Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây lá ngón

43 338 0
  • Loading ...
1/43 trang

Thông tin tài liệu

Ngày đăng: 07/10/2015, 16:59

BỘ Y TÊTRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘIVŨ HUYỀN TÌNHNGHIÊN CỨU ĐẶC• ĐIEM THựC•v ậ• t v àTHÀNH PHẦN HOÁ HỌC CÂY LÁ NGÓN0GELSEMIUM ELEGANS B E N T H LOGANIACEAE)KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆPDược SỸ KHOÁ 1998 - 2003Giáo viên hướng dẫn:Noi thực hiện:Thòi gian thực hiện:GS.TS. Phạm Thanh KỳTS. Nguyễn Tiến VữngBộ môn Dược liệuTrường ĐH Dược Hà NộiTừ 02-0512003Hà Nội - 5/2003U ẩ £ i ■LL M ài o ă mổn.&ỖỈ jeitt iừiụ, tẩ lòng, ỉùèt tín lâu. iắd tới:GS. TS. Pham Thanh Kỳ.TS. Nguyễn Tiến Vững,.(lf)ă hxiốnẨỊ. ilẫn tôi lĩũìitL thành luân, ứúềt tốt ntjititffi, nxuẬ,.^ầitạ. thời tồi eũtu/ x.itL trân, trfrtuj. eảm Ổ4Laáa thầy,eô- ạ.iÓLơ-fỂấỂ ểẩli-ặ. tíurật aiètt trartạ bậ rnâtL ^OưđaLiêu, a à aáe p,hÒ4tạ, b a n etiứe. n ă n g , trtìtu / ti.li.cL teư èiuỊttã, ta.fr ĩtỉễ u Ííìèn th u ậ n . L&i íifi& t â i tr a n ụ LíLốt tfià lạ.LCLn tlviiti Itìèn ĩtề tà i tốt tLtj,fiiêp_ này,.Hà Nội, tháng 05 nám 2003Sinh viênVũ Huyền Tình1 MỤC LỤCTrangĐẶT VẤN Đ Ể ............................................................................................ 3PHẦN 1 TỔNG Q UAN............................................................................ 41.1 Đặc điểm thực v ậ t.................................................................... 41.2 Thành phần hóa học................................................................ 41.3 Độc tính và tác dụng................................................................ 6PHẦN 2 NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú u .. 92.1 Nguyên liệu............................................................................... 92.2 Phương pháp nghiên cứu......................................................... 9PHẦN 3 THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ ........................................ 103.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật............................................... 103.1.1 Đặc điểm hình thái cây lá ngón............................................. 103.1.2 Đặc điểm cấu tạo giải phẫu của rễ, thân, l á ...........................1 03.1.3 Đặc điểm bột rễ, thân, lá của cây Lá ngón.............................123.2 Nghiên cứu thành phần hóa học............................................ 133.2.1 Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hóa học................. 133.2.2 Định tính alcaloid bằng sắc ký lớp mỏng.............................. 203.2.3 Định lượng alcaloid toàn phần................................................ 2 13.2.4 Chiết xuất và phân lập alcaloid............................................... 223.2.5 Nhận dạng chất TV2............................................................... 24PHẦN 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ.................................................... 26PHỤ LỤCTÀI LIỆU THAM KHẢO.2 ĐẶT VẤN ĐỂCây lá ngón (Gelsemium elegans Benth.) là một loài cây độc mọc hoang ởnhiều vùng núi Việt Nam. Lá, thân, rễ đều có chất độc có thể gây chết người.Gần đây có nhiều trường hợp tử vong do sử dụng nhầm các bộ phận của cây lángón [1 0 ].Để góp phần kiểm định dược liệu và tiến tới giám định các vụ ngộ độc docây lá ngón, chúng tôi tiến hành đề tài: “Nghiên cứu đặc điểm thực vật vàthành phần hoá học của cây lá ngón Gelsemium elegans Benth.,Loganiaceae ” với các nội dung sau:Về mặt thực vật:-Mô tả đặc điểm thực vật, định tên khoa học mẫu nghiên cứu.-Xác định đặc điểm vi phẫu: rễ, thân, lá.-Xác định đặc điểm bột rễ, bột thân, bột lá.Về thành phần hoá học- Định tính các nhóm chất hữu cơ trong rễ, thân, lá.Định tính alcaloid bằng sắc ký lớp mỏng.Định lượng alcaloid toàn phần trong rễ, thân, lá.Chiết xuất và phân lập alcaloid chính.Nhận dạng alcaloid phân lập được.3 PHẦN ITỔNG QUAN1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬTCây lá ngón có tên khoa học là: Gelsemium elegans (Benth.), họ Mãtiền (Loganiaceae). ở một số vùng của Việt Nam nó còn có tên là Co ngón(Lạng Sơn), thuốc dút ruột, Hồ mạn đằng, Câu vẫn, Đoạn trường thảo [12].Cây lá ngón là một loại cây mọc leo, thân và cành không có lông, gỗ cómàu vàng. Thân cây có khía dọc, lá mọc đối hình trứng thân dài hay hơi hìnhmác, đầu nhọn, phía cuối nhọn hay hơi tù, mép nguyên, bóng, nhẵn, dài 7 12cm, rộng 2,5 - 5,5 cm. Hoa mọc thành xim ở đầu cành hay ở kẽ lá. Cánhhoa mầu vàng, đài 5, lá đài rời. Tràng gồm 5 cánh hoa nhẩn, dính thành ốnghình phễu, nhị 5 đính ở phía dưới ống tràng, bầu chẩn, vòi dạng sợi. Đầunhụy 4 thùy hình sợi. Quả nang có vỏ cứng dai, mầu nâu hình thon dài lcmrộng 0,5cm hạt nhỏ, quanh mép có rìa mỏng màunâu nhạt, hình thận[1], [3], [5], [9], [12].Cây lá ngón phân bố khá phổ biến ở nhiều miền rừng núi Việt Nam. TừHà Giang, Tuyên Quang, Lai Châu, Lào Cai, Lạng Sơn, Bắc Giang, QuảngNinh, Hoà Bình, đến các tỉnh Tây Nguyên. Ngoài ra, cây lá ngón còn mọc ởmột số nước nhiệt đới. ở Trung Quốc, lá ngón có ở các tỉnh Phúc Kiến, QuảngĐông, Quảng Tây. Ở Bắc Châu Mỹ có loài Gelsemium sempervirens. Art[4][9][12].1.2. THÀNH PHẦN HOÁ HỌCTheo các tài liệu của Đỗ Tất Lợi [12],Võ Văn Chi [4], Vũ Văn Chuyên[5],Trần Công Khánh [9], thì cây lá ngón có chứa nhiều alcaloid khác nhau,4 cụ thể là: Từ loài cây ngón mọc ở Bắc châu Mỹ, G. sempervirens đã chiết rađược nhiều alcaloid như: gelsemin (QoH^OjINy, gelmixin (C19H 2 4 0 3N7)chất sempervirin và sempervin... tất cả đều có độc tính rất mạnh.ở Trung Quốc năm 1931 [12] người ta đã nghiên cứu rễ, thân, cành của câylá ngón Trung Quốc (Gelsemium elegans) đã chiết xuất được 4 alcaloid đặt tênlà:+ Kumin (CjqH^ON j ): dễ tan trong cồn, khó tan trong ether, không tantrong nước. Tan trong nước acid. Đây là thành phần chủ yếu của cây chấtnày không độc lắm.+ Kuminin là chất vô định hình, không màu, dễ tan trong ether và nhiềudung môi hữu cơ, khó tan trong nước, tan trong nước acid.