ cỹa cõy kim ngõn... diờu ho dụng mõu Leukotriene co tõc dung hoõ ỷng dụng bach cõu *** Yộu to hoat hoõ tiộu cõu (PAF) PAF l mot dõn xuõt cỹa phospholipid mng, duoc sinh sau hoat hoõ phospholipase A2 PAF hoat hoõ