9/11/2013 THỤ TINH NHÂN TẠO CHO GIA SÚC • Tù trưởng Arab- Lấy trộm tinh dịch để phối cho ngựa  Thời kỳ sơ khai: I.I. Ivanov (Nga), L. Spallanzani (Italia) sau Bibbiena -> thí nghiệm tằm để TTNT. Ivanov (Russia) 1900 - - Đã phát triển phương pháp 1898 Heape (Anh) phát chu kỳ sinh dục gia súc làm tảng khoa học cho TTNT  1914, Amantea (Anh) -> Âm đạo giả NỘI DUNG: - Mục đích TTNT, Huấn luyện đực giống, khai thác tinh dịch, kiểm tra chất lượng tinh dịch… - Môi trường pha loãng, bảoVũtồn, dẫnHuế tinh cho g.súc Giảng viên: Phan Hải -ĐH  Ivanov (1917) Milovanov (1934) -> Môi trường pha loãng tinh dịch (chất điện giải NaCl, NaCl) Phillips (1940), Salisbury (1943) cải tiến môi trường pha loãng bảo tồn với lòng đỏ trứng gà, Na-Citrate, kháng sinh Lịch sử Việt nam  Bắt đầu từ 1957 Học viện Nông - Lâm, trường ĐHNN  1958, TTNT tiến hành cho lợn An Khánh - Hà Tây  1960, TTNT cho bò, 1961 TTNT cho trâu, 1964 cho ngựa  Những năm 70, sở đông lạnh tinh dịch bò dạng viên tiến hành trại Moncada - Ba Vì - Hà Tây  1986 TTNT cho gà, 1990 cho ngỗng, 1991 lai xa ngan vịt, 1995 cho dê, 1997 cho chó nghiệp vụ.  Phát triển vốn gen – nâng cao khả truyền giống đực  Kiểm soát dịch bệnh (tránh lấy lan qua tiếp xúc…)  Thuận tiện vận chuyển tinh dịch Khắc phục khó khăn chênh lệch lớn tầm vóc giao phối trực tiếp, đực giống bị thương…  Đáp ứng việc gây động dục đồng loạt  Kéo dài thời gian sử dụng đực giống  Có hiệu kinh tế 9/11/2013 NỘI DUNG Cần phát động dục tốt Xử lý, bảo quản tinh dịch Cần có cán kỹ thuật cao Thời gian lâu + Gieo tinh không thời gian,thời điểm Cần vốn ban đầu cao +Chất lượng tinh trùng bảo quản Có thể lây lan bệnh tật + Dẫn tinh sai thao tác, không liều Kỹ thuật huấn luyện đực giống Kỹ thuật khai thác tinh dịch Kỹ thuật kiểm tra chất lương tinh dịch Môi trường pha loãng tinh dịch Kỹ thuật pha loãng, đóng liều, bảo quản tinh dịch vận chuyển  Kỹ thuật dẫn tinh cho gia súc      * Nguyên tắc huấn luyện: Thành lập cho gia súc đực phản xạ có điều kiện nhảy giá thường xuyên củng cố phản xạ này.      Tuổi huấn luyện Chế độ chăm sóc nuôi dưỡng Lịch huấn luyện Người huấn luyện Phòng giá huấn luyện  Kích thích tính dục  Cưỡng kích thích  Tham quan  Dùng lợn nái -> Kết hợp sử dụng mồi, giá nhảy 9/11/2013 CÁC YÊU CẦU TRONG KHAI THÁC TINH DỊCH  Phải khai thác toàn tinh dịch đực lần khai thác 1. Bằng điện (Electro-ejaculation)  Đảm bảo phẩm chất tinh dịch  Hữu dụng đực giống không nhay + Dụng cụ khai thác tuyệt đối vô trùng  Có thể lẫn nước tiểu + Không khai thác tinh dịch gia súc ốm, bị bệnh  Chất lượng không thực tốt + Phải tắm rửa đực trước lần khai thác tinh