+ Kuminixin: là chất vô định hình.+ Kuminidin: có tinh thể hình trụ, không màu, tan nhiều trong các dungmôi hữu cơ và nước.Hàm lượng cả 4 loại alcaloid ở trong cây là 0,3%.Vào năm 1936 F.Guichard nghiên cứu cây lá ngón mọc ở Việt Nam đãchiết từ lá, vỏ thân và rễ được những chất giống như lá ngón Trung Quốc. Tácgiả đã thấy chất kumin có cả trong quả và hạt, ngoài ra còn tìm thấy một chấtcó huỳnh quang dưới đèn tử ngoại, không tan trong acid và ghi là chất thuộcnhóm esculetin [1 2 ].Năm 1953 M.M Janot xác định lá ngón Việt Nam có chứa gelsemin ởlá, kumin ở thân, rễ và sempervirin ở các bộ phận của cây. Năm 1971 PhanQuốc Kinh, Phạm Gia Khôi và Lương Văn Thịnh chiết được kumin từ rễ câylá ngón mọc ở Hoà BìnhHoàng Như Tố đã phân tích bằng sắc ký lớp mỏng thấy có 15 vếtAlcaloid ở cây lá ngón trong đó đã tách được gelsemin và kumin [1].5 NHOMeGelsenicin(Gelsemin1.3. ĐỘC TÍNH VÀ TÁC DỤNG SINH HOCCây lá ngón là một loại cây rất độc, không được nhân dân ta dùng làmthuốc mà chỉ dùng với mục đích tự tử hay đầu độc. Nhưng ở Trung Quốcngười dân lại hay dùng làm thuốc chữa hủi hay chữa bệnh nấm tóc [1 2 ].Theo Võ Văn Chi, [4], thì cây lá ngón có thể dùng làm thuốc, bộ phậndùng là rễ, thân, lá. Nó có vị cay, đắng, tính nóng, rất độc* có tác dụng thanhnhiệt, tiêu thũng, giảm đau, sát trùng, chống ngứa. Có công dụng là: điều trịeczema, nấm ở chân, ở thân, đòn ngã tổn thương, đụng giập, tri, tràng nhạc,đinh nhọt và viêm mủ da, điều trị phong hủi. Giã cây tươi đắp ngoài hoặc nấunước rửa ngoài mà không được dùng uống trong [4].Trong cây lá ngón mọc ở Bắc Mỹ: thành phần chủ yếu là chất gelmixin,có độc tính rất mạnh. Với liều thấp trên động vật có vú, trước khi thấy hiệntượng ức chế hô hấp thường thấy một thời kỳ hưng phấn ngắn [1 2 ].Trong cây lá ngón của ta và Trung Quốc có thành phần khác nhưng sovới tác dụng của những alcaloid trong cây lá ngón Bắc Mỹ thì nhiều phầngiống nhau. Chất kumin và kuminin ít độc hơn, gần giống tác dụng củagelsemin. Chất kuminixin rất độc, nhưng chất gelsemixin lại độc hơn nữa.Nhỏ dung dịch gelsemin và gelsemixin lên mắt thì thấy hiện tượng giãn đồngtử còn kumin và kuminin không làm giãn đồng tử [1 2 ].6 Ngoài thành phần hoá học, Hoàng Như Tố [14] còn kiểm tra truyềnthuyết dân gian nói: “chỉ ăn 3 lá là đủ chết người" đồng thời tìm cơ chế tácdụng của lá ngón để tìm cách chống độc có hiệu quả đã đi tới một số kết luậnsau:-Liều độc: LD50 đối với chuột nhắt trắng của rễ là 102mg/kg thể trọng(chiết bằng cồn 90°), của lá là 600mg/kg (dược liệu tươi chiết bằng nước),200mg/kg (lá khô chiết bằng nước), 150mg/kg (lá khô chiết bằng cồn 70°),89mg/kg (lá khô chiết bằng cồn 90°), của alcaloid toàn phần chiết từ lá khô là200mg/kg, trong khi đó của gelsemin là 140mg/kg và kumin thì không độc.Như vậy, lá ngón có độc nhưng không đến mức 3 lá đủ chết người như dângian thường nói.Tác dụng độc của lá ngón không đặc hiệu trên hệ thống thần kinh, gâynên co giật và chết do ngừng hô hấp trong một trạng thái thiếu oxy rõ rệt.-Nghiêu cứu về mặt chống độc, cho phép kết luận cơ chế tác dụng củacác hoạt chất cây lá ngón chủ yếu đánh vào các men hô hấp, gây sự rối loạntrong tế bào dẫn tới sự thiếu oxy nghiêm trọng gây nên tình trạng co giật cơ vàliệt cơ. Phương hướng dùng các thuốc ngăn cản sự ức chế men và bảo trợ menđã dẫn tác giả tìm ra được tính chống độc của ATP. Khi dùng ATP để ngănngừa cũng như để điều trị ngộ độc bằng lá ngón đã giảm tỷ lê chết của chuộtnhắt trắng từ 58% xuống còn 25%, đã cứu được tất cả các thỏ làm thí nghiệmkhi đã bị ngộ độc bằng liều chết của lá ngón [ 1 2 ].Dù đã nghiên cứu như vậy nhưng việc phát hiện các chất độc trong cơthể khi bị ngộ độc lá ngón còn rất khó khăn, vì phản ứng được tiến hành trênnhững chất lấy được ở cơ thể người bị ngộ độc là một việc không phải dễ dàng[12].7 Chất độc chính trong cây lá ngón là các alcaloid như gelsemin, kumidinvà kumin có trong toàn cây, độc nhất là ở rễ và lá non. Ngộ độc với triệuchứng như khát nước, sốt, đau rát họng, đau bụng, nôn mửa, hoa mắt răng cắnchặt, sùi bọt mép, hạ thân nhiệt, hạ huyết áp, hô hấp chậm rồi chết. Cách giảiđộc: Phải nhanh chóng loại chất độc ra khỏi cơ thể bằng cách gây nôn và rửaruột (nôn ra sớm thì sống, chậm thì chết) [9].Theo kinh nghiệm truyền thống thì cho uống thật nhiều nước sắc camthảo. Tiêm truyền huyết thanh mặn hay ngọt, giữ cơ thể ấm. Nếu hạ huyết ápthì dùng ephedrine, khó thở thì dùng niketamid cho thở oxy hoặc hô hấp nhântạo, đau bụng thì dùng thuốc giảm đau [9]8 PHẦN IINGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁPNGHIÊN CỨU2.1. NGUYÊN LIỆU- Nguyên liệu là rễ, thân và lá của cây lá ngón có hoa thu hái tại xã AnChâu, huyện Sơn Động, tỉnh Bắc Giang vào tháng 02/2003.- Nguyên liệu sau khi thu hái được thái nhỏ sấy khô ở nhiệt độ 40-50°Csau đó được bảo quản trong túi bóng lớn, kín.2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cứ u2.2.1. Nghiên cứu về mặt thực vật học- Quan sát hình thái bên ngoài bằng cảm quan.- Cắt và quan sát vi phẫu: Rễ, thân, lá trên kính hiển vi quang học tạibộ môn dược liệu theo tài liệu “Thực tập dược liệu” [2] và “Thực tậpgiải phẫu và hình thái thực vật” [8 ].- Soi bột và mô tả các đặc điểm của bột rễ, thân, lá theo tài liệu củaTrần Công Khánh [8 ] và thực tập dược liệu [2].2.2.2. Nghiên cứu thành phần hoá học trong cây lá ngón- Định tính các nhóm chất trong rễ, thân và lá cây theo tài liệu “Bàigiảng dược liệu” [1 ], thực tập dược liệu [2 ].- Định lượng alcaloid trong cây theo phương pháp acid base [2 ].- Xác định độ ẩm trên máy Sartorius ( Germany) tại bộ môn dược liệu.- Đo phổ u vtrên máy UV-VIS Spectrophotometer cary(Australia) tại Viện kiểm nghiệm Bộ y tế.- Đo phổ IR trên máy FTTR tại Phòng Hoá, Viện khoa học hình sự.- Đo phổ khối trên máy 5989B MS tại Phòng cấu trúc Viện hoá học.-Đo phổ cộng hưởng từ hạt nhân trên máyAy.ĩùồ tại V)t*v.