BỘ Y TÊ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THANH TÙNG ĐỊNH LƯỢNG ARTESƯNAT KHI CÓ MẬT DIHYDRO ARTEMISININ VÀ (HOẶC) ACIDSƯCCINIC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆUNẢNG CAO ( HPLC ) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP D ợ c s ĩ ĐẠI HỌC KHOÁ 1999-2004 Người hướng dẫn: PGS - TS. TRẦN ĐỨC HẬU Th.s. VÕ NHỊ HÀ Nơi thực hiện: PHÒNG THÍ NGHIỆM BỘ MÔN HOÁ DƯỢC - TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HANỘI Thời gian thực hiện: 9/2003 - 5/2004 *í . 'ĩ' ì Ií* ị n ì ị ~Vị ị' \ Lt-U i HÀ NỘI THÁNG - 2004 ĨHl íftj LỜI CẢM ƠN Trước hết xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS - TS Trần Đức Hậu, Th.s. Vố Nhị Hà hai người thầy trực tiếp hướng dẫn, dành nhiều công sức giúp đỡ truyền đạt kinh nghiệm quý báu suốt trình nghiên cứu hoàn thành khoá luận tốt nghiệp. Tôi xin cảm ơn thầy cô giáo, cán kỹ thuật viên môn Hoá Dược - Trường Đại Học Dược Hà Nội nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện để hoàn thành khoá luận. Trong trình thực khoá luận nhận hướng dẫn, giúp đỡ tận tình thầy cô môn Bào Chế, Phân Tích, Phòng Thí Nghiệm Trung Tâm. Tôi xin chân thành cảm ơn. Cuối cùng, vô cảm ơn gia đình, bạn bè người thân động viên hết lòng giúp đỡ để hoàn thành khoá luận này. Hà Nội, tháng năm 2004 Nguyễn Thanh Tùng MỤC LỤC ĐẶT VẤN Đ Ể PHẦN I: TỔNG Q U A N . 1.1. Tổng quan hao hoa vàng hoạt chất 1.1.1 Cây hao hoa vàng 1.1.2 Thành phần hóa học Thanh hao hoa vàng 1.2 Đại cương artesunat 1.2.1 Công thức . 1.2.2 Phương pháp điều chế .6 1.2.3 Tính chất artesunat . 1.2.4 Cơ chế tác dụng 1.2.5 Dược đông học . 1.2.6 Độc tính 1.2.7 Chế phẩm 10 1.2.8 Chỉ định 10 1.3 Các phương pháp định lượng artesunat nguyên liệu . 11 1.3.1 Phương pháp đo quang phổ hấp thu vùng tử ngoại .11 1.3.2 Phương pháp HPLC với detector u v .11 1.3.3 Phương pháp HPLC với detector khúc xạ k ế 12 1.3.4 Phương pháp HPLC với detector điện hóa 12 1.3.5 Phương pháp đo kiềm môi trường nước 13 1.3.6 Phương pháp đo kiềm môi trường khan 13 1.3.7 Phương pháp đo phổ hấp thụ vùng khả kiến dạng muối hydroxamat sắt . 14 1.3.8 Các phương pháp định lượng khác 14 1.4 Các phương pháp định lượng artesunat viên nén áp dụng nước t a 14 1.4.1 Phương pháp quang phổ .14 1.4.2 Phương pháp đo kiềm môi trường nước . 15 1.5 Nhận xét lựa chọn 15 1.6 Phương pháp HPLC 16 1.6.1 Nguyên tắc 16 1.6.2 Co sở lý thuyết . 17 1.6.3 Nguyên tắc cấu tạo hệ thống máy sắc ký HPLC 17 1.6.4. Các thông số đặc trưng trình sắc ký 19 1.6.4 Pha tĩnh HPLC 21 1.6.5 Pha động HPLC : . 23 1.6.6 Nguyên tắc lựa chọn pha tĩnh pha động 24 1.6.7. Phương pháp định lượng, cách đánh giá pic tính kết HPLC . 25 PHẦN II ĐỐI TƯỢNG - HOÁ CHẤT, THIẾT BỊ - NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 27 2.1 Đối tượng nghiên cứu .27 2.2 Phương tiện, dụng cụ hoá chất . 27 2.3 Nội dung phương pháp nghiên cứu 28 2.3.1 Nghiên cứu, xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng artesunat phương pháp HPLC . 28 2.3.2 Đánh giá phương pháp vừa xây dựng mặt: tính xác, tính tuyến tính, tính đặc biệt trú trọng tới tính đặc hiệu phương pháp 29 2.3.3 Một số công thức tính toán xử lý thống kê kết . 29 PHẦN III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ . 30 3.1 Xây dựng qui trình kỹ thuật để định lượng artesunat phương pháp HPLC . 30 3.1.1 Nguyên tắc lựa chọn điều kiện sắc ký 30 3.1.2 Khảo sát để lựa chọn điều kiện sắc ký . 30 3.1.3 Thử tính thích hợp hệ thống .32 3.2 áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng artesunat nguyên liệu . . 33 3.3 Đánh giá phương pháp 34 3.3.1 Đánh giá tính xác phương pháp . 35 3.3.2 Đánh giá tính tuyến tính phương pháp .35 3.3.3 Đánh giá tính phương pháp .37 3.3.4 Đánh giá tính đặc hiệu phương pháp . 38 3.4 Bàn luận kết . .42 KẾT LUẬN VÀ ĐỂ XUẤT 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO BẢNG CHỮ YIẾT TẮT ART : Artesunat DHA : Dihydro artemisinin HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao NXB : Nhà xuất PA : Tinh khiết phân tích QHS : Quing Hao su TCCS : Tiêu chuẩn sở TCN : Tiêu chuẩn ngành Ư V -V IS : Tử ngoại - khả kiến ĐẶT VẤN ĐỂ * Sốt rét bệnh xã hội, dễ bị lây nhiễm, gây ký sinh trùng sốt rét, ký sinh trùng thuộc chi Plasmodium. Những loài gây bệnh cho người chủ yếu gồm: - Plasmodium íalciparum - Plasmodium malariae - Plasmodium vivax Trong đó, tỷ lệ mắc bệnh Plasmodium falciparum 70%, Plasmodium vivax 20 - 30% Plasmodium malariae chiếm tỷ lệ nhỏ, khoảng - 2%. Do đặc điểm tác nhân truyền bệnh muỗi, bệnh có tính chất dịch tễ quan trọng lan tràn thành dịch không phát ngăn chặn kịp thời. Bệnh phát triển nhiều nước giới, đặc biệt nước nhiệt đới có khí hậu ẩm thấp (nóng, ẩm, mưa nhiều). Theo số liệu thống kê Tổ Chức Y Tế giới (WHO) có khoảng 100 đến 200 triệu ca sốt rét với mức tử vong từ tới 1,5 triệu ca năm [17], [24]. Theo Bộ y tế nước ta hàng năm có triệu ca sốt rét, có 30 000 ca sốt rét ác tính [18]. Việc kiểm soát sốt rét khó khăn, có tới 1,7 tỷ người sinh sống vùng mà trước sốt rét bị đẩy lùi, phát triển mạnh trở lại. Hiện ký sinh trùng sốt rét kháng lại hầu hết loại thuốc quen thuộc: Quinolin, Cloroquin, Quinacrin, Mefloquin, .làm cho việc điều trị sốt rét ngày trở nên khó khăn [24]. Do vậy, ngày việc nghiên cứu tìm sản xuất thuốc chữa sốt rét trở thành yêu cầu cấp bách. Vào đầu thập niên 70, nhà khoa học Trung Quốc chiết xuất # từ Thanh hao hoa vàng chất có tác dụng điều trị bệnh sốt rét gọi Quinghaosu (QHS) artemisinin. Việt Nam, Thanh hao hoa vàng trồng chiết xuất artemisinin. Chất có vòng Secquiterpen lacton nhóm Peroxyl nội phân tử. Chất chứng tỏ có hiệu lực chống sốt rét tốt với bệnh nhân mắc chủng kháng thuốc, artemisinin dẫn xuất có khả vượt qua hàng rào máu não nên có hiệu lực điều trị sốt rét thể não [10]. Tuy nhiên, độ tan artemisinin nước tỷ lệ tái phát sau dùng cao nên tác dụng điều trị artemisinin phần bị hạn chế. Để hoàn thiện khả điều trị artemisinin. Các nhà khoa học tiếp tục nghiên cứu bán tổng hợp số dẫn xuất như: artesunat, arterether artermether có tác dụng điều trị cao artemisinin, đồng thời sử dụng đường tiêm, số chất artesunat dùng phổ biến nay. Nước ta tổng hợp artesunat đưa vào sản xuất với quy mô lớn. Việc kiểm tra chất lượng nguyên liệu thành phẩm artesunat quan trọng, nhiên thực tế việc định lượng artesunat sở cho thấy nhiều điều bất cập, thường cho kết cao phụ thuộc người định lượng. Để xây dựng phương pháp định lượng artesunat có tính đặc hiệu cao đồng thời góp phần làm sở xây dựng tiêu chuẩn Dược Điển Việt Nam, khoá luận tiến hành đề tài “Định lượng artesunat có mặt dihydroartemisinin (hoặc) acid succinic phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)” với mục tiêu sau: • Xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng artesunat phương pháp HPLC. • Đánh giá phương pháp xây dụng, đặc biệt ý tới tính đặc hiệu phương pháp định lượng artesunat HPLC. PHẦNI TỔNG QUAN * 1.1. Tổng quan vê hao hoa vàng hoạt chất 1.1.1. Cây hao hoa vàng Thanh hao hoa vàng thuốc cổ truyền Trung Quốc sử dụng lâu đời, tài liệu Y học cổ truyền Trung Quốc có nói đến Quinghao ghi chép sớm chữa tới 52 loại bệnh, có bệnh sốt rét. Từ đời Hán, năm 168 trước Công Nguyên, người ta dùng Quinghao để chữa bệnh, người Trung Quốc đề xuất cách hạ sốt sau: dùng nắm Quinghao ngâm lít nước, lọc lấy nước uống. Sau đó, Lý Thời Trân viết trong: “Bản thảo cương mục” năm 1595 dùng chế phẩm Quinghao để chữa lạnh sốt rét Thanh hao hoa vàng tên khoa học là: Artemisia annua L. Asteraceae. Theo tổ chức Y tế giới (WHO) Trung Quốc Mỹ có khoảng 40 loài thực vật thuộc chi artemisia có vài loài: artemisia annua L. chứa hoạt chất có tác dụng chữa sốt rét. Việt Nam biết có 15 loài, có loài dễ nhầm lẫn với là: Artemisia capillaris, Artemisia campestris, Artemisia apiaceae Artemisia annua L; loài Artemisia capillaris, Artemisia campestris, Artemisia apiaceae Hance không chứa artemisinin [11]. • Đặc điểm hình thái Thanh hao hoa vàng Thanh hao hoa vàng loại thảo sống lâu năm, mọc hoang thành đám vùng đồi núi ven suối, ven sông. Cây cao từ 1,5 - 2m, xẻ lông chim hai lần, thành phiếm hẹp, phủ lông mềm, có mùi thơm, cụm hoa hình cầu hợp thành chùm kép, bắc tổng bao hình trứng hình bầu dục. Hoa màu vàng nhạt, hoa gồm sáu hoa: hoa lưỡng tính, xung quanh hoa cái, hoa có kích thước 0,5 - lmm. Quả bế hình trứng, dài lmm, mặt vỏ có tuyến chứa tinh dầu, thị trường Trung Quốc thường bị trộn khác gọi hoàng cao hay xú cao họ Cúc quanh năm màu vàng, trước màu lục [13]. Thanh hao hoa vàng phân bố nhiều nơi giới Trung Quốc, Nhật Bản, ấn Độ, Bắc Mỹ, Iran. Mông cổ, Đông  u, .[11], [13]. Tại Việt Nam, Thanh hao hoa vàng có số tên gọi khác như: Thanh cao hoa vàng, ngải sĩ, ngải dại, ngải đắng, ngải hôi, ngải hoa vàng, ngải, . mọc hoang dại thành cụm dọc ven sông, suối, chân đồi nơi ẩm thấp ánh sáng nhiều. Cây mọc nhiều tỉnh phía Bắc như: Lạng Sơn, Quảng Ninh, Cao Bằng, Bắc Kạn, Thái Nguyên, Hà Bắc, Vĩnh Phú, Tuyên Quang, Hòa Bình, . dọc tỉnh miền trung: Thanh Hóa, Nghệ An, .[10], [13]. 1.1.2. Thành phần hóa học Thanh hao hoa vàng Tất phận Thanh hao hoa vàng có chứa tinh dầu hàm lượng tinh dầu Thanh hao khác nhau, phụ thuộc vào giống nơi trồng, dao động từ khoảng 0,5 - 0,6%. Tinh dầu có màu vàng nhạt có mùi long não với thành phần chủ yếu là: camphor, 1,8 - cineol, p íamesen, p caryophylen, p cubeben, Artemisia ceton, p mycren, .[13]. Ngoài thành phần tinh dầu hoạt chất có tác dụng điều trị sốt rét artemisinin mà nhà khoa học Trung Quốc chiết tách xác định cấu trúc từ năm 1972, secquiterpen lacton có cầu nối peroxyd nội phân tử. Ngoài artemisimin người ta xác định loạt hợp chất secquiterpen khác sau [15]: STT Diện tích pic Số liệu thống kê Hệ số bất đối xứng (mAƯ) 93,052 93,383 1,10 93,838 s = 0,3152 1,08 93,524 Sx= 0,338 1,12 93,137 1,00 93,363 1,17 Bảng 2: Kết thử tính thích hợp hệ thống sắc ký HPLC Kết trình bày bảng cho thấy độ lệch chuẩn tương đối kết thu Sx = 0,338 « 2%, hệ số bất đối xứng dao động từ 1,00 đến 1,17. Điều chứng tỏ hệ thống sắc ký mà sử dụng đảm bảo tính thích hợp cho việc phân tích định lượng artesunat. 3.2. áp dụng phương pháp xây dựng để định lượng artesunat nguyên liệu Chuẩn bị mẫu thử mẫu chuẩn artesunat có chứa mg/ml artesunat methanol sau: * Dung dịch thử : Trong bình định mức 25ml cân xác khoảng 0,lg artesunat nguyên liệu hoà tan thêm methanol vừa đủ đến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 n m. * Dung dịch chuẩn : Trong bình định mức 25ml cân xác khoảng 0,lg artesunat chuẩn hoà tan thêm methanol vừa đủ đến vạch, lọc qua màng lọc 0,45 /Ầm. Chuẩn bị cho hệ thống sắc ký chạy ổn định với pha động khoảng 30 phút. Tiêm 20 ^il dung dịch chuẩn bị vào hệ thống sắc ký tiến hành sắc ký điều kiện chọn. Ghi diện tích píc thu sắc ký đồ mẫu chuẩn mẫu thử tương ứng. Tính hàm lượng % artesunat 33 có mẫu thử dựa chuẩn artesunat biết hàm lượng theo công thức sau: x% = AsXtHu x p Au x m s As, Au : diện tích pic mẫu thử mẫu chuẩn(mAU). Ms, niu : lượng cân mẫu chuẩn mẫu thử (mg). P: hàm lượng % ghi nhãn artesunat chuẩn. Kết định lượng trình bày bảng sau: Mẫu chuẩn Mẫu thử STT Hàmlượng Lượng cân Diện tích Lượng cân Diện tích artesunat (gam) píc (mAU) (gam) píc (mAU) (%) 0,1012 91,022 0,1032 93,052 98,355 0,1052 93,857 0,1047 93,584 98,417 0,1028 91,973 0,1038 93,204 98,434 0,1034 92,257 0,1050 93,835 98,442 0,1041 93,514 0,1029 92,834 98,177 Số liệu thống kê 98,365% ; Sx= 0,0494; s = 0,1105; Ax = taSx = 0,137 ; độ lệch chuẩn tương đối Sx = 0,1123% Khoảng tin cậy = 98,365 ±0,137 Bảng 3: Kết định lượng artesunat nguyên liệu Kết trình bày bảng cho thấy nguyên liệu artesunat đem định lượng có hàm lượng 98,365 ±0,137 %. 3.3. Đánh giá phương pháp Chúng tiến hành đánh giá phương pháp định lượng artesunat HPLC xây dựng với tiêu sau. 34 3.3.1 Đánh giá tính xác phương pháp Cách tiến hành kết trình bày phần 3.2. Độ xác phương pháp đánh giá độ lệch chuẩn tương đối phép thử song song. Kết thử độ xác phương pháp cho thấy, điều kiện sắc ký chọn, độ lệch chuẩn tương đối kết nhỏ(Sx= 0,1123% « 2%). Như phương pháp xác. 3.3.2. Đánh giá tính tuyến tính phương pháp Chúng tiến hành khảo sát phụ thuộc tuyến tính nồng độ với diện tích píc artesunat chất chuẩn artesunat. Pha dãy dung dịch chuẩn artesunat có nồng độ biến thiên từ: 3,2 - 4,8 mg/ml. Trong bình định mức 25ml cân xác khoảng 0,08g; 0,09g; 0,lg; 0,1 lg; 0,12g artesunat chuẩn hoà tan thêm methanol vừa đủ đến vạch, ta ' thu dung dịch có nồng độ từ 3,2 - 4,8 mg/ml. Tiêm 20ul dung dịch vào hệ thống sắc ký chạy ổn định với pha động khoảng 30 phút. Ghi giá trị diện tích píc đo ứng với nồng độ artesunat. Kết được trình bày bảng 4, đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính diện tich píc nồng độ artesunat ghi hình 5. STT Nồng độ (mg/ml) Diện tích pic (mAU) 3,2 73,976 3,6 84,72 4,0 93,517 4,4 102,112 4,8 110,983 Bảng 4: Khảo sát phụ thuộc tuyến tính nồng độ diện tích píc artesunat 35 Đồ thị biểu diễn phụ thuộc diện tích pic vào nồng độ dung dịch c Hình 5: Đồ thị biểu diễn phụ thuộc tuyến tính diện tích píc nồng độ artesunat Nhận xét: Kết thu bảng hình cho thấy khoảng nồng độ khảo sát, diện tích píc thu sắc ký đồ tỷ lệ thuận với nồng độ chúng biểu diễn phương trinh hồi quy. y = 22,91x + 1,36 với hệ số tương quan tương ứng r = 0,9990 Độ lệch chuẩn y - intercept: SB = 0,516 Khoảng tin cậy y - intercept: AB = 1,64 - 0,28 [...]... PHẦN III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 Xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng artesunat bằng phương pháp HPLC 3.1.1 Nguyên tắc lựa chọn điều kiện sắc ký Chọn phương pháp sắc ký: Artesunat là hợp chất hữu cơ phân cực Vì vậy để phân tích và định lượng tốt, chúng tôi chọn phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao pha đảo Chọn cột sắc ký: Trong phương pháp định lượng HPLC pha đảo, cột sắc ký thông dụng là Nucleosil... HPLC và một vài hoá chất khác 2.3 Nội dung và phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu, xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng artesunat bằng phương pháp HPLC + Tham khảo các phương pháp định lượng artesunat đã công bố + Tham khảo các phương pháp định lượng artesunat dang áp dụng ở Việt Nam + Tham khảo tính đặc hiệu của các phương pháp hiện đang sử dụng để định lượng artesunat ở nước ta và một số phương. .. quá trình tác sắc ký tốt, thì hỗn hợp mẫu có bao nhiêu chất sẽ có bấy nhiêu pic riêng biệt trên sắc ký đồ Ngày nay phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao được ứng dụng ngày càng rộng rãi trong các ngành phân tích Trong kiểm nghiệm thuốc, HPLC là phương pháp đầu tay để phân tích các thuốc đa thành phần nhờ khả năng phân tách các chất với hiệu năng cao của cột và dung môi pha động, khả năng phát hiện... Phương pháp chuẩn độ trực tiếp chỉ áp dụng khi acid succinic tự do trong chế phẩm < 0,2%, do đó khó có thể áp dụng cho định lượng viên nén - Phương pháp chuẩn độ gián tiếp là phương pháp chính xác, đúng, đặc hiệu, ít phụ thuộc vào sự có mặt của tạp chất, dễ thực hiện Tuy nhiên, phương pháp này mới chỉ được nghiên cứu áp dụng cho định lượng nguyên liệu artesunat, muốn áp dụng phương pháp này trong định. .. Các phương pháp định lượng khác Cầu nối peroxyd nội phân tử của artemisinin và artesunat còn thể hiện sự đáp ứng trên điện cực giọt thủy ngân nên người ta còn dùng phương pháp cực phổ để định lượng Ngoài ra, phương pháp cực phổ xung và phân tích phóng xạ miễn dịch đã được áp dụng để định lượng artemisinin và các dẫn xuất của nó Các nhà khoa học Trung Quốc còn miêu tả hai phương pháp khác để định lượng. .. lượng artemisinin và các dẫn xuất của nó trong mẫu thử sinh học [26]: - Phương pháp đo độ phóng xạ: sau khi uống thuốc đã được đánh dấu bằng Tritium - Phương pháp phân tích đo mật độ quang trên sắc ký lớp mỏng 1.4 Các phương pháp định lượng artesunat trong viên nén đang áp dụng ở nước ta [2], [3] 1.4.1 Phương pháp quang phổ Cân chính xác một lượng bột viên tương ứng với khoảng 60mg artesunat cho vào... dụng phương pháp HPLC với detector điện hóa để định lượng artesunat Quá trình xảy ra trên bề mặt điện cực được mô tả như sau: 12 Nhận xét: Phương pháp này có độ nhạy, tính đặc hiệu cao nên thích hợp trong việc định lượng với hàm lượng nhỏ như trong dịch sinh vật, tuy nhiên phương pháp HPLC với detector điện hóa không phải là cơ sở nào cũng có được 1.3.5 Phương pháp đo kiềm trong môi trường nước Vì artesunat. .. artesunat là este của acid succinic và dihydro artemisinin nên trong phân tử còn một nhóm chức acid tự do, do đó người ta có thể định lượng trực tiếp nhóm chức này bằng NaOH 0,05% với chỉ thị phenolphtalein từ đó suy ra hàm lượng artesunat hoặc có thể định lượng artesunat bằng phương pháp chuẩn độ gián tiếp Cho artesunat tác dụng với một lượng dư KOH rồi chuẩn độ KOH dư bằng dung dịch chuẩn acid [5] Nhận... tích pic người ta có thể dùng tích phân kế hoặc dùng máy tính đã cài đặt sẵn chương trình * Đánh giá chiều cao của pic: Điều kiện để áp dụng việc đánh giá bằng chiều cao của pic là các chỉ số k’ hằng định Đo chiều cao pic chỉ thích hợp J khi nồng độ mẫu thử từ thấp đến trung bình > Phương pháp định lượng và cách tính kết quả trong HPLC 25 Tất cả các phương pháp định lượng bằng sắc ký đều dựa trên nguyên... tính bằng sự chênh lệch nồng độ (lượng chất chuẩn thêm vào) và độ tăng của diện tích pic Với phương pháp thêm nhiều lần với nồng độ khác nhau ta có phương pháp thêm đường chuẩn • Phương pháp phần trăm diện tich pic (hoặc phần thăm chiều cao pic) Là phương pháp tính nồng độ của mẫu thử dựa trên diện tích pic (hoặc chiều cao pic) của nó tính theo phần trăm trên tổng toàn bộ pic có trong sắc ký đồ Trong phương . Định lượng artesunat khi có mặt dihydroartemisinin và (hoặc) acid succinic bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với những mục tiêu sau: • Xây dựng quy trình kỹ thuật để định lượng. ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI NGUYỄN THANH TÙNG ĐỊNH LƯỢNG ARTESƯNAT KHI CÓ MẬT DIHYDRO ARTEMISININ VÀ (HOẶC) ACIDSƯCCINIC BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆUNẢNG CAO ( HPLC ) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP D ược. việc định lượng artesunat ở các cơ sở cho thấy còn nhiều điều bất cập, thường cho kết quả rất cao phụ thuộc người định lượng. Để xây dựng một phương pháp định lượng artesunat có tính đặc hiệu cao