dịch  Dùng cho cừu bò thịt + Vệ sinh giá nhảy, phòng lấy tinh 2. Phương pháp Massage + Nhân viên lấy tinh dịch phải cố định không mắc bệnh truyền nhiễm  Kích thích qua trực tràng; túi tinh, tuyến sinh dục  Không gây ảnh hưởng thô bạo đến quan sinh đực  Kích thích dương vật  Dụng cụ an toàn cho quan sinh dục gia súc, dễ thao tác => Khó thực hơn, có hiệu 10 3. Âm đạo giả (Artificial Vagina) • Nhiệt độ • Áp suất XEM PHIM VỀ CÁC KỸ THUẬT KHAI THÁC TINH DỊCH • Ma sát (bôi trơn) => Cho kết tốt 11 12 9/11/2013 Màu sắc, mùi, độ vẩn Thể tích tinh dịch (V) (Lượng tinh dịch xuất lần khai thác) Nồng độ tinh trùng (C) Các tiêu đánh giá thường xuyên (Số lượng tinh trùng /1ml tinh nguyên) Sức hoạt động (A) (TL phần % t.trùng vận động tiến thẳng vi trường quan sát) Chỉ tiêu khác: Độ pH tinh dịch Sức kháng tinh trùng (R) (Sức chịu đựng tinh trùng dd NaCl 1%) TL kỳ hình (K%) Các tiêu đánh giá định kỳ Kiểm tra thể acrosome (Ac%) MỘT SỐ CHỈ TIÊU ĐÁNH GIÁ TINH DỊCH CHÍNH  Màu sắc, mùi, độ vẩn Mức độ biểu thị Chỉ số tuyệt đối sức sống t.trùng thể (Sa) Các tiêu khác: Sức kháng thẩm thấu t.trùng (Ro), độ nhớt tỷ trọng Mức độ vẩn Nồng độ tinh trùng Rất nhiều +++++ Cao Nhiều ++++ Tỉ lệ sống (Sg%) tỉ lệ chết (Ch%) Chỉ tiêu tổng hợp VAC (Tổng số t.trùng có khả thụ thai lần khai thác) +++ ++ + Trung bình Ít Loãng Cao Trung bình Thấp Thấp Hệ số giảm hoạt lực t.trùng (Ghh) 9/11/2013 Thể tích tinh dịch (V) Thể tích tinh dịch (V) 17 Nồng độ tinh dịch (C) Nồng độ tinh dịch (C) • Phương pháp dùng buồng đếm  Phương pháp dùng ống Karas Bảng số Ống Karas 95 90 85 80 75 70 65 60 55 50 45 40 35 30 25 20 Nồng độ tinh trùng (106/ml) qua mức pha loãng . 1/10 2/1 3/1 4/10 5/10 135 67,5 45.0 33,7 27,0 150 75,5 50,0 37,5 30,0 165 82,5 55,0 41,2 33,8 180 90,0 60,0 45,0 36,0 195 97,5 65,0 48,7 39,0 210 105,0 70,0 52,5 42,0 225 112,5 75.0 56,2 45,0 245 122,5 81 ,6 61,2 49,0 265 132,5 88,3 66,2 53,0 295 147,5 98,3 73,7 59,0 335 167,5 111,6 83,7 67,0 375 187,5 125,0 93,7 75,0 425 212,5 141.6 106,2 85,0 485 242,5 161,6 121,2 97,0 555 277,5 85,0 130,0 111,0 635 317,5 211,6 158,2 127,0 Các nhân tố ảnh hưởng: - Loài - Giống - Tuổi - Kỹ thuật khai thác - Thời tiết, mùa vụ - Điều kiện chăm sóc, 18 nuôi dưỡng C = n. 106 19 20 9/11/2013 Hoạt lực tinh trùng (A) Sức kháng (R)  Phương pháp lọ -> lợn nội - Tinh trùng cần phải kiểm tra A sau lấy khỏi thể gia súc sau lấy khỏi nơi bảo tồn. - Khi kiểm tra phải nhiệt độ 40-410C. - Độ chênh lệch cho phép 0.1 lần kiểm tra. - Sức hoạt động tinh trùng số loài gia súc sau khai thác xong phải đạt: dê, cừu A ≥ 0.9, trâu bò A ≥ 0.8, lợn A ≥ 0.7 21 R = ro + r.n = 1000 + 100 x n 22 Phương pháp lọ -> lợn ngoại, trâu bò… Tỉ lệ tinh trùng kỳ hình R = ro + rn = 2000 + 200 xn 23 24 9/11/2013 Tiêu chuẩn tinh dịch số loài vật nuôi Việt Nam 26 25 Yêu cầu môi trường pha loãng Mục đích:  Tăng thể tích tinh dịch  Kéo dài thời gian sống tinh trùng thể gia súc  Giúp cho trình vận chuyển Ví dụ: bò, lượng tinh lần xuất tinh 5ml, pha loãng 10 lần phối cho 10 bò cái. Ở lợn nội: -> 250ml, pha loãng lần phối cho 30 lợn nái 27 Có điều kiện lý, hóa, sinh thỏa mãn tối đa điều kiện sống tinh trùng:  Áp lực thẩm thấu  pH  Có chất điện giải không điện giải phù hợp  Đặc điểm vật lý phù hợp: tỷ trọng, độ nhớt…  Phải có tính kinh tế thực tiễn 28 9/11/2013 Chất liệu tạo môi trường Chất liệu tạo môi trường  Chất cung cấp lượng (không điện giải): loại đường  Chất đệm (chất điện giải): Các muối kim loại kiềm yếu Na3C6H5O7, NaHCO3, lòng đỏ trứng gà (NaH2PO4/Na2HPO4, H.Protein/Na.Protein)  Chất chống choáng lạnh ("shock" nhiệt độ): Glyxerin, lòng đỏ trứng (leucitin)  Các chất chống khuẩn: penicillin, streptomycin, tetracycline  Các chất rửa môi trường: Do tinh dịch có kim loại nặng đa hóa trị Ca2+, Fe2+, Al3+ . -> bổ sung TrilonB (EDTA): Na2H2Y → 2Na+ + H2Y2Ca2+ + H2Y2- → CaH2Y  Các chất sinh học: Men Muxinaza, Hyaluronidaza, oxytocin, prostaglandin… 29 Các loại môi trường Môi trường pha loãng tinh dịch lợn a. Môi trường đơn giản: Môi trường sữa bò tươi: Lấy sữa bò khỏe mạnh, vắt, hấp cách thủy 20-30’ -> để nguội xuống 50 - 600C. Dùng vải gấp 5-6 lần lọc cho hết phần bơ lên -> Để nguội xuống 35-400C, cho tetracycline vào (0,05g/1 lít sữa lọc), khuấy cho lọc lại lần bảo quản để dùng Dùng ngày 31 30 a. Môi trường đơn giản (tt)  Dùng 250 ml nước cất 35-40oC pha 100g sữa khuấy cho tan -> cho thêm 750 ml nước cất để đủ 1000ml, dùng đũa thủy tinh khuấy cho đều. Hấp cách thủy vòng 20- 30’ -> để nguội xuống 350C, cho 0,05g tetracycline vào khuấy đều, lọc qua nhiều lớp vải màn.  Bảo quản nhiệt độ 4-5oC để sử dụng  Dùng ngày 32 9/11/2013 b. Môi trường tổng hợp Một số môi trường pha loãng cho lợn Pha glucose vào nước cất, đun cách thủy sôi 15-20’, để nguội xuống 60oC. Cho thêm Natri citrate, natri bicarbonate, kali clorua, trilon B vào, dùng đũa thủy tinh khuấy cho đều. Để nguội xuống 35oC, cho thêm ammonium sulfate, lòng đỏ trứng gà, kháng sinh vào khuấy cho tan đều, lọc qua vải (hoặc giấy lọc). Bảo quản nhiệt độ lạnh để sử dụng. 33 34 Bội số (tỉ lệ) pha loãng Một số môi trường pha loãng tinh dịch bò  Căn vào phẩm chất tinh dịch để có bội số pha lõang thích hợp  Công thức pha HEO: F=Q.V  Trong : Q - bội số pha loãng; A - sức họat động tinh trùng; C - nồng độ tinh trùng (109) D - dung tích liều dẫn; a - tổng số tinh trùng tiến thẳng liều tinh (109); F - lượng môi trường cần pha (ml); V - thể tích tinh dịch (ml)  Ví dụ: Khai thác đực giống ta có: V = 250ml; A = 0,7; C = 250 triệu; Yêu cầu liều tinh sau : D = 30ml; a = 600 triệu. Xác định thể tích môi trường cần pha?  