-kxi 'ộiq c- Đo độ chảy trên máy GALLENKAMP tại bộ môn hoá hữu cơ.91E PHẦN IIITHỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ3.1. NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT3.1.1. Đặc điểm hình thái cây lá ngón (Xem phụ lục hình 3.1; 3.2; 3.3; 3.4)Cây bụi leo mọc ở ven rừng, thân nhỏ hoặc vừa không có lông, lá mọc đối,hình trứng thuôn dài hay hơi hình mác, đầu nhọn phía cuống lá nhọn, mépnguyên, bóng, nhẵn, dài 10cm, rộng 5cm, mặt trên của lá mầu sẫm, mặt dướimầu nhạt hơn, gân lá hình lông chim, có từ 4-7 cặp gân phụ, cuống lá dàilcm. Hoa nhỏ mọc thành xim ở đầu cành hay ở kẽ lá, bao hoa mầu phớt tím,cánh hoa mầu vàng.Mẫu chúng tôi nghiên cứu đã được GS. Vũ Văn Chuyên định tên khoahọc là: Gelsemỉum elegans (Benth.), Loganiaceae.3.1.2. Đặc điểm cấu tạo giải phẫu của lá, thân và rễ* Cấu tạo giải phẫu lá (Xem phụ lục hình 3.5)Mặt cắt ngang có dạng đối xứng hai bên, lá được chia làm hai phầnchính, phiến lá và gân lá.- Gân lá: Mặt dưới lồi, mặt trên phẳng hơi lõm.Biểu bì ( 1 ) trên gồm một lớp tế bào hình trứng kích thước tương đối lớn xếpđứng, biểu bì dưới ( 1 ) tế bào có dạng hình tròn và nhỏ hơn.Mô dày (2) gồm những lớp tế bào tròn, thành dày xếp sát biểu bì trên và biểubì dưới.Mô mềm (3) cấu tạo từ những tế bào tròn mỏng xếp lộn xộn.Cung gỗ (5) ở giữa gân lá. Có libe (4) bao quanh cung gỗ.- Phiến lá: Biểu bì trên và biểu bì dưới cấu tạo bởi những tế bào tròn xếpđều đặn thành hàng, tế bào ở phía trên to hơn ở phần biểu bì dưới. Hầu nhưkhông quan sát thấy mô dậu. Ngay dưới lớp biểu bì là mô khuyết, các tế bàoxếp lộn xộn có nhiều khuyết nhỏ.10 * Cấu tạo giải phẫu thân (Xem phụ lục hình 3.6)Mặt cắt ngang thân hình tròn, từ ngoài vào trong có:-Biểu bì (1) Gồm một 'ị.% ạụ hàng tế bào hình chữ nhật xếp thành dãy.- Mô mềm vỏ (2) Gồm nhiều tế bào thành mỏng, phía ngoài dẹt, phíatrong hình trứng. Trong mô mềm vỏ có các tế bào hoá gỗ (3) và các sợi gỗxếp riêng lẻ, hoặc thành từng đám.- Libe (4) xếp thành từng bó, phía ngoài libe có các sợi thành dầy, xếpthành từng đám.- Gỗ (5)Mô gỗ khá dầy có các mạch gỗ lớn xếp trong mô gỗ, bị các tiaruột thành dầy hoá gỗ chia ra từng bó. Mô gỗ liên tục càng vào phía trong cácmạch gỗ nhỏ dần, phần ngoài tia ruột có nhiều tinh thể canxi oxalat hình khối.- Libe quanh tuỷ (6 ) tạo thành một cung liên tục nằm ở giữa gỗ và mômềm ruột.- Mô nểm ruột (7) Gồm các tế bào thành mỏng xếp lộn xộn tạo nhiềuchỗ khuyết.* Cấu tạo giải phẫu rễ (Xem phụ lục hình 3.8)Mặt cắt rễ tròn từ ngoài vào trong có:- Lớp bần (1) Gồm ba đến bốn hàng tế bào xếp thành dẫy đồng tâm vàxuyên tâm, có nhiều chỗ đã bị bong ra.- Mô mềm vỏ (2) được cấu tạo bởi những tế bào có thành mỏng.Không có các bó sợi và tế bào hoá gỗ trong mô mềm vỏ.- Libe (3) Xếp thành từng bó, bên ngoài libe không có các sợi thànhdầy hoá gỗ như ở phần thân cây.- Gỗ (4) Có các mạch gỗ lớn, xếp trong mô gỗ bị các tia một thành dầyhoá gỗ chia ra từng bó vào gần đến tâm. Mô gỗ phía trong liên tục và khôngcó mô mềm ruột.11 3.1.3. Mô tả đặc điểm bột rễ, thân, lá của cây lá ngón (Xem phụ lụchình 3.7)* Bột lá: mầu xanh lục, mùi hắc. Soi kính hiển vi nhận thấy có các đặcđiểm sau:- Các mảnh mô mềm (2)- Các mạch xoắn (1)- Các mảnh biểu bì có lỗ khí (5)- Tinh thể Canxi Oxalat hình khối (7)* Bột thân cây: mầu vàng nhạt, có mùi hắc. Soi kính hiển vi nhận thấy cócác đặc điểm sau:- Có rất nhiều các mảng mạch điểm (3)- Các tế bào màng hoá gỗ (4)- Các sợi gỗ (6 )- Các mảnh mô mềm (2)* Bột rễ cây: mầu vàng đậm có mùi hắc. Soi dưới kính hiển vi có các đặcđiểm sau:- Tế bào màng hoá gỗ (4)- Có nhiều các mảng mạch điểm (3)- Các bó sợi và sợi gỗ (6 )- Có rất nhiều các hạt tinh bột đứng riêng lẻ hay thành từng đám haiđến ba hạt (8 )- Có các mảnh mô mềm (2)- Các mảnh bần (9)Nhận xét:Các bộ phận của cây lá ngón có một số đặc điểm vi học đặc trưng- Giải phẫu lá: lớp tế bào biểu bì ở phần gân trên của lá có hình trứng, xếpđứng, kích thước lớn hơn các tế bào biểu bì phiến lá, libe bao quanh bó gỗ.12 - Bột lá có các mạch xoắn, các tế bào ở phần phiến lá có chất tế bào tạothành khối giống tình thể canxi oxalat.- Giải phẫu thân và rễ: Mô mềm vỏ của thân có nhiều sợi gỗ thànhđầy, khoang hẹp, còn ở rễ thì hầu như không có sợi gỗ ở mô mềm vỏ. Các tiaruột màng hoá gỗ chia gỗ ra từng bó ở phía ngoài, mô gỗ ở phía trong liên tục,tinh thể canxi oxalat hình khối phân bố nhiều ở phần tia ruột cạnh libe củathân.- Bột thân và rễ có nhiều tế bào màng hoá gỗ kích thước lớn và các sợi gỗ.3.2.NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HOÁ HỌC3.2.1. Định tính các nhóm chất trong rễ, thân và lá của cây lá ngón- Định tính alcaloỉd:Cân khoảng 10 gam bột dược liệu đã được sấy khô cho vào bình nóndung tích 250ml. Thấm ẩm đều bằng dung dịch NH4OH 10%. Để yên 60 phút.Thêm vào 50ml CHƠ 3 , lắc 5 —> 10 phút rồi để yên qua đêm, lọc. Lấy 30mldịch lọc cho vào bình gạn, thêm 10ml HC1 5%, lắc 2 —» 3 phút, gạn lấy phầnacid để làm phản ứng. Cho vào 3 ống nghiệm, mỗi ống 2ml dịch chiết,ống1: Thêm 2 —» 3 giọt TT Mayer -» Có tủa trắng,ống 2 : Thêm2-» 3 giọt TT Dragendorff —» Có tủa đỏ gạch,ống 3: Thêm2—> 3 giọt TT Bouchardat —>Có tủa đỏ nâu.Nhận xét: Qua kết quả định tính trên ta có thể sơ bộ kết luận trong rễ,thân, lá của cây lá ngón đều có alcaloid.- Định tính flavonoid:Lấy khoảng 10 gam dược liệu cho vào bình nón dung tích 100ml thêm50ml ethanol 90° đun cách thuỷ cho sôi vài phút, lọc nóng. Dịch lọc dùng vàocác phản ứng sau:ế13 + Phản ứng cyanidin:Cho 2 ml dịch chiết vào ống nghiệm thêm một ít bột Mg kim loại sau đócho từng giọt HC1 đặc (3 -» 5 giọt), để yên một vài phút không thấy dung dịchchuyển màu. Phản ứng âm tính.+ Phản ứng với kiềm:Nhỏ 1 giọt dịch chiết lên giấy lọc. Hơ khô rồi để lên miệng lọ amoniacđặc đã mở nút, màu vàng của dịch chiết không tăng lên. Phản ứng âm tính.+ Phẩn ứng với dung dịch AlCl33%:Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết thêm 3 giọt dung dịch A1C13 3% cóhiện tượng tạo tủa. Phản ứng dương tính.Nhận xét: Trong rễ, thân, lá của cây lá ngón không có Flavonoid.- Định tính coumarin:Cho 5 gam bột dược liệu vào cốc, thêm 50ml cồn 90°, đun cách thuỷcho sôi vài phút, lọc qua giấy lọc. Dịch chiết thu được tiến hành làm các phảnứng sau:+ Phản ứng mở- đóng vòng lacton:Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống lml dịch chiết.- ống 1 : Thêm lml dung dịch NaOH 10%.ống 2 : để nguyên.Đun cả 2 ống nghiêm đến sôi rồi để nguội.Quan sát:- ống 1: Có mầu vàng- ống 2: Vẫn trongThêm vào cả 2 ống nghiệm mỗi ống 2ml nước cất. Lắc đềuQuan sát:- ống 1 : đục hơn ống số 2- ống 2 : vẫn trong suốtAcid hoá ống 1 bằng vài giọt HC1 đặc thì thấy ống 1 vẫn đục như banđầu. Phản ứng âm tính.14/Ọ + Phản ứng diazo hoá:Cho vào ống nghiệm nhỏ lml dịch chiết, kiềm hoá bằng NaOH1 0%,đun cách thuỷ đến sôi rồi để nguội. Nhỏ vài giọt TT Diazo mới pha. Dungdịch trong ống nghiệm không chuyển sang màu hồng hay tím đỏ. Phản ứngâm tính.+ Vi thãng hoa:Cho một ít bột dược liệu vào nắp chai bằng kim loại, đậy lên trên mộtphiến kính nhỏ có bông tẩm nước lạnh ở trên. Đốt nóng bằng đèn cồn trong 15-» 20 phút. Lấy phiến kính ra để nguội, nhỏ1-> 2 giọt dung dịch KI. Soi trênkính hiển vi không thấy tinh thể nâu sẫm hay tím. Phản ứng âm tính.Nhận xét trong rễ, thân, lá của cây lá ngón không có coumarin.- Định tính tanin:Lấy 3 gam bột dược liệu, cho vào cốc. Thêm 20ml nước cất, đun sôi vàiphút rồi lọc. Lấy dịch lọc làm các phản ứng sau:+ Phản ứng với FeCl35%:Cho vào ống nghiệm lml dịch chiết, thêm 1 ->2 giọt FeCl3 5%, thấyxuất hiện tủa xanh đen. Phản ứng dương tính.+ Phản ứng với dung dịch gelatin 1%:Cho vào ống nghiệm lml dịch chiết, thêm vào vài giọt dung dịchgelatin 1 % thấy xuất hiện tủa bông. Phản ứng dương tính.Nhận xét: Trong rễ, thăn, lá của cây có chứa tanin.- Định tính acid hữu cơ:Cho vào ống nghiêm lml dịch chiết nước vài tinh thể Na2 C03, thấy cóbọt khí nổi lên rất rõ.Nhận xét: trong rễ, thân, lá của cây có acid hữu cơ15 - Định tính antranoid:+ Phản ứng Borntraeger:Cho 3 gam bột dược liệu vào bình nón có dung tích 100ml, thêm 15mlH2 S0 4 10%. Đun cách thuỷ 15 phút, lọc, chuyển dịch lọc vào bình gạn, lắc vớiether etylic trong 1 —» 2 phút, để yên cho tách thành 2 lớp. Loại phần nước,cho vào phần ether 5ml dung dịch NaOH 10%. Lắc thấy lớp ether có mầuvàng nhạt. Thêm vào đó dung dịch H2 0 2. Lắc đều, đun cách thuỷ vài phútdung dịch trở nên không mầu. Phản ứng âm tính.Nhận xét: trong rễ, thân, lá của cây lá ngón không có antranoid.- Định tính saponin:+ Quan sát hiện tượng tạo bọt:Cho 5 giọt dịch chiết cồn vào ống nghiệm có 5ml nước, lắc mạnh trong5 phút. Thấy có nhiều bọt xuất hiện và bền vững sau 15 phút (phản ứng dươngtính)Nhận xét: trong rễ, thân, lá của cây lá ngón có saponin.- Định tính đường khử:Lấy 2 gam bột dược liệu cho vào ống nghiệm to, thêm 10ml cồn, đuncách thuỷ10phút, lọc, cho lmd dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ thêm3giọtTT Feling A và 3 giọt TT Feling B. Đun cách thuỷ 10 phút thấy có tủa đỏgạch (phản ứng dương tính)Nhận xét: Có đường khử tự do trong rễ, thân, lá.- Định tính chất béo:Nhỏ dịch chiết cloroform lên giấy lọc, hơ khô. Không để lại vết mờ trêngiấy lọc. Phản ứng âm tính.Nhận xét: Không có chất béo trong rễ, thân, lá.16 - Định tính sterol:Lấy khoảng 5 g bột dược liệu, cho vào bình nón dung tích 100ml, thêm40ml cồn 25°. Ngâm 24 giờ, gạn dịch chiết, loại tạp bằng chì acetat 30% đếndư, lọc bỏ tủa, lắc dịch lọc với cloroform 2 lần (mỗi lần10ml trong một hìnhgạn). Gạn lớp cloroform làm phản ứng:+ Phản ứng Salkopski:Trong ống nghiệm nhỏ cho khoảng 2ml cloroform.Thêm từ từ 1ml H2 S0 4 đặc (nghiêng ống nghiệm 45°) cho chảy từ từ dọc theothành ống nghiệm để có phân lớp.Thấy có xuất hiện vòng đỏ thắm trên bề mặtphân cách giữa hai lớp chất lỏng. Phản ứng dương tính.+ Phản ứng Liebermann: Trong ống nghiệm nhỏ, cho 2ml dịch chiếtcloroform. Bốc hơi cách thuỷ đến khô. Hoà cắn bằng lml anhydrid acetic, lắcđều, thêm từ từ 1ml H2 S0 4 đặc cho chảy dọc theo thành ống nghiệm để cóphân lớp.Thấy có xuất hiện vòng đỏ thắm trên bề mặt phân cách giữa hai lớpchấrtỏng. Phản ứng dương tính.Nhận xét: Có sterol trong rễ, thán, lá .- Định tính gly cosỉd tim :Cho 10 g dược liệu vào bình nón dung tích 250ml, thêm 80ml cồn 25°ngâm 24 giờ, gạn lấy dịch chiết, loại tạp bằng dung dịch chì acetat 30% dư,lọc bỏ tủa, dịch lọc cho vào bình gạn và lắc kỹ2 02lần với clorofrom (mỗi lầnml), gạn dịch cloroform vào cốc thuỷ tinh khô bốc hơi cách thuỷ đến khô.Cắn được hoà tan trong cồn 90°, dịch chiết cồn để làm các phản ứng định tínhglycosid tim.+ Phản ứng Legal:Cho lml dịch chiết vào ống nghiệm, thêmNitroprusiat 1 % và22giọt dung dịch Natrigiọt dung dịch NaOH 10% ,không thấy xuất hiện mầuhồng. Phản ứng âm tính. + Phản ứng Baljet:Chuẩn bị thuốc thử Baljet: Cho vào ống nghiệm to lml acid picric 1 % và9ml dung dịch NaOH 10% lắc đều.Làm phản ứng:mCho lml dịch chiết trong cồn vào1ống nghiệm nhỏ, nhỏ từng giọtthuốc thử baljet vừa mới pha vào ống nghiệm. Không thấy xuất hiện màu.Phản ứng âm tính.+ Phản ứng Liebermann:Trong1ống nghiệm nhỏ, cho 2ml dịch chiết trong cồn 90°. Cô cạn cồn,rồi hoà tan cắn bằng 2 ml anhydrid acetic, lắc đều, đặt ống nghiệm nghiêng45°, thêm từ từ H2 S0 4 theo thành ống nghiêm để dịch lỏng trong ống nghiệmchia thành 2 lớp, ở mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng có xuất hiện vòng tím đỏ.Phản ứng dương tính.+Phản ứng Keller- Kiliani:Cho lml dịch chiết vào ống nghiệm, cho vào đó lml FeCl3 5% trong acidacetic, lắc đều, nghiêng ống nghiệm, cho đồng lượng acid sulfuric đặc theothành ống nghiệm. Không thấy xuất hiện vòng tím đỏ giữa2lớp phân cách.Phản ứng âm tính.Nhận xét Không có glycosrd tìm trong rễ, thân, lá của cây lá ngón.- Định tính acid amin:Trong một ống nghiệm nhỏ cho 2ml dịch chiết nước, thêm vào 3 giọt thuốcthử Ninhydrin 3% trong ethanol. Đun cách thuỷ 5-10 phút, không thấy xuấthiện màu xanh tím. Phản ứng âm tính.Nhận xét: Không có acid amin trong rễ, thân, lá.18 Bảng 3.1: Kết quả định tính các nhóm chất trong cây lá ngón.TT12345NhómchấtFlavonoidGlycosidĐườngkhửAlcaloidCoumarinPhản ứng định tínhPhản ứng CyanidinPhản ứng với kiềmThuốc thử A1C1, 3%/cồn 'Phản ứng LiebermannPhản ứng Bal jetPhản ứng LegalPhản ứng Keller-KilianiKết quảRễ ThânLá------++-----------KhôngcóKhôngcó++Có+++Thuốc thử Dragendorff+++Thuốc thử MayerThuốc thử Bouchardat+++Thuốc thử DiazoPhản ứng mở đóng vòngLactonVi thăng hoaThuốc thử Gelatin 1%++++++++++Có++Thuốc thử FeCl3 5%+++Phản ứng tạo bọt+++++Cósaponin+++CóThuốc thử Fehling A+B6Tanin7Saponin8Acid hữuThuốc thử Na2 C0 3cơ9AntranoidPhản ứng Bomtraeger10SterolPhản ứng LiebermannPhản ứng Salkopski11Chất béoVết mờ trên giấy lọc12Acid aminThuốc thử Ninhydrin 3%+Kết luân----------++-++-++------KhôngcóCóKhôngcóCóKhôngcóKhôngcóNhận xét:Qua các phản ứng định tinh sơ bộ thấy trong rễ, thân, lá đều có cácnhóm chất sau: alcaloỉd, saponin, tanin, acid hữu cơ, sterol, đường khử19 3.2.2. Định tính alcaloid bằng sắc ký lớp mỏngLàm định tính alcaloid trên 3 bộ phận: rễ, thân, lá của cây lá ngón bằngsắc ký lớp mỏng.3.2.2.1. Chuẩn bị bản mỏngDùng bản mỏng Silicagel 60 F2 54 (Merck), hoạt hoá trong tủ sấy ở 105°ctrong 1 giờ.3.2.2.2. Chuẩn bị dịch chấm sắc kýCân lOg bột dược liệu làm ẩm bằng NH4OH 10% trong lh cho vào bìnhnón dung tích 250 ml, cho 50 ml CHCI3 , ngâm qua đêm, lọc, lấy dịchlọc cô còn khoảng 5 ml đem chấm sắc ký.3.2.23. Tiến hànhChấm lên các bản mỏng đã chuẩn bị sẵn cùng lượng dịch chiết rồi khaitriển bằng 2 hệ dung môi sau:Hệ I - CHCI3 : CH3 OH: NH4OH đặc [50 : 9 : 1]Hệ II- Toluen: aceton : C2 H5OH : NH4OH đặc [ 45: 45:7:3]Sau đó phun hiện mầu bằng thuốc thử Dragendorff. Trên bản sắc kýxuất hiện các vết có mầu từ vàng nhạt đến vàng đậm. So sánh thấy hệ II táchtốt vì số lượng các vết xuất hiện nhiều và khoảng cách các vết ở xa nhau hơn.Kết quả sắc ký khai triển với hệ dung môi II được trình bày ở hình 3.9và ở bảng 3 .2 .Bảng 3.2STTKết quả định tính alcaloid bằng SKLMMàuVIV2V3V4V5V6Vàng nhạtVàng đậmVàngVàng nhạtVàngVàngV7Vàng đậmV8VàngLáThânRễMàuRf0,045 Vàng nhạt0,270 Vàng đậm0,315 Vàng nhạtRf0,0440,2700,3150,3420,387 Vàng0,423 Vàng0,384MàuRfVàngVàng0,2700,458Vàng nhạt0,4570,514Vàng nhạt0,5130,3140,4230,459 Vàng nhạt0,514 Vàng20 Nhận xét:- Kết quả sắc ký lớp mỏng cho thấy ở rễ cho 8 vết, ở thân cho 7 vết và ở lácho 4 vết hiện màu với thuốc thử Dragendoff- Các vết của ba bộ phận rễ, thân, lá có Rf gần trùng nhau là các vết V2,V3, V7, V 8 . Trong đó V2 là vế to nhất, đậm nhất.3.2.3. Định lượng alcaloid toàn phần3.2.3.1. Định lượng alcaloid toàn phần trong rễ, thản, lá của cây lá ngónbằng phương pháp acid base.Bột dược liệu dùng để định lượng đem xác định độ ẩm trên máy xácđịnh độ ẩm tại bộ môn dược liệu Trường Đại học Dược Hà Nội.Cân chính xác khoảng lOg dược liệu (đã xác định độ ẩm) thấm ẩm bằngNH4OH đặc (để yên12giờ), cho bột dược liệu vào túi lọc rồi đặt vào bìnhsoxhlet. Chiết với dung môi là CHC13 đến kiệt alcaloid (kiểm tra bằng TTDragendorff).Cất thu hồi dung môi rồi hoà tan cắn trong HC1 5%, rửa dịch acid bằngether (rửa 3 lần, mỗi lần 10ml). Kiềm hoá bằng NH4 OH đặc đến pH 10 - > 1 1rồi chiết bằng CHCI3 (chiết 5 lần, mỗi lần lOml) để lấy hết alcaloid. Tập trungdịch chiết rồi rửa bằng nước cất đến pH 7, để bốc hơi tự nhiên đến khô. Hoàtan cắn bằng một lượng chính xác 10ml HC1 0,1 N thêm nước cất đun sôi đểnguội và 3 giọt dung dịch đỏ metyl. Định lượng acid thừa bằng dung dịchNaOH 0,1N.Gọi V là số ml dung dịch NaOH 0,1 N đã định lượng. (10 - v) sẽ là sốml dung dịch acid đã tham gia bão hòa alcaloid, lml dung dịch HC1 0,1Ntương ứng với 0,0306g alcaloid toàn phần, tính theo Kumin. Hàm lượngalcaloid toàn phần trong dược liệu tính theo Kumin.21 (10 - V) X 0,0306 X 100x% = -------------- -----------pX: Hàm lượng alcaloid toàn phần trong dược liệu khô tuyệt đối.V: Thể tích NaOH 0,1 N dùng để trung hoà HC1 dưP: Khối lượng bột dược liệu đã trừ độ ẩmTiến hành làm mỗi bộ phận 5 mẫu, kết quả định lượng được ghi ở bảng 3.3Bảng 3.3: Kết quả định lượng aỉcaloid toàn phần trong rễ, thân, láTTHàm lượng alcaloid toàn phần (%)RễThânLá10.670.340.1620.660.340.1930 .6 80.320.1840.650.320.1650.660.330.15Trung bình0.6640.3320.1693.2.4. Chiết xuất và phân lập alcaloid3.2.4.1. Chiết xuất alcaloid toàn phầnChiết xuất alcaloid bằng dung dịch acid HC1 1 % qui trình chiết xuấtđược tóm tắt ở hình 3.11.22 Hình 3.11 Sơ đồ chiết xuất alcaloid toàn phần:23 3.2.4.2.Phân lập alcaloid bằng sắc ký cột:Căn cứ vào kết quả định tính bằng sắc ký lớp mỏng chúng tôi nhận thấy,trong các vết alcaloid của rễ cây lá ngón có V2 to nhất (hàm lượng cao nhất).Vậy có thể sử dụng phương pháp sắc ký cột để phân lập alcaloid V2.* Dùng silicagel 60 cỡ hạt 0,036 đến 0,2mm của hãng Merck, thực hiệnphương pháp nhồi cột ướt.Hoạt hoá silicagel ở 105°c trong1giờ, sau đó lấy silicagel hoà trong mộtlượng cloroform rồi đem nhồi cột. Để yên cột trong8giờ. Cắn alcaloid toànphần hoà tan bằng một ít cloroform rồi cho thêm 2g silicagel vào trộn đều. Sấynhẹ cho cloroform bay hơi rồi đổ lên cột dàn thành lớp.* Rửa giải cột:Dùng hệ dung môi rửa giải là CHC13: CH3 OH (9:1) hứng mỗi ống khoảng2 ml. Kiểm tra bằng sắc ký lớp mỏng. Chọn riêng những ống chỉ cho một vếttrên bản mỏng gộp lại rồi cho bốc hoi cloroform, để kết tinh tự nhiên trongống nghiệm. Cạo lấy phần tính thể đem kết tinh lại nhiều lần thu được alcaloidv 2.Kiểm tra độ tinh khiết của V2 bằng sắc ký lớp mỏng:Tinh thể alcaloid V2 được hoà tan trong một lượng vừa đủ methanol, rồi chấmlên ba bản mỏng và được khai triển bằng ba hệ dung môi khác nhau:Hệ I-Cloroform : Methanol: Amoniac [50:9:1].Hệ II- Toluen : Aceton : Ethanol: Amoniac [45:45:7:3].Hệ III- Ether Ethylic : Methanol: Amoniac [50:9:1].Kết quả cho thấy alcaloid V2 chạy trên ba hệ dung môi khác nhau luôn chomột vết. Điều đó chứng tỏ V2 là đơn chất.3.2.5 Nhận dạng chất TV2- TV2 là dạng tinh thể hình kim, không màu- Tan tốt trong cloroform , methanol, ethanol-Không tan trong nước.24 - Độ chảy 170°c.- Phổ tử ngoại (UV) đo trong MeOH cho Ằ,max: 264 nm.- Phổ hồng ngoại (IR) đo dưới dạng viên nén KBr cho các đỉnh hấp thụmạnh ở: 3447,23; 2929,28; 2864,88; 1724,85; 1628,49; 1584,87; 1446,69;1331,09; 1214,75; 1080,55; 926,02; 776,12; 758,65 em '.-Phổ khối (MS) cho gốc [ M]+= 306 nm tương ứng với công thức C20H2 2 ON2 và các pic mảnh:291 nm= M+ - 15 (CH3); 263 nm= 291- 28 (CO); 251 nm= 279- 28(CH2 =CH2); 234 nm= 251- 17 (OH); 267 nm (C12H9 N).- Phổ NMR:+ Phổ 'H - NMR cho biết trong cấu trúc của TV2 có 22 H+ Phổ l3C - NMR cho biết trong cấu trúc của TV2 có 20C trong đó có 5cacbon bậc 4- Phổ DEPT: Cho biết trong cấu trúc TV2 có 1 nhóm CH3, 5 nhóm CH2 , 9nhóm CH.Căn cứ vào phổ u v , IR, MS, NMR, DEPT chúng tôi nhận dạng chấtTV2 là Kumin có công thức phân tử làsau:Kumin25và công thức cấu tạo như PHẦN IV - KẾT LUẬN VÀ ĐỂ NGHỊ4.1. KẾT LUẬNSau một thời gian thực hiện khoá luận tốt nghiệp, chúng tôi đã thu đượckết quả sau:* Về đặc điểm thực vật:Đã lấy mẫu, quan sát đặc điểm thực vật của cây nghiên cứu vàGiáo sư Vũ Văn Chuyên đã định tên khoa học mẫu chúng tôi nghiêncứu là: Gelsemium elegans (Benth.), Loganiaceae.Đã xác định đặc điểm vi phẫu rễ, thân, lá và đặc điểm bột rễ,thân, lá của cây lá ngón nghiên cứu góp phần nhận biết dược liệu.* Về thành phần hoá học:• Bằng các phản ứng hoá học đã xác định trong ba bộ phận rễ, thân, lácủa cây lá ngón có alcaloid, saponin, tanin, acid hữu cơ, đường khử,sterol.• Bằng sắc kí lớp mỏng và sử dụng hệ dung môi thích hợp đã phát hiệnđược8vết alcaloid trong rễ, 7 vết alcaloid trong thân và 4 vết alcaloidtrong lá.• Đã định lượng alcaloid toàn phần trong rễ, thân, lá bằng phương phápacid-base. Kết quả cho thấy trong rễ có 0,664%, trong thân có 0,332%,trong lá có 0,169% alcaloid toàn phần.• Đã phân lập được 1 alcaloid tinh khiết trong rễ cây lá ngón. Căn cứ vàophổ u v , phổ IR, phổ khối (MS), phổ NMR ('H-NMR, l3C-NMR), phổDEPT. Chúng tôi nhận dạng v 2là kumin.26 4.2.ĐỂ NGHỊTrên đây là những kết quả nghiên cứu bước đầu.công trình nghiên cứunày cần được nghiên cứu sâu hơn về thành phần hoá học đặc biệt là chiết xuất,phân lập các alcaloid, thử độc tính và tác dụng sinh học.27 TÀI LIỆU THAM KHẢOTài liệu tiếng Việt1. Bộ môn dược liệu (1998), Bài giảng dược liệu (tập1, tập2).2. Bộ môn dược liệu (1998), Thực tập dược liệu3. Võ Văn Chi, Lê Khả Kế, Vũ Văn Chuyên (1971), Cây cỏ thường thấy ởViệt Nam, Nhà xuất bản KHKT, tr 288-289.4. Võ Văn Chi,( 1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, tr644 -645.5. Vũ Văn Chuyên, Tóm tắt họ thực vật, Nhà xuất bản Y học.6. Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu,(1985) Phương pháp nghiên cứu hoáhọc cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr 376 —398.7. Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam tập 2, Nhà xuất bán Y học, tr 288289.8. Trần Công Khánh,(1981) Thực tập giải phẫu và hình thái thực vật, Nhàxuất bản KHKT.9. Trần Công Khánh (1992), Cây độc, Nhà xuất bản Y học, tr 146 -148.10. Khoa chống độc - Bệnh viện Bạch Mai (2000), Tài liệu đào tạo kiến thứcvề độc chất, Bệnh viện Bạch Mai, tr 260-262.11. Phạm Thanh Kỳ, Chuyên đề dược liệu 1..12. Đỗ Tất Lợi,( 1998), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. Nhà xuất bảnKHKT, tr 318 -321.tỷ_Ị3. Nguyễn Viết Thân, Bành Như Cương (1998), Hội nghị khoa học côngnghệ dược, Cấu tạo giải phẫu một số bộ phận của cây Lá ngón, trường đạihọc Dược Hà Nội, tr 331-335.14. Hoàng Như Tố,( 1970), Độc chất học, Nhà xuất bản Y học và thể dục thểthao, tr 136 -137.28 Tài liệu tiếng Anh15. Thompson u(2002), Multiple animal intoxications associated withCarolina jessamine, PubMed - indexed for Medline, p. 272-273.16. Wang Y, Fang Y...(2 0 0 1 ), Inhibitory effect o f gelsemium alkaloids extracton hepatic carcinoma HepG2 cells invitro, PubMed - indexed forMedline, p.579-581.17. Bousta D, Soulimani R...(2 0 0 1 ), Neutropic, immunological and gastriceffects o f low doses Atropa belladonna L., Gelsemium sempervirens L. andPoumon histamine in stressed mice, PubMed - indexed for Medline, p.205215.18. Sakai s (1995), Chemical studies of indole alkaloids, PubMed - indexedfor Medline, p.351-369.19. Luo SR, Li T, Yang JS (1993), Determination of gelsemium alkaloids byRP-HPLC, PubMed - indexed for Medline, p. 695-698.20. Lin LZ, Cordell GA...(1989), New humantenine-type alkaloids fromgelsemium elegans, PubMed - indexed for Medline, p.588-594.2 1. Schun Y, Cordell GA (1987), Cytotoxic steroids of Gelsemiumsempervirens, PubMed - indexed for Medline, p. 195-198.22. Schun Y, Cordell GA (1986), Rankinidine, a new indole alkaloid fromGelsemium rankinii, PubMed - indexed for Medline, p.806-808.29 PHỤ LỤC1. Biên bản định tên cây lá ngón2. Ảnh cây lá ngónHình 3.1: Mẫu cây tươi có hoaHình 3.2: Mẫu cây tươi có hoaHình 3.3: Ảnh thân câyHình 3.4: Ảnh rễ cây3. Ảnh vi phẫu lá, thân và bột rễ, thân, láHình 3.5: Ảnh vi phẫu láHình 3.6: Ảnh vi phẫu thânHình 3.7: Ảnh bột rễ, thân, lá4. Ảnh vi phẫu rễ, sắc ký đồ và tinh thể V2Hình 3.8: Ảnh vi phẫu rễHình 3.9: Ảnh sắc ký đồ của rễ, thân, láHình 3.10: Ảnh tinh thể V25. Phổ :Phổ tử ngoại (UV)Phổ hồng ngoại (IR)Phổ khối (MS)Phổ NMR ('H-NMR, l3 C-NMR)Phổ DEPT.ŨPAGE Ũ37D BIÊN BẲN ĐỊNH TÊN CÂY LÁ "GỐMTên np^ừơiđưa raSù : vũ Huyền T ìn h3ị a c h ỉ :LỚp Ầ2 K ”53 Trừdng Đạri họ*Dựơc Hà HỘiSố lư ơ n g mẫu : 1 m u câ y ép khô__có hoaNơi th u m u : xã An Châu, Sdn ĐÔng, Bấc G ian ẹĩỉgày th u mẫu: 0 8 /0 2 / 2 0 0 3Npràỵ đưa TT.au:2/2003I . MÔ T i sri BÔ MẪU :Thân d à i khoảng 18 era, đừơng k ín h 2 ram .BÓng d à i 7 cmLá : P h iế n d à i 10nguyênera rộn g 5 cn rr.ăt tr ê n s a n , reft dứ ơi nhạt hơn ,mép, có mủi ahon .Gần l álô n g ch im . Mọc đ ố iCuống lá d à i 1 em.Hoa nhỏ , có 2 c ành Rian^ hoa.1 . TẰĨ LIÊU THAM KHẲ.O :1Phạm Hoàng HÔ câ y cỏ V iệ t Nr.m Quyển I I iĩhà x u ấ tbản t r ẻ 2000trancỂốỌsố 6 6 7 0 - G elsen iu m eleprans (G ardn. e t Champ. ) 3e n t h .Lá ncrón, Thuấyc rú t ru ô t - Y e llo w je s s a m in e2 . Võ Văn C h i T ư đ i é n c ã y t h u 3 c V ỉệ t ẳan Ahv xuHt b »n ỵ h ọ c l 9 g 7 t r a n gsô y h ỉn h I2Ó9 - l á ngón, ngón vàng ih u ỏ c r ú t ru ộ tj>. Đỏ l á t Lđi ứhừng c r y th u óc và v ị thuoc i í ẹ t ao.m aXB ỵ học 1999 tr a n g J>18h ỉn h 'dhồí'4 . A lfr e d P é t e l o t l e s p la n t e s r a é đ ic in a le s1v5j> t r a n g ló>rion màu v à n g (Phạn hoàn gđu vaiHbodge, du MaOS e t duV ie tẳọ g h iĩ hoa màu t r ắ n g )2 . iu đ ỉe n Bach khoa dựđc học AXÉ5 xừ đ ie n Bách khoa l ý 99 tr a n g0 . Lể 'rran sứ c 4 ẩ y th u o c v i ệ tMaall.>491nam íXis nỏng n g h iẹp l y y Ỹ t r a n g 1^4-0I I I . KỂx- quẲ ĐỊỉíii rEn MAƯ 0 Ă 1 LÁ íỉữónMặc dù Phạra â o a n g ăó cholà hoa cay l á ngón «6 MAU xkẮíiG,m u v ạ t đưa đenvan đúng ĩ à c ã y l á n gọn, họ LOửÁ/rlAoEa Ei e n tchoa học ĩ ư elseniura e l e g a n s ( ữ a r đ n e r và ^harap. )isenth .x én Anh : l e l l q v ie ss a m in ehaà ftọi Id dỳ/d/đOQin gừ đ ỉ đ ịn h te nvũ văn ^ u ỵ ê nSò dY,pho ííhà ưhung ẳoàn Kiẻíià i-iọiĐ.x. Odữữdỹo HÌNH 3.1: MẪU CÂY TƯƠI CÓ HOAHÌNH 3.3: THÂN CÂYHÌNH 3.2: MAU c â ykhô có hoaHÌNH 3.4: RẺ CÂY HÌNH 3.5: VIPHÂU LÁ NGÓNHĨNH 3.6: VIPHÂU THÂN NGÓNHÌNH 3.7:BỘT RỄ, THÂN, LÁ HÌNH 3.8: VI PHAU r ễV21ngón12 3HÌNH 3.9: ẢNH SẮC KÝ Đ ồCỦA RỄ(1) THÂN (2) LÁ (3)VÀV2HÌNH 3.10: ẢNH TINH THE V2 Spectrum /Peak ReportMethod fileInformationData File:::Date 5/15/2003 Time 23:25:18Mau GOverlaid Spectra:#Name1Thu1]_Report g e n e r a t e d byPeaks(nm)264.0******Abs(AU) Valleys(nm)Abs(AU)0.767180.66778******247.0******: Vung* *★***Signature:*** End Spe ctrum/Peak Report ***Page 1 of 1 Phong Hoa - Vien KHHS4000______30001000Collection time: Thu May 29 10:15:58 20032000Wavenumbers (cm-1)_______ sW H > 0H- p) 2 o 'd H-N11VMoooootooooou>ooooooooƯ1ooooa\QioooooCDoU1oƯ1Ch••Ư1tooUJootSJ00Chfthr0a►7»1■*—1uoi>H- s(D 1£ỜMc HJ uCO 0 U)JH- 0) tNUJb•i5 rr0 Ơ> ookQs(DtoooNJo1—1 tò UlCDU)0) h-1(Dp)ft0H ica n63(4 . u / 2m iru : Ivi - U i r j z j . uTV2m/ zabund.m /zabund.50.15268761.1556651.15140762 . 1528652.1572763 . 1596653.15233164 . 1533554.25138365 . 15207855.15837466 . 1558356.25281767 . 15246257.25906368 . 151822- 58.25102369.20423170 . 101953659.. 1548471 . 101090460.151439S c a n 63 ( 4 . 0 7 2 m i n ) : M- D I P 3 2 3 . DTV2m/ z72 . 1073 . 1074 . 1075 . 1076 . 1077 . 1078 . 107 9 . 1080 . 1081 . 1082 . 10abund.110722747161260267646761090207790429225719m /z83 . 0084 . 1085 . 0086 . 0087 . 0088 . 108 9 . 1090 . 1091 . 1092 . 1093 . 10abund.6761652014536011937894699160948922738011872m/ zabund.m/ zabund.1993105.0094.10232868195.101741106.10107.10143896.1020331918 •97.102410108.10139598.101386109.10110.0099.10109395918221 1 1 .10100.00408112.102286101.101803102.102081113.1035911018103.001374114.003477115.10104.003141S c a n 63 ( 4 . 0 7 2 m i n ) : M- D I P 3 2 3 . DTV2m/ z1 1 6 . 001 1 7 . 00118.001 1 9 . 00120.10121.00122.00123.10124.101 2 5 . 10126.00abund.1611233022491366974231302114113779510261119m/ z127.001 2 8 . 00129.101 3 0 . 001 3 1 . 001 3 2 . 00133.10134.10135.10136.10137.10abund.28832875437623911173210511351661987586819m/ zabund.m/zabund.45881 5 0 . 00138.107362412151.00139.0019774158152.00140.0019112153153.00141.1013962784154.00142.009121691143.001840155.001180156.00144.1013651154157.10145.10688650146.108451 5 8 . 104841 5 9 . 00147.108002811 6 0 . 10149.0031824S c a n 63 ( 4 . 0 7 2 m i n ) : M- D I P 3 2 3 . DTV2m/ z1 6 1 . 00162.00162.95163.95164.95165.95166.95167.951 6 9 . 05169.95171.05abund.37284710831178271329001840850131572940900m /z172.05172.95174.05174.95175.95176.95177.95178.95179.95180.95'181 . 95abund.4772462594431406151540662574719339443172abund.m /zm/zabund.7002183.051655193.953526184.05853195.053410196.05185.0512861655197.05185.95472198.05575187.05360791199.05187.95180243200.15189.05651383201.05189.951614202.05655190.9541711057202.95192.0543955812203.95192.953870S c a n 63 ( 4 . 0 7 2 m i n ) : M - D I P 3 2 3 . DTV2m/ z205.05205.952 0 7 . 05208.05209.05210.05211.05212.05213.05214.05215.05abund.3291613133352819278612506063241068287522m/ z2 1 6 . 05217.05218.05219.052 2 0 . 052 2 1 . 052 2 2 . 052 2 3 . 052 2 4 . 052 2 5 . 052 2 6 . 05abund.1265416357454314467250462082843125731200214 m/zabund.m/ zabund.227.154362 3 8 . 056002 2 8 . 15633239.15387229.156322 4 0 . 151132 3 0 . 051754241.154972 3 1 . 05242.151266495452232.0537172 4 3 . 1510882 4 4 . 0533362 3 3 . 0537442 4 5 . 058452 3 4 . 0535122 4 6 . 059812 3 5 . 0511172 4 7 . 0517902 3 6 . 0511792 4 8 . 051990; 237.05S c a n 63 (4 . 0 7 2 m i n ) : M- D I P 3 2 3 . DTV2m/z273.10274.10275.10276.102 7 7 . 10278.102 7 9 . 10280.10281.20284 .20285.20abund., 31530013057363168222779691291361290101.m/ z287.30289.10290.302 9 1 . 10292.10293.10295.00296.20301 .203 0 5 . 103 0 6 . 10abund.1213141741815453 .197243142229569033480m/ z2 4 9 . 05250.05251.05252.15253.15254.05255.15256.15257.20257.90259.10abund.2133169846459042161143291562568193598m /z260.10261.00262.002 6 3 . 10264.00265.10266.10267.00269.102 7 1 . 10272.20abund.5371897180962791420577128126149170102m/ z307.10308.10309.10311.10321.103 2 2 . 10323 . 203 2 6 . 10342 . 203 5 2 . 15353 . 25abund.73031072341128655223138140111373287m /z368.25386.35abund.191299 t ,■ĩTíP"—■)/ ,—LPon.1 . c| 5 727c Õ T0. 98 8“. ? 79“i . t 043* 6283. 6043.1843.161u>. 0 45Lnon^z °4.598\I—1-------cn3.069h-41b /3. 6534.2/04 .2614 . 2464 .2374 .2214 .2173. 94 8. 750^°ocnooV.Bt-1cn s to inDOơ) D ’-q M t\303 ă1TJnooCDCOwcn Ho 3o vQh-* T5CJ 0)o OJ 11oo M Qjo 3U) n o CPi Ncn T5 'TDz IrG II—* o Io1—11—‘IIIIIliIInƠ5 ƠD H a D 50 > *Ms1-* w Mẵ a lO 1 COƯ)D DupoPItnX>Ư1zo2ocnt-*l-»GJt-h1o U) VDoIIo •o lio o IIoIIh-1u>oo CDoCUD(_n P>H-*VoDo u> ƯI U) U) K)VO-Jo o cn-*oMCOo o Chh1oo o o CD-J (——1OJ UDCTi oo o o o ►w c cƯ) ECDCCD ỮỈ ƯÌ n> N Nn CD(V oo ow H D *1G JO z H- tu K)tH o w 3 rtno 03 H (DfD 150 5c po 1o o G>cn 2oÙ3c(_nHw3H§rrHoK)DcI-1orto TJ1U) Qjo Ch H- Qj I—D cn M 3 < -J o ^cn•cn 0jo cn^Q cWH ww o1—• o cn OJ 3ro LJ o o o fl)rtCDMo at" CO D SHo ZMM2 0 fl>DortDữirt0J3.1053.0822.8172.7932.6272. 6102.5982.5912.5832.4192.3902.3772.3702.3482.3241,8 941 .8651.7351 .6971. 6851. 6731.3201.3061.2921.2550.9360. 9210. 9060.8961-3 CỰ00 "J 3ocn cr> n>3 1- 00 r fXN35:NWDIIIIII>v iiỳó IIơ) T>2r t—> aÓ (—*oh-*K*CD IIiiIIóofDCĂwHDi£loưioo1aẵCO Dpo >o o M S COD a:1—1 -9 0CO H2 H- ÍD00 o ã ão co 3 rrtr*tufD ã)X>2233(—>N)cnMt-*tr*£D> HiK> 1—» 1 00K)K) ơ) CJ 00rtN II(—» IIo l-» o oo h-1o o bc cr> IIII£ a a a cIIX00 w á)IINa>IIoiiroa a D H a—»t— 1PĨ n—»k> 1opiH-*coMooocnIIiiIIIIIIIIIIII-JI—* 1 1—*IIIIoooMoooot\>ooooU)ooooooooooooooU)w co ư)(D (D Cữo o osc1—’oo111— t—U)Ư1Mcr.oo ChK) oo 0)o oco K DC(D N NoMcnưaC-nT3cnv£ìU) COơ\ o»^1>o►Q"ơ P 3 2 orỏ X > co TJ 2 nn 2 m 1-5Z oocDHwHrtHoŨ)rtDJ130»1\ ) 3orro T)H- 0j 1—* OJ 0J< 00 ocn Qjc uno o o U) 3t—1o o ort(T)(DDft&»3rortH (D(—1K) k 3 (/>đặc điểm thực vật: Đã lấy mẫu, quan sát đặc điểm thực vật của cây nghiên cứu và Giáo sư Vũ Văn Chuyên đã định tên khoa học mẫu chúng tôi nghiên cứu là: Gelsemium elegans (Benth.), Loganiaceae Đã xác định đặc điểm vi phẫu rễ, thân, lá và đặc điểm. ..PHẦN III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 3.1.1 Đặc điểm hình thái cây lá ngón (Xem phụ lục hình 3.1; 3.2; 3.3; 3.4) Cây bụi leo mọc ở ven rừng, thân nhỏ hoặc vừa không có lông, lá mọc đối, hình trứng thuôn dài hay hơi hình mác, đầu nhọn phía cuống lá nhọn, mép nguyên, bóng, nhẵn, dài 10cm, rộng 5cm, mặt trên của lá mầu sẫm, mặt dưới mầu nhạt hơn, gân lá hình lông... bột rễ, thân, lá của cây lá ngón nghiên cứu góp phần nhận biết dược liệu * Về thành phần hoá học: • Bằng các phản ứng hoá học đã xác định trong ba bộ phận rễ, thân, lá của cây lá ngón có alcaloid, saponin, tanin, acid hữu cơ, đường khử, sterol • Bằng sắc kí lớp mỏng và sử dụng hệ dung môi thích hợp đã phát hiện được 8 vết alcaloid trong rễ, 7 vết alcaloid trong thân và 4 vết alcaloid trong lá • Đã định... cuống lá dài lcm Hoa nhỏ mọc thành xim ở đầu cành hay ở kẽ lá, bao hoa mầu phớt tím, cánh hoa mầu vàng Mẫu chúng tôi nghiên cứu đã được GS Vũ Văn Chuyên định tên khoa học là: Gelsemỉum elegans (Benth.), Loganiaceae 3.1.2 Đặc điểm cấu tạo giải phẫu của lá, thân và rễ * Cấu tạo giải phẫu lá (Xem phụ lục hình 3.5) Mặt cắt ngang có dạng đối xứng hai bên, lá được chia làm hai phần chính, phiến lá và gân lá. .. Biên bản định tên cây lá ngón 2 Ảnh cây lá ngón Hình 3.1: Mẫu cây tươi có hoa Hình 3.2: Mẫu cây tươi có hoa Hình 3.3: Ảnh thân cây Hình 3.4: Ảnh rễ cây 3 Ảnh vi phẫu lá, thân và bột rễ, thân, lá Hình 3.5: Ảnh vi phẫu lá Hình 3.6: Ảnh vi phẫu thân Hình 3.7: Ảnh bột rễ, thân, lá 4 Ảnh vi phẫu rễ, sắc ký đồ và tinh thể V2 Hình 3.8: Ảnh vi phẫu rễ Hình 3.9: Ảnh sắc ký đồ của rễ, thân, lá Hình 3.10: Ảnh... riêng lẻ hay thành từng đám hai đến ba hạt (8 ) - Có các mảnh mô mềm (2) - Các mảnh bần (9) Nhận xét: Các bộ phận của cây lá ngón có một số đặc điểm vi học đặc trưng - Giải phẫu lá: lớp tế bào biểu bì ở phần gân trên của lá có hình trứng, xếp đứng, kích thước lớn hơn các tế bào biểu bì phiến lá, libe bao quanh bó gỗ 12 - Bột lá có các mạch xoắn, các tế bào ở phần phiến lá có chất tế bào tạo thành khối... Chi,( 1997), Từ điển cây thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, tr 644 -645 5 Vũ Văn Chuyên, Tóm tắt họ thực vật, Nhà xuất bản Y học 6 Nguyễn Văn Đàn, Nguyễn Viết Tựu,(1985) Phương pháp nghiên cứu hoá học cây thuốc, Nhà xuất bản Y học, tr 376 —398 7 Phạm Hoàng Hộ, Cây cỏ Việt Nam tập 2, Nhà xuất bán Y học, tr 288289 8 Trần Công Khánh,(1981) Thực tập giải phẫu và hình thái thực vật, Nhà xuất bản KHKT... Xếp thành từng bó, bên ngoài libe không có các sợi thành dầy hoá gỗ như ở phần thân cây - Gỗ (4) Có các mạch gỗ lớn, xếp trong mô gỗ bị các tia một thành dầy hoá gỗ chia ra từng bó vào gần đến tâm Mô gỗ phía trong liên tục và không có mô mềm ruột 11 3.1.3 Mô tả đặc điểm bột rễ, thân, lá của cây lá ngón (Xem phụ lục hình 3.7) * Bột lá: mầu xanh lục, mùi hắc Soi kính hiển vi nhận thấy có các đặc điểm. .. mầu từ vàng nhạt đến vàng đậm So sánh thấy hệ II tách tốt vì số lượng các vết xuất hiện nhiều và khoảng cách các vết ở xa nhau hơn Kết quả sắc ký khai triển với hệ dung môi II được trình bày ở hình 3.9 và ở bảng 3 2 Bảng 3.2 STT Kết quả định tính alcaloid bằng SKLM Màu VI V2 V3 V4 V5 V6 Vàng nhạt Vàng đậm Vàng Vàng nhạt Vàng Vàng V7 Vàng đậm V8 Vàng Lá Thân Rễ Màu Rf 0,045 Vàng nhạt 0,270 Vàng đậm... 2 phút, để yên cho tách thành 2 lớp Loại phần nước, cho vào phần ether 5ml dung dịch NaOH 10% Lắc thấy lớp ether có mầu vàng nhạt Thêm vào đó dung dịch H2 0 2 Lắc đều, đun cách thuỷ vài phút dung dịch trở nên không mầu Phản ứng âm tính Nhận xét: trong rễ, thân, lá của cây lá ngón không có antranoid - Định tính saponin: + Quan sát hiện tượng tạo bọt: Cho 5 giọt dịch chiết cồn vào ống nghiệm có 5ml nước, ... Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hoá học ngón Gelsemium elegans Benth., Loganiaceae ” với nội dung sau: Về mặt thực vật: - Mô tả đặc điểm thực vật, định tên khoa học mẫu nghiên cứu - Xác... pháp nghiên cứu PHẦN THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 10 3.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật 10 3.1.1 Đặc điểm hình thái ngón 10 3.1.2 Đặc điểm cấu tạo giải phẫu rễ, thân, l 3.1.3 Đặc. .. Về đặc điểm thực vật: Đã lấy mẫu, quan sát đặc điểm thực vật nghiên cứu Giáo sư Vũ Văn Chuyên định tên khoa học mẫu nghiên cứu là: Gelsemium elegans (Benth.), Loganiaceae Đã xác định đặc điểm
- Xem thêm -

Xem thêm: Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây lá ngón, Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây lá ngón, Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây lá ngón

Từ khóa liên quan

Gợi ý tài liệu liên quan cho bạn