Q= 35  F = 7,75 . 250 = 1937.5 ml 36 9/11/2013 Kỹ thuật pha lõang tinh dịch Đối với trâu, bò  Yêu cầu số lượng tinh trùng cần thiết cho liều dẫn  tinh lỏng là: 20-25 triệu (pha lãng 5-50 lần);  tinh đông lạnh là: 360-400 triệu (pha loãng 2-5 lần) Ở Moncada sx tinh cọng rạ cỡ 0.25ml, số tính trùng khoảng 25 triệu 37 Kỹ thuật pha Nguyên tắc:  Tinh dịch lấy khỏi thể gia súc vòng từ – 10’ cần pha lõang  Nhiệt độ môi trường phải tương đương nhiệt độ tinh dịch  Đổ môi trường từ từ vào tinh dịch (không làm ngược lại) 38 Kỹ thuật đóng liều  Tinh dịch sau lấy khỏi thể gia súc, cần tiến hành kiểm tra tiêu phẩm chất  Tính tóan bội số pha lõang, lượng môi trường cần pha  Đo nhiệt độ tinh dịch nhiệt độ môi trường, có chênh lệch ta nâng nhiệt độ môi trường lên cho nhiệt độ tinh dịch (không làm ngược lại).  Đổ từ từ môi trường vào tinh dịch, đổ theo thành bình để môi trường từ từ pha lõang vào tinh dịch, đổ hết dùng đũa thủy tinh khuấy nhẹ cho đều.  Kiểm tra lại sức họat động tinh trùng sau pha, tương đương với trước pha đạt yêu cầu, yếu cần xem lại kỹ thuật pha. 39  Lọ đóng tinh phải rửa sạch, sấy khô (tốt lọ màu xanh họăc da cam). Sau rót từ từ tinh dịch vào lọ, rót cho đầy, cho đóng nút lại không không khí bên liều tinh. Dùng nút bấc nút lại, gắn parafin bên ngòai, bảo quản để sử dụng.  Hoặc dùng máy tự động 40 10 9/11/2013 Bảo tồn đông lạnh Bảo tồn tinh dịch  Bảo tồn nhiệt độ không khí : dùng vải đen nhúng nước, vắt cho bớt nước bọc lọ tinh, để vào nơi kín tối. Phương pháp bảo quản sử dụng ngày.  Bảo quản nhiệt độ lạnh : tùy theo tinh dịch loài loại môi trường mà ta chọn nhiệt độ bảo quản khác nhau. + Đối với tinh dịch lợn, tùy theo môi trường mà ta chọn nhiệt độ bảo quản phù hợp, thường khoảng 10 - 200C. + Đối với tinh dịch trâu, bò bảo quản lạnh 41 thường nhiệt độ - 50C. Nguyên tắc bảo tồn:  Dựa nguyên tắc sống tiềm sinh động vật (ngủ đông) để bảo tồn + Tạo pH toan tính phù hợp với điều kiện sống tinh trùng.  Cản trở cung cấp O2 để hạn chế trình trao đổi chất tinh trùng.  Dồn tinh trùng lại trạng thái dày đặc (ly tâm, loại bỏ tinh thanh) hạ nhiệt độ xuống thấp. 42 QUI TRÌNH LÀM ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH  Môi trường đông lạnh tinh dịch bò - nước cất 100ml - đường lactose saccarose 11,5g - Lòng đỏ trứng gà 20ml - Glycerin 5,0ml 43 44 11 9/11/2013 45 46 Thời điểm dẫn tinh Bò - 12 h sau phát chịu đực (qui tắc sáng-chiều) Heo - 24 36 h sau bắt đầu động dục (12 24 h với nái tơ) Cừu -12 - 18 h sau bắt đầu động dục Insemination Protocol •Trực tràng/Âm đạo •Âm đạo 47 48 12 9/11/2013 DẪN TINH CHO BÒ Gloves (Arms Length) Lube Pipette with syringe Semen Straw 50 49 DẪN TINH CHO HEO •XEM PHIM 51 52 13 9/11/2013 Swine AI Process Swine AI Process 53 54 55 56 14 9/11/2013 Factors Effecting Conception Rate Time of insemination # of sperm inseminated Fertility of female (reproductive organs…) Skill of inseminator 58 57 CÂU HỎI ÔN TẬP 1. Lợi ích bất lợi TTNT cho gia súc? 2. Nguyên tắc điều kiện để huấn luyện tốt đực giống? 3. Các yêu cầu kỹ thuật khai thác tinh dịch gia súc? 4. Kỹ thuật lấy tinh lợn tay? 5. Phương pháp lấy tinh bò Âm đạo giả (cấu tạo cách lắp ráp ÂĐG, kỹ thuật lấy tinh)? 6. Các đặc tính tinh dịch? 7. Đặc điểm trao đổi chất tinh trùng? 8. Đặc điểm vận động tinh trùng? 59 9. Các đặc tính tinh trùng? 10. Các yếu tố ảnh hưởng đến sức sống tinh trùng? 11. Trình bày yếu tố ảnh hưởng đến thể tích tinh dịch (V)? 12. Độ vẩn tinh dịch? 13. Trình bày phương pháp đánh giá sức hoạt động (A) kính hiển vi? 14. Trình bày phương pháp kiểm tra nồng độ tinh trùng (C) lợn buồng đếm? 15. Trình bày phương pháp kiểm tra sức kháng (R) tinh trùng lợn ngoại? 16. Phương pháp đánh giá tỉ lệ sống tinh trùng? 60 15 9/11/2013 17. Trình bày phương pháp đánh giá tỉ lệ tinh trùng kì hình (K)? 18. Các chất liệu tạo môi trường pha loãng tinh dịch? 19. Cách pha chế môi trường tổng hợp? 20. Cho ví dụ tính toán thể tích môi trường pha loãng cho tinh dịch lợn? 21. Kỹ thuật pha loãng tinh dịch? 22. Các phương pháp bảo tồn tinh dịch? 23. Thời điểm kĩ thuật dẫn tinh cho lợn? 61 16 [...]... khai thác tinh dịch gia súc? 4 Kỹ thuật lấy tinh lợn bằng tay? 5 Phương pháp lấy tinh bò bằng Âm đạo giả (cấu tạo và cách lắp ráp ÂĐG, kỹ thuật lấy tinh) ? 6 Các đặc tính của tinh dịch? 7 Đặc điểm về trao đổi chất của tinh trùng? 8 Đặc điểm vận động của tinh trùng? 59 9 Các đặc tính của tinh trùng? 10 Các yếu tố ảnh hưởng đến sức sống của tinh trùng? 11 Trình bày các yếu tố ảnh hưởng đến thể tích tinh dịch... khoảng 10 - 200C + Đối với tinh dịch trâu, bò khi bảo quản lạnh 41 thường ở nhiệt độ 0 - 50C Nguyên tắc bảo tồn:  Dựa trên nguyên tắc sống tiềm sinh của động vật (ngủ đông) để bảo tồn + Tạo pH toan tính phù hợp với điều kiện sống của tinh trùng  Cản trở cung cấp O2 để hạn chế quá trình trao đổi chất của tinh trùng  Dồn tinh trùng lại trạng thái dày đặc (ly tâm, loại bỏ tinh thanh) và hạ nhiệt độ... đánh giá tỉ lệ tinh trùng kì hình (K)? 18 Các chất liệu cơ bản tạo môi trường pha loãng tinh dịch? 19 Cách pha chế môi trường tổng hợp? 20 Cho ví dụ và tính toán thể tích môi trường pha loãng cho tinh dịch lợn? 21 Kỹ thuật pha loãng tinh dịch? 22 Các phương pháp bảo tồn tinh dịch? 23 Thời điểm và kĩ thuật dẫn tinh cho lợn? 61 16 ... 9/11/2013 DẪN TINH CHO BÒ Gloves (Arms Length) Lube Pipette with syringe Semen Straw 50 49 DẪN TINH CHO HEO •XEM PHIM 51 52 13 9/11/2013 Swine AI Process Swine AI Process 53 54 55 56 14 9/11/2013 Factors Effecting Conception Rate Time of insemination # of sperm inseminated Fertility of female (reproductive organs…) Skill of inseminator 58 57 CÂU HỎI ÔN TẬP 1 Lợi ích và bất lợi của TTNT cho gia súc? 2... của tinh dịch? 13 Trình bày phương pháp đánh giá sức hoạt động (A) bằng kính hiển vi? 14 Trình bày phương pháp kiểm tra nồng độ tinh trùng (C) của lợn bằng buồng đếm? 15 Trình bày phương pháp kiểm tra sức kháng (R) của tinh trùng lợn ngoại? 16 Phương pháp đánh giá tỉ lệ sống của tinh trùng? 60 15 9/11/2013 17 Trình bày phương pháp đánh giá tỉ lệ tinh trùng kì hình (K)? 18 Các chất liệu cơ bản tạo môi...9/11/2013 Bảo tồn đông lạnh Bảo tồn tinh dịch  Bảo tồn ở nhiệt độ không khí : dùng vải đen nhúng nước, vắt cho bớt nước bọc lọ tinh, để vào nơi kín và tối Phương pháp này chỉ bảo quản và sử dụng trong ngày  Bảo quản ở nhiệt độ lạnh : tùy theo tinh dịch của từng loài và từng loại môi trường mà ta chọn nhiệt độ bảo quản khác nhau + Đối với tinh dịch lợn, tùy theo môi trường mà ta chọn nhiệt... trùng lại trạng thái dày đặc (ly tâm, loại bỏ tinh thanh) và hạ nhiệt độ xuống thấp 42 QUI TRÌNH LÀM ĐÔNG LẠNH TINH DỊCH  Môi trường đông lạnh tinh dịch bò - nước cất 100ml - đường lactose hoặc saccarose 11,5g - Lòng đỏ trứng gà 20ml - Glycerin 5,0ml 43 44 11 9/11/2013 45 46 Thời điểm dẫn tinh Bò - 12 h sau khi phát hiện chịu đực (qui tắc sáng-chiều) Heo - 24 và 36 h sau khi bắt đầu động dục (12 . 9/11/2013 1 Giảng viên: Phan Vũ Hải - H Huế 1 THỤ TINH NHÂN TẠO CHO GIA SÚC NỘI DUNG: - Mục đích của TTNT, Huấn luyện đực giống, khai thác tinh dịch, kiểm tra chất lượng tinh dịch… - Môi trường. Thấp 9/11/2013 5 17 Thể tích tinh dịch (V) Các nhân tố ảnh hưởng: - Loài - Giống - Tuổi - Kỹ thuật khai thác - Thời tiết, mùa vụ - Điều kiện chăm sóc, nuôi dưỡng 18 Thể tích tinh dịch (V) Nồng độ tinh dịch (C) . bảo tồn. - Khi kiểm tra phải ở nhiệt độ 4 0-4 1 0 C. - Độ chênh lệch cho phép là 0.1 giữa các lần kiểm tra. - Sức hoạt động của tinh trùng một số loài gia súc sau khi khai thác xong phải